Белки методы исследования аналитические

Существенные экспериментальные трудности, которые до последнего времени ограничивали исследования в области белковой химии, в значительной степени обусловливались отсутствием простых и надежных способов анализа аминокислот. Лишь благодаря развитию за последние два десятилетия ионообменной и распределительной хроматографии удалось разработать автоматический метод количественного анализа аминокислот с использованием окисления аминокислот нингидрином и фотометрирования продуктов реакции [9]. Однако стремительное развитие химии белков и пептидов, среди которых обнаружены важнейшие биорегуляторы и антибиотики, уже сейчас предъявляет новые требования по чувствительности и быстроте анализа. Сложность аппаратурного оформления и дороговизна эксплуатации, безусловно, ограничивают применение автоматического анализатора Мура и Штейна и в значительной степени обусловливают интерес к разработке новых методов аналитического определения аминокислот, свободных от указанных недостатков. [c.252]

Применение люминесценции для аналитических целей включает широкую область использования ее для идентификации веществ, для обнаружения малых концентраций веществ для контроля изменений, претерпеваемых веществом для определения степени чистоты веществ. Широко применяются измерения люминесценции при изучении кинетики обычных химических реакций. Высокая чувствительность метода позволяет фиксировать малую степень превращения, а иногда по люминесценции промежуточных соединений становится возможным установить механизм химической реакции. Люминесцентные методы используются в биологии, в частности, для исследования структуры белков методом флуоресцентных зондов и меток. [c.49]

Все описанные методы изолирования алкалоидов не гарантируют, однако, получения настолько чистого вещества, чтобы оно могло быть обнаружено и определено в дальнейшем обычными аналитическими реакциями и методами. Как правило, алкалоид или другое вещество основного характера, представляющее токсикологический интерес, изолируется из объектов исследования вместе с жирами, жирными кислотами, белками и продуктами их распада (смолы, красящие вещества и т. п.), маскирующими это вещество и мешающими его обнаружению и определению. Особое значение при этом приобретает очистка изолированных из биологического материала (трупный материал) алкалоидов. [c.130]

Правда, автор перед собой не ставил таких задач и ограничился лишь подробным изложением и анализом истории науки о белке, вернее одного ее аспекта — структурно-химических исследований. В связи с этим, по-видимому, целесообразно сделать некоторые вступительные замечания о коренных переменах, происшедших в науке о белке за последние 10—15 лет. Внешне эти перемены проявились, как это отмечает автор книги, во внедрении в экспериментальную практику новых аналитических методов исследования строения белка, а, в сущности, они заставляют пересмотреть основные подходы к решению проблемы белка в целом. [c.3]

При исследовании белков гель-фильтрация пользуется особым вниманием как простой аналитический метод решения ряда задач, например определения молекулярно-весового распределе-иия в биологических жидкостях, сопоставления размеров белковых молекул, определения молекулярного веса на уровне нескольких микрограммов. Несомненным достоинством метода является возможность одновременного сравнения 30 образцов. [c.263]

Выведение многочисленных эмпирических формул различных белков Либихом и его учениками и монография Лясковского — все это завершило первый этап периода аналитических исследований белковых веществ. Этот этап характеризовался в первую очередь развитием первых аналитических методов исследований [c.41]

Несмотря на столь значительные успехи в развитии аналитических методов исследования химии белка Э. Фишер продолжал считать синтетическое направление наиболее перспективным в деле выяснения принципов строения белковой молекулы. [c.77]

Электронные спектры поглощения находят широкое применение для решения разнообразных аналитических и исследовательских задач органической и неорганической химии, биологии и медицины. В таких областях, как химия красителей, биохимия белков и жиров, химия лекарственных веществ, уже с давних пор используются спектрофотометрические методы исследования и анализа. В последнее время электронные спектры поглощения широко и с большим успехом используются в химии редкоземельных и актинидных элементов, при получении веществ в особо чистом состоянии и в других областях науки и техники. [c.350]

Наиболее полное разделение смеси белков на индивидуальные компоненты достигается с помощью электрофоретических методов. Как уже обсуждалось в разд. 5.2, проведение препаративного электрофореза, несмотря на то что он обладает значительными теоретическими преимуществами, сопряжено с большими трудностями. Поэтому он используется не часто. В аналитическом же варианте электрофорез — это один из наиболее широко применяемых методов исследования. Действительно, чтобы охарактеризовать очищенные препараты белков, их теперь почти обязательно подвергают электрофоретическому анализу. Для проведения аналитического электрофореза в гелях требуется всего 5—25 мкг белка это обычно не слишком значительная часть полученного препарата. До того как были предложены гелевые системы, электрофоретический анализ проводили в аппарате Тизелиуса методом движущейся границы. Хотя для этого приходилось расходовать десятки миллиграммов белка, разделения очень сходных белков не достигалось и анализ каждого образца требовал больших усилий и внимания. Затем был разработан аналитический электрофорез на бумаге и других целлюлозных материалах, используемых в качестве носителей, что исключило два из указанных выше недостатков метода Тизелиуса количество необходимого для анализа белка значительно сократилось и проводить электрофорез стало намного легче, так как для этого метода требуется только простое оборудование. Однако разрешение осталось примерно таким же, как н прежде, даже при использовании обладающих хорошими качествами современных ацетатцеллюлозных пленок это объясняется тем, что разделение компонентов смеси происходит в соответствии только с приблизительной величиной отношения заряд/размер и многие белки движутся вместе в виде одной зоны (ср. с разд. 5.2). [c.316]

Как стабильные , так и радиоактивные изотопы широко используются в химических и биологических исследованиях. Введение изотопных меток произвело целую революцию в изучении метаболизма. В одном из первых биологических экспериментов, основанных на использовании стабильного изотопа (регистрируемого масс-спектрометрически), Шен-геймер с сотрудниками в 1937 г. обнаружили неожиданно высокую скорость обновления белков в живых тканях (гл. 14, разд. Б). Используя СО2, Кэлвин и др. впервые проследили путь углерода в процессе фотосинтеза (дополнение 11-А). Аналогичным образом применение изотопов Р и 5 позволило изучить метаболизм фосфора и серы тритий ( Н) нашел широкое применение для мечения разнообразных органических соединений, например тимина. Использование радиоактивных изотопов лежит в основе чувствительных аналитических методов, к числу которых относится радиоиммуноанализ [c.168]

В последние годы благодаря развитию аналитических методов изучение нативных белков приобретает все возрастающее значение как в химических, биохимических и медицинских исследованиях, так и в клинической практике. В книге, целью которой является детальное описание методов анализа белка, было бы затруднительно давать подробный обзор результатов, полученных при использовании того или иного метода, и вполне естественно, что этого нельзя требовать от руководства, предназначенного для определенных практических задач. Мы решили, что будет наиболее целесообразным на тщательно подобранных примерах проиллюстрировать возможности и ограничения того или иного аналитического метода. [c.7]

Биохимия не только использует в своих целях методы, созданные в рамках других химических дисциплин, но и вооружает химию новыми методами, основанными на применении биополимеров как инструмента химического исследования. Ферменты часто позволяют с уникальной, недоступной обычным химическим приемам избирательностью провести анализ сложных реакционных смесей, осуществить химические превращения в мягких условиях, избегая побочных реакций и побочных продуктов. Большое значение для решения тонких аналитических задач приобрели иммунохимические методы, использующие в качестве инструмента анализа антитела — белки, вырабатываемые высшими живыми организмами в ответ на введение чужеродных веществ. Антитела обладают способностью избирательно взаимодействовать именно с этими, вызвавшими иммунный ответ веществами и могут поэтому использоваться для их определения в сложных смесях. [c.10]

Биохимия является одновременно и биологической, и химической дисциплиной. Биологической она является в первую очередь по природе изучаемых ею объектов, которые представлены веществами животного, растительного и микробного происхождения. Биологической она является и по тем конечным целям, во имя которых проводятся биохимические исследования — познание свойств и выяснение механизмов функционирования веществ, из которых построена живая материя. В то же время, будучи наукой о веществах и о протекающих с их участием химических превращениях, биохимия по своей методологии является химической дисциплиной. Она использует разнообразные методы, которые предоставляют в её распоряжение фундаментальные химические науки — неорганическая, органическая, аналитическая и физическая химия, а также химия высокомолекулярных соединений. В то же время природа исследуемых объектов, особенности решаемых задач накладывают свою специфику на использование этих методов, на их относительную значимость. Наиболее выпукло эти особенности проявляются при исследовании нерегулярно построенных биологических полимеров — белков и нуклеиновых кислот, которые являются более высокой формой организации материи, чем низкомолекулярные соединения и регулярно построенные гомополимеры, также широко представленные в живой природе, в первую очередь различными полисахаридами. [c.230]

В развитии биохимии аминокислот можно различить несколько этапов. Первый этап состоял в выделении аминокислот, встречающихся в природных объектах, и в изучении их свойств. Второй характеризуется работами по питанию экспериментальных животных и микроорганизмов. Отправной точкой этих исследований послужили наблюдения, продемонстрировавшие роль белков как необходимых компонентов пищи животных проведению таких исследований способствовало аналитическое определение аминокислотного состава белков и создание усовершенствованных методов выделения аминокислот. Эти работы привели к открытию ряда новых аминокислот и показали, что одни аминокислоты могут синтезироваться в организме, а другие — нет кроме того, были получены важные данные, указывающие на характер взаимосвязей в обмене различных аминокислот. [c.7]

Хроматография на бумаге. Хроматографию на бумаге применяют для разделения микроколичеств смеси веществ. Этот метод приобрел большое значение в исследовании белков, углеводов, жиров, антибиотиков, гормонов, каротиноидов, алкалоидов и многих других природных соединений. Вначале им пользовались главным образом для аналитической идентификации соединений. В настоящее время он применяется и для препаративного выделения чистых веществ из сложных смесей. [c.34]

Фракционирование путем электрофореза представляет собой суммарный результат действия многих факторов, некоторые из которых противоположны друг другу. При электроэндоосмосе присутствие фиксированных зарядов на мембранной или гелевой матрице может вызывать результирующий поток воды в направлении, противоположном направлению миграции белков. В зависимости от изоэлектрической точки данного белка и состава буферного раствора белок может быть нейтральным, чисто катионным или чисто анионным. Суммарный заряд белка будет определять скорость и направление его передвижения. Вследствие того, что электрофорез дает возможность разделять материалы биологического происхождения, представляющие интерес для биоинженерных исследований, можно прогнозировать, что эта область применения электрофореза будет развиваться самостоятельно, наряду с широким использованием указанного метода и для аналитических целей. [c.89]

Аналитическая ультрацентрифуга широко используется при исследовании вновь выделенных белков и других макромолекул. Она служит также для проверки качества препаратов, полученных установившимися методами. В обоих случаях исследователь ставит перед собой такие вопросы [c.201]

Многие методы, применяемые в настоящее время при экспериментальном изучении проблемы происхождения жизни, ничем не отличаются от методов, используемых в других областях, скажем в аналитической химии или биохимии белка. Так, например, наблюдая со стороны аналитическую часть исследований, в которых моделируется состав примитивной атмосферы, совершенно невозможно определить, что эти работы имеют отношение к проблеме происхождения жизни. Здесь точно так же используются хроматография на бумаге, электрофорез и другие методы, применяемые при решении самых разных химических задач. И при этом характер получаемых результатов, равно как и характер ограничений и ошибок, также будет одинаковым независимо от того, имеет данная работа отношение к проблеме биогенеза или нет. Но существуют и такие приемы, которые специфически присущи экспериментам, связанным с проблемой происхождения жизни, например заполнение и опорожнение аппаратов, предназначенных для проведения экспериментов с пропусканием искровых разрядов. Но даже и в этом случае многие индивидуальные операции, такие, как использование вакуумной техники и высоковольтного оборудования, идентичны тем, которые применяются при исследовании ряда химических и физических проблем. [c.50]

Рекомендовать странам — членам СЭВ — в рамках двухстороннего научно-технического сотрудничества обменяться материалами по аналитическим методам исследования природных и сточных вод (окисляемость по бихроматному методу определение детергентов, в частности некаля и веществ, меняющих органолептические свойства воды —окраску, вкус, запах) типовыми проектами очистных сооружений (для обесфеноливания на феносольвановых и других установках биологической очистки на башенных орошаемых фильтрах и на установках с активным илом, обеспечивающих получение кормового белка из фенольных сточных вод и из сточных вод производства синтетических жирных кислот комплексной обработки сточных вод химических производств). [c.292]

К концу XIX в. все обычные аналитические методы исследований органической химии широко использовались при изучении белковых веществ. Мы встречали белки уже среди первых веществ, подвергнутых элементарному анализу. Так как вскоре выяснилось, что невозможно дифференцировать белки на основании данных об их элементарном составе, то химикам пришлось обратиться к другим аналитическим методам исследований органической химии. Химики испытывали действие на белки различных окислителей — хромовой кислоты, нейтрального и щелочного растворов марганцевокислого калия восстановителей— олова и соляной кислоты, иодистоводородной кислоты и т. п. белки подвергали гидролизу, пытались получить их нитропроизводные при действии концентрированной и дымящейся азотной кислоты белки сульфировали, сплавляли со щелочами и действовали на них галогенами с целью получить характерные галоидные производные наконец, белки обрабатывали перекисью водорода. [c.64]

Учение о соединительной ткани прошло ряд исторических этапов. В рамках первого, преимущественно аналитического этапа, который можно назвать этапом описательной морфологии, соединительная ткань была выделена из других тканей и были получены основные сведения о структуре ее составных элементов как клеточных, так и межклеточных. Следующий этап гистофизиологии соединительной ткани или этап первоначального синтеза характеризовался тем, что сейчас называют системным подходом , т. е. попыткой синтеза морфологических и физиологических знаний и разработкой систем ( макрофа-гическая система И. И. Мечникова, ретикулоэндотелиальная система Ашофа, внутренняя среда А. А. Максимова, физиологическая система соединительной ткани А. А. Богомольца). Затем благодаря развитию специальных методов исследования наступил новый аналитический этап, продолжающийся и в настоящее время. Он характеризуется углубленным анализом химического и антигенного состава, молекулярной структуры, биосинтеза и катаболизма белков и углеводов соединительной ткани, гистогенеза, гистохимии, ультраструктуры и функции клеточных элементов и, наконец, патологии соединительной ткани. Этот этап принес огромные достижения, но накопился такой фактический материал, который практически стал необозримым. [c.285]

Химические, физико-химические свойства белков и их структура определяются аминокислотным составом. Поэтому исследование аминокислотного состава является важным аналитическим методом характеристики этих соединений. Исследование аминокислотного состава белков и пептидов включает расщепление этих соединений до свободных аминокислот, разделение последних, их идентификацию и количественное определение. Изучению аминокислотного состава предшествует, как правило, определение однородности изучаемых препаратов. О чистоте препаратов белка судят на основании данных ульт-рацентрифугирования, электрофореза, в частности диск-электрофореза ) [c.122]

Перечень предложенных в 1920-1940 гг. теорий и гипотез можно было бы продолжить, но, по-видимому, приведеных уже достаточно для постановки следующих двух вопросов чем были вызваны фактический отказ от пептидной теории Фишера и появление такого большого количества существенно отличающихся и даже взаимоисключающих друг друга концепций химического строения белков и почему все они, несмотря на пестроту в химическом отношении, непременно постулировали существование белковых молекул только в форме циклических группировок Для сложившейся в послефишеровский период ситуации характерно прежде всего наличие заметного несоответствия между достаточно высоким уровнем развития аналитической и синтетической органической химии и неудовлетворительным состоянием белковых исследований. В химии белка отсутствовали надежные количественные методы выделения, очистки и анализа, а также методы расщепления, гарантирующие от вторичных реакций и образования побочных соединений. По этим причинам, а часто и вследствие неиндивидуальности выделенных белков среди продуктов их распада находили массу самых разнообразных веществ, строение которых органическая химия того времени уже умела анализировать. Поскольку разделить их на первичные и вторичные не представлялось возможным, выбор в каждом случае оказывался случайным, обусловленным вкусами и интуицией автора. Это ответ на вторую часть первого вопроса. [c.63]

Исследование равновесия в растворах между сывороточными белками и различными лигандами, особенно фармакологически активными соединениями, показало значительное различие в константах связывания соответствующих энантиомеров [82, 83]. Этот эффект, однако, более надежно был зафиксирован с помощью хроматографической техники. Так, в 1973 г. ранее известное высокое сродство I -триптофана к бычьему сывороточному альбумину (БСА) было использовано для разделения энантиомеров на колонке, заполненной гелем БСА—сефарозы [84]. Элюирование о-формы проводилось боратным буфером (рН9), а элюирование ь-формы — разбавленной уксусной кислотой. Этот метод был в дальнейшем использован для определения сродства ряда лекарственных препаратов к сывороточным альбуминам [85, 86]. В последние несколько лет аналитические методы хиральной ЖХ, основанные на использовании иммобилизованных белков в качестве неподвижных фаз, развивались очень быстро и нашли применение для решения широкого круга задач. [c.132]

Основные научные работы Мура, которые он проводил совместно с У. X. Стайном, посвящены исследованию строения белков. Они разрабатывали точные аналитические методы для определения аминокислотного состава белков. Развили (1951) метод ионообменной хроматографии, который применили для выделения и очистки рибонуклеазы. Благодаря сочетанию хроматографических методов анализа, разработанных Муром и Стайном, с предложенным ими фотометрическим нингидринным методом и их же автоматическим коллектором фракций они создали методику, позволяющую анализировать белковый гидролизат в течение двух недель. Применение синтетических ионообменных смол (сульфокатионитов) позволило им сократить (1950-е) это время до недели. Затем (1958) процесс ими был автоматизирован, а время анализа уменьшено до нескольких часов. Мур и Стайн установили [c.347]

Новый метод анализа аминокислот быстро развивался. Появилась возможность с его помощью приступить к решению ряда сложных, казавшихся неразрешимыми проблем, и прежде всего проблёмы определения первичной структуры белков. Вскоре стало очевидным, что анализ аминокислот в его первоначальном варианте слишком трудоемок и недостаточно эффективен. Ввиду этого был поставлен ряд исследований по механизации трудоемких операций и совершенствованию организации эксперимента. Основной вклад в решение этих задач вновь внесла группа исследователей под руководством Мура и Стайна [4]. Благодаря проведению реакции аминокислот с нингидрином в проточном капиллярном реакторе и измерению интенсивности окраски на регистрирующем проточном фотометре трудоемкая обработка фракции была преобразована в непрерывный процесс. Таким образом, на основе аналитического метода был создан новый прибор — аминокислотный анализатор. Выпуск и дальнейшее усовершенствование этого прибора были предприняты промышленными фирмами. Последующие усилия были направлены на повышение эффективности и чувствительности анализа. Первое время причиной низкой эффективности прибора служила длительность элюирования. Основой для дальнейшей оптимизации процесса послужила теоретическая работа Гамильтона [5], в которой было показано, что повышения эффективности можно достигнуть путем увеличения скорости подачи элюента и уменьшения размеров зерен ионита. В результате многочисленных модификаций ионитов (а эта работа все еще продолжается) удалось более чем в 10 раз сократить время элюирования без снижения разрешения. Сокращение продолжительности анализа [c.306]

Дальнейших успехов в химии гликонротеинов следовало ожидать на основе развития методов и лабораторной техники идентификации и количественного определения малых количеств сахаров и аминокислот, структурного анализа олиго- и полисахаридов, эффективного разделения и очистки белков, оценки гомогенности макромолекул и определения их молекулярных весов. С введением улучшенных методов исчерпывающего метилирования и периодатного окисления углеводов, реагентов (борогндридов щелочных металлов), избирательно восстанавливающих карбонильную группу, аналитической ультрацентрифуги Сведберга, аппарата Тизелиуса для электрофореза с подвижной границей, ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии, метода меченых атомов, метода фракционирования белков плазмы крови холодным спиртом по Кону, хроматографии на бумаге и на колонках, хроматографии на ионообменниках, полученных из целлюлозы, упрощенных микрометодов электрофореза (электрофорез на бумаге, крахмальном или агаровом гелях), иммуноэлектрофореза и, наконец, последнего по времени, но важного в этой области открытия конститутивных и индуцируемых бактериальных ферментов, действующих избирательно на гетеросахариды, настало время для третьего и наиболее сложного и плодотворного периода исследования гликонротеинов. [c.18]

Гель-хроматографию особенно целесообразно применять в тех случаях, когда необходимо очень быстро отделить высокомолекулярные компоненты от низкомолекулярных. На специально подготовленной колонке (3X6 сл) с сефадексом 0-25 (грубым) Эрлан-деру [25] удалось всего за 2 мин полностью отделить рибонуклеазу от воды, содержащей тритий. Этот быстрый аналитический метод позволяет изучить кинетику обмена трития и на этом основании сделать выводы о степени спирализации растворенного белка. Несколько позднее аналогичная методика была успешно использована при исследовании вторичной структуры растворимых рибонуклеиновых кислот [26] и дезоксирибонуклеиновых кислот [27]. Конечно, нуклеиновые кислоты также могут быть модифицированы химическим путем, например действием диазотированной сульфаниловой кислоты [28]. Избыток реагента и побочные продукты реакции удаляют на сефадексе 0-50. [c.146]

Впервые идея о применении значительной центробежной силы для осаждения и определения размеров коллоидных частиц была высказана и опробована на практике еще в 1913 г. Думан-ским. Однако потребовались долгие годы теоретических и практических изысканий, прежде чем Сведбергрм (1940 г.) были разработаны теоретические основы данного метода и создана первая ультрацентрифуга со скоростью вращения ротора до 65 ООО об1мин. К настоящему времени методы аналитического и препаративного ультрацентрифугирования получили широкое применение в исследованиях белков и нуклеиновых кислот и при изучении структурных элементов клетки. [c.142]

Литература, посвященная восстановлению дисульфидов и свойствам тиолов, очень обширна в числе обстоятельных обзоров по этому вопросу наиболее интересный материал для исследований в области химии белка дает статья Сесила и Мак-Фи [12]. Главную задачу в этой области составляла разработка точных аналитических методов для определения 55- и 5Н-групп в интактных белках. Для определения 5Н-групп в простых веществах в течение многих лет применялись мягкие окислители, однако для исследования белков реактивы этого рода, в том числе иод, феррицианид, иодобензо-ат, порфириндин и фосфорновольфрамовая кислота, непригодны. Многие из этих реактивов оказались неспецифичными, вследствие чего полученные с их помощью результаты трудно интерпретировать. Поэтому описание этих методов здесь не приводится некоторые данные о них можно найти в обзоре Шинара и Геллермана [13]. Более надежны методы, в которых используются алкилирующие соединения или вещества, образующие меркаптиды, в сочетании с методом амперометрического титрования. [c.99]

В своих исследованиях Вальдшмидт-Лейтц широко использовал методы аналитической химии белка, и в первую очередь уже упоминавшиеся методы Д. Ван-Слайка, С. Сёренсена и др. [c.117]

Решающее значение в успехах аналитической химии белков безусловно сыграл хроматографический метод, предложенный и разработанный еще в 1903 г. М. С. Цветом. 111ирокое внедрение этого метода в лабораторную практику началось после того, как А. Мартин и Р. Синг в 1944 г. создали метод хроматографии на бумаге [234]. Эти методы были с самого начала описаны с больщой полнотой и четкостью и не претерпели до настоящего времени никаких принципиальных изменений. В то же время точность этого метода была так велика, что данные, полученные при его помощи, стало возможно с уверенностью использовать для исследования структуры белков. [c.131]

Четвертой, не упомянутой выше, но приобретающей в последнее время все больший интерес, задачей, разрешаемой при помощи химического изменения белков, является применение его в качестве вспомогательного средства при исследовании порядка чередования аминокислотных остатков. и определения концевых групп в белках. Работа в этом направлении была существенно облегчена введением метода Зангера [9] и весьма широко проводится английскими биохимиками. Новый способ отличается от обычного способа приготовления белковых производных или измененных белков тем, что полученные соединения гидролизуют и образующиеся производные аминокислот изолируют. Часто этим способом исследуют структуру не только нативных белков, но и продуктов неполного ферментативного или кислотного гидролиза, а также структуру продуктов частичного окисления. При разрыве поперечных цистиновых связей (—S—S—) путем окисления до остатка цистеиновой кислоты (—SO3H), которое также было введено Зангером [10], молекула белка распадается на отдельные полипептидные цепи. Тристрам [11] (статья III) и Фокс [12] произвели оценку точности аналитических результатов этого важного исследования. [c.270]

Монография, написанная коллективом авторов США, Канады н Швейцарии, под редакцией американского ученого Э. Хефтмана посвящена хроматографии — важнейшему современному аналитическому методу, который широко используется в научных исследованиях и в промышленности для контроля и управления технологическими процессами. В практическом аспекте рассматриваются все основные хроматографические методы жидкостная, плоскостная, газовая, ионообменная хроматографии, гель-хроматография, электрофорез. В части 1 рассмотрена хроматография аминокислот, олигопептидов, белков, липидов, терпенов и стероидов. [c.4]

Орнитин, НгЫ СНз СН2 СНз СНСЫНг) СООН. Эта аминокислота, как и цитруллин, является известным продуктом метаболизма (продуктом обмена веществ) и является составной частью орнитуровой кислоты. -Моно-ацетилорнитин выделен из растительных веществ [211. Наличие орнитина в гидролизатах белков, обработанных щелочами или иным путем, можно объяснить распадом остатков аргинина [22]. Орнитин, изолированный из кис лотных гидролизатов тироцидина [14] и грамицидина-С [23, 109 а], может также появляться в результате распада при автолизе исходных бактерий. Неудачи в обнаружении орнитина в белковых гидролизатах могут быть часто следствием несовершенства аналитического метода однако даже при современных тщательных исследованиях продуктов кислотного гидролиза яичного альбумина ис удалось его обнаружить. [c.49]

В очень обстоятельном исследовании реакции иодирования сывороточного альбумина человека Хьюгс и Стрессли [102] использовали ряд аналитических и физико-химических методов для характеристики реакции. с иодом, ее специфичности в разных условиях и состава получаемых продуктов. Авторы нашли, что сначала происходит селективное окисление сульфгидрильных групп при незначительном сопутствующем замещении. Затем до 70% тирозиновых остатков подвергается дииодированию, причем эта реакция предшествует протеканию каких-либо других процессов замещения. Полное иодирование тирозиновых звеньев осуществляется лишь наряду с интенсивным замещением в гистидиновых остатках (предположительно). Максимальное количество иода было введено в состав белка при высоких pH и использовании 150-кратного молярного избытка иода на 1 моль белка в результате в одну молекулу белка вводилось 64 атома иода. Следует отметить, однако, что ири наличии большого избытка иода и pH 10,3 происходит интенсивная окислительная деструкция триптофане вых остатков, входящих в состав молекул белка. [c.352]

Такие аналитические методы, как исследование кругового дихроизма и рентгеноструктурный анализ, могут быть использованы для определения конформации ренатурированных и растворимых рекомбинантных белков. Немногочисленные имеющиеся к настоящему времени данные обнадеживают. Например, спектры, полученные при исследовании кругового дихроизма ренатурировавшего прохимозина [53] и секретируемого клетками Е. oli гормона роста человека [42], существенно не отличаются от спектров природных белков. Был также получен в кристаллическом виде -глобин, продуцируемый клетками Е. соИ и включившийся в состав гемоглобина. Исследование дифракции рентгеновских лучей с разрешением 2,8 А выявило весьма небольшие различия между природным и мутантным рекомбинантным белками эти различия объясняют изменениями, возникающими при генноинженерных манипуляциях [23]. Хотя и существуют проблемы, связанные с очисткой эукариотических полипептидов, выделяемых из клеток Е. oli, такая система используется для получения ряда белков, используемых в медицине [1]. [c.134]