Классическая колоночная хроматография

Для жидкостно-жидкостной ТСХ со стационарной неполярной фазой поверхность диоксида кремния подвергается гидрофобизации обработкой алкилсиланами. Первоначально, как и в классической колоночной хроматографии, при формировании тонкослойных пластинок использовались сорбенты и носители жидких фаз с размерами частиц 200-250 мкм. В настоящее время чаще применяют мелкодисперсные сорбенты с узким диапазоном размеров частиц от 1 до 25 мкм. Появился и соответствующий термин — высокоэффективная тонкослойная хроматография. [90]. Подробно с техникой тонкослойной хроматографии и областями ее применения можно познакомиться в [91-94]. [c.189]

КЛАССИЧЕСКАЯ КОЛОНОЧНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ [c.195]

Адсорбционную очистку проводят методом классической колоночной хроматографии. В качестве адсорбентов используют оксид алюминия и силикагель с большой удельной поверхностью (например, КСМ-5) и размером зерна 0,1—0,5 мм. Сорбенты предварительно сушат в течение нескольких часов при 250—300 °С и 160—180 °С. Обычно применяют стеклянные колонки достаточно большой вместимости с отношением высоты к диаметру в пределах 20—30 и краном, работающим без смазки. Наилучшие результаты достигаются на колонках с двумя слоями сорбента нижнюю половину колонки набивают оксидом алюминия, а верхнюю—силикагелем. [c.132]

III. Методы А. Классическая колоночная хроматография [c.101]

Одним из наиболее эффективных методов очистки синтетических красителей является ТСХ (см. гл. 2). Поскольку для масс-спектрометрии требуются очень небольщие образцы, методом ТСХ можно получить их соверщенно чистыми без лишнего труда и затрат. В большинстве случаев ТСХ предпочтительнее классической колоночной хроматографии, поскольку обычно первая быстрее и дает лучшее разделение. Иногда применима жидкостная хроматография высокого давления (см. гл. 4). Удобно, что синтетические красители дают зоны, которые не нужно специально делать видимыми методами, могущими изменить образец. Соскабливая соответствующую зону и экстрагируя краситель, находящийся на сорбенте, получают чистый образец. [c.256]

Анализ полициклических углеводородов можно проводить с помощью классической ЖХ на оксиде алюминия, силикагеле и сефадексе с последующим детектированием по УФ-поглощению и флуоресценции (см. табл. 12.19 и 12.20). Ранее классическую колоночную хроматографию считали [165] первой стадией в анализе раствора или экстракта сложной смеси на содержание полициклических ароматических углеводородов . Методы определения следов полициклических углеводородов с помощью классической колоночной хроматографии (табл. 12.19 и 12.20) рассмотрены в [c.430]

Предел определения (порог чувствительности) и селективность (специфичность) анализа — различные параметры, хотя они и тесно взаимосвязаны в любом хроматографическом методе. Обе характеристики зависят от чистоты пробы и используемых реактивов, метода разделения и способов измерения или детектирования. Чувствительность можно определить как минимальную концентрацию вещества, детектируемую в присутствии остальных компонентов пробы и применяемых в ходе анализа реагентов. Чувствительность и селективность необходимо оценивать, исходя из конкретной аналитической задачи. В классической колоночной хроматографии чувствительность и селективность зависят от метода анализа элюата. Колонки подчас использовали для предварительного выделения вещества (или груплы веществ) из сложной смеси соединений, которые могут помешать дальнейшему анализу более чувствительными и селективными методами, например методом газовой хроматографии (ГХ). В большинстве конкретных задач, решаемых описываемым методом, максимальное количество вещества, вводимого в колонку, составляет несколько миллиграммов, хотя существующие методы детектирования позволяют оперировать количествами, на несколько порядков меньшими. В ряде других конкретных задач колонки используют для концентрирования. Так, большой объем раствора, содержащего сложную [c.546]

В круговой хроматографии элюирование осуществляется в направлении от центра к периферии слоя сорбента. Образец наносят в виде дуги или кольца вокруг центра хроматограммы, куда затем подают растворитель. Полученные с помощью этого метода хроматографические зоны представляют собой концентрические дуги или окружности, расположенные на различном удалении от центрального пятна. Если хроматографирование в плоском слое сорбента осуществляется таким же образом, как в классической колоночной хроматографии, метод непрерывного элюирования соответствует простому элюированию с колонки, многократное элюирование — хроматографии с повторяющимся циклом, а радиальное элюирование — центрифужной колоночной хроматографии. Следует отметить, что под действием центробежной силы скорость радиального элюирования плоских хроматограмм увеличивается . для создания такой силы используют приспособление типа фонографа. [c.23]

В физико-химической картине и химизме процесса мы не обнаружим ничего нового. Закономерности обычной классической колоночной хроматографии соблюдаются во всех случаях и при высоких давлениях, но подбор условий эксперимента (дисперсность сорбентов, скорость потока, размеры колонок) специфичны для этого прогрессивного метода. [c.5]

Наряду с полярными адсорбентами в настоящее время все большее и большее распространение получают химически модифицированные сорбенты, в частности для систем с обращенной фазой используют сорбенты, поверхность которых неполярна. Область их применения примерно такая же, как область применения активного угля в классической колоночной хроматографии. Активные угли из- [c.107]

Для жидкостной хроматографии при высоком давлении на полярных твердых фазах справедливы те же закономерности, которые установлены для классической колоночной хроматографии ( адсорбционная хроматография ). Применяется жидкостная хроматография при высоком давлении главным образом для разделения неполярных соединений и соединений со средней полярностью. Сильнополярные и ионогенные соединения удерживаются на полярных адсорбентах слишком сильно, и для их разделения применяют другие системы (распределительная или ионообменная хроматография) предпочтительно с неполярными неподвижными фазами. [c.152]

Перенесение методов разделения, известных из классической колоночной хроматографии, в хроматографию при высоком давлении не представляет никаких трудностей. Конечно, это касается только разделительной системы, но не данных по удерживанию. В распределительных системах свойства материала носителя всегда играют некоторую роль, поэтому могут проявиться различия, обусловленные предварительной обработкой носителя. [c.220]

Хроматографическое разделение в открытой колонке занимает много времени. Это является основным недостатком классической колоночной хроматографии. Высокоэффективная жидкостная хроматография лишена этого недостатка. В этом высокопроизводительном методе наиболее широко применяют поверхностно-пористые ионообменники, обладающие рядом преимуществ по сравнению с обычными ионитами 1) они хорошо выдерживают давление 2) мас-сопередача в тонком поверхностном слое ионита осуществляется быстро, что обеспечивает установление равновесия за очень короткое время. [c.606]

В классической колоночной хроматографии, как правило, используются сорбенты с частицами диаметром 30—200 мкм. На основе таких материалов можно получать колонки эффективностью до нескольких тысяч теоретических тарелок на 1 м длины. Уже такой эффективности достаточно было бы для решения множества аналитических и препаративных задач. Однако главный недостаток крупнозернистых сорбентов — большая длина пути диффузии внутри зерен. Поэтому потенциальная эффективность таких колонок если и реализуется, то лишь при малых линейных скоростях подвижной фазы. В классической колоночной хроматографии используются разнообразные по химической природе типы сорбентов, но лишь некоторые из них оказались пригодными в качестве основы для разработки материалов ВЭЖХ. Наиболее популярен из них силикагель. Другие типы материалов (окись алюминия, углеродные сорбенты) в течение последних десятилетий используются все реже. Современные материалы для ВЭЖХ имеют параметры, оптимизированные с точки зрения кинетики процесса. Их свойства и методы получения детально рассмотрены в специальной литературе, поэтому здесь мы ограничиваемся лишь той информацией, которая нужна хроматографисту-практику в первую очередь. [c.29]

Использование ступенчатых градиентов. Как отмечено в разд. 1.2.3 и на рис. 1.3, препаративную ЖХ можно использовать как быстрое средство выделения или обогащения классов соединений в условиях ступенчатого градиента. Иногда для простых смесей на этом может быть закончена необходимая очистка (см. пример на рис. 1.27). В других случаях для разделения сложного образца с компонентами, сильно отличающимися по полярности, может быть необходимо использовать многоступенчатую последовательность. Если оставить в стороне вопросы, связанные с растворимостью образца (см. разд. 1.6.2.2.6), то в адсорбционной ЖХ с помощью комбинации только четырех растворителей можно создать последовательность восьми градиентных ступеней и быстро разделить образец на фракции, которые затем можно индивидуально очистить в изократическом режиме. В каждой фракции спектр компонентов будет перекрывать диапазон к примерно только на 5—10 единиц. При скорости 1 мертвый объем в минуту процесс разделения, показанный в табл. 1.8, потенциально может быть закончен менее чем за 20 мин. Размер колонки может быть выбран в соответствии с имеющимся в наличии образцом. Для быстрого фракционирования образца можно аналогичным образом достаточно эффективно использовать градиентные схемы и в других методах разделения (ионный обмен, аффинная хроматография, распределение и т.д.). Классическая колоночная хроматография на открытых колонках часто выполнялась с использованием ступенчатого градиента, создаваемого элюотроп-ным рядом, подходящим для используемой неподвижной фазы. Однако, поскольку приготовление хорошей препаративной ЖХ-колонки требовало искусства и длительного времени. [c.100]

По классической колоночной хроматографии алкалоидов имеется обширная литература [2—5]. Ссылки на более ранние работы приведены в Библиографии по колоночной хроматографии [6] и в обзорах, опубликованных в Analyti al hemistry. [c.100]

В распределительной хроматографии сорбенты служат главным образом в качестве носителей жидкой стационарной фазы, обычно воды и водных буферных растворов с pH 3—7 (в зависимости от природы" алкалоидов). Реже используют полярные органические растворители, например формамид. В классической колоночной хроматографии в качестве сорбента чаще всего применяют целлюлозу и диатомитовые земли (под разными коммерческими названиями, например Hyflo Super el и elite 545), реже — силикагель. [c.102]

В классической колоночной хроматографии алкалоиды в отдельных фракциях определяют спектрофотометрически, колориметрически, потенциометрическим титрованием, взвешиванием сухого остатка и т. д. Описано детектирование алкалоидов в элюате на спектрофотометре с проточной ячейкой. Для автоматического анализа, например в токсикологии, разработан интересный прибор [12], в котором колоночная хроматография сочетается с экстракционной обработкой комплексов алкалоидов [c.103]

До последнего времени широкое применение находила классическая колоночная хроматография на силикагеле или окиси алюминия. Недавно в химии бора стали использовать сухую колоночную хроматографию. Основными преимуществами этого метода являются хорошее качество и высокая скорость разделения, незначительная степень деструкции твердой фазы под действием водорода (вследствие гидролиза), а также возможность быстрого подбора условий разделения методом ТСХ. Хорошие результаты были получены не только при разделении окрашенных соединений (металлокарбораны, имеющие структуру типа сэндвича), но также и при разделении соединений, поглощающих в УФ-области спектра, при условии проведения хроматографии в кварцевых колонках или в колонках из полиэтилена или полипропилена. Для разделения борорганических соединений пытались использовать гель-проникающую хроматографию [1] и высокоэффективную жидкостную хроматографию [2], однако эти методы требуют дальнейшего усовершенствования. [c.167]

Рассмотрим в качестве примера разделение методом ЖХВД на силикагеле двух соединений с удовлетворительным коэффициентом емкости к и коэффициентом разделения а, близким к единице. На хроматограмме, полученной при элюировании 4%-ным раствором эфира, пики таких соединений недостаточно хорошо разделены. Поэтому следует улучшить а, меняя состав элюирующей системы. В такой ситуации всегда необходимо заменить наиболее полярный компонент, сохранив при этом элюирующую способность системы (выражаемую параметром е ). С этой целью целесообразно, например, определить, как влияет на а переход к системе с 4% этилацетата в пентане или 26% дихлорметана в пентане. Нельзя ожидать, что замена пентана, например, на гексан окажет существенное влияние на а. При длительном хроматографировании методом классической колоночной хроматографии или при повторном разделении методом ЖХВД с безводными растворителями или системами растворителей вода из колонки постепенно удаляется, что ухудшает хроматографические свойства колонки. Это явление особенно важно при работе с неполярными системами растворителей, когда эффективность колонки сильно зависит от содержания воды в адсорбенте и когда содержание воды убывает с возрастанием полярности элюирующих систем. Для сильнополярных растворителей этот эффект незначителен. Чтобы предотвратить его, можно или добавлять воду к растворителям или, что еще лучше, предварительно насыщать элюирующую систему водой в специальной колонке. [c.195]

В классической колоночной хроматографии содержание элементов во фракциях элюата устанавливают различными методами неорганического анализа. Поскольку разделение ионов, а также соединений требует сравнительно больших объемов растворителя, то при разделении методом колоночной хро.матографни часто наблюдаются значительные эффекты разбавления, и в результате для количественного анализа следов в элюатах (без дополнительного обогащения) пригодны лишь высокочувствительные способы обнаружения. В табл. 37 приведена сводка таких методов, в которых колоночная хроматография сочетается с различными способами обнаружения и служит для удаления соединений, мешающих определению (или даже основного компонента), для разделения фракций, содержащих отдельные элементы, или для обогащения сильно разбавленных проб. [c.101]

Устройства для сбора отдельных фракций, необходимых только для того, чтобы можно было определить растворенные составные части пробы, в аналитической жидкостной хроматографии при высоком давлении больше почти не нужны, так как чувствительность детекторов достаточна. Только в особых случаях (например, при измерении радиоактивности и др.) собирают отдельные фракции либо имеющие постоянный объем, либо собранные за определенный промежуток времени. Для препаративных работ, когда размер пробы превышает 100 мг, конечно, подходит коллектор фракций. В этом случае должна иметься возможность (так же как в препаративной газовой хроматографии) управлять сборником фракций с помощью самописца. Тогда число фракций, необходимых для проведения всей работы, значительно уменьшается. Наряду с пробоотборниками, известными из классической колоночной хроматографии, в продаже имеются приборы меньших размеров (на 10-20 фракций), выпускаемые специально для жидкостной хроматографии при высоких давлениях. [c.56]

Полностью пористые матершлы (например, силикагель, окись алюминия) с большой удельной поверхностью (50 — 500 м г) и большим удельным объемом пор (0,2-2 млт), г. е. такие же, как используемые в обычной классической колоночной хроматографии, но с диаметром частиц в пределах 5 — 50 мкм. Преимущественно применяют ситовую фракцию от 10 до 5 мкм. С помощью таких материалов получают очень эффективные разделительные колонки (см. разд. [c.83]

В критичесжих случаях линейную емкость адсорбента следует определить экспериментально. Используя найденные значения к или к, строят их зависимость от логарифма величины пробы, приходящейся на грамм адсорбента. На рис. 1.2 приведена подобная кривая для силикагеля. После того как величина пробы достигнет некоторого определенного значения, размывание полосы и значения к начинает меняться. Согласно Снайдеру [1], 10%-ное изменение значения к еще допустимо (определение линейной емкости). Однако такое изменение к допустимо только для классической колоночной хроматографии, в жидкостной хроматографии при высоких давлениях оно, по-видимому, должно быть меньше. Не следует превьпиать полученные наибольшие допустимые значения пробы. Увеличение ширины полосы связывают с образованием хвостов. [c.106]

Из числа многих разработанных для классической колоночной хроматографии адсорбентов в жидкостной хроматографии при высоких давлениях используют практически только силикагель и окись алюминия на их основе изготавливают либо пористые носители, либо поверхностно-пористые материалы (ППМ). Все эти носители представляют собой типичные окисные полярные адсорбенты чаще всего с одинаковым рядом элюирования. Однако селективность их несколько различается. Так, окись алюминия более, чем силикагель, пригодна для разделения многоядерньре ароматических углеводородов. [c.107]

Силикагель, покрытый нитратом серебра, используют в жидкостной хроматографии для селективного отделения насыщенных органических соединений от ненасыщенных. Подобные системы, известные из классической колоночной хроматографии, применимы и в жидкостной хроматографии прт высоком давлении. В работах [10, 11] описаны примеры такого разделения (нитрат серебра [10], тринитрофлуоренон [11]). [c.111]

С целью сокращения элюирования проводится программированное дезактивирование неподвижной фазы или вытеснение сильно адсорбирующихся соединений водой. Следует, однако, отметить, что при разделении указанным способом возможно одновременное элюирование нескольких соединений. Главным образом это вызываете проскоком зоны воды. Кроме того, конец зоны вещества, элюируемого с образованием хвоста, в некоторых случаях может так сжаться, что его можно принеть за следующий пик. С проблемой расщепления зоны вещества хроматографисты столкнулись уже в классической колоночной хроматографии [44]. [c.142]

Распределительная хроматография занимает промежуточное положение между адсорбционной хроматографией и хроматографией на обращенных фазах. Распределительные системы предпочтительны при разделении членов гомологического ряда. Такое разделение можно провести и в системах с обращенной фазой. Методом адсорбционной хроматографии можно разделить только низшие члены гомологического ряда. Оптические изомеры удается разделить только в форме пар диасгереомеров (см. рис. VI.21), что в ( щем не представляет трудностей. Для расщепления рацематов в принципе пригодны оптически активные подвижные фазы. Подобные фазы для классической колоночной хроматографии известны только в форме производных целлюлозы [2, 3], для жидкостной хроматографии при высоком давлении они не пригодны. Область применения ионообменной хроматографии ограничена, так как использовать можно лишь чисто водные системы. В таких системах можно разделять те ионы или соединения, которые легко и обратимо образуют комплексы (обмен лигандов) с ионами, связанными с ионообменником. Кроме того, на органической матрице ионообменника может также происходить неионообменная сорбция. Если в системах с ионообменниками к водным элюентам добавляют органические растворители, то элюенты разделяются и образуется распределительная система. Если бы дополнительно учитывали обе эти возможности разделения на ионообменниках, то возможности использования этого метода были бы более многообразны, чем это следует из табл. Х.1. [c.218]

Очищают растворители методом классической колоночной хроматографии. Колонку с внутренним диаметром 2-5 см, длиной 40-150 см заполняют высокоактивными адсорбентами, напримф окисью алюминия и силикагелем, и сразу же наливают сверху элюент. Пфвую часть капающего из колонки растворителя собирают отдельно, так как чаще всего он недостаточно чист, но его [c.232]

Адсорбционную очистку проводят методом классической колоночной хроматографии, используя адсорбенты (оксид алюминия или силикагель) с больщой удельной поверхностью и размером зерен 0,1-0,5 мм. Сами сорбенты предварительно сущат при 250-300 °С несколько часов. Наилучшие результаты достигаются на колонках с двумя слоями сорбента нижний — AI2O3, верхний — силикагель. При массах сорбентов 100 г каждого в зависимости от их активности можно очистить 300-600 мл неполярных растворителей и в 1,5-2 раза меньще растворителей средней полярности (хлороформ, тетрагидрофуран). Качество очистки проверяют по УФ-спектрам. Растворители с полярностью, превыщающей в элюотропном ряду этилацетат, таким методом очистить нельзя из-за очень большого сродства их к сорбентам. [c.177]

Однако при всех достоинствах классической колоночной хроматографии необходимо отметить ее достаточную длительность. Вместе с тем этот недостаток с успехом преодолевается получившим в последние годы развитие методом, использующим тонко-дисперсные адсорбенты, элюирование под давлением и названным высокоразрешающей жидкостной хроматографией под давлением (HPL ). [c.22]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология