Электрофорез горизонтальный

Метод электрофореза на носителе во многом подобен методу хроматографии. Камера для электрофореза состоит из трех частей, двух электродных сосудов и расположенной выше подставки для носителя, например бумаги. Камеры должны быть плотно закрыты для предотвращения испарения растворителя. Носитель укладывают горизонтально, уровень растворителей в обеих электродных камерах должен быть одинаковым. Электроды, платиновый или графитовый, встроены в диафрагму. Вещество наносят на носитель в виде точек или полос. Место нанесения пробы зависит от предполагаемого направления движения. При движении разделяемых, веществ к аноду пробу наносят на катодную сторону, и наоборот. Для количественной и качественной оценки процесса разделения (проявление вещества и т. д.) применяют методы, используемые в бумажной хроматографии. [c.387]

Камера для электрофореза состоит из плексигласовой ванны с пригнанной к ней крышкой 0). В ванне имеются 2 электродных отсека (2), каждый из которых разделен продольной перегородкой (5) на два отделения, сообщающиеся между собой. Во внутренние отделения отсеков опускают электроды, а во внешние — концы бумажных полос (4), основную часть которых располагают на горизонтальной пластинке с шипами (5), находящейся в центральной части камеры. Между горизонтальной пластинкой и наружным отделением электродных отсеков имеются палочки (6), через которые перекидываются бумажные полоски и которые служат для их поддерживания. Под верхней крышкой камеры находится сделанная из плексигласа пластинка с большими круглыми отверстиями (7), на которую сверху кладутся смоченные в ди- [c.89]

Для приготовления агаровых пластинок используют предметные стекла. Предварительно их обезжиривают, тщательно промывают водой и высушивают. Стекла нумеруют, укладывают на строго горизонтальную поверхность и на каждое осторожно наливают пипеткой с широким концом 4 мл агара. Пузырьки воздуха в агаре необходимо вывести пипеткой на края стекла. Когда агар застынет и образуется твердый гель, в нем посередине вырезают лунку (щель) для нанесения исследуемого раствора. Приготовленные пластинки укладывают в электрофоретическую камеру. Агаровое плато соединяют с буферным раствором бумажными мостиками из фильтровальной бумаги. В щель каждой пластинки вводят сыворотку крови, предварительно разведенную буферным раствором. На электрофореграмму наносят около 100—300 мкг белка в объеме 0,01 мл. Прибор подключают к источнику тока. Медленно повышая напряжение, доводят силу тока до 20—25 мА (напряжение 200—300 В). Электрофорез проводят в течение 3—4 ч. [c.93]

Раствор полисахарида помещают в У-образную ячейку прибора для электрофореза, которая разделена плоскими шлифами на три секции таким образом, что ток жидкости через ее канал может быть прерван горизонтальным смещением центральной секции. При заполнении и монтировании ячейки раствор полисахарида помещают в нижнюю секцию. Одну часть центральной секции ячейки заполняют раствором полисахарида, а другую — буфером. Буфер помещают также в верхнюю секцию ячейки и в сосуды, соединенные с верхней секцией. При передвижении центральной секции в нормальное положение между раствором полисахарида и буфером образуется резкая граница. В ячейке поддерживают температуру 4 С, при которой плотность воды максимальная и конвекционные токи ничтожны. Смещение границы измеряют по фотографиям, сделанным через различные промежутки времени. Оптическое устройство работает по принципу регистрации изменения показателя преломления раствора в месте границы. [c.48]

Электрофорез в крахмальном геле. Гель готовят из гидролизованного крахмала. Горячий гель заливают в кювету глубиной 5—6 мм, которую закрывают специальной крышкой, устроенной так, что в застывшем геле остается поперечный ряд узких щелей (0,3—0,7 мм). В щели вносят кусочки фильтровальной бумаги, смоченной раствором исследуемого вещества, и проводят одномерный или двумерный электрофорез в горизонтальных или вертикальных установках. Преимущество горизонтального варианта — простота исполнения, вертикального — большая разрешающая сила. [c.147]

Электрофорез выполняют в установках вертикального или горизонтального типа. В ходе электрофореза необходимо следить за тем, чтобы кювета не перегревалась во избежание возникновения конвекционных токов. [c.148]

С помощью горизонтального электрофореза на бумаге можно проводить анализ смеси пептидов методом отпечатков пальцев и выделять микроколичества различных фракций. Для решения этих задач удобен электрофорез на бумаге в двух буферных растворах, который позволяет в одноэтапном эксперименте четко разделить кислые и основные компоненты смеси [8]. После гидролиза средней продолжительности в реакционной смеси обычно присутствует смесь кислых и основных пептидов. Одновременная подача двух разных буферных растворов способствует более полному разделению таких пептидов. [c.38]

Электрофорез на ацетат-целлюлозной мембране можно проводить практически в любой камере для горизонтального электрофореза, в которой размещаются полоски длиной свыше 8—10 см. Контакт с буферным раствором может осуществляться непосредственно концами мембраны или полосками фильтровальной бумаги. [c.72]

ГОРИЗОНТАЛЬНЫЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В КРАХМАЛЬНОМ ГЕЛЕ [c.80]

Полученный гель выливают в горизонтальную ванну, прикрытую стеклянной пластинкой. Эта ванна входит в комплект прибора для электрофореза. Гель должен полностью закрывать обеспечивающие электрический контакт фитили. Подготовку ванны с крахмальным гелем необходимо закончить в течение 3—5 мин. Примерно через час после этого в гель можно вносить исследуемый образец, как это описано в п. 4 разд. 1. [c.81]

Электрофорез продолжается 6 ч при 140 В и 70 мА. Закончив электрофорез, крахмальный блок горизонтально разрезают на две половины, одну из которых окрашивают амидовым черным 10 В (см. стр. 87). [c.81]

Методика. Закончив электрофорез, крахмальный блок горизонтально разрезают на две половины. Одну половину окрашивают обычным образом, другую переносят на стеклянную пластинку и располагают колонки крахмала так, как показано на фиг. 9. Затем вокруг них наливают горячий раствор агара (приготовление см. на стр. 127), при застывании которого образуется слой толщиной [c.82]

Крахмал суспендируют в 270 мл буферного раствора, предназначенного для геля, в котором растворено 40,0 г мочевины. Все остальные процедуры проводят так же, как и при обычном горизонтальном электрофорезе в крахмальном геле (стр. 80). [c.83]

Аппараты для высоковольтного электрофореза обеспечивают градиент напряжения от 50 до 100 В/см. В них специальное охлаждение становится обязательным. В горизонтальных камерах оно осуществляется с помощью металлической охлаждающей плиты, а в вертикальных — с помощью эффективного контакта с органическими растворителями. [c.95]

Электрофорез осуществляется при низкой температуре в небольших объемах буферного раствора на расположенной горизонтально фильтровальной бумаге при градиенте напряжения 30—40 В/см. [c.96]

Описание аппарата. На фиг. 15 схематически изображен изготовленный в мастерской аппарат для горизонтального электрофореза с охлаждающей плитой из плексигласа размером 44 х44 см. Циркуляция охлаждающей жидкости внутри плиты направляется особыми перегородками. В качестве такой жидкости применяют 50%-ный этанол, охлаждаемый в специальном резервуаре смесью льда с ацетоном или с помощью холодильного агрегата. Температура охлаждающей плиты должна быть примерно +6° С. На плиту кладут смоченный буферным раствором лист фильтровальной бумаги, соединенный с электродными отсеками прибора бумажными фитилями, покрытыми целлофаном. Сверху лист фильтровальной бумаги закрывают пластинкой из плексигласа толщиной 15 мм, которая в трех точках плотно прижимается к охлаждающей плите. [c.96]

На первом этапе проводят горизонтальный электрофорез при pH 4,3—5,0. 3—4 мг исследуемого материала наносят на бумагу [c.104]

Чем меньше буферного раствора содержится в фильтровальной бумаге, тем выше разрешающая способность горизонтального электрофореза. Поэтому перед нанесением образца следует особенно тщательно удалять избыток буферного раствора промоканием. [c.105]

В горизонтальных аппаратах для высоковольтного электрофореза одного типа охлаждение обеспечивается циркуляцией водопроводной воды в охлаждающей плите, изготовленной из металла. Металлическую плиту, разумеется, необходимо отделить от фильтровальной бумаги полиэтиленовой пленкой с соответствующими изоляционными свойствами. В аппаратах для высоковольтного электрофореза с водяным охлаждением фильтровальная бумага охлаждается и сверху и снизу двумя плитами, которые прижимаются друг к другу надувным резиновым кольцом. Если в ходе эксперимента применяли пришивание, то, для того чтобы обеспечить [c.113]

Электрофорез проводят в горизонтальном аппарате при градиенте напряжения 80 В/см. Сила тока при ширине пластинки 10 см должна быть 50— 60 мА. После 20—25 мин электрофореза пластинку вынимают, высушивают струей теплого воздуха и проводят идентификацию ДНС-аминокислот в ультрафиолете. [c.278]

Непрерывное оформление фокусирующего электрофореза осуществляется на листах бумаги и отличается от обычной методики тем, что по горизонтальному краю бумага разделяется на три участка при-катодный участок питается раствором комплексообразующего агента, прианодный участок — раствором минеральной кислоты, а средний участок — раствором смеси разделяемых ионов. Под влиянием [c.151]

Различные экспериментальные серийные установки для электрофореза на бумаге можно разделить на 3 группы з вертикальные, горизонтальные и с бумагой, зажатой между горизонтально расположенными стеклянными пластинками. Для точного измерения подвижности растворенных веществ особенно пригоден последний способ, при работе по которому отсутствует испарение. Испарение имеет место в установках с открытыми листами бумаги, поскольку при прохождении электрического тока выделяется тепло. Концы бумаги погружаются в раствор электролита, поток которого компенсирует испарение. [c.563]

Схема камеры для электрофореза на бумаге приведена на рис. 18. Для подготовки прибора к работе его устанавливают горизонтально и в электродные кюветы наливают заранее приготовленный буферный раствор при pH 8,6. На полоске бумаги длиной 27 см и щириной [c.125]

Необходимым условием для электрофоретического разделения компонентов на отдельные зоны является предотвращение конвекции. йертен [565, 567] для стабилизации разделенных зон в растворе применил вращение электрофоретической трубки. Его метод получил название зонального электрофореза в свободной среде. В процессе электрофореза горизонтальная трубка с внутренним диаметром 3 мм вращается вокруг своей продольной оси со скоростью 40 об/мин. Такое вращение предотвращает конвекционные возмущения, что можно объяснить следующим образом. Рассмотрим некоторую часть образца, помещенную во вращающуюся трубку в положении I, как показано на рис. 6. Если эта часть, представляющая собой жидкость, имеет более высокую плотность, чем окружающая среда, то она будет перемещаться вниз, а не по направлению к стенке. При вращении трубки образец станет синхронно колебаться относительно ее поперечного сечения, и в результате будет достигнута стабилизация. [c.22]

Рис. 2. Трубки с ПААГ после окончания электрофореза горизонтальные полоски — окрашеппые белковые зоны

И менее точен, но зато значительно проще, чем метод Тизелиуса. На полоску фильтровальной бумаги, увлажненной буферным раствором, наносят в форме поперечной черточки или пятна исследуемый биоколлоидный раствор. Полоску помещают в горизонтальном положении в закрытое пространство, а концы ее погружают в буферный раствор, где находятся электроды. После подключения источника электродвижущей силы электрическое поле вызывает движение компонентов, находящихся в черточке или пятне, вдоль полоски. Скорость перемещения компонентов зависит от их электрофоретической подвижности. Через некоторое время электрофорез прекращают, бумагу высушивают и погружают в раствор красителя, который на биоколлоиде адсорбируется сильнее, чем на бумаге. По полученному изображению видно положение компонентов в конце электрофореза, и можно судить об их числе и электрофоретической подвижности. Из сказанного выше видно, что бумага играет роль пористой среды, препятствующей растеканию компонентов и их конвективному перемешиванию со средой, в которой протекает электрофорез . В последнее время вместо бумаги используют гелеобразные среды (агар-агар, желатин), которые дают более резко очерченные зоны. Электрофорез на бумаге (и в других средах) сопровождается побочными явлениями, такими, например, как перенос вещества, вызываемый миграцией испаряющегося буфера (Машбёф, Ребейрот и др., 1953 г.). Кроме того, было установлено (Шелудко, Константинов, Цветанов, 1959 г.), что, например, в желатине не только сама электрофоретическая подвижность некоторых красителей меньше, чем в воде или водных растворах, но и соотношение между подвижностями компонентов в этом случае совсем иное. Эти особенности метода еще не до конца изучены. Поскольку рассматриваемый метод имеет важное практическое значение, различные проблемы создаваемой в настоящее время теории электрофореза в пористых и гелеобразных средах п разнообразные методы его использования являются предметом многих научных трудов. Некоторое представление о них читатель может получить из монографии [6 1. [c.158]

В камеру (прибор для горизонтального электрофореза типа 0Е-2а) помещают 10 бумажных полос размером 4X44 см, концы которых погружают в сосуды с раствором электролита. На бумажных полосках на расстоянии [c.127]

Электрофорез проводят в обычных приборах для горизонтального электрофореза на бумаге и тонкослойных пластинках (обязательно в закрытой во избежание подсыхания пленки камере), например фирмы AMAG (модели 67701 или 61000 последняя — для длинных полосок и высокого напряжения) или фирмы Savant (США). [c.461]

Подготовка камеры. Отсеки для электродов наполняют буферным раствором до одинакового уровня (во избежание перетекания буфера), примерно по 800 мл в каждый отсек. Во внутренние части электродных отсеков погружают электроды. На листе хроматографической бумаги (18X45 см) (при использовании тонких сортов бумаги образцы лучше наносить на отдельные полоски шириной 4—5 см) на расстоянии 15 см от одного из его узких сторон простым мягким карандашом (графит препятствует растеканию жидкости) очерчивают места для нанесения проб. Они представляют собой прямоугольники (2X0,3 см), большие < тороны которых располагают перпендикулярно длине бумажной полосы. Расстояние между стартовыми зонами и краями электрофореграм-мы — 2 см. Электрофореграмму пропитывают буфером, в котором будет проходить электрофорез. Для этого ее протягивают через кювету с буферным раствором. Концы бумажных полос (6—8 см) не смачивают. От избытка буфера освобождаются, промокая полосы между дву-мя-тремя лисгами фильтровальной бумаги. Влажную электрофореграмму помещают в камеру на центральную горизонтальную пластинку (5), а концы опускают в наружные отделения электродных отсеков Прибор плотно закрывают крышкой, под которой находятся смоченные водой листы фильтровальной бумаги. [c.91]

Одним из самых важных применений электрофореза является использование его в анализе естественных смесей коллоидов, например белков, полисахаридов и нуклеиновых кислот, а также продуктов, полученных фракционной перегонкой. При электрофорезе между раствором белка и буфером в специальной У-образной трубке, снабженной электродами, образуется резкая граница, за движением которой можно проследить с помощью оптической шлирен-системы (разд. 11.10). Эти опыты обычно проводят при температуре 4° С, т. е. при максимальной плотности воды, так что температурный градиент в электрофоретической кювете, вызванный нагреванием током, сопровождается наименьшим градиентом плотности. Градиенты плотности горизонтально поперек кюветы стремятся вызвать конвекцию. На рис. 20.1 [1] показана электрофоретическая картина плазмы крови человека в буферном растворе (pH 8,6) диэтилбарбитурата натрия с ионной силой 0,10 (после 150 мин при 6,0 В/см и 1°С). Строится график зависимости градиента показателя преломления от расстояния в кювете (горизонтальная ось). Одна картина получена для той части кюветы, в которой белки опускаются вниз, а другая — для той части, где белки поднимаются вверх. Начальные положения границ указаны на рисунке тупыми концами стрелок. Различные виды белков представлены альбумином, аг, аг-, р-, у-глобу-линами и фибриногеном ф. Площадь под определенным пиком почти точно пропорциональна концентрации белка, дающего эту границу. Так, например, процент альбумина может быть получен делением площади пика альбумина на суммарную площадь всех пиков белков. е-Граница в спускающейся части и б-граница в поднимающейся части картины обусловлены не белковыми компонентами, а изменениями концентрации соли, которые возникают в опытах с обычным переносом вблизи начального положения границы. [c.603]

Приборы. Используют прибор для электрофореза, предназначенный для анализа белков jtpoBH (Институт им. А. А. Богомольца АН УССР, г. Киев), или прибор для электрофореза со специальными камерами, сконструированными на химическом заводе им. П. А. Войкова, с источником питания УИП-1. Также могут быть использованы аппараты для горизонтального и вертикального электрофореза, предназначенные для фракционирования протеинов, исследований по органической химии, биологических и фармакологических исследований, типа ОЕ-201 (фирма Labor, Будапешт). [c.56]

Рис. 4.4. Картирование сайтов рестрикции. А. Результаты гель-электрофореза фрагментов ДНК, полученных ее расщеплением указанными ферментами. Очищенную ДНК гидролизовали рестриктазами ЕсоК и ВатШ раздельно, а затем их смесью, проводили гель-электрофорез и визуализировали продукты окращива-нием бромистым этидием. Числа слева от горизонтальных полос -длина фрагментов в парах оснований. Б. Рестрикционная карта, построенная по электрофоретическим данным. Числа - расстояние между сайтами узнавания соответствующих ферментов.

Локализация белковых фракций. Закончив электрофорез, ъанну с крахмальным гелем извлекают из прибора и располагают горизонтально на столе. Пленку парафина, закрывающую гель, удаляют, и всю поверхность крахмала покрывают листом фильтровальной бумаги. Лист плотно прижимают к поверхности геля в течение 5 мин, затем снимают его, высушивают в сушильном шкафу при 100 С и окрашивают белковыми красителями (см. стр. 54). Этим способом удается установить локализацию фракций, не прибегая к окрашиванию самого крахмального геля (метод отпечатков), [c.80]

В нашей лаборатории горизонтальный электрофорез в крахмальном геле проводят по методу Смитиса [26] в камере для зонального полумикроэлектрофореза следующим образом. [c.80]

Фиг. 15. Схема прибора для горизонтального средневольтного электрофореза на бумаге с охлаждением.

Фиг. 16. Укладка фильтровальной бумаги в приборе для горизонтального электрофореза. Чтобы предотвратить слишком интен-сивиый электроэидоосмотический поток буферного раствора, фильтровальная бумага (I) контактирует с фитилем (3) через целлофановую мембрану (2).

Комбинированное использование тонкослойной гель-фильтрации с электрофорезом или иммунодиффузией до настоящего времени представляет собой один из наиболее тонких методов микроанализа белков. Хансон и др. [10] разработали метод двумерного разделения, используемый для анализа белков. На первом этапе белки подвергают гель-фильтрации в тонком слое сефадекса G-200 или G-100, а на втором — электрофорезу. Они предложили прибор, в котором хроматографическую пластинку можно закреплять под углом для гель-фильтрации и горизонтально для электрофореза. В описанных экспериментах использовали стеклянные пластинки размером 30 x 30 см и толщиной 1 мм, на которые наносили слой геля сефадекса толщиной 0,5 мм. Для набухания сефадекс оставляли в 0,05 М вероналовом буферном растворе pH 8,6. Сначала проводили гель-фильтрацию, а затем в направлении, перпендикулярном первому, в течение 3 ч вели электрофорез при градиенте напряжения 10 В/см. Этот метод весьма успешно был применен для анализа сывороток крови человека, спинномозговой жидкости и гормона роста. [c.240]

После электрофореза или хроматографии полосы хроматографической бумаги сушат в горизонтальном положении и просматривают в ультрахемископе. Пятна нуклеотидов обводят карандашом и после сравнения со свидетелями элюируют 5 мл [c.50]

Электрофорез длится 2 часа 10 минут при градиенте Потенциала 50 в на 1 см. Нуклеотиды в электростатическом поле идут от катода к аноду и располагаются в последовательности цитидиловая, аде-ниловая, гуаниловая и уриди-ловая кислоты. После окончания электрофореза полоски вынимают и сушат в вытяжном шкафу в горизонтальном положении. [c.97]

Хорошие результаты, по нашим данным, дает электрофорез рибонуклеотидов в 0,04 М цитратном буфере pH 3,5 без применения ССи. Используемый при этом прибор горизонтального электрофореза должен иметь расстояние между резервуарами с буферным раствором не менее 40 см. Хроматографическую бумагу натягивают на специгальную пластмассовую рамку толщиной 5 мм и подвижной стенкой или раскладывают на редко натянутые тонкие нити типа жилки. Это делается для того, чтобы в процессе разделения нуклеотиды находились во влажной камере, а хроматографическая бумага не касалась дна прибора. [c.98]

Сефадексы являются превосходными наполнителями при Электрофорезе на колонках (Желлотт и сотр. [46]), поскольку при их использовании не наблюдается заметной необратимой адсорбции на частицах геля. Дозе и Краузе [47] с помощью горизонтального электрофореза на сефадексах 0-25 и 0-50 [c.268]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология