Сефадекс применение для фракционирования

Применение хроматографии на сефадексах. Аналитическое фракционирование. При гельфильтрации на колонке с сефадексом получается количественный выход фракционируемых веществ. Это свойство позволяет широко использовать сефадексы для аналитических целей. К тому же гельфильтрация эффективна тогда, когда дру-гие методы фракционирования неприменимы. Этот метод нашел широкое применение для фракционирования молекул биологических препаратов по их молекулярному весу [341, 461, 522], Многочисленными исследованиями показано, что элюционный объем для глобулярных белков зависит от их молекулярного веса [165, 451, 845]. Также известно, что элюционный объем является линейной функцией от молекулярного веса (165, 166]. Надо заметить, что зави- [c.136]

Область применения. Фракционирование на ДЭАЭ-сефадексе с успехом можно использовать во всех областях биохимии, белковой химии, иммунологии и клинической химии для выделения белковых фракций. [c.215]

Сефадекс (поперечно-сшитый декстран), который используется уже более 20 лет, будет и дальше использоваться, особенно при работе в промышленных масштабах, когда необходимо учитывать быстроту, стоимость и удобство выполнения опе- раций. Поперечно-сшитые полиакриламидные гранулы (биогели) также находят широкое применение и имеют сходные с сефадексом интервалы фракционирования. Для очень больших молекул белков, вплоть до агрегатов, приближающихся по размерам к вирусам, наиболее предпочтительны агарозные гели. Попытки ввести в белковую химию материалы на основе стекла с контролируемым размером пор не увенчались успехом из-за сорбции белка на его поверхности. Хотя эти трудности можно было бы преодолеть, преимущества стеклянных гранул, обусловленные их жесткостью, в значительной степени утратили свою ценность вследствие появления новых, более совершенных материалов. Основная проблема, связанная с использованием сефадекса и полиакриламида, заключается в мягкости их гранул даже очень слабое давление, в том числе осмотическое давление, возникающее в колонке во время хроматографиче- [c.200]

Недавнее появление более пористых гелей, сефадексов 0-100 и 0-200 (И г = 10 и 20) сделало возможным фракционирование в более широком интервале молекулярных весов. Ниже приводятся результаты ряда экспериментов по разделению с применением этих гелей. [c.276]

Таким образом, применение хроматографического разделения на сефадексах при исследовании растворенных органических веществ речных вод, несомненно, перспективно. Судя по полученным результатам длл разделения окрашенных органических веществ речных вод особенно перспективно использование сильно набухающих сефадексов. Однако правильная информация о составе растворенных органических веществ может быть получена лишь при сохранении неизменными первоначальных форм этих веществ, что возможно, прежде всего, лишь при отсутствии какого-либо химического воздействия в процессе подготовки пробы к фракционированию. Во избежание высаливания высокомолекулярных органических веществ необходимо также предварительно установить допустимую степень концентрирования исходной пробы. [c.162]

Методы, связанные с применением ионообменных смол, целлюлоз или гелей, основаны на одном и том же принципе. При других методах фракционирования на колонках, когда используются более или менее инертные гели, состоящие из шариков различной пористости, разделение происходит главным образом благодаря различию в размерах разделяемых частиц. Так, применение агара или, еще лучше, агарозы вместо декстрановых гелей дало возможность распространить принцип, лежащий в основе фракционирования с помощью сефадекса, на частицы, размеры которых соответствуют размерам вирусов [3, 470]. Но каковы бы ни были эти различия, во всех методах, связанных с применением гелей, более или менее важную роль в процессе разделения играет ионный обмен. [c.44]

Гравитационная неустойчивость, возникающая в ходе нанесения образца (см. рис. 5.4), особенно велика, когда используются очень плотные растворы, такие, как растворенные осадки, полученные при фракционировании сульфатом аммония. Это особенно трудная проблема в случае применения мягких гелей типа сефадекса 0-200. При использовании современных материалов с жесткими зернами плотная поверхность хроматографического слоя позволяет предотвратить избыточное смешивание [c.211]

Из других аналитических работ, выполненных с применением сефадекса Г-200, следует отметить такие, как фракционирование антигенов и антител, клеточных и вирусных нуклеиновых кислот, вирусных ингибиторов и интерферона [95, 182, 192, 811, 814, 823]. [c.138]

Применение хроматографии на агарозе- Хроматографию на агарозе применяют для фракционирования вирусов, субклеточных частиц и макромолекул в зависимости от их молекулярного веса. Как было описано выше, на сефадексах возможно фракционирование веществ с молекулярным весом до 8 10 дальтон. Использование агара и агарозы значительно расширило этот ряд до 150-10 дальтон 405, 648, 763], Агароза обладает превосходным разрешением для широкого ряда субстанций. Острые элюцион-ные профили, получаемые при гельфильтрации на колонке с агарозой, позволяют довольно точно определить молекулярный вес элюируемых веществ [c.146]

В дополнение к полисахаридным гелям фирмой Bio-Rad (США) предлагаются биогели на полиакриламидной основе (табл. 3-4). Введение в практику макропористых полистирольных смол, ненабухаюшнх пористых стеклянных шариков и иммобилиза-Ш1Я гидрофобных радикалов на декстрановой матрице сделали возможным гель-хроматографическое фракционирование в среде органических растворителей. Алки-лированные декстраны (типа сефадекс-LH) находят широкое применение в синтетической пептидной химии [38]. [c.350]

С тех пор как Порат и Флодин в 1959 г. в качестве носителя при фракционировании белков применили первые гели из сетчатого декстрана сефадекса (Sephadex), произошло очень суш,ественное развитие этой техники. Она стала повседневной во всех лабораториях и даже в промышленных производствах, нуждаюш,ихся в выделении белков. Разработано много других носителей, все более расширяющих возможности их применения. [c.73]

В последние годы все большее распространение получает хроматографическое разделение веществ по их молекулярному весу, причем первое место среди таких вариантов хроматографии принадлежит гель-фильтрации на сефадексах . Сефадекс представляет собой полусинтетический -сорбент полисахаридной природы, гранулы которого обладают порами определенного размера, так что диффузия внутрь этих гранул возможна только для молекул, величина которых не превышает величину пор. Поэтому сефадекс работает как своего рода молекулярное сито , задерживающее проникающие внутрь гранул низкомолекулярные вещества и не задерживающее полимеры. Гель-фильтрация незаменима для быстрого отделения полимера от низкомолекулярных примесей (неорганических солей, мономеров и т. д.). Ее применяют и для разделения полимеров, причем одновременно можно приблизительно оценить их молек лярный вес, так как существует набор сефадексов, различающихся величиной пор. Есть все основания полагать, что в химии полисахаридов этот перспективный метод будет находить все большее применение. Особенно интересным является использование сефадексов для разделения высоко- и низкомолекулярных осколков, образующихся при расщеплении биополимеров различными реагентами , и для выделения полисахаридов из различных природных источников Хроматография на модифицированных сефадексах, обладаюш.их ионообменными свойствами, например на диэтиламиноэтилсефадексе, также может служить эффективным приемом фракционирования полисахаридов . [c.487]

При фракционировании белков обычно применяют иониты, содержащие карбоксиметильную и диэтиламиноэтильную функциональные группировки, однако эти иониты не вполне подходят для разделения пептидов. Как правило, почти все кислотные пептиды адсорбируются на катионите при pH 3,0—3,5 в буфер ном растворе с низкой ионной силой, откуда могут быть элюи рованы при рн 6—9 и при более высокой ионной силе. Карбо ксилсодержащие иониты слабо диссоциированы при pH 3, и следовательно, обладают пониженной емкостью. Кроме того в разбавленных электролитах, т. е. в условиях проведения сорб ции, слишком велика буферная емкость ионита. Скачкообразное изменение pH элюента приводит на практике к одновременному элюированию группы пептидов. Аналогичные недостатки свойственны ионитам с ВЕАЕ-группой, особенно при работе с летучими буферными растворами. Изменение ионной силы и значения pH во время элюирования вызывает сжатие столбика сорбента, нарушение скорости потока и искажение профиля элюирования. В наибольшей степени этот эффект выражен у ионитов на основе слабосшитых гелей, однако в какой-то степени это свойство характерно и для модифицированных целлюлоз. И тем не менее некоторые типы ионитов на основе целлюлозы находят применение для разделения небольших пептидов. К ним относятся фосфоцеллюлоза, ЗЕ-целлюлоза, 8Р-целлюлоза и РАЕ-сефадекс. [c.411]

Возможность препаративно разделять сывороточные белки при помощи гель-хроматографии на сильно набухающих в воде гелях послужила стимулом для интенсивных исследований в этой области химии белков. На фиг. 31 было показано, как примерно протекает фракционирование сыворотки на сефадексе G-200. Аналогично выглядят кривые выхода, приводимые в большинстве работ (см. литературу, приложение VII). Важной областью применения гель-фильтрации является удаление избытка реагента при получении флуоресцирующих белков взаимодействием с флуорес-цеин-изотиоцианатом (см. литературу к гл. IV, приложение I). Хорошо известно, что многие лекарственные препараты н некоторые металлы образуют комплексы [c.217]

Создание метода гель-фильтрации на гелях сшитого декстрана (сефадекс) дало в руки исследователей новый принцип разделения водорастворимых соединений — фракционирование по величине молекул [1]. Область применения гелей сефадексов охватывает веш ества с молекулярным весом от 100 до 300 000. По-видимому, полиакриламидные гели, введенные в употребление Хьертеном. и Мосбахом [2], обладают аналогичными свойствами. Дальнейшее расширение возможностей метода связано с созданием сферических гелей агарозы различной пористости [3] (см. разд. 5.7.1). В настоящее время гель-фильтрация находит широкое применение, особенно в различных областях биохимии (см. обзор Детермана [4]). [c.256]

Приведем еще один пример, демонстрирующий применение биполярного ионита. Порат и Фриклунд [156] применяли хроматографию на биполярном ионите для фракционирования яда змеи Naja nigri ollis. Ионит приготавливали путем связывания Р-аланина с сефадексом G-75 после активации последнего бромцианом, проведенной по методике, описанной в разд. 7.2. Результаты фракционирования показаны на рис. 5.32. Последующее регенерирование колонки и приведение биполярного ионита к равновесию демонстрируется на рис. 5.33. Некоторые примеры хроматографии белков даны в табл. 5.17. Большое число ссылок на работы по применению ионообменной хроматографии для разделения белков и ферментов можно найти в библиографиях [40, 41]. [c.320]

Известно, что физико-химические методы фракционирования и выделения индивидуальных т-РНК, хотя они в настоящее время и позволяют выделять индивидуальные т-РНК высокой степени чистоты, остаются еще достаточно трудоемкими. В лаборатории Д. Г. Кнорре (Л. В. Сандахчиев и др.) разработано два новых метода фракционирования т-РНК. Первый метод представляет собой оригинальную модификацию известного метода Замечника. Препарат суммарной т-РНК после предварительного выделения фракции валиновой т-РНК хроматографией на ДЕАЕ сефадексе подвергался ферментативному амино-ацилированию — валином и периодатному окислению. Для удаления окисленных т-РНК был применен полученный в лаборатории ноли-акрилгидразидагаровый гель. На основе этого была разработана препаративная процедура получения валил-т-РНК 85—95%-ной чистоты. [c.521]

Истинное молекулярно-весовое распределение реомакродекса находится приблизительно в пределах от 10 ООО до 100 ООО. Очевидно, ни один из примененных в этих опытах гелей не обеспечивает фракционирование по всем интервале распределения молекулярных весов реомакродекса. Как и следовало ожидать, в области низких молекулярных весов сильно сшитые гели дают лучшие результаты, чем сефадекс 0-200, который обеспечивает хорошее фракционирование в области высоких молекулярных несов. Здесь, по-видимому, гель-фильтрация на 0-200 превосходит метод экстракции. [c.278]

Смолу амберлит ХАВ-2, не содержащую ионогенных групп, широко используют для выделения стероидных гормонов и их конъюгатов [221]. Липофильная гель-хроматография позволяет провести эффективное фракционирование конъюгатов нейтральных стероидов перед их анализом с помощью хроматомасс-спектрометрии [9, 222, 223]. Связь между структурой стероидов и их поведением в условиях гель-хроматографии изучена Воу-зом и др. [224]. Описано применение сефадекса ЬН-20 [225, 226] и липидекса 5000 [227, 228] для анализа стероидных гормонов. [c.308]

Жесткие гели типа биогеля Р-2, которые практически не меняют своих свойств при значительном повышении давления,, можно использовать в качестве сорбентов при ВЭЖХ, тогда как более мягкие гели, например биогель Р-300, теряют в этиг условиях механическую прочность. Большое число работ, выполненных в последнее время, посвящено исследованию возможности применения для фракционирования полисахаридов более жестких сорбентов, не изменяющих своих характеристик при высоких давлениях. Наиболее перспективным в этом направлении является, по всей видимости, использование таких неорганических сорбентов как стекло или силикагель, каждый из которых можно получить в виде гранул строго определенного-размера. Наибольшего прогресса следует, по-видимому, ожидать в направлении применения в качестве сорбента пористого-стекла (если будет решена проблема адсорбции [135] путем дезактивации полярных центров [136]), так как комбинирование сорбентов с различным размером пор позволяет существенно-расширить диапазон фракционирования соединений [136, 137]. Данные о такого рода разделениях приведены в табл. 7.3, в которой сравниваются между собой области фракционирования декстранов на стеклянном сорбенте с контролируемым размером пор [137] и на смеси сефадексов [124]. Показано также, что полисахариды с Mw до 10 можно разделить на стеклянных сорбентах с подходящим размером пор [136]. [c.29]

Работы, посвященные теории и практике фильтрации через сефадексы, довольно многочисленны [5—8]. Сефадексы — сильно набухающие, сшитые поперечными связями макромолекулы полисахарида декстрана. Высокое сродство сефадексов в воде обусловлено огромным числом гидроксильных групп в их молекулах. Разделение веществ на колонках сефадексов происходит вследствие различия молекулярных весов, точнее, размера молекул веществ разделяемой смеси. Чем больше размер молекул, тем ниже коэффициент распределения веществ. Таким образом, чем выше молекулярный вес вещества, тем быстрее оно вымывается из колонки. В последние годы сефадексы нашли применение при фракционировании растворенных органических веществ морских вод, главным образом, с целью определения их молекулярного состава [9—15]. [c.153]

Трудно представить себе биохимика, который не пользовался бы распределительной гель-хроматографией для фракционирования смеси молекул по их размерам. На рис. 12.14 схематически изображена одна гранула геля из тех, что используются в молекулярных ситах. Удобные в употреблении молекулярные сита с большими размерами пор, такие как сефадекс (сшитые поперечными сшивками полидекстраны) и биогель (сшитый поперечными сшивками полиакриламид), всегда имеются в свободной продаже. Для препаративных целей используются также гранулы из пористого стекла и агарозные гели. Применение подобных материалов дало в руки исследователей действенное средство для разделения смеси молекул на фракции, в которых молекулы имеют приблизительно одинаковые размеры. [c.294]

Первонрячиной создания эффективных и весьма тонких методов исследования вирусных частиц нослужило применение новейшей техники (препаративные и аналитические ультрацентрифуги, аминокислотные анализаторы и высокоразрешающие электронные микроскопы) и совершенно новых материалов для фракционирования биологических макромолекул (ионообменные целлюлозы и гели сефадекса, агарозы и полиакриламида). Это позволило всесторонне изучить вирусы на молекулярном уровне, узнать их антигенную структуру и архитектонику, состав и физико-химические свойства как самих вирусных частиц, так и их компонентов. [c.3]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология