Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Матрицы полиакриламид

    При измерениях в неподвижном растворе можно использовать три различных способа иммобилизации энзима в электродном устройстве [21 ]. В первом энзимный слой представляет собой раствор глюкозооксидазы (100 мг/мл) и пероксидазы (50 мг/мл). Во втором способе энзимная смесь физически закреплена в полиакриламиде, который полимеризуется под влиянием света на нейлоновой сетке. Третий способ заключается в том, что смесь энзимов химически связана с матрицей из полиакриловой кислоты. Во всех случаях энзимный слой на Г-селективном мембранном электроде закрывается чашечкой, сделанной из диализной бумаги. Электроды хранят в фосфатном буферном растворе при pH = 6. [c.329]


    Природа полимерной матрицы. Полимерные гели, применяемые для иммобилизации, способствуют созданию оптимального микроокружения включенного фермента, что позволяет добиться высокой каталитической активности иммобилизованных препаратов. Оптимизация микроокружения достигается за счет подбора соответствующей гелеобразующей системы. Особенно удобными с этой точки зрения являются гели на основе сополимеров производных акриловой кислоты. Варьируя химическую природу исходных мономеров и их соотнощение, можно получать полимерные матрицы с наиболее подходящими для данной ферментативной реакции характеристиками. В частности, при введении в состав полимера мономерных звеньев, несущих электрический заряд, повышается каталитическая эффективность иммобилизованного препарата в реакциях с участием заряженных субстратов. Например, скорость реакции гидролиза положительно заряженного субстрата этилового эфира а-Ы-бен-зоил-/.-аргинина под действием трипсина, иммобилизованного в геле полиакриламида, возрастает при введении в полимерную цепь путем сополимеризации отрицательно заряженных мономерных звеньев акриловой кислоты. Увеличение скорости ферментативной реакции объясняется повышенным сродством положительно заряженного субстрата к отрицательно заряженной полимерной матрице. [c.66]

    Энзимы. Иммобилизованные энзимы получают нанесением на твердый полимер, после окончания реакции он полностью регенерируется. Иммобилизованные энзимы обладают всеми достоинствами, присущими фиксированным на носителе катализаторам. Для связывания энзима с носителем используют различные способы [49, 50] ограничение подвижности молекулы энзима ( матричная ловушка ) сшивание полимера, например полиакриламида, проводят в присутствии энзима, молекулы которого больше пор матрицы, при этом энзим фиксируется физически адсорбция энзима на инертном носителе или ионообменнике капсулирование энзимов с помощью мембран, проницаемых только для малых молекул ковалентное связывание энзима с полимером-носителем, содержащим функциональные группы. [c.84]

    В электродах первого типа глюкозооксидаза химически связывалась с полиакриламидом, тонкий слой которого закрепляли с помощью кольца между платиновым электродом и пленкой целлофана. В системе второго типа глюкозооксидаза механически удерживалась у электрода матрицей из полиакриламидного геля. И, наконец, третий тип отличался тем, что порошкообразная растворимая глюкозооксидаза удерживалась между электродом и целлофановой мембраной с помощью резинового кольца. Электрод помещали в раствор глюкозы и на него подавали потенциал 0,6 В (против НКЭ). Пероксид водорода, образовавшийся в ходе ферментативной реакции, диффундировал из слоя, где находился фермент, к платиновому электроду и окислялся по реакции  [c.327]


    Если мы начнем рассмотрение с полистирольного сорбента, содержащего фрагменты L-Pro а), то увидим, что из двух возможных диастереомерных комплексов, образуемых бидентатным лигандом, комплекс L—I менее стабилен ввиду стерической затрудненности сольватации. Следовательно, в этом случае сначала элюируется 1 а затем о-энантиомер. В случае тридентатных лигандов соседняя группа, в рассматриваемом примере карбоксильная, оказывает большее стабилизирующее влияние, чем координация молекулы воды. Но такое замещение возможно только в I—L-комплексе, который теперь более устойчив, и о-энантиомер элюируется соответственно раньше [-энантиомера. Теперь рассмотрим сорбент на основе полиакриламида с хиральными фрагментами ь-Рго (б) здесь следует учитывать влияние полярных групп в структуре матрицы. В этом случае в комплексообразовании участвуют электронодонорные карбонильные группы полиакриламида [112]. Предполагают, что стабилизация комплекса, обусловленная участием в комплексообразовании карбонильного кислорода амидной группы, меньше для 1—о-комплексов вследствие стерических взаимодействий с заме- [c.144]

    На рис. 109 представлена зависимость поляризации разбавленных растворов системы флуоресцеин — полиакриламид для различных молекулярных весов полимеров. Откладывая р как функцию Т ц, где т] — вязкость воды при температуре Г, получают прямую, отсекающую на оси ординат отрезок ро 0,5 и имеющую наклон В, увеличивающийся с ростом молекулярного веса 139]. Поэтому время релаксации вращательной диффузии р растет с увеличением молекулярного веса. Номере увеличения молекулярного веса величина р приближается к предельному значению, равному 6-10 сек, в то время как свободный флуоресцирующий краситель имеет величину р, примерно в десять раз меньшую [33]. Для полимера определенного молекулярного веса, связанного с флуоресцеином в комплексе, величина р увеличивается по мере того, как подавляется сегментальное движение частично перекрывающихся полимерных цепей. Из данных, приведенных на рис. ПО, видно, что, хотя величина р для полимеров с двумя различными молекулярными весами растет неодинаково при низких концентрациях, в области концентраций выше 50% величины р этих полимеров совпадают. Свободный флуоресцеин в растворах полимеров имеет, конечно, более низкую величину р, но по мере увеличения локальной вязкости р приближается к значениям, характерным для чистых полимерных матриц. [c.183]

    Среди способов иммобилизации наиб, распространение получили ковалентное связывание фермента с матрицей и включение фермента в гель, В первом случае в качестве матрицы обычно используют целлюлозу, декстраиовые гели (сефарозу, агарозу), микропористые стекла или кремнеземы, а также синтетич. полимеры. Матрицу при ковалентной иммобилизации ферментов обычно предварительно активируют, обрабатывая, напр., бромциаиом, азотистой к-той или цианурхлоридом. Благодаря этому она становится носителем активных группировок, к-рые способны вступать в р-цию сочетания, взаимод. с группами ННг, ОН, СООН, Во втором случае в качестве гелеобразующего полимера используют полиакриламид. [c.215]

    Неподвижные фазы в эксклюзионной хроматофафии выбирают для решения конкретной аналитической задачи. Первоначально устанавливают, какая система растворителей может быть использована для анализа (водная или водно-органическая), что и определяет тип сорбента. Так, например, разделение водных смесей проводят на сшитых декстранах (сефадекс) или полиакриламиде (биогель Р). С органическими растворителями разделение проводят на гидрофобных полистиролах с различной степенью сшивки (стирогель, порагель, биобид С). Подобные гидрофобные гели обладают хорошей разделяющей способностью только в том случае, если полимер набухает в органическом растворителе. Такие набухшие гели неустойчивы к давлению, скорость потока очень низка. Для эксклюзионной хроматофафии при высоких давлениях колонки заполняют устойчивыми к давлению неподвижными фазами с жесткими матрицами — силикагелями. Недостаток таких сорбентов — высокая адсорбционная активность, которую можно подавить силанизацией поверхности либо выбором подходящего по полярности элюенга (см. разд. 8.7.1). Например, используя в качестве подвижной фазы метиленхлорид ипи тетрагидрофуран, на силикагеле можно разделить по молекулярным массам попистиропы. [c.326]

    Интенсивные исследования в области ХЛОХ, проводимые с 1970 г., привели к синтезу большого числа сорбентов на базе различных матриц (полистирол, полиакриламид, полиметилметакрилат, силикагель) и различных хиральных селекторов (из которых наибольшее распространение нашли закрепленные через атом азота ь-Рго, L-flллo-HO-Pro и ь-НО-Рго). Перечень этих сорбентов дан в табл. 7.9. [c.145]

    Полиакриламидные гели стабильны в диапазоне pH 1-г-Ю и при использовании обычных элюентов. Они не содержат заряженных групп, и поэтому ионообменные взаимодействия с хроматографируемыми веществами минимальны. Полиакриламидные гели биологически инертны и вследствие этого не подвержены микробной атаке. Поскольку частицы геля сильно прилипают к чистой стеклянной поверхности, в работе [22] рекомендуется использовать силиконизированную стеклянную или полиэтиленовую лабораторную посуду. Недостаточная механическая прочность полиакриламида ограничивает его применение в качестве матрицы для аффинной хроматографии. [c.23]


    Для приготовления антигенных иммуносорбентов используют два способа. В первом из них достаточно концентрированный раствор антигена превращают в пространственную сетку, сшивая молекулы белка между собой глютаровым альдегидом или другим бифункциональным агентом. Второй способ состоит в ковалентном связывании антигена с гидрофильной водонерастворимой полимерной матрицей типа полиакриламида, агарозы или сефадекса. [c.110]

    Следует иметь в виду, что при элюции белков из геля может выходить большое количество линейного полиакриламида, не вошедшего в состав матрицы геля. Он не обнаруживается при оценке чистоты белка аналитическим электрофорезом. Между тем аналитическое ультрацентрифугирование показывает, что количество элюированного полиакриламида может быть таким же, как и самого белка. Дополнительную очистку белка в этом случае можно провести его сорбцией на ионообменную смолу [Brooks, Sander, 1980]. [c.118]

    Ионообменная хроматография. Этот вид хроматографии можно считать вариантом адсорбционной хроматографии. Принцип метода состоит в том, что ионо-обменник обратимо адсорбирует заряженные молекулы. Существует два типа ионообменников катиониты (несут отрицательные заряды, например 80 карбоксильные группы) и аниониты (заряд положительный, например, четвертичная аминогруппа, алифатические или ароматические аминогруппы). Матрицы бывают декстрановые, целлюлозные, акрильные, фенольные, используются смолы дауэкс и др. Мембранные белки (как и полисахариды) лучше разделяются на ионообменниках на основе целлюлозы, декст-рана и полиакриламида. [c.108]


Смотреть страницы где упоминается термин Матрицы полиакриламид: [c.475]    [c.358]    [c.511]    [c.527]    [c.318]    [c.432]    [c.440]    [c.45]    [c.25]    [c.103]    [c.249]    [c.250]    [c.328]   
Аффинная хроматография Методы (1988) -- [ c.245 ]




ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Матрица

Полиакриламиды



© 2025 chem21.info Реклама на сайте