Обнаружение с помощью антител

Серологическое исследование. Серодиагностика направлена на обнаружение специфических антител в парных сыворотках крови, взятых в первые 3 — 4 дня болезни и спустя 12—14 дней от начала заболевания. Наличие антител устанавливают с помощью [c.301]

Обнаружение с помощью антител [405] [c.312]

Однако постановка микробиологического диагноза инфекционного заболевания возможна не только с помощью вьщеления и идентификации возбудителя, но и при обнаружении специфических антител к нему. Для этого используют серологический метод, заключающийся в постановке реакций иммунитета. Антитела к возбудителю заболевания появляются, как правило, к концу 1-й недели заболевания, с этого времени и используют названный метод. В некоторых случаях серологический метод может быть направлен на выявление специфического антигена непосредственно в исследуемом материале. В частности, для экспресс-диагностики инфекционного заболевания применяют реакцию иммунофлюоресценции, позволяющую быстро (в течение нескольких часов) выявить возбудителя в исследуемом материале. [c.195]

Микроскопия. Для обнаружения антигенов с помощью РИФ препараты-соскобы фиксируют в холодном ацетоне в течение 10 — 15 мин и обрабатывают флюоресцирующими антителами. При люминесцентной микроскопии хламидии трахомы представляют собой флюоресцирующие включения в цитоплазме клеток конъюнктивы. [c.247]

Электронно-микроскопическое выявление ЭМВ). Это исследование дает возможность в зависимости от вида вируса выявить в клетках отдельные вирионы и их кристаллоподобные скопления в ядре или цитоплазме. ЭМВ, как правило, используется для обнаружения возбудителей вирусных инфекций с типичной морфологией (оспенные вирусы), особенно в тех случаях, когда их не удается культивировать обычными методами (вирусы гепатитов А и В, ротавирусы). Вирусы, содержащиеся в исследуемом материале, очищают и концентрируют ультрацентрифугированием, колоночной хроматографией, адсорбцией с помощью специальных сорбентов или антител. Последний способ лежит в основе метода иммунной электронной микроскопии (ИЭМ). [c.267]

На новую высшую ступень люминесцентная цитохимия была поднята Кунсом с сотрудниками [4], разработавшими метод люминесцентно-меченых антител. В основном он заключается в следующем. В результате иммунизации животного соответствующим антигеном получают специфическую сыворотку белковые их фракции, в которых преимущественно сосредоточены специфические антитела, обрабатывают флуорохромом и получают комплекс флуорохром — антитело, используемый для обнаружения соответствующего антигена. Наличие и локализация последнего в микроскопическом препарате выявляется в результате реакции антиген — антитело. Продукт этой реакции ярко люминесцирует и с помощью люминесцентного микроскопа может быть открыт даже в отдельных участках клеток [18, 14]. [c.317]

Биосенсор представляет собой электронное регистрирующее устройство, в котором для обнаружения или измерения концентрации химического вещества используется биологический материал, например клетка, фермент или антитело. С его помощью особенно удобно производить измерения в случае ферментов или антител, потому что они очень специфичны и способны различать в сложной смеси отдельные молекулы. [c.93]

Рис. 9-9. Замедление в геле. Принцип метода схематически изображен на рис. 9-9, А. Экстракт, полученный из линии клеток, продуцирующих антитела, смешивают с радиоактивными фрагментами ДНК, содержащими последовательность от точки—131 до + 36 (относительно сайта инициации транскрипции в положении +1) гена, кодирующего легкую цепь соответствующей молекулы антитела. Воздействие белков, входящих в состав экстракта, на подвижность фрагмента ДНК определяют методом электрофореза в полиакриламидном геле с последующей радиоавтографией. Свободные фрагменты ДНК быстро передвигаются к концу геля, тогда как фрагменты, связанные с белком, задерживаются. Обнаружение шести зон с замедленным движением указывает на присутствие в экстракте шести различных сайт-специфических ДНК-связывающих белков (обозначенных С1-С6). На схеме Б экстракты фракционировали с помощью стандартной хроматографической методики, каждую фракцию смешивали с радиоактивным фрагментом ДНК, наносили на одну дорожку полиакриламидного геля и анализировали далее, как

Таблица 5.2. Обнаружение антител к индивидуальным антигенам с помощью вестерн-блот-анализа

Существуют три основных методических подхода для решения этой задачи. Первый способ — избирательное окрашивание нейронов, выделяющих определенный нейромедиатор, может осуществляться с помощью преобразования естественного медиатора в его флуоресцирующее производное. В этом случае флуоресценция определенных групп клеток поможет выявить специфические связи в структурах мозга. Второй экспериментальный подход связан с введением молекул медиатора, предварительно меченного радиоактивным изотопом. Нейронные окончания, содержащие исследуемый медиатор, способны избирательно захватывать метку. Затем их легко выявить методом авторадиографии. Третий способ обнаружения специфических связей в нервной системе состоит в использовании высоко специфичной способности узнавать либо антигенные детерминанты медиатора, либо определенные ферментные белки, участвующие в метаболизме нейромедиаторов, либо нейрорецептор-ные компоненты на мембране клетки. Последние считаются наиболее убедительным свидетельством в пользу существования конкретных нейрохимических взаимодействий межцу клетками и зонами мозга. Обычно для иммунохимической идентификации используют флуоресцентный краситель или изотоп, который маркирует антитела. В последние годы широко распространились методы, использующие антитела, меченные частицами тяжелых металлов, например коллоидного золота, железа и др. [c.224]

Иммунофлюоресцентный метод. Обнаружение бактериальных и вирусных антигенов в инфицированных материалах, тканях животных и культурах клеток при помощи флюоресцирующих антител (сывороток) получило широкое применение в диагностической практике. Иммунофлюоресцентный метод относится к экспресс-диагностике, не уступая другим серологическим реакциям по чувствительности и специфичности (рис. 55). [c.114]

Итак, обнаружен и выделен ген рака. Значит, существует, хотя еще и не охарактеризован как следует, раковый белок . Начинается новый этап в борьбе с болезнью. Ведь после того, как белок будет выделен и детально изуче1Ю, что он делает, наверняка удастся придумать, как этот белок выводить из строя. Конечно, самым радикальным средством было бы испортить или починить сам онкоген. Но избирательно портить гены внутри клеток пока никто не умеет. Так что главные надежды возлагают сейчас на порчу белка, например, с помощью антител к нему. [c.151]

На иммунизацию организм отвечает синтезом очень неоднородной популяции антител, молекулы к-рых могут сильно отличаться друг от друга по сродству к антигену. Такая неоднородность объясняется участием в иммунном ответе очень большой популяции В-лимфоцитов, каждый из к-рых синтезирует лишь одну разновидность молекул антител. С помощью техники гибридом (гибридные клетки, получаемые слиянием злокачественных и нормальных анти-телобразующих клеток лимфоцитов) удается получить в больших кол-вах однородные моноклональные антитела, к-рые широко используют в качестве высокоспецифич. реагентов для обнаружения, локализации и выделения разл. в-в, а также для диагностики и лечения нек-рых заболеваний. Гомог. И. накапливаются в больших кол-вах в крови и моче больных при ряде злокачеств. поражений лимфоцитов (т. наз. миеломные И.). [c.217]

Выделение чистых И. проводится с помощью ионообменных смол с послед, гель-фильтрацией. Для мн. целей используют препараты миеломных И., особенно минорных классов. Антитела выделяют с помощью иммуносорбентов - фиксированных на нерастворимых носителях (напр, целлюлозе) антигенов. Обнаружение и количеств, определение И. разных классов проводят иммунологич. методами с помощью соответствующих антисывороток. Для определения кол-ва антител используют методы преципитации (иммунная р-ция осаждения антигена антителом), агглютинации (взаимод. антитела с двумя клетками), нейтрализации бактерий и вирусов и др. Широкое распространение получают радиоиммунные и ферментно-иммунные методы, обладающие исключительно высокой чувствительностью и позволяющие определять очень малые кол-ва антител (или антигенов) в смесях с др. в-вами. [c.217]

Этот дисахарид - составная часть группоспецифического вещества крови, так называемого вещества Н, которое, как и вещества А и В, определяет специфичность группы крови. Так, смешивание крови разных групп приводит к специфической реакции антиген-антитело, в результате чего происходит агглютинация или растворение красных кровяных телец. Группоспецифические вещества крови представляют собой гликолипиды или гликопротеины, с помощью которых, например, липидная часть нековалентно закрепляется на внешней мембране эритроцита. К липидной части примыкает сердцевинная часть, состоящая из неспецифической олигосахаридной цепи, к которой примыкает детерминирующий олигосахаридный фрагмент (так называемый гаптен), содержащий группоспецифическое вещество крови [76]. Вещество Н, обнаруженное у обладателей группы крови О, содержит в качестве детерминант-ного трисахарид из г-фукозы, о-галактозы и N-aцeтил-D-глюкoзaминa (а-г-Гис-(1 2)-р-о-Са1-(1 3)-о-01с-ЫАс) [77]. [c.570]

Рис. 9.1. Обнаружение антигена-мишени с помощью ELISA. Е—фермент, присоединенный ко второму антителу.

Поиск нейронспецифических белков, связанных с генетическими нервными заболеваниями, очень сложен, однако перспективен. Примером является белок Pel Duarte (специфический белок мозга), наличие которого связывают с заболеванием шизофренией [12]. Все возрастающее число специфических компонентов нервной системы открываютс помощью иммунологических методов. Так как их функция неизвестна, они обозначаются символами NS1, NS2, L1 и т. д. (NS — антиген нервной системы). Применение техники моноклональных антител ведет к открытию антигенов клеточной поверхности, специфичных для различных типов клеток нервной системы. Таким способом обнаружен фактор адгезии нейрональных клеток (N- AM), который, по-видимому, играет важную роль в развитии нервной системы [13]. Мы вернемся к этому в следующей главе. Установлено, что мозг экспрессирует 30 ООО генов, продукты которых все еще ждут исследования. [c.315]

Экспресс-методом диагностики хламидиозов можно считать обнаружение в клиническом материале (моча, отделяемое половых органов, материал соскобов) группового антигена возбудителя. Для выявления антигенов как элементарных, так и ретикулярных телец используют ИФА, но чаще — РИФ (прямой и непрямой варианты). На рис. 25 (цв. вклейка) представлены результаты прямой РИФ с исследуемым материалом. При использовании антител, меченных флюорохромом, свечение измеряют с помощью прибора — флюорометра. [c.246]

Другой метод, не связанный с присутствием в белке остатков триптофана, тирозина и фенилаланина, состоит во введении в белок флуоресцирующей метки, например, с помощью флуо-ресцеинизотиоцианата или 5-диметиламинонафталинсульфохло-рида (ДНС-хлорида). Метод применялся для введения флуоресцентной метки в антитела [81, 82], которые затем использовали для обнаружения антигенов. [c.459]

Агрегация молекул инсулина часто затрудняет его точную идентификацию при гель-хроматографии тем не менее в подходящем растворителе с помощью теля декстрана удалось, например, выделить кристаллический инсулин из одного экземпляра рыбы [37], из 10— 20 г поджелудочной железы быка [38] и из одной железы кошки [39]. Инсулин, меченный 1г (см., напри-Мер, [40]), служит для обнаружения взаимодействия антигена с антителом. Комплекс, образующийся в сыворотке, был отделен от свободного инсулина на сефадексе 0-75 [41]. С помощью хроматографии на сефадексе 0-200 было показано, что имеется по крайней мере две белковые фракции, с которыми связывается инсулин [42]. Ингибитор инсулина из альбуминовой фракции был частично очищен в препаративных масштабах [43]. С другой стороны, наблюдалось, что часть [c.216]

Перспективным методом и самым быстрым для обнаружения фекальных стрептококков группы D в воде является комбинация техники мембранных фильтров и флуоресцирующих антител. Время анализа — 10—12 ч (Pugsley, Evison, 1975). Значение быстрой идентификации фекальных стрептококков с помощью флуоресцирующих антител в оценке качества воды подчеркнуто Pavlova с соавт. (1973). [c.176]

Быстрое и специфическое обнаружение каких-либо веществ или организмов с помощью флуоресцирующих метчиков часто выполняют с помощью люминесцентного микроскопа. В качестве метчика можно использовать либо комплекс флуорохром — антитело, либо прямое флуорохромирование препарата. Для прямого флуорохромирования клеток используют акридиновый оранжевый, риванол, нрофлавин (см. гл. 5), примулин (II), аурамин (III) и многие другие флуорохромы [c.292]

Большинство антигенов вызывает в организме образование целого набора антител, но каждый отдельно взятый лимфоцит продуцирует лишь одно из них. Миеломы — это злокачественные новообразования иммунной системы они развиваются в результате неконтролируемой пролиферации одной линии лимфоцитов. При этом в больших количествах синтезируется один тип белков-антител. Иными словами, миеломы являются природными продуцентами моноклональных антител. По методу Миль-штейна проводят слияние нормальных (неопухолевых) лимфоцитов и клеток миеломы. Вначале полученные гибриды синтезируют смесь антител, включающую два типа антител родительских клеток, а также гибридные их формы, образующиеся путем ассоциации тяжелых и легких цепей антител двух родительских форм. Впоследств ии в результате элиминации хромосом образуются клетки, способные к синтезу антител лишь одного типа. Это могут быть либо антитела, закодированные в геноме лимфоцита, либо антитела, характерные для клеток миеломы. Скрининг и обнаружение клона, синтезирующего искомое антитело, ведут при помощи биохимических и иммунохими-ческих методов. Схема этого метода дана на рис. 7.5. [c.313]

Другие методы идентификации рекомбинантных плазмид основаны на экспрессии включенного в них гена. При этом идентифицируется белковый продукт, для чего используются иммунологические методы или методы определения его специфической активности. Для обнаружения антигенов в бактериях путем скрининга, на основе специфического их взаимодействия с антителами, часто используется метод, разработанный Брумом и Джилбертом. Для этого пластиковый диск покрывают слоем специфических радиоактивных антител и помещают его на предварительно лизированные колонии. Антигены из лизиро-ванных бактерий связываются с антителами на диске. Положение антигенов, адсорбированных на диске, определяют с помощью радиоавтографии. [c.316]

За последние десять лет в изучении нейропептидов достигнута значительные успехи. Большую роль в этом сыграла иммуноцитохимия. Можно получить антитела к пептиду, обнаруженному в какой-либо ткани, а затем использовать эти антитела для поиска того же или иных структурно близких пептидов в других тканях организма. С помощью этого метода в нейронах были найдены пептиды, которые прежде не относили к пептидам нервной системы, а также многие новые разновидности пептидов. В большинстве случаев данные в пользу того, что эти нейронептиды (рис. 19-38) служат нейромедиаторами, убедительны, но все же недостаточны. Например, можно показать, что антитела к данному пептиду связываются определенными нейронами и окончаниями их аксонов, а сам пептид при локальном введении способен имитировать эффекты, вызываемые активностью этих нейронов. Иногда удается показать, и это более убедительно, что нейроны в активном состоянии секретируют определенный пептид, а эффект, вызываемый активностью этих нейронов, блокируется антителами к обнаруженному пептиду. Но-видимому, нейронептиды играют особенно важную роль в регуляции таких ощущений и потребностей, как боль, наслаждение, голод, жажда и половое влечение. [c.328]

В 1940 г. Ландштейнер и Винер [753] при иммунизации кроликов эритроцитами макака-резуса получили сыворотку, которая агглютинировала эритроциты 39 из 45 особей. При сравнении этих антител с антителами, обнаруженными Левином и Стет-соном, авторы пришли к выводу, что в обоих случаях реакция происходит с одним и тем же антигеном. В дальнейшем оказалось, что это не совсем так. В настоящее время антиген, открытый с помощью истинного анти-резус-антитела, называется LW-B честь Ландштейнера и Винера, а Rh-типирование у человека всегда проводится с сывороткой человеческого происхождения, как это было сделано в работе Левина и Стетсона. Последующее изложение вопроса относится только к реакциям с этими антителами человека. [c.210]

Интересные возможности были обнаружены при использовании ферментов для повышения чувствительности иммунохими-ческих методов анализа. Сущность любого иммунохимического анализа сводится к тому, чтобы после завершения реакции антиген-антитело определить концентрацию избыточного компонента (антигена или антитела), не вступившего в реакцию. Поскольку эти концентрации очень невысоки (10 — 10 моль/л), для их обнаружения обычно применяют легко детектируемую метку радиоактивным атомом, вводимым в один из компонентов (радиоактивный иод, тритий). Оказалось, что без потери чувствительности метода радиоактивная метка может быть заменена присоединением фермента, который после реакции обнаруживается по его каталитической активности. Накоплен достаточный материал по применению этого нового метода, получившего название иммуноферментный анализ (ИФА). С помощью ИФА могут быть детектированы любые вещества, обладающие свойствами антигенов и, естественно, многочисленные возбудители заболеваний человека, животных, растений. Многие из этих методов могут быть приспособлены к автоматическому режиму слежения, что важно для решения задач экологии, контроля технологических производств и т. д. [c.17]

РТПГА применяется для обнаружения антигенов бактерий чумы в исследуемом материале с помощью стандартной противочумной сыворотки, антитела которой нагружены на эритроциты. [c.202]

На практике электросинерез наиболее часто используют в клинической диагностике для обнаружения и идентификации некоторых антигенов и антител. Многие авторы сообщали о выявлении с помощью этого метода В-антигена гепатита (австралийский антиген). В недавно опубликованном техническом отчете Всемирной организации здравоохранения ( Вирусные гепати ты , 1975) отмечается, что электросинерез (называемый также встречным иммуноэлектрофорезом) представляет собой высокоспецифический, быстрый, простой и сравнительно дешевый метод обнаружения вируса В гепатита. По чувствительности этот метод в 2—10 раз превосходит иммунодиффузию, однако суще ствуют и другие, даже более чувствительные (хотя и менее специфические) методы. При определении антител, а не антигенов чувствительность метода снижается (Отчет Всемирной организации здравоохранения, методический раздел, а также [684]), Электросинерез, подобно иммуноэлектрофорезу, можно прово-дить на пленках из ацетата целлюлозы [1338]. [c.247]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология