Сефадексы в хроматографии

Для гель-хроматографии применяют в зависимости от целей гидрофильные и гидрофобные сорбенты. В качестве гидрофильных сорбентов применяют декстрановые гели (сефадексы и моя-селекты), полиакриламидные гели (биогелн), оксиалкилметак-рилатные гели (сфероны) и т. д. Сефадексы получают из декстрана [c.237]

В гель-хроматографии применяются наполнители различных марок, отличающиеся размером пор. При использовании в качестве наполнителя, например, сефадекса марки 0-50 для разделения фракций поли-21Тиленгликоля Н(-СНОН—СНг—),,0Н первыми будут выходить из колонки фракции с относительной молекулярной массой больше 10 000 (/< =0). Последними будут выходить фракции полимера с молекулярной массой, меньше 500, и в их числе часто присутствующие минеральные соли (ЫаС1 и др.), для которых К = Таким образом, с помощью се( )адекса 0-50 могут быть разделены фракции полиэтилеигликоля с молекулярной массой в области 500—10 000. [c.59]

В тонком слое применяют также мегод гель-проникающей хроматографии. В этом случае на пластинку наносят слой сефадекса, [c.131]

По данным гель-хроматографии строят график зависимости = рассчитывают Уо, зная массу сухого сефадекса в колонке, и, воспользовавшись данными табл. 3.2, приведенной выше, рассчитывают число теоретических тарелок N. ВЭТТ и Кау ДЛЯ щавелевой кислоты по уравнениям (3.2) — (3.4), (3.22). [c.243]

Установка для проведения гель-хроматографии (наполнитель, например, сефадекс G-50). [c.61]

ТСХ применяется также и при разделении смеси веществ методом гель-хроматографии. Для этого готовят слой декстран-геля (сефадекса). Сефадекс взбалтывают в дистиллированной воде и дважды декантируют. Полученную суспензию наносят на пластинку обычным способом слоем толщиной 0,2 мм. Пластинку сушат на воздухе при комнатной температуре до появления явной структуры геля. [c.138]

Для образования полисахаридного геля нужно, чтобы цепные молекулы были организованы в рыхлую пространственную сетку, в ячейках которой находится растворитель (вода). Одним из ключевых вопросов, ответ на который позволяет связать структуру полимера с его способностью к гелеобразованию, является природа узлов этой сетки. Это могут быть ковалентные связки между цепями, и в таком случае сетка представляет собой одну гигантскую трехмерную молекулу. Так построен, например, гликопептид бактериальной клеточной стенки, который мы уже рассмотрели, а из искусственных образований — сефадекс, полусинтетический материал для гель-хроматографии. Более типичны полисахаридные гели, в которых связи цепей в узлах не ковалентны. [c.164]

ГЕЛЬ-ХРОМАТОГРАФИЯ В ТОНКОМ СЛОЕ СЕФАДЕКСА [c.117]

Обессоливание и смена буфера с помощью гель-фильтрации широко используются в ходе очистки белков и пептидов для освобождения от сульфата аммония или в качестве промежуточной операции, подготавливающей препарат к последующему этапу хроматографии (ионообменной, аффинной или других видов). Если объем раствора белка изл еряется миллилитрами, то рутинную операцию его очистки нередко ведут вслепую . Однажды откалибровав небольшую колонку с сефадексом С-25, последующий отбор фракций, содержащих высокомолекулярные компоненты, производят по объему элюата, нередко просто путем отсчета капель. Соотношение объемов исходного раствора и колонки в этом случае может составлять примерно 1 10. В препаративных вариантах обессоливания, когда желательно максимально использовать объем колонки и избежать разбавления препарата, 5то соотношение можио увеличить до 1 3, контролируя выход хроматографических зон по УсГ-поглощению. Скорость элюции в таких опытах может быть значительной, порядка 20мл/см -ч (скорость продвижения фронта зоны очищаемого вещества по колонке — 20 см/ч). [c.137]

ГЕЛЬ-ХРОМАТОГРАФИЯ НА КОЛОНКЕ С СЕФАДЕКСОМ [c.176]

Ввиду специфики химической природы лиганда (к упомянутому выше следует добавить сплошной, без характеристических полос, спектр поглош ения, склонность к необратимой сорбции на ионообменных смолах, сложность выделения значительных количеств препарата из природных поверхностных вод) большинство физических и физико-химических методов не могли быть использованы при исследовании комплексообразования их с ионами металлов. Поэтому при изучении комплексообразования микрограм-мовых и субмикрограммовых количеств элементов с природными комплексообразующими веществами различными методами (модифицированными и специально разработанными физико-химиче-скими, в частности, методами фильтрации через сефадексы, хроматографии на ионообменной бумаге и в тонких слоях целлюлозы, кинетическими и хемилюминесцентными) получены данные о природе, составе и устойчивости комплексных соединений, образуемых неорганическими компонентами (Са, Зг, Си, Се, , Ре, Ки и др.) с фульвокислотами, поллфенолами и другими растворенными органическими веществами природных вод. [c.103]

Проводилось концентрирование изопреноидных углеводородов Сю—С20 жидкостной хроматографией на сефадексе LH-20 [89]. Отмечено, что применение сефадекса позволяет выделять нзопре-ноиды даже при весьма незначительном содержании их в сырье, [c.63]

В ионообменной хроматографии целлюлозоиониты применяются либо в виде порошка, которым заполняют колонку, либо в виде сефадексов и химически сшитых агарозных гелей в тонкослойной хроматографии (см. гл. IV). [c.117]

Примером может служить применение гель-хроматографии для диагностики заболеваний щитовидной железы. В этом случае используется избирательное сродство трииодтирозина к сефадексу. Предварительно сыворотку инкубируют в стандартных условиях с гормоном, меченным радиоактивным иодом, затем хроматографируют на колонке с сефадексом. Растворителем служит вода. В результате получают три ника пик связанного с белком гормона, пик свободного гормона и между ними пик радиоактивного иода, образовавшегося при фотохимическом разложении гормона. Диагноз устанавливают по количеству иода, т, е. по величине пика. [c.233]

Декстран ( Sephadex ) — очень гидрофильный материал. Присоединение ионогенных групп происходит также по гидроксилалг полисахарида. Пористость и жесткость матриц на основе сефадексов зависит от процентного содержания сшивки (эпихлоргидрина). Модифицированные сефадексы для ионообменной хроматографии выпускаются на основе только двух типов сефадексов G-25 и G-50. Размеры пор у модифицированных сефадексов значительно выше, чем у двух исходных типов матриц, за счет уже знакомого нам эффекта расталкивания одноименно заряженных ионогенных групп. Ионообменные сефадексы соответственно и менее жестки их объемы тоже могут изменяться в зависимости от pH и ионной силы элюента. Особенно сильно это выражено у ионообменников, полученных на основе сефадекса G-50. Рабочий диапазон pH 2—12. [c.251]

За последние годы широкое применение для разделения высокомолекулярных веществ и определения их молекулярной массы нашел предложенный Л. Поратом и П. Флодином метод гель-фильтрации (гель-хроматографии). Гель-хроматография состоит в фильтровании исследуемого раствора через колонки, заполненные зернами набухающего трехмерного полимера (сефадекса). Набухшие зерна сефадекса представляют собой своеобразные клетки , внутрь которых могут проникнуть путем диффузии только молекулы (ионы) подходящего размера. Более крупные молекулы проходят с фильтрационным потоком мимо зерен сефадекса (рис, 10.8). Набор различных марок сефадексов с возрастающим размером клеток позволяет отделять низкомолекулярньк вещества от высокомолекулярных, разделять макромолекулы, изучать образование ассоциатов в макромолекулярныхрастворах. [c.299]

К матрице аффинного сорбента, помимо общих для всех хроматографических матриц требований (нерастворимость п гидрофильпость, жесткость, подходящая форма и размер гранул, химическая стабильность в условиях модификации и в самом хроматографическом процессе, отсутствие неспецифической адсорбцип ж др.), предъявляется требование наличия химических групп, позволяющих с помощью несложной химической реакции ковалеитио связывать с матрицей разнообразные биологические молекулы (лиганды и спейсе-ры). Наиболее удобными с этой точки зрения оказались гидроксильные группы полисахаридных матриц — агарозы и сефадексов, а также амидные группировки полиакриламидного геля. Если иметь в виду аффинную хроматографию белков или использование белко- [c.342]

Данными методами проанализированы нафтены, выделенные из остатков Западно-сибирских нефтей с помощью жидкостной хроматографии на силикагеле. Отсутствие парафинов нормального строения проверялось методом карбамидной депарафинкзации. Нафтеновые концентраты подвергались делению на 6 -6 фракций гель-хроматографией на сефадексе //-20. [c.116]

Для очистки мембранной D-лактатдегидрогеназы Е. соИ хроматографией на оксиапатите [Pratt et al., 1979] был использован пологий линейный градиент концентрации (0—0,2 М) К-фосфатного буфера, pH 7,2 (500 мл для колонки размером 2,6 X 20 см). Растворимость белка обеспечивали включением в состав буфера детергентов (1% Тритона Х-100 и 0,1% ДДС-Na). Очистке на оксиапатите предшествовали освобождение фермента из ме.мбрин с помощью дезоксихолата натрия, хроматография на DE-52 и гель-фильтрация на сефадексе G-200. На всех хроматографических этапах очистки в составе элюентов тоже присутствовали детергенты. [c.234]

Наиболее широкое распространение среди носителей для гель-хроматографии белков получили сорбенты, приготовленные на основе декстрана (сефадексы, сефакрилы, молселекты), полиакриламида (биогели Р, акрилексы) и агарозы (сефарозы, биогели А) и др. Набухая в воде, они образуют гели. [c.106]

Олигонуклеотиды несут большой отрицательный заряд, поэтому они с успехом могут быть разделены на слабых крупнопористых анио-нообменниках. Для этой цели используют колонки, заполненные ДЭАЭ-сефадексом, ДЭАЭ-целлюлозой, Эктеола-целлюлозой и др. Нуклеотиды элюируются с колонки в градиенте концентрации Na l в порядке увеличения их молекулярной массы. Для подавления неспецифической сорбции нуклеотидов на полисахаридных матрицах хроматографию проводят в присутствии 7 М мочевины. [c.177]

Гель-хроматография. Полученный раствор наносят на колонку с сефадексом G=100 (2,5x100 см). Уравновешивание колонки и элюцию осуществляют тем же буфером. Фракцию фермента разливают на порции и хранят при —70° С. [c.231]

Ионообменная хроматография. После диализа раствор наносят на колонку (4x20 см), заполненную ДЭАЭ-сефадексом А-50, уравновешенную буфером В. Колонку промывают тем же буфером (500 мл), после чего проводят элюцию 0,3 М трис-фосфатным буфером, pH 8,0, содержащим 0,1 мМ ЭДТА (500 мл). Фракции, содержащие фермент, объединяют и добавляют сульфат аммония до 807о-ного насыщения. Продолжают перемешивание в течение часа, центрифугируют (20 мин при 15000 ). Осадок осторожно суспендируют в буфере В, насыщенном сульфатом аммония, и хранят при 4° С. [c.245]

Хроматография на ДЭАЭ-сефадексе. Готовят колонку (1,5X40см), заполненную ДЭАЭ-сефадексом А-25. Колонку уравновешивают указанным выше буфером. Наносят раствор белка (около 100 мг в 3 мл) и проводят элюцию тем же буфером, определяя во фракциях элюата содержание белка и активность фермента Фракции, содержащие наибольшую активность, объединяют и добавляют к ним сульфат аммония до концентрации 3,0 М. Доводят pH до 6,0. При этом около 90% [c.262]

Хроматография на ДЭАЭ-сефадексе А-25. Через колонку с подвижным адаптером с ДЭАЭ-сефадексом Л-25 (5x26 см), уравновешенную 0,02 М трис-НС1 буфером (pH 9,2), пропускают последовательно (снизу вверх) 1 л 0,02 М раствора хлористого калия и ферментный раствор, полученный на предыдущей стадии. Как только ферментный раствор полностью впитывается, начинают пропускать 0,1 М хлористый калий, который используется в качестве элюирующего раствора. Скорость элюции — 90 мл/ч, объем элюируемых фракций — 3 мл. Во фракциях определяют белок и транскетолазную активность. Фракции с удельной активностью 0,1 Е/мг и выше объединяют и используют для дальнейшей работы (можно хранить в холодильнике в течение ночи). [c.286]

Наилучшими свойствами для эксклюзионной хроматографии биополимеров обладают TSK-гели типа SW. Поверхность этих материалов покрыта гидрофильными ОН-грутопами по особой технологии, обеспечивающей исключительную инертность сорбента, практически не уступающую сефадексу. Поэтому эксклюзионное разделение, как правило, не осложняется побочными сорбционными процессами. ТЗК-гели SW выпускают с тремя размерами пор и они перекрывают диапазон молекулярных масс от 5 10 до 4 10 (по декстрану) или до 10 (по глобулярным белкам). За счет большого объема пор колонки, с этими гелями характеризуются высокой разделительной способностью, а их гарантированная эффективность составляет 16 тыс.т.т./м. Калибровочные кривые для некоторых модифицированных жестких сорбентов приведены на рис. 4.11. [c.109]

Смотреть страницы где упоминается термин Сефадексы в хроматографии: [c.320] [c.59] [c.201] [c.71] [c.150] [c.693] [c.52] [c.53] [c.139] [c.166] [c.188] [c.286] [c.303] [c.307] [c.322] [c.414] [c.430] [c.108] [c.119] [c.231] [c.117]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология