Фракционирование на колонке ступенчатое

Фракционирование белков сыворотки крови можно проводить с использованием градиентной или ступенчатой элюции. Сорбцию белков на колонке осуществляют при pH 5,65. При этом значении pH белки сыворотки крови могут сорбироваться на слабых анионитах. [c.111]

Фракционирование белков сыворотки крови на КМ-целлюлозе рекомендуется проводить путем создания ступенчатой элюции. Это обусловлено достаточно большими различиями в сродстве отдельных белковых фракций к иониту. Сорбция белков на колонке осуществляется при pH 4,6 ( стартовый буфер). При таком значении pH белки сыворотки крови сорбируются на слабых катионитах. [c.112]

Фракционирование полисахаридов на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой (31] проводят следующим образом. В колонку полисахариды вводят в виде водного раствора максимальной концентрации. Вначале ДЭАЭ-целлюлозу в колонке промывают водой, чтобы определить, удерживаются ли полисахариды этой целлюлозой. После этого проводят ступенчатое или непрерывное градиентное элюирование. Непрерывное градиентное элюирование позволяет определить число фракций и концентрации электролитов, необходимые для ступенчатого элюирования каждой из этих фракций. Ступенчатое вымывание позволяет лучше разделить полисахариды на фракции, чем непрерывное градиентное элюирование. Скорость протекания элюента через колонку не должна превышать 1,5 мл в минуту. Фракции объемом 10—20 мл собирают обычно с помощью автоматического коллектора. [c.47]

Практически удобнее, особенно если проводится повторное фракционирование, рассчитывать положение средних точек вертикальных ступенек, а не вычерчивать ступенчатую кривую. На график наносят значения исправленного кумулятивного веса фракции — — (ьУж) и соответствующие им значения М . Значения исправленного кумулятивного веса фракции приведены в шестой колонке табл. 1. Точки, обозначенные на рис. 1 светлыми кружками, вычислены именно таким методом эти точки определяют интегральную кривую, соответствующую уравнению (6). При использовании описанного метода предполагается, что каждая фракция имеет симметричное распределение по молекулярному весу и не содержит молекул, молекулярный вес которых больше или меньше среднего молекулярного веса последующей или предыдущей фракции, т. е. фракции почти не перекрываются. [c.9]

При определении ММР полиэтилена методом ГПХ получено хорошее соответствие с результатами обычного ступенчатого элюирования [59]. В этих экспериментах насадкой служил коммерческий стирогель, а фракционирование вели в ТХБ при 135 °С. Для анализа полиэтилена необходима колонка с высокой разрешающей способностью в диапазоне молекулярных масс более 10 , поскольку кривая распределения этого полимера сильно асимметрична и простирается в область чрезвычайно [c.288]

Получение преполимеров осуществляли в вакууме при 50 °С и различных отношениях N O ОН. Для стабилизации преполимеров концевые N O-группы обрабатывали метанолом, меченым по углероду. Фракционирование полиуретанов проводили методом ступенчатой экстракции в колонках [35]. Среднечисленную функциональность / определяли по значениям молекулярной массы и активности по [c.42]

Образец вносят либо в виде узкой зоны, либо распределяют по всему объему колонки при создании градиента. Фракционирование идет наиболее быстро и эффективно в том случае, когда образец внесен вблизи зоны фокусирования. Для внесения в виде узкой зоны образец (при создании ступенчатого градиента) растворяют в одной или двух промежуточных фракциях рабочего раствора или (при создании плавного градиента) в рабочем растворе промежуточной плотности, вытекающем из смесителя. Плотность зоны образца не должна превышать плотность нижнего слоя рабочего раствора. Плотность слоев можно определить ориентировочно с помощью обычного сахариметра. При распределении образца по всему объему колонки белок растворяют в разбавленном, а иногда и в концентрированном растворах, приготовленных для построения градиента. В этом случае раствор с образцом следует отделить от верхнего и нижнего электролитов, соответственно разбавленным или концентрированным рабочими растворами. [c.310]

Фракционирование по функциональности ПДИ-1 проводилось путем ступенчатой десорбции олигомера из колонки с активной насадкой (силикагель) растворителями с возрастающей полярностью [7]. [c.33]

Фракционирование полисахаридов роговицы глаза быка на колонке с целлюлозой при ступенчатом вымывании 0,3%-ными растворами ацетата [c.267]

Прочность сорбции мРНК на поли(и)-сефарозе, очевидно, зависит от длины ее полиадениловой цепочки. Бинум и Волкин осуществляли фракционирование поли(А)-РНК из культуры клеток миело-мы на колонке (0,5 X 10 см) поли(и)-сефарозы, уравновешенной 0,5 М раствором КС1 в 0,005 М Трис-НС1, pH 7,6. В таком же растворе вносили и РНК, промывали 40 мл 1 М КС1, а затем вели ступенчатую элюцию (по 20 мл) следующими растворами 0,5— 0,25—0,1 М КС1 (все — в том же буфере), чистым буфером, 1%-ным раствором ДДС-Na и, наконец, 90%-ным формамидом. Каждая ступень элюции снимала с колонки свой пик РНК. [c.444]

В современных аминекислотных анализаторах используются мелкозернистые катионообменники. Элюция идет при повышенном давлении, на большой скорости, так что весь анализ занимает около часа. Используются колонки длиной 20—30 см. Все фракционирование осуществляется на одной колонке при повышенной температуре (50— ТО ). Используются, как правило, три ступени смены элюента и ступенчатые изменения температуры элюцип, прпчем моменты изменения последней могут и не совпадать с моментами смены буфера. Десорбирующая способность элюента растет от ступени к ступени за счет увеличения pH от 3,2—3,5 (что обеспечивает отставание Glu от Asp п даже от Thr и Ser) и до 10, если ионная сила элюента остается неизменной. В других вариантах элюции от ступени к ступени увеличивается и концентрация соли (вплоть до 1 —1,5 М) тогда увеличение pH ограничивается заметно более скромными цифрами, как можно видеть из приведенных ниже примеров. Использование в качестве солп цитрата натрия (или лития) удобно для кислых значений pH кроме того, он прозрачен в УФ-области спектра. Титровать раствор цитрата натрия до нужного значения pH можно с помощью NaOH или НС1. Молярность соли надо оценивать по суммарной кон- [c.517]

Фракционирование белков сыворотки крови на КМ-целлюлозе осуществляют с помощью ступенчатого элюирования, подавая на колонку последовательно следующие растворы 0,02 М натрий-ацетатный буфер, pH 4,6 ( стартовый буфер), затем 0,05 М натрий-ацетатный буфер, pH 5,2 0,08 М натрий-ацетатный буфер, pH 6,0 0,1 М фосфатный буфер, pH 7,0 и, наконец, 0,1 М фосфатный буфер, содержащий 0,5 М Na l, pH 8,3. Каждый новый раствор подают на колонку только после того, как полностью элюируется пик, вымываемый предыдущим раствором. Скорость тока приблизительно составляет 50 мл/ч. Элюат собирают порциями по 2—3 мл. Обработку результатов см. на с. 108. Идентификацию белков осуществляют методом электрофореза на бумаге или в полиакриламидном геле (с. 112). Регенерацию КМ-целлюлозы проводят вне колонки. [c.113]

Для препаративного фракционирования лигнинов использовали электродиализ, ступенчатое извлечение из древесины, ступенчатое осаждение из растворов, элюирование из хроматографических колонок, а для аналитического фракционирования - ультрацентрифугирование, турбиди-метрическое титрование и эксклюзионную жидкостную хроматографию. При изучении молекулярно-массовых характеристик препаратов лигнина привлекались практически все методы определения молекулярной массы полимеров. [c.413]

Использование ступенчатых градиентов. Как отмечено в разд. 1.2.3 и на рис. 1.3, препаративную ЖХ можно использовать как быстрое средство выделения или обогащения классов соединений в условиях ступенчатого градиента. Иногда для простых смесей на этом может быть закончена необходимая очистка (см. пример на рис. 1.27). В других случаях для разделения сложного образца с компонентами, сильно отличающимися по полярности, может быть необходимо использовать многоступенчатую последовательность. Если оставить в стороне вопросы, связанные с растворимостью образца (см. разд. 1.6.2.2.6), то в адсорбционной ЖХ с помощью комбинации только четырех растворителей можно создать последовательность восьми градиентных ступеней и быстро разделить образец на фракции, которые затем можно индивидуально очистить в изократическом режиме. В каждой фракции спектр компонентов будет перекрывать диапазон к примерно только на 5—10 единиц. При скорости 1 мертвый объем в минуту процесс разделения, показанный в табл. 1.8, потенциально может быть закончен менее чем за 20 мин. Размер колонки может быть выбран в соответствии с имеющимся в наличии образцом. Для быстрого фракционирования образца можно аналогичным образом достаточно эффективно использовать градиентные схемы и в других методах разделения (ионный обмен, аффинная хроматография, распределение и т.д.). Классическая колоночная хроматография на открытых колонках часто выполнялась с использованием ступенчатого градиента, создаваемого элюотроп-ным рядом, подходящим для используемой неподвижной фазы. Однако, поскольку приготовление хорошей препаративной ЖХ-колонки требовало искусства и длительного времени. [c.100]

В особо трудных случаях, или когда компоненты образцов сильно отличаются по полярности и растворимости (требуется ступенчатый градиент), может стать необходимым нредадсор-бировать их на части неподвижной фазы. Для этого растворяют образец в хорошем растворителе, обычно намного более сильном, чем растворитель, который может быть использоваи в качестве подвижной фазы. Затем полностью адсорбируют этот раствор на достаточном количестве неподвижной фазы. Путем тщательной сушки, например с помощью роторного испарителя под вакуумом и осторожного нагревания, удаляют все следы растворителя, чтобы покрыть насадку образцом. При этом надо быть осторожным и не допустить разложения образца. Затем сухой материал помещают на вход препаративной ЖХ-колонки или в отдельную колонку, подсоединенную к входу первой колонки. Затем через колонку пропускают подвижную фазу или проводят элюирование с помощью ступенчатого градиента. Такая методика достаточно хороша для фракционирования образца при условиях градиента, однако не дает хороших разделений в изократических системах. Медленное растворение компонентов образца приводит к интенсивному расширению полосы, размыванию фронта пика (ср. разд. 1.4.42), и результаты редко бывают удовлетворительными. В таких случаях попытайтесь найти лучшее средство разделения (например, ситовую хроматографию с использованием подходящего раствори-теля в качестве подвижной фазы). [c.103]

Б. Хроматография. На колонку размером 1x50 см пипеткой осторожно наносят 2 мл сыворотки, диализованной в течение суток против стартового буферного раствора. После того как нанесенная сыворотка войдет в Ф-целлюлозу, ее остатки смывают тремя порциями буферного раствора по 2 мл. Фракционирование белков производят с помощью ступенчатого элюирования, подавая на колонку следующие растворы 0,02 М NaHzPO (стартовый буферный [c.214]

Весслау [24] сравнил фракционирование полиэтилена высокой плотности посредством ступенчатого элюирования из песочно колонки с обычным методом осаждения и получил сравнимые результаты, хотя метод элюирования требует значительно меньшего времени. Весслау нанес также данные Танга [27], Тремонтоцци [28], Духа и Кюхлера [11] на общий график и получил соотношение [c.90]

Фракционирование пептидов на ионообменных смолах основано на целом ряде принципов, о которых уже говорилось выше (гл. I и II). Сюда входят и различия в электрохимических свойствах разделяемых фрагментов, и различное сродство неполярных радикалов к бензольным кольцам матрицы смолы, и изменение концентрации конкурирующих ионов в буферном растворе. Поэтому элюция пептидов со смолы достигается путем пропускания через колонку буферных растворов изменяющейся ионной силы и pH. Это изменение концентрации ионов и pH может осуществляться линейно или ступенчато. Элюируемые компоненты идентифицируют нингидриновой колориметрией, лиофилизуют (высушивают из замороженного состояния) и проверяют на гомогенность с помощью хроматографии на бумаге и методом пептидных карт. Негомогенные пики фракционируют дополнительно. В качестве примера можно привести разделение пептидов, полученных триптическим гидролизом окисленной (т. е. лишенной дисульфидных мостиков) рибонуклеазы (рис. 11). [c.84]

Помимо хорошо известных в литературе методов дробного фракционирования и фракционного растворения, в настоящее время получает широкое распространение метод фракционирования на колонке, предложенный Десро . По этому методу полиэтилен осаждают на целитовую насадку, а затем экстрагируют толуолом, ступенчато повышая температуру опыта. Этот метод был модифицирован (включая установки, смеси растворитель — осадитель и градиент температуры в колонке) Франсисом, Куком и Эллиоттом Генри Кенионом с сотрудниками и другими. [c.12]

В зависимости от целей фракционирования можно использовать оба метода элюировапия. Для препаративной цели в большей степени подходит ступенчатое элюирование, а ири аналитическом фракционировании большую информацию можно получить, используя градиентное элюирование. Размеры колонок могут быть разными они могут содержать от 1 мл МАК" (емкость около 100 мкг ДНК) до 200 мл МАК (емкость 200 мг ДНК гли больше). При использовании менее 2 мл суспензии МАК для фракциопи- [c.124]

Представлявшие ранее несомненную ценность методы адсорбционной хроматографии на колонках, заполненных смесью угля и целита [2], а также методы распределительной хроматографии на порошкообразной целлюлозе [3] в настоящее время утратили свое значение в качестве аналитических процедур, но сохранили определенную важность для препаративных целей. В качестве примера можно привести предварительное фракционирование на колонке (58X5 см), заполненной смесью угля и целита (в соотношении 2 3), олигосахаридов, образующихся при частичном гидролизе 50 г ксилана березы [4]. Ступенчатое элюирование водными растворами этанола с увеличивающейся концентрацией последнего дает в результате четырех хроматографических разделений (в каждом используется 25% гидро-лизата) обогащенные фракции, из которых далее при помощи других методов легко выделить олигосахариды вплоть до моносахарида (см. разд. 7.2.3). [c.6]

Устойчивость комплексов, образуемых борат-ионами с сахарами и полиолами, зависит от различных структурных факторов, которые обусловлены числом соседних ис-гидроксиль-ных групп, а также от экспериментальных условий, в частности от pH и ионной силы среды и концентрации в ней борат-ионов. Первые сообщения о разработке метода разделения смесей сахаров на сильноосновной анионообменной смоле дауэкс 1 в боратной форме в ступенчатом градиенте pH (от 8 до 9) и концентрации боратного буфера появились около 30 лет назад [70, 71]. В дальнейшем этот метод нашел применение для фракционирования полиолов [72]. Однако предложенные первоначальные условия не обеспечивали удовлетворительного разделения, а время анализа составляло примерно 60 ч. Данный метод обычно не находил применения в качестве аналитической методики до тех пор, пока интенсивные исследования влияния различных факторов, в частности температуры, ионной силы буфера и размера частиц смолы, на эффективность и скорость хроматографии не привели к значительному улучшению характеристик разделения. Использование смолы со средним размером частиц 20 мкм и подогрева колонки до температуры 50°С при градиентном элюировании буферами с увеличивающейся концентрацией бората (0,1—>-0,2 М) и хлорида (О—>-0,2 М), [c.21]

Фракционирование осуществляют в растворителе с соответствующей растворяющей способностью путем ступенчатого изменения температуры, либо фракционированным осаждением или экстракцией системой из хорошего и плохого растворителя, путем изменения их соотно-н1ения или температуры. Из. многих приведенных в литературе методов следует указать на метод, использованный при непрерывных способах работы и давно разработанный Бейкером и Вильямсом [12], позволяю-пи1Й произвести разложение на практически любое количество четких фракций. При работе по этому способу сочетается постоянное изменение состава смеси растворителя и осадителя с температурным перепадом при элюировании полимера, выделяющегося в колонке. [c.177]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология