Иммунизация при определении антигенных

Иммунизация определенным антигеном (А) вызывает образование антител, которые связываются с А, но не с В, С и т. д. Простейший способ проверки антител состоит в смешивании сыворотки крови с антигенами. Антитела связывают антигены, и на дне пробирки образуется осадок (преципитат). Преципитат в пробирке свидетельствует о наличии антитела, которое может связываться с данным антигеном (- нет преципитата + следы, +++ сильный преципитат). В данном примере антигены и 6 имеют формы (эпитопы, или детерминанты), похожие на А говорят, что они перекрестно реагируют с А. (также см. табл. 3.1 и рис. 3.6) [c.74]

Память об антигене остается не всегда. В некоторых случаях иммунная память или очень слаба, или вовсе нё формируется. Так происходит при введении антигена в ослабленный организм или при иммунизации здорового индивида определенными антигенами, например полисахаридами. Видимо, в первом случае отсутствие памяти связано с отсутствием иммунной реакции, а во втором — с независимостью синтеза антител от Т-клеток. [c.93]

Все белки, изученные до сих пор, обладают антигенными св-вами. У белков различают линейные детерминанты, построенные из аминокислотных остатков, расположенных рядом в одном участке полипептидной цепи, и конформационные, к-рые слагаются из аминокислотных остатков разных участков одной или большего числа полипептидных цепей. Антитела, полученные при иммунизации данного животного определенным белком, могут реагировать, хотя и с небольшим сродством, с нек-рыми пептидами, выделенными из гидролизата зтого белка. Такие пептиды, построенные из 5-7 остатков, часто располагаются на изгибах или выступающих отрезках пептидной цепи и, очевидно, являются детерминантами или их частями. Однако в иных условиях, напр, при иммунизации др. вида животного, могут образовываться антитела к иным участкам молекулы того же белкового А. Практически вся пов-сть белковых молекул обладает антигенными св-вами, она, т. обр., представляет собой сумму перекрывающихся детерминант, каждая из к-рых может вызывать иммунную р-цию или не вызывать ее в конкретных условиях. Последние определяются различиями в строении между белковым А, и собственными белками организма, а также регуляторными иммунными механизмами, находящимися под генетич. контролем. По-видимому, почти все детерминанты белков конформационно зависимы. Согласно данным рентгеноструктурного анализа, антигенные детерминанты обладают повыш. подвижностью. [c.174]

Первое, что обращает на себя внимание, — это ограничения в использовании иммунизации. На человеке недопустимо применять те схемы иммунизации, которые у грызунов вызывают максимально интенсивный иммунный ответ. Для получения клеток-предшественников нужной специфичности в большинстве случаев приходится рассчитывать на случайную иммунизацию. Однако это ограничение, по крайней мере в качественном аспекте, оказывается не таким уж строгим, как это может показаться на первый взгляд. Дело в том, что иммунный ответ на многие антигены, к которым требуется получить МКА, возникает естественным образом. Например, при беременности организм матери вырабатывает антитела к отцовским антигенам, плода, которые используются для типирования и определения групп крови. Можно найти иммунные В-клетки и у больного раком, если в его крови циркулируют противоопухолевые антитела. Аналогичным образом иммунный ответ возникает в результате вирусных и бактериальных инфекций. И в этом случае можно получать иммунные клетки. Наконец, можно рассчитывать на весь спектр специфичностей нормальных антител индивидуума, включая и аутоантитела. Получение МКА человека, специфичных к собственным антигенам, намного упростило бы изучение патогенеза аутоиммунных заболеваний. [c.154]

II. Титрование антисывороток с использованием контрольных реагентов (ОРИД). Данный метод наиболее удобен для количественного определения IgG, полученного путем хронической иммунизации лабораторных животных. Такие антитела должны образовывать с антигеном одно кольцо преципитации. Кроме того, метод можно использовать и для повседневного тестирования сывороток пациентов с целью выявления антител к инфекционным агентам. Правда, в ряде случаев чувствительность метода недостаточна. [c.209]

Сначала все слияния клеток проводят с предельно допустимыми разведениями популяции клеток — продуцентов МА против антигенов клеточных поверхностей. Последующий анализ обычно дает достаточно определенные результаты для того, чтобы можно было отобрать гибридные клоны, представляющие интерес. Этот этап не прост, если учесть, что первичная иммунизация крыс клетками мышиных лимфом требует 200—300 лунок с растущими клонами. Такое количество образцов нетрудно проверить с помощью ИФМ, однако приблизительно 5—20% лунок содержат клоны, продуцирующие МА против неизвестных мембранных компонентов. Поэтому следует проводить и негативный отбор, чтобы отбраковать клоны, которые секретируют МА к общим для всех клеток поверхностным антигенам. После того как с помощью ИМФ отбирают клоны, позитивные [c.179]

Для контроля за ходом иммунизации животного и для планирования иммунохимических экспериментов необходимо располагать способом обнаружения и оценки содержания в антисыворотке антител, специфических к иммунизирующему антигену. Протекающая на молекулярном уровне реакция взаимодействия антител с антигенами должна приводить к развитию явлений, доступных наблюдению невооруженным глазом. Вовсе не обязательно, чтобы эти явления воспроизводили механизмы защитных реакций организма. Достаточно того, чтобы они определенно указывали на образование специфического иммунного комплекса. [c.117]

Чрезвычайно широкий спектр применений имеет иммуноанализ для определения как самого факта присутствия, так и измерения количества антигенов, в том числе гаптенов, т.е. низкомолекулярных соединений, к которым можно получить антитела, как правило, путем иммунизации животных конъюгатом гаптена с высокомолекулярным носителем, способным вызывать иммунный ответ. Иммуноанализ нашел широкое применение для анализа содержания различных гормонов, что имеет огромное значение для оценки состояния эндокринной системы человека и животных. Важное значение для оценки состояния окружающей среды, в первую очередь качества питьевой воды и пищевых продуктов, приобретает иммуноанализ содержания пестицидов. В связи с интенсивным развитием гибри-домной техники для анализа определенных антигенов всё более широкое применение находят моноклональные антитела. [c.257]

Высокая специфичность моноклональных антител позволяет создать иммуноферментные диагностику мы для определения антигенов, которые имеются в ограниченных количествах или же недоступны в очищенном состоянии. В таких случаях для иммунизации животных и получения гибридом может быть использован препарат, содержащий около 1 % антигена. Высокоочищенный антиген необходим на стадии тестирования гибридом однако при наличии высокочувствительного метода определения нужные количества антигена исчисляются несколькими микрограммами. После получения гибридомы антиген может быть выделен методом аффинной хроматографии на моноклональных антителах. Полученный в вы-сокоочищенном состоянии в значительных количествах антиген в дальнейшем может быть использован в составе иммуноферментных диагностикумов. [c.170]

Антигенные детерминанты — это определенные участки трехмерной структуры иммуногенов и антигенов. Эти структуры способны взаимодействовать как со специфическими рецепторами лимфоцитов, индуцируя тем самым иммунный ответ, так и с антигенсвязывающими центрами специфических антител. Сложные антигены обладают множеством различных антигенных детерминант. Иммунизация такими антигенами приво-,111т к образованию поликлональных антител самой различной специфичности, которые можно обнаружить в антисыворотке. Одна детерминанта может быть образована 4—6 аминогруппами гли остатками сахаров. Тем не менее детерминанты могут бьпь чрезвычайно разнообразны по форме и распределению зарядов и способствовать развитию достаточно разнообразных ре-с кцип гуморального иммунного ответа. Действительно, специфические к одной определенной детерминанте антитела могут ( ыть клонально гетерогенны и при этом еще п значительно различаться по степени аффинности (см, разд. 4). [c.19]

Цель иммунизации — индукция клонов В-лимфоцитов, продуци- ующих антитела к определенному антигену. Для некоторых анти-енов получение гибридом возможно без целенаправленной иммуни-ации, однако такая ситуация чрезвычайно редка. [c.195]

Второе доказательство предетерминированности основано на том, что удаление из суспензии лимфатических органов неиммунизированных животных клеток, специфически реагирующих с определенными антигенами, ослабляет образование ими антител к этим антигенам при последующей иммунизации. [c.136]

Разными методами проводилось определение минимальной величины популяции лимфатических клеток неиммунизированного животного, в которой еще возможно вызвать антителообразование при иммунизации соответствующим антигеном. Предполагается, что в этой популяции содержится по крайней мере один предшественник АОК (ПАОК). (Если [c.136]

Она характеризует свойство антигенов реагировать на антитела и связана с определенными элементами структуры антигена. Эти структурные элементы называются антигенными детерминантами, или эпитопами они расположены на поверхности белков и представлены небольшим числом аминокислот. Понятие последовательностных и конформационных детерминантов [99, 100] ввели и уточнили Атассии и Смит [2]. Они различают детерминанты непрерывные и прерывистые . Первые образуются последовательностью аминокислот, соседствующих в первичной структуре белка, и имеют особую конформацию благодаря всей совокупности структуры белка. Антигенные детерминанты прерывистого типа образуются посредством последовательного сочетания аминокислот, не рядом расположенных в первичной структуре белка. Иммунизация нативными белками, по всей видимости, вызывает в основном образование антител, специфич- [c.90]

В настоящее время разработаны иммунологические методы определения КБА. В этих методах для иммзшологической регистрации КБА, образующихся при появлении в нем канцерогенных веществ, используются антитела, полученные с помощью азопротеинов, содержащих канцерогенное вещество, присоединенное ковалентной связью к носителю белковой природы. При помощи иммунологических методов КБА обнаруживаются в биологических жидкостях в период инициации экспериментального канцерогенеза у животных, у больных с опухолями и у рабочих с профессиональным онкологическим риском. Образование КБА коррелирует с канцерогенезом, и поэтому они могут служить эффективными маркерами рака и онкологического риска. Однако следует отметить, что при иммунизации животных конъюгатами канцерогенов с белковыми носителями неизбежно индуцируются побочные антитела против общевидовых антигенов, что затрудняет интерпретацию результатов определения канцерогенов в биологических материалах. Побочные антитела ограничивают специфичность антисывороток к гаптенам (веществам, к которым вырабатываются антитела в организме), особенно при необходимости их регистрации в крови человека. [c.184]

Хотя в табл. 10 эритроциты группы крови О обозначены как не имеющие антигена, это не совсем так. Они обладают антигенами, относящимися к другим системам групп крови, которые будут обсуждаться ниже, а также имеют антиген, связанный с системой ABO. В плазме человека ангглютинин к этому антигену содержится не всегда иногда он встречается в плазме лиц, кровь которых принадлежит к подгруппе AjB, и в нормальной сыворотке некоторых животных. Этот агглютинин обнаружен в сыворотке некоторых угрей, чаще европейских, чем американских, а также может быть получен при иммунизации коз бациллой Шига. Все эти источники мало доступны, а полученные таким путем агглютинины всегда слабы и ненадежны. Поэтому важную роль в дальнейшей разработке методики определения крови сыграло открытие того, что солевые экстракты семян некоторых растений (например, Ulex europeas, дикорастущее растение из Западной и Южной Европы и Северной Африки) содержат агглютинин, специфически реагирующий с антигеном эритроцитов группы О [4,9]. Этот растительный агглютинин заменил в данном случае все другие реактивы. [c.69]

Любой из природных белков обладает антигенной специфичностью. Антитела, возникшие в ответ на введение определенного белка, образуют преципитаты только с этим белком, но не с другими белками. Перекрестная реакция наблюдается только в тех случаях, когда исследуемый антиген очень близок к антигену, применявшемуся для иммунизации. Так, например, антитела, образующиеся при инъекции сывороточных белков лошади, преци-питируют также и сывороточные белки осла яичный альбумин утиных яиц преципитируется антителами, образовавшимися при иммунизации яичным альбумином куриного яйца [4]. С другой стороны, серологические свойства миоглобина резко отличаются от свойств гемоглобина, хотя оба вещества содержат один и тот же гемин [5]. Очевидно, в данном случае специфичность обусловливается белковым компонентом, а не гемином. Гемоглобин человека серологически отличается от гемоглобина быка. Однако при помощи реакции задержки комплемента можно установить наличие некоторого родства между этими двумя веществами [6]. [c.330]

Описанный метод используют главным образом для одновременного количественного определения всех компонентов какой-либо гетерогенной смеси. Для этой цели нужна антисыворотка, содержащая антитела ко всем анализируемым компонентам, причем титр этих антител должен быть достаточно высоким, чтобы образовались преципитаты, поддающиеся измерению. Подобную сбалансированную антисыворотку трудно получить путем иммунизации. Ганрот [424] предлагает готовить антисыворотки высокого титра для нескольких антигенов, а затем смешивать их в таком соотношении, при котором обеспечивается адекватное содержание антител для каждого антигена. Очевидно, более выгодно использовать при перекрестном иммуноэлектрофорезе смесь антигенов в двух разных концентрациях [1017]. Само количественное определение заключается в измерении площадей под пиками преципитации. Его можно провести с помощью полуавтоматического электронного планиметра [873, 1386]. Другой способ состоит в том, что пластинку проецируют на лист белой бумаги, пики обводят карандашом, вырезают и взвешивают. Если методика электрофореза отличается высокой [c.256]

Мышей с определенной характеристикой по локусу К или D иммунизировали одним из вирусов (условно вирусом А). От примированных животных получали Т-клетки, которые использовали в цитотоксическом тесте с клетками-мишенями, зараженными вирусом и относящимися по характеру локуса К (или D) либо к донору Т-клеток, либо к его аллельному варианту. Цитотоксическую реакцию оценивали по интенсивности выделения Сг из клеток-мишеней. Примированные Т-киллеры гаплотипа не дают реакции с генетически идентичными, интактными клетками-мишенями (1). Нет реакции и при заражении клеток-мишеней вирусом, отличающимся от вируса использованного при иммунизации (2). Цитотоксическая реакция положительная, если генетически идентичные Т-кил-лерам клетки-мишени заражают гомологичным вирусом (3). В то же время при использовании клеток-мишеней, отличающихся по локусу К от Т-киллеров, цитотоксическая реакция не развивается даже при наличии гомологичного вируса у клеток-мишеней (К" против К или К против К — 4,5). Аналогичные отношения выяапены для локуса D. В то же время генетические ограничения не проявляются по генам, контролирующим молекулы П класса. Из этих опытов следует, что Т-киллеры распознают как собственные молекулы I класса, так и чужеродный вирусный антиген [c.171]

В свете рассматриваемых положений можно объяснить ряд установленных ранее данных о регуляторной роли естественных антител. Впечатляющее по своим результатам исследование было выполнено J. Murray еще в 1967 г. Он проанализировал значение естественных антител против эритроцитов барана, содержащихся в сыворотке крыс, на продукцию этими животными антител против того же антигена (эритроцитов барана). Следует напомнить, что у человека и различных экспериментальных животных, не подвергавшихся иммунизации, в сыворотке крови содержатся в низких концентрациях естественные антитела как против эритроцитов барана, так и против ряда других антигенов и гаптенов. Эти естественные антитела, в том числе естественные антитела против эритроцитов барана, представляют собой комплексы / -белков определенной специфичности с циркулирующими иммуноглобулинами, причем последние выполняют только функцию носителя (см. гл. 5) [c.92]

Особо следует рассмотреть вопрос о специфичности антител, образующихся при иммунизации денатурированными белками. Они взаимодействуют только с денатурированным белком, причем антитела к одному из денатурированных белков взаимодействуют с другим денатурированным белком. Это наблюдается и в том случае, когда изучаемые белки в нативном виде не имеют антигенного родства. Здесь надо иметь в виду, что, утратив определенную конформацию вследствие денатурации, белок приобретает некоторую другую конформацию, чаще всего хаотического клубка (random oil), которая допускает возникновение у разных белков статистически вероятных пространственных структур, мало зависящих от их первичной структуры. Скорее всего именно благодаря этим структурам возникает антигенное родство различных денатурированных белков. [c.32]

Все накопленные к настоящему времени факты свидетельствуют о том, что у одной особи данного вида невозможно индуцировать синтез антител ко всем антигенным детерминантам определенного антигена, равно как п получить сильный ответ на серию различных антигенов. Путем направленной селекции можно резко усилить ответ на некоторые антигены (антигенные детерминанты). Так, например, путем селекции двадцати поколений мышей удалось, в частности, получить лпннп, отличающиеся по силе иммунного ответа на эритроциты барана в 200 раз. Подобный эффект не достигается посредством многократной иммунизации, в результате которой можно вообще подавить ответ из-за возникновения так называемого иммунологического паралича (см. гл. И). [c.54]

Для разных целей требуются сыворотки с различными свойствами, поэтому нельзя разработать единый способ иммунизации животных, который бы гарантировал получение продукта, идеально удовлетворяющего всем требованиям. Тем не менее существуют определенные принципы получения антител, которые могут быть приняты за основные правила . Идеальные антисыворотки получают в определенной степени методом проб и ошибок, поскольку каждый иммуноген отличается от других и процесс образования антител у каждого животного имеет свои особенности. Необходимые свойства антисыворотки — это высокий титр в сочетании с высокой средней авид-ностью, а также специфичность. Первые (на которые оказывают влияние различные адъюванты) зависят от достижения баланса между неограниченной стимуляцией антиген-чувстви-тельных клеток в лимфоидных тканях животных при условии персистирования иммуногена, с одной стороны, и от конкуренции между клетками за лимитированное количество антигена таким образом, чтобы отвечали лишь клетки с наибольшей аффинностью,— с другой. Специфичность же критически зависит от чистоты иммувогена, поскольку даже небольшие примеси могут вызвать непропорционально сильное антителообразование. [c.33]

При получении МКА к подклассам IgG человека, специфичных в отношении лишь тех минимальных различий, которые существуют в областях, определяющих антигенность подкласса, оказалось полезным получение толерантности у мышей-продуцентов путем в/б инъекции около 12 мг IgG определенного подласса за неделю до иммунизации другими подклассами [24]. Парапротеины, используемые для создания толерантности, подвергли биофильтрации путем пассажа на мышах, сыворотка которых служила в дальнейшем источником толерогена. [c.54]

Антисыворотки к подклассам IgA и IgG могут быть получены с помощью гибридомной технологии. Готовые к применению аффинно очищенные антитела могут быть использованы как в качестве им муногенов, так и в качестве сорбирующих антигенов. При этом простота в определении изотипов моноклональных антител сочетается с возможностью успешного получения специфической преципитирующей антисыворотки. Сыворотки получают, вводя животному интактные молекулы Ig илн F -фрарменты, затем их истощают на колонках со смесью других изотипов, содержащих как х-, так и Я-цепи. Получение чистого IgGaa мыши для иммунизации и адсорбции может быть осуществлено физико-химическими методами (разд. 10.6.1). [c.104]

МЛ Ю7о-ной суспензии на мышь. Наряду с опытной группой животных, получивших фактор, антиген и В-клетки, необходимо ввести две контрольные группы, из которых одна получала бы В-клетки и антиген, а другая (в качестве контроля на антигенную специфичность) — фактор, В-клетки и контрольный антиген, не дающий перекрестных реакций с испытуемым. Для сравнения в опыт следует также включить группы животных, получающих либо только Т-клетки, либо только В-клетки, либо один лишь испытуемый антиген. Через 8—14 дней после переноса (в зависимости от природы антигена и линии мышей) у животных берут кровь и извлекают селезенку. Целесообразно и титровать сывороточные антитела, и определять число антителообразующих клеток (АОК) в селезенке. Для этого используют общепринятые методы, применяя в качестве индикаторных клеток эритроциты, сенсибилизированные испытуемым антигеном. Синтетические полипептиды обычно присоединяют к БЭ с помощью хлорида хрома (III). Условия оптимального присоединения варьируют в зависимости от природы эритроцитов и антигена, и их следует определять заранее. Обычно смешивают в указанной последовательности равные объемы осадка эритроцитов, антигена (в концентрации от 1 до 10 мг/мл) и СгС1з (1—10 мг/мл). Все ингредиенты реакции готовят на физиологическом растворе без фосфатов. Смесь инкубируют 5 мин при комнатной температуре, затем добавляют избыток физиологического раствора, забуференного фосфатами, и клетки тщательно отмывают. Если при этом наблюдается выраженный гемолиз, содержание СгС1з следует уменьшить. Эффективность сенсибилизации эритроцитов проверяют непосредственно после присоединения антигена в реакции агглютинации со стандартной антисывороткой. В большинстве случаев к эритроцитам присоединяют антиген, использованный для иммунизации. Однако в случае, если антигеном служит (Т, 0)-А-Ь, для определения АОК в качестве индикаторных клеток обычно используют эритроциты, сенсибилизированные (Т, 0)-Рго-Ь, которые, как правило, дают более легко учитываемые зоны гемолиза. [c.331]

Маркер СА125 был обнаружен с помощью моноклональных антител, полученных от мыши, иммунизированной клетками линии карциномы яичников. Было обнаружено, что соответствующий антиген экспрессируется в большинстве случаев карциномы немуцинового эпителия яичников и его определение может быть использовано для диагностики рака яичников. Маркер СА19-9 обнаруживается при гастроинтестинальной аденокарциноме. Антитела к этому маркеру были получены при иммунизации клетками линии карциномы толстой кишки. В на- [c.397]

В ранний период изучение гуморального иммунного ответа сводилось в основном к определению специфических антител в крови животных после иммунизации Т-зависимыми или Т-независимы-ми антигенами. По мере накопления данных о развитии и созревании В-лимфоцитов стали проясняться клеточные механизмы иммунных реакций in vivo. Характеристики гуморального ответа, связанные с описанными выше клеточными функциями, включают [c.210]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология