Бактерии ауксотрофные

Перенос генетического материала путем прямого контакта между двумя клетками называется конъюгацией. Уже давно на основании морфологических данных предполагали, что и у бактерий может происходить своего рода спаривание однако только эксперименты с множественными мутантами бесспорно доказали, что и у бактерий возможна передача генетического материала при прямом межклеточном контакте. В 1946 г. Ледерберг и Татум провели решающий опыт с двумя мутантами Е. соИ К12, каждый из которых был ауксотрофным по двум различным аминокислотам (рис. 15.14). Один двойной мутант нуждался в аминокислотах А и В, но был способен синтезировать С и D (А В D ) другой мутант был ему комплементарен (А В" С D ). Эти мутанты не росли на минимальной питательной среде и не образовывали колоний. Однако если на ту же минимальную среду высевали смесь суспензий обоих мутантов, то колонии появлялись. Клетки этих колоний обладали наследственной способностью синтезировать все аминокислоты, т.е. принадлежали к типу A B D (были прото-трофными). Такие клетки возникали с частотой 1 10 это были генетические рекомбинанты-они объединяли в себе генетическую информацию двух реципрокно дефектных (взаимодополняющих) родительских клеток. Использование в качестве исходных штаммов множественных мутантов исключало возможность появления ревертантов, так как вероятность одновременной реверсии по двум генам составляет величину порядка 10 на генерацию. Необходимой предпосылкой рекомбинации служил прямой контакт родительских клеток. [c.456]

Биосинтез нуклеотидов у ауксотрофных бактерий, лишенных способности синтезировать определенные аминокислоты. Нормальные клетки Е. соИ синтезируют все аминокислоты, но некоторым ауксо-трофным мутантам, не способным к синтезу определенных аминокислот, для оптимального роста необходимо вводить эти аминокислоты в питательную среду. Аминокислоты нужны не только для синтеза белков некоторые из них требуются для биосинтеза других азотсодержащих клеточных компонентов. Допустим, у нас [c.679]

Для перепечатывания реплик к чашке с питательным агаром, на котором растут небольшие колонии бактерий, прижимают стерильную бархатную подушечку, после чего ее используют для перепечатывания реплик в чашки с минимальной средой. Исходные колонии и колонии, образовавшиеся в чашках-репликах (с минимальной средой), сравнивают, после чего отбирают колонии ауксотрофов (которые не росли на минимальной среде). На втором этапе ауксотрофы можио тем же методом реплик перенести в чашки с минимальной средой, содержаш,ей различные питательные добавки (аминокислоты, пурины, пиримидины, витамины и т. д.). Отбор становится проще при предварительной обработке пенициллином (дополнение 7-Г) облученных клеток в минимальной среде. Пенициллин убивает растущие клетки, тогда как ауксотрофы, которые не растут на минимальной среде, выживают. В дальнейшем производят разрушение пенициллина, добавляя пенициллиназу (дополнение 7-Г). В результате этих операций процентное содержание ауксотрофных мутантов в суспензии значительно увеличивается [3]. [c.188]

Относительно быстрое выяснение путей биосинтеза аминокислот и других соединений стало возможным благодаря использованию аук-сотрофных мутантов грибов и особенно бактерий. Ауксотрофность многих мутантов обусловлена утратой способности к образованию какого-то фермента, участвующего в биосинтезе. Для роста мутанта нужен в этом случае конечный продукт того пути биосинтеза, который блокирован из-за выпадения функции фермента. Эти мутанты обладают еще [c.254]

Сейчас во всем мире в больших количествах получают глутаминовую кислоту или ее натриевую соль (около 100 ООО т в год), -лизин и метионин (по 50 000 т в год). Большую часть этого количества дает микробиологический синтез (за исключением получения метионина). Для биосинтеза используют ауксотрофные мутанты, т. е. бактерии, которые под влиянием мутагенных факторов (облучение, химическое воздействие и др.), утратили способность самостоятельно синтезировать какую-нибудь необходимую для роста и развития аминокислоту, например гомосерин, а с другой стороны, приобрели способность к сверхсинтезу другой аминокислоты. Это значит, что для роста и размножения таких бактерий в среде должны содержаться определенные аминокислоты — гомосерин, треонин или метионин и т. д. Очень часто этим мутантам необходим и биотин. Такие бактерии называют гомосериндефицитными или биотиндефицитными. В то же время эти мутанты обладают способностью в большом количе- [c.157]

Пенициллиновый метод отбора (и разработанный позднее метод отпечатков —метод реплик, — который будет описан в гл. VI) позволил легко выделить огромное количество ауксотрофов Е. соН. Среди этих ауксотрофов были обнаружены бактерии, нуждающиеся для роста в пуринах, пиримидинах и в семнадцати из дв дцати стандартных аминокислот. Неизвестны ауксотрофные мутанты лишь для трех аминокислот, аланина, аспарагина и глутамина. [c.121]

Часто для обозначения питательных потребностей организма пользуются терминами прототроф и ауксотроф . Прототроф не нуждается в факторах роста, ауксотроф требует добавления таких факторов в среду. Ауксотрофные формы часто являются мутантными организмами, или патогенами. Фактором роста в принципе может называться любое вешество. Например, молочнокислые бактерии нуждаются в наборе почти всех аминокислот, и в данном случае они и являются факторами роста. Но чаше ауксотрофность проявляется по витаминам (кофакторам ферментов). Обычно источником комплекса витаминов служит дрожжевой автолизат (автолиз дрожжей проводят при температуре 50 °С с небольшим количеством толуола) с добавлением витамина В12, так как в дрожжевом автолизате его мало. Дрожжевой автолизат — это также и источник азота в виде аминокислот и полипептидов. [c.72]

Для более полного включения радиоактивной метки удобно использовать мутантные штаммы бактерий, ауксотрофные по одной из аминокислот или тимину. [c.266]

Погибает большое число нрототрофных клеток, мутанты же, которые не способны расти на минимальной среде, выживают. Затем клетки отмывают от яда и засевают на чашки Петри, со-держаш,ие агар и минимальную среду с некоторой добавкой универсальной среды. На этой среде оставшиеся неубитыми клетки дикого типа образуют большие колонии, а мутанты растут медленнее и дают мелкие колонии. В результате обогащения мутантов с помощью пенициллина удается обнаружить события, происходящие с очень малой вероятностью, например порядка 10 . Найдя на поверхности агара ауксотрофные мутанты, мы можем провести детальный анализ их недостаточности, пересевая их на пластинки с промежуточными средами, как говорилось выше. Метод Ледерберга и Зиндера — весьма важное развитие приемов селекции бактерий. [c.297]

Клон этих ауксотрофных бактерий можно отобрать из колонии на исходной чашке. [c.145]

Микробиологический синтез лизина. Белки семян зерновых культур (пшеницы, ячменя, кукурузы и др.) не сбалансированы по содержанию незаменимых аминокислот и прежде всего лизина. Поэтому для удовлетворения потребностей животноводства в нашей стране, как и в ряде других стран (Япония, США, Франция, Испания, Югославия), организовано крупнотоннажное производство этой незаменимой аминокислоты. В основу производства положены технологии с использованием одноступенчатого микробиологического синтеза, которые включают промышленное культивирование ауксотрофных мутантов бактерий из рода СотупеЬас1егшт, способных к сверхсинтезу этой аминокислоты. Обычно у диких штаммов, из которых получены ауксотрофные мутанты, сверхсинтеза лизина не наблюдается, так как у них действуют механизмы саморегуляции. В клетках бактерий аминокислота лизин синтезируется из аспарагиновой кислоты через ряд промежуточных этапов, связанных с образованием полуальдегида аспарагиновой кислоты, дигидропиколино-вой кислоты и а,8-диаминопимелиновой кислоты, являющейся непосредственным предшественником лизина. Полуальдегид аспарагиновой кислоты является также одним из предшественников в синтезе аминокислот— треонина, метионина и изолейцина (схема I). [c.276]

Чаргафф и его сотрудники [58] выделили ДНК из протопластов дикого штамма Е. oli и этой ДНК обрабатывали мутант, ну кдаю-щийся в лизине. Оказалось, что в результате такой обработки у бактерий, ауксотрофных по лизину, восстанавливается про-тотропный тип питания, при котором протопласт уже не нуждается в поступлении лизина извне. Эта форма бактериальной трансформации была названа ими восстановительной . [c.304]

Один из методов, использованных для выяснения направления репликации у . oli, состоял в следующем. В хромосому бактерии в сайте att (рис. 15-1) встраивали профаг X, а во многие другие сайты, локализованные вдоль хромосомы, встраивали ДНК фага Ми-1 [189]. Особенно удобно использовать в этом случае фаг Ми-1, поскольку его включение может происходить во многих сайтах, локализованных в пределах хорошо картированных генов. Включение в пределах какого-то гена инактивирует этот ген (мутация добавки), что позволяет точно определить место локализации профага Ми-1. Удалось получить целую серию штаммов бактерий, содержащих как профаги X, так и фаг Ми-1, причем последний был локализован в различных участках хромосомы. Эти бактерии были, кроме того, ауксотрофны по определенным аминокислотам. Благодаря этому репликацию можно было останавливать. [c.272]

Менее распространены одноступенчатые технолог получения триптофана на основе ауксотрофных мутантов бактерии Ba illus subtilis, осуществляемые по схеме, близкой к способу получения лизина. Длительность одноступенчатого процесса 48 ч, а концентрация триптофана в культуральной среде составляет 10 г/л. [c.49]

Для производства аминокислот бактерии стали использоваться с начала 50-х годов. Штаммы их постоянно улучшали генетическими методами, выделяя ауксотрофные мутанты и мутанты с измененными регуляторными свойствами. Чтобы обес печить образование аминокислот в больших количествах, в любом случае необходимо изменить систему регуляции обмена. Для этого можно либо стимулировать потребление субстрат в некоторых путях биосинтеза и выделение аминокислот в среду,. [c.147]

Мутационный переход от ауксотрофов к прототрофам исследовать легче, чем обратный переход, так как можно высеивать большие популяции ауксотрофных родителей на минимальной среде, а прорастать в колонии будут только прототрофы. Witkin [9] наблюдала, что мутации такого типа, вызванные ультрафиолетовыми лучами, возникали со значительно большим выходом, в том случае, если для бактерий непосредственно после облучения были доступны аминокислоты, по сравнению с посевом на минимальной среде. Kada [е] удалось глубже проникнуть в сущность этого явления при использовании штамма Е. соИ требующего для роста тирозин, метионин, урацил и тимин. Он исследовал индуцирование мутаций, приводящих к способности синтезировать тирозин, и оценил относительную значимость активного синтеза белка, РН1< и ДНК после облучения путем исключения или снабжения метионином, урацилом и тимином соответственно. Было обнаружено значительное различие в мутагенном действии ультрафиолетовых и рентгеновских лучей с ультрафиолетовыми лучами выход мутаций после определенной дозы заметно уменьшался, если ингибировался синтез белка или РНК, а на выходе рентгеновских мутаций наличие или отсутствие любого из веществ, необходимых для роста родительского ауксотрофного штамма, никак не сказывалось. [c.150]

Запаздывающее проявление мутаций. Если в гаплоидной клетке произойдет реверсия, превращающая ауксотрофную мутантную клетку в прототрофную, то такая обратная мутация сразу проявится в феноти пе. Восстановление способности вырабатывать определенный фермент можно в надлежащих условиях тотчас же распознать. Иначе обстоит дело с мутациями, приводящими, наоборот, к ауксотрофному состоянию, например к утрате способности синтезировать определенную аминокислоту. Такие мутации удается распознать лишь по прошествии периода, включающего несколько клеточных генераций. Запаздывающее проявление объясняется в данном случае тем, что, хотя мутация и делает невозможным синтез необходимого фермента, еще продолжает какое-то время действовать фермент, синтезированный ранее. Новый признак проявится лишь тогда, когда в результате клеточных делений произойдет достаточное разбавление этого фермента. С запаздывающим изменением фенотипа приходится также считаться при выявлении фагоустойчивых бактерий. Если фагочувствительные бактерии приобретают устойчивость в результате мутации, ведущей к утрате способности синтезировать особое рецепторное вещество, то эта устойчивость выявится лишь тогда, когда в результате ряда клеточных делений это вещество будет в достаточной мере разбавлено. [c.448]

После воздействия, индуцирующего мутации, и многочасового роста бактериальную суспензию инкубируют в среде с глюкозой, но без азота. Это делается для того, чтобы дать возможность клеткам использовать оставшиеся растворимые соединения азота. Через несколько часов добавляют пенициллин и сульфат аммония и проводят инкубацию (на этот раз продолжительностью до 24 ч.). Прототрофные родительские клетки растут, и пенициллин их убивает, тогда как ауксотрофные мутанты, нуждающиеся в определенной аминокислоте, не растут, и это позволяет им уцелеть. Затем суспензию освобождают от пенициллина промыванием или добавлением пенициллиназы и высевают на агаризованную среду, содержащую аминокислоты. Среди вырастающих в таких условиях бактерий процент ауксотрофных клеток оказывается более высоким (помимо них растут также прототрофные клетки, выдержавшие обработку пенициллином). Если бактерии устойчивы к пенициллину, то с той же целью можно применить другие антибиотики (новобиоцин, циклосерин, колистин, канамицин). Для избирательного уничтожения растущих клеток используют и такое явление, как летальный синтез . [c.451]

Отбор бактерий-ауксотрофов существенно упростился благодаря открытию Ледер-берга. Он показал, что если популяцию, содержащую прототрофные и ауксотрофные бактерии и растущую на минимальной среде, обработать пенициллином, то выживают только ауксотрофы, поскольку пенициллин убивает лишь растущие клетки. Последующее перенесение клеток на минимальную среду, в которую добавлен соответствующий фактор роста, завершает отбор ауксотрофов. [c.487]

Бактерии и в самом деле скрещиваются друг с другом. Если смешать клетки двух различных ауксотрофных штаммов Es heri hia oli К12, то среди их потомков обнаруживаются рекомбинанты, ауксотрофные сразу по двум факторам роста, а также рекомбинанты, возвратившиеся к дикому типу (т. е. прототрофы, или анауксотрофы). Однако в данном случае необходим прямой контакт между двумя бактериальными клетками в отличие от трансдукции (когда участок бактериального генома переносится из клетки в клетку бактериофагами) или трансформации (когда участок генома, свободно блуждая, проникает в клетку-реципиент). Показано, что если разделить два штамма, способных к взаимной рекомбинации, поместив их в U-образную трубку со стеклянной пористой перегородкой, не пропускающей бактерий, но легко проницаемой для фагов и фрагментов генома, то рекомбинации не происходит. [c.170]

В целях промышленного получения незаменимой аминокислоты триптофана разработаны технологии на основе использования ауксотрофных мутантов бактерии Ba illus subtilis с нарушенным синтезом фенилаланина и тирозина. Все технологические процессы организованы примерно по такой же схеме, как и получение лизина с помощью мутантов коринебактерий. Ферментация длится 48 ч при 37 С, концентрация триптофана в культуральной жидкости достигает 10 г/л. После отделения культуральной жидкости от клеток бактерий она упаривается и высушивается при 110—120°С. Высушенный продукт называют кормовым концентратом триптофана (ККТ). [c.282]

Тем же самым методом, который использовался ранее при работе с нейроспорой, можно точно установить природу недостающего фактора роста у любого ауксотрофного мутантного штамма. Для этого образны клона ауксотрофных бактерий вносят в ряд пробирок с минимальной средой, в каждую из которых были добавлены различные предполагаемые факторы роста —аминокислоты, витамины, пурины или пиримидины. Вещество, добавление которого к минимальной среде оказывается необходимым и достаточным для роста бактерии, и есть то вещество, в котором нуждается для своего роста ауксотроф. Татум не смог идентифицировать точную природу фактора роста для всех выделенных им ауксотрофных мутантов. Однако он установил, что многие из полученных им ауксотро-фов Е. ali реагируют на добавление в минимальную среду лишь одного какого-нибудь фактора. Например, один из полученных им мутантов нуждался для роста только в треонине, другой — только в пролине, третий —только в триптофане, четвертый —только в тиамине, пятый — [c.120]

Эти свойства ауксотрофных мутантов Е. соИ явились дальнейшим подтверждением теории один ген — один фермент. Восстановление роста ауксотрофа при добавлении в среду какой-то одной аминокислоты, витамина или пурина свидетельствует о том, что мутация, приведшая к возникновению этого ауксотрофа из прототрофной бактерии дикого типа, связана лишь с каким-то одним геном бактерии, который контролирует один-единстЕенный фермент, катализирующий одну из стадий биосинтеза соответствующего фактора роста. [c.121]

Метод, использованный Татумом для выделения ауксотрофов, оказался очень сложным приходилось отбирать наугад и вновь высевать тысячи бактериальных колоний. Поэтому генетики бактерий обрадовались, когда в 1948 г. Дэвис и Ледерберг опубликовали одновременно метод, позволяющий проводить прямой отбор ауксотрофов. Предложенный ими метод основан на том, что антибиотик пенициллин убивает бактерии только в том случае, если они находятся в процессе роста. Пенициллин препятствует синтезу клеточной стенки бактерии. Поэтому бактерии, растущие в его присутствии, вырастают из своей оболочки и в конце концов лопаются. Для бактерий, которые в данный момент не растут и, следовательно, не образуют клеточной стенки, очевидно, не имеет значения, подавлен синтез их клеточной стенки пенициллином или нет. Поэтому, чтобы отобрать небольшую фракцию ауксотрофных мутантов среди всех выросших колоний, культуру бактерий инокулируют в минимальную среду, содержащую пенициллин. В этих услоьиях все содержащиеся в культуре прототрофы будут расти и, следовательно, погибнут от действия пенициллина. Но любой оказавшийся в этой культуре ауксотроф, который не может расти из-за отсутствия в минимальной среде необходимого ему фактора роста, при этом уцелеет. Когда большинство прототрофов бывает убито, пенициллин из культуральной среды удаляют, а нем ногие выжившие клетки высевают на агар с полной средой. В принципе (хотя, увы, это не всегда так) после обработки культуры пенициллином на агаре с полной средой должны появляться только такие колонии, которые образуются клонами ауксотрофов. После этого уже можно описанным ранее методом определять их потреб нссти в спеиифических факторах роста. [c.121]

Проходивший летом 1946 г. в Колд-Спринг-Харборе 11-й симпозиум по количественной биологии был посвящен Наследственности и изменчивости у микроорганизмов . Этот симпозиум стал памятным событием в истории молекулярной генетики, так как именно на этом симпозиуме было сделано сообщение о существовании пола у бактерий. (К этому вопросу мы вернемся в последующих главах.) Однако для участников симпозиума вопросом первостепенной важности были не эти совершенно неожиданные открытия, а несомненный триумф теории один ген —один фермент. Несколько докладчиков сообщили о своих исследованиях ауксотрофных мутантов у грибов и бактерий. Изложенные ими факты показывали, что рост большинства ауксотрофных мутантов действительно можно восстановить, добавляя к минимальной среде лишь один какой-нибудь метаболит. После одного из таких докладов выступил Макс Дельбрюк и указал, что, как ни убедительны на первый взгляд эти данные, они все же не доказывают правильности теории один ген —один фермент, хотя, безусловно, они и не противоречат тезису, что каждый ген контролирует образование отдельного фермента, катализирующего отдельную стадию реакции огромного метаболического ансамбля. Сам метод выделения ауксотрофов, говорил он, исключает объективность выводов, так как дает возможность обнаруживать мутанты именно такого типа, которые, судя по всему, всем хочется обнаружить. Так, если допустить, что существуют гены, контролирующие не один, а сразу очень много ферментов, то по крайней мере один из этих ферментов мог бы быть связан с незаменимой для клетки функцией. И тогда ни одно из присутствующих в полной среде относительно простых веществ не могло бы компенсировать отсутствие такой незаменимой функции. Иными словами, даже если бы допущение один ген — много ферментов было правильным, мутации в таких генах при использовании описанного метода отбора мутантов все равно бы обнаружить не удалось, так как соответствующие мутантные клетки вообще не образовывали бы колоний на агаре с полной средой. В заключение своей критики Дельбрюк предложил, чтобы поборники теории один ген — один фермент разработали такие опыты, которые бы дали возможность опровергнуть предложенную им теорию, так как если мы такими методами не располагаем, то вся масса совместимых с этим тезисом доказательств ничего не дает в его подтверждение . [c.122]

В то время как значение флуктуационного теста и метода пересева сводится сейчас лишь к тому, что в свое время с их помощью был решен очень важный вопрос, метод отпечатков остается и сейчас одним из наиболее ценных методов в исследованиях генетики бактерий. Метод отпечатков нашел широкое применение при отборе ауксотрофных мутантов, подобных тем, которые были описаны в гл. V. При использовании этого метода для выделения акусотрофов засевают ряд исходных чашек с полной средой, содержащей бульон, так что на каждой из этих чашек после инкубации вырастает несколько сот колоний прототрофных бактерий. Затем с этих исходных чашек делают отпечатки на чашки с минимальной средой. Легко обнаружить присутствие на исходной чашке с полной средой любой редкой ауксотрофной мутантной колонии эти бактерии неспо- [c.143]

Легче всего объяснить мутации типа La - -La , Тгр - -Тгр или - -His". Очевидно, что в этом случае мутантный фенотип обусловлен потерей каталитической функции фермента. Эта потеря функции обусловлена в свою очередь мутацией в гене, контролирующем первичную структуру соответствующей полипептидной цепи. Мутации такого типа должны, по-видимому, происходить с высокой частотой, обусловленной следующими причинами. Во-первых, замещение аминокислоты почти в любом месте полипептидной цепи, вероятно, нарушит третичную и четвертичную структуру белка таким образом, что он утратит свою каталитическую функцию. Поэтому любое из очень многих возможных мутационных изменений в соответствующем гене может привести к функционально дефектному мутантному фенотипу. Во-вторых, прототрофность (или способность сбраживать сахар) бактерий дикого типа зависит от последовательного действия нескольких ферментов. Поэтому при мутации в любом из этих нескольких генов возникнет мутантный, ауксотрофный, или неспособный сбраживать сахар, фенотип. Менее ясна природа мутирования Топ" — Toп так как механизм синтеза рецепторов для фага Т1 в клеточной стенке Е. соИ пока еще мало изучен. Тем не менее существуют косвенные указания на то, что отсутствие рецепторов для фага TI у мутантных клеток Топ обусловлено тем, что эти мутантные клетки утратили функциональный белок, имеющийся у клеток Топ . Но если это так, то почему мутации [c.152]

Ледерберг считал, что наиболее хорошие результаты даст метод скрещивания двух различных ауксотрофных бактерий при совместном выращивании их в полноценной среде и последующем высеве образцов культуры на минимальную среду, что дало бы возможность отобрать любые редкие прототрофные рекомбинанты, которые могут в этих условиях возникнуть. Однако Ледерберг понимал также, что если акты рекомбинаций будут настолько редкими, что число прототрофных рекомбинантов будет меньше чем 1 на 10 родительских бактерий, то обратные мутации к прототрофности у одного или обоих ауксотрофных родительских штаммов (мутации, которые, по-видимому, должны встречаться со сравни- юй частотой) могут препятствовать обнаружению истинных рекомбинантов. Поэтому он считал, что следует проводить скрещивания, используя в качестве родительских штаммов множественные ауксотрофы, несущие два или более мутантных генов. В этом случае возможность восстановления прототрофности за счет обратных мутаций практически исключалась, так как трудно было представить вероятность возникновения обратных мутаций сразу в нескольких генах одного из родительских штаммов. В 1946 г. Ледерберг решил провести такие скрещивания, однако, чтобы не тратить время на выделение необходимых множественных ауксотрофов самому, [c.214]

К моменту проведения этого эксперимента уже была известна генетическая трансформация пневмококков и было установлено, что она осуществляется бактериальной ДНК- Поэтому на первый взгляд казалось вероятным, что Ледерберг и Татум столкнулись всего лишь с другим случаем такой трансформации. Могло оказаться, например, что при совместном росте двух ауксотрофных родительских штаммов из некоторых клеток Met+ Bio штамма В в результате спонтанного лизиса выделялись молекулы ДНК, несущие гены met bio, и что эти молекулы проникали в компетентные клетки Thr Leu Thi штамма А, приводя к образованию прототрофных трансформантов. Однако весьма скоро выяснилось, что происхождение таких рекомбинантов едва ли можно объяснить трансформацией, поскольку было показано, что для их появления необходим непосредственный контакт между бактериями штаммов А и В. Так, Ледерберг и Татум показали, что если к культуре одного штамма добавить стерильный фильтрат среды, в которой был выращен другой штамм, то образования прототрофов не происходит, даже если клетки этого штамма были разрушены или лизированы непосредственно перед фильтрацией среды. В 1950 г. Дэвис получил дополнительные данные, подтверждающие результаты Ледерберга и Татума, проведя свой эксперимент в U-образной пробирке (фиг. 107). Два ауксотрофных штамма А и В высевали в ветви U-образной пробирки, которые были разделены в нижней части пористым стеклянным фильтром, непроницаемым для клеток Е. соИ, но пропускающим частицы размером менее 0,1 мкм, а следовательно, и свободные молекулы ДНК- Затем обе бактериальные культуры выращивали до насыщения. Повышая и понижая поочередно на одном из концов U-образной пробирки давление, медленно перегоняли культуральную жидкость из одной ветви в другую. В результате два ауксотрофных штамма использовали одну и ту же питательную среду, но между клетками непосредственного контакта не было. Ни в одной из ветвей U-образной трубки прототрофы обнаружены не были. Следовательно, для образования рекомбинантных бактериальных геномов необходимо, чтобы две конъюгирующие родительские клетки пришли в контакт. [c.216]

Доказав с помощью флуктуационного теста, что за плодовитость скрещиваний Р+ X Р" ответственны спонтанные Н1г- мутации , возникающие в р+-популяции, Вольман и Жакоб повторили уже предпринимав-щуюся ранее попытку обнаружить спонтанные мутанты, а именно использовали разработанный Ледербергом метод отпечатков для непосредственного выделения мутантов. С этой целью исходную чашку, содержащую полноценную среду, засевали достаточным числом клеток ауксотрофной Р+-культуры для образования сплошного газона бактерий. Затем [c.228]

ЭТОТ газон перепечатывали с помощью бархата (гл. VI) на чашку с минимальным селективным агаром, поверхность которого была покрыта плотным слоем ауксотрофных Р -бактерий, неспособных расти на этой среде. Генетический состав F - и F -штаммов был подобран таким образом, чтобы сделать возможным возникновение таких генетических рекомбинантов, которые были бы способны расти на селективном агаре чашки-реплики. Часть редких Hfr-клонов среди F -бактерий исходной чашки, способных образовывать селектируемый рекомбинантный тип, захватывается бархатом и переносится на газон F -бактерий чашки-реплики. В результате на этой чашке возникают рекомбинантные колонии. Местоположение такой рекомбинантной колонии указывает, таким образом, зону на газоне F -бактерий исходной чашки, в которой возникли Hfr-бактерии. Эту зону газона отбирали, высевали на вторую чашку и повторяли один или два раза процедуру отпечатков для селективного обогащения культуры Hfr-клетками. Наконец, отдельные Hfr-колонии обогащенной популяции F -клеток проверяли на плодовитость и среди них находили чистые клоны Hfr-клеток. Изменяя генотип Р -клеток и селективные условия исходной чашки, Вольман и Жакоб выделили из одного и того же родительского Р+-штамма различные Hfr-штаммы, некоторые из которых, подобно HfrH, переносят с высокой частотой участок генома thr-leu, а другие — иные участки генома. Таким образом, было доказано, что плодовитость скрещиваний F Х F действительно определяется небольшим колн-4e TB0M Hfr-6aKTepHn, возникающих спонтанно во время роста F -куль-туры. [c.229]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология