Гибридные клетки линии

Использование таких приемов отбора позволило получить гибриды не только путем слияния линий клеток одного вида, о и межродовые гибриды клеток человека с клетками мыши м крысы. Эти линии клеток грызунов/человека нестабильны, тричем легче они теряют хромосомы человека, так что после тридцати делений в процессе выращивания у них остается всего семь из 24 хромосом человека, изначально присутствовавших в гибридной клетке. Этот процесс элиминации хромосом был Применен при картировании генома человека, поскольку таким путем удается быстро локализовать определенные гены на хромосомах. [c.313]

В ряде случаев для определения частоты соматического мутагенеза необходимо исследовать огромное число клеток, экспрессирующих один и тот же V-ren. Практический подход для идентификации такой группы состоит в характеристике иммуноглобулинов, получаемых от серии клеточных линий, осуществляющих иммунный ответ на одинаковый антиген. (Используемые для этой цели антигены представляют собой маленькие молекулы, имеющие дискретную структуру, которая, по-видимому, обусловливает стойкий иммунный ответ. Они отличаются от больших белков, отдельные части которых могут стимулировать образование разных антител. Эти маленькие молекулы получили название гаптенов. Для того чтобы придать им свойства антигена, их соединяют с инертным белковым носителем. Иммунизируя таким антигеном мышь, получают реактивные лимфоциты, которые соединяют путем слияния с миеломными клетками для получения гибридом. Такие гибридные клетки продолжают независимый синтез желаемого антитела.) [c.515]

В 1960 г. было показано, что при совместном культивировании клеток двух различных линий они могут сливаться, образуя гибриды, содержащие геномы обеих родительских форм. Первые гибридные клетки были получены при слиянии культивируемых клеток разных линий мышей. Кроме внутривидовых получены и межвидовые гибриды, например. [c.294]

Отдельные клетки (изолированные протопласты) важны для клоповой селекции мутантных, гибридных, трансформированных линий. Обычно в эти клетки вводят маркерные гены или создают маркерные признаки для обеспечения селективных условий отбора. Мацерированные клетки ткани растения являются хорошей моделью для сравнительного изучения физиологических процессов в ткани и отдельной тканевой клетке. В частности, сравнение процесса фотосинтеза на уровне отдельных клеток мезофилла листа и тканевом представляет большой интерес для изучения фотодыхания. [c.28]

Гибридные клетки имеют большее число хромосом, чем клетки каждой из родительских линий по отдельности, но обычно меньше, чем сумма хромосом обеих родительских линий. [c.289]

В таблице представлены примеры вариантов клеточных линий, устойчивых к ядам, и некоторые их характеристики. Эти характеристики включают используемый селективный агент, механизмы токсичности селективных агентов, биохимическую основу устойчивости, тип наследования признака устойчивости в гибридных клетках и локализацию на хромосомах человека, если она известна. [c.158]

Следовательно, для практического применения антител в качестве диагностического инструмента или компонентов терапевтических средств необходимо было создать такую линию клеток, которая росла бы в культуре и продуцировала антитела одного типа, обладающие высоким сродством к специфическому антигену-мишени, - моноклональные антитела. Подобная клеточная линия могла бы стать неиссякающим источником идентичных молекул антител. К сожалению, В-лимфоциты (В-клетки), синтезирующие антитела, не могут воспроизводиться в культуре. Решение данной проблемы виделось в создании гибридной клетки. Получив генетическую составляющую от В-клетки, она могла бы вырабатывать антитела, а приобретя способность к делению от клетки совместимого типа — расти в культуре. Было известно, что В-лимфоциты иногда перерождаются и становятся раковыми (миеломными) клетками, приобретая спо- [c.184]

Образование и отбор гибридных клеток Первый шаг в процессе получения гибридной клеточной линии, продуцирующей антитела одного типа, состоит во введении мышам антигена. После ряда иммунизаций, проведенных в течение нескольких недель, проверяют, произошло ли развитие у животных иммунного ответа. Если ответ развился, то животных умерщвляют, извлекают селезенку, промывают ее, измельчают и несильно встряхивают для высвобождения единичных клеток, среди которых находятся и антителопродуцирующие В-клетки. Взвесь клеток селезенки смешивают со взвесью миеломных клеток, дефектных по гипоксантин-гуанин-фосфорибозилтрансферазе (НОРКТ ). Комбинированную взвесь в течение нескольких минут инкубируют в 35%-НОМ полиэтиленгликоле, а затем переносят в среду, содержащую гипоксантин, аминоптерин и тимидин (среда ГАТ). [c.185]

Намного труднее исследовать биохимию синаптогенеза, так как еще не удалось продемонстрировать функциональный синаптогенез между клонированными клеточными линиями нейронов. Для этого процесса необходимо наличие нескольких гомогенных клеточных популяций из первичных культур и, таким образом, клеток, которые были получены из различных органов, например ганглия или ретины. Определенный прогресс был достигнут после открытия, что гибридные клетки, полученные при слиянии нейробластомы с клетками глиомы, способны к образованию химических синапсов [7]. Этот результат указывает на возможные хелперные функции глиальных клеток при функционировании нервов. [c.329]

Линия гибридомных клеток не истинно нейрональная модельная система, однако она должна быть упомянута здесь, поскольку представляет собой полезный инструмент исследования в нейрохимии. Каждый В-лимфоцит обычно секретирует только один тип антител. Смесь большого числа моноспецифических антител образует нормальную гетерогенную антисыворотку. Для получения высокопродуктивных моноспецифических лимфоцитов, секретирующих антитела, Кёлер и Милштейн проводили слияние В-клеток иммунной мыши с опухолевыми клетками. В отличие от нормальных лимфоцитов, полученные гибридные клетки растут и размножаются практически бесконечно и продуцируют смесь антител против антигена, используемого для иммунизации. Даже если антиген является индивидуальным белком, продуцируемые антитела представляют собой смесь многих антител, каждое из которых направлено против одного специфичного антигенного участка исходной молекулы. Для получения моноспецифической сыворотки, т. е. раствора антител против одной антигенной области и происходящих из одного вида гибридомных клеток, эти клетки необходимо отобрать и клонировать . Теперь клон продуцирует моноклональные антитела , гомогенную популяцию антител против только одной детерминанты антигена. Эти моноклональные антитела можно пспользовать для разнообразных исследований, например для идентификации функциональных участков молекулы. Но что еще более важно, такой метод может использоваться для полу- [c.371]

Рис. 18.5. Получение гибридной клеточной линии человек-грызун. Человеческие клетки, в данном случае лейкоциты, смешиваются с клетками выбранной линии грызуна в присутствии вируса Сендай. Сначала формируются клетки с двумя ядрами, дикарионы. При слиянии ядер образуются одноядерные гибридные клетки, синкарионы. Если клетки переносятся на селективную среду, то вырастают только гибридные линии. Например, если реципиентная линия клеток грызуна несет ауксотрофность по глицину, используют селективную среду, не содержащую этой аминокислоты. Неслившиеся лейкоциты человека также неспособны пролиферировать в культуре клеток. Каждая выросшая колония клеток содержит полный геном реципиентной клеточной линии грызуна и несколько донорских хромосом человека.

Сцепление генов в соматических клетках предложено называть син-тенией, от греческого сшд>-совместно, тени -поддерживать. Этот термин введен для того, чтобы отличать данные о хромосомной локализации, полученные в опытах с соматическими клетками, от результатов по сцеплению генов, полученных при анализе родословных. Если два гена присутствуют или оба отсутствуют в гибридных клеточных линиях, то они называются синтеничными. Из результатов, приведенных в табл. 18.1, следует, что гены ТК и GALK синтеничны. Оба этих гена локализованы в семнадцатой хромосоме. [c.297]

Рис. 18.6. Отбор стабильных гибридных клеточных клонов по методу HAT. В том случае, если родительская линия клеток мыши лишена тимидин-киназной активности, на селективной среде HAT будут образовывать колонии только гибридные клетки, содержащие хромосому человека 17. В этой хромосоме расположен ген ТК человека.

Селекция по типу HAT и другие способы позволяют получать стабильные клеточные линии, несущие индивидуальные человеческие хромосомы. Существуют более прямые методы, позволяющие получать гибридные клеточные линии, содержащие определенные компоненты генома человека. Это гибридизация клеток мыши с микроклетками человека, несущими неполный геном, и эндоцитоз мышиными клетками изолированных хромосом человека. [c.304]

Обычно гибридные клеточные линии используются для определения корреляции между экспрессирующимися генами и присутствующими в клетках хромосомами человека. Для того чтобы уменьшить количество анализируемых клонов, можно применить селекционные методы, позволяющие отобрать клоны, которые содержат лишь некоторые хромосомы исследуемого генома. Ограничимся хромосомами человека 1 -8. Составьте таблицу, состоящую только из трех клонов (т.е. припишите каждому клону хромосомы, которые должны в нем присутствовать), таким образом, чтобы можно было определить хромосомную локализацию любого экспрессирующегося гена человека, расположенного в одной из этих восьми хромосом. [c.333]

Клетки эмбриональных тканей и тканей новорожденных используются в качестве исходного материала для выделения специфических типов клеток, которые можно исследовать биохимически либо использовать для создания клеточных культур. Многие клетки растений и животных выживают и часто способны пролиферировать в культуральной чашке при наличии питательной среды соответствующего состава. Разные типы клеток нуждаются в различных питательных веществах, в том числе в одном или нескольких белковых факторах роста. Большинство клеток животных погибает после конечного числа белений, но иногда в культуре клеток спонтанно возникают редкие варианты, способные поддерживаться бесконечно долго в виде клеточных линий. Клеточные линии можно использовать для получения клонов, которые происходят из одиночной клетки-предшественника. Так, можно выделить мутантные клетки, дефектные по одному белку. Можно осуществить слияние различных типов клеток с образованием гетерокарионов (клеток с двумя ядрами), из которых в конечном счете образуются гибридные клетки (ядра клеток которых слились воедино). Гибридные клетки можно использовать для изучения взаимодействия компонентов двух различных клеток. Кроме того, этот метод позволяет ответить на вопрос, в каких конкретно хромосомах находятся те или иные гены. [c.208]

Гкбридома — гибридная клеточная линия, полученная в результате слияния антителопродуцирующей клетки с миеломной, активно пролиферирующей клеткой, у которой отсутствует собственный синтез иммуноглобулинов гибридома образует высокоаффинные антитела узкой специфичности. [c.460]

В 1960 г. французский биолог Ж- Барский с сотрудниками, выращивая вне организма в культуре ткани клетки двух линий мы-щей, обнаружил в небольшом количестве третий тип клеток. Эти клетки оказались гибридными и могли размножаться in vitro. По морфологическим и биологическим признакам гибридные клетки были промежуточными между исходными родительскими клетками. Однако спонтанное слияние клеток в культуре ткани происходит очень редко, поэтому использование таких гибридных клеток для проведения биохимических и генетических экспериментов затруднено. [c.168]

Было известно, что клетки, зараженные каким-нибудь вирусом, могут сливаться со здоровыми клетками и образовывать гигантские многоядерные клетки. Эти наблюдения использовали И. Ока-да в Японии и Г. Харрис в Англии для разработки техники гибридизации соматических клеток. Они употребляли для гибридизации вирус Сендай, обладающий способностью сливать клетки между собой. В результате обработки этого вируса ультрафиолетовыми лучами или алкилирующим мутагеном удается повредить его РНК и оставить неповрежденной белковую оболочку. Такой инактивированный вирус утрачивает свои инфекционные свойства, ио сохраняет способность сливать соматические клетки. С помощью инактивированного вируса Сендай удалось повысить выход гибридных клеток в несколько тысяч раз. При внесении инактивированного вируса Сендай в смен]аиную культуру двух типов клеток в некотором количестве образуются многоядерные гибридные клетки — гетерокарионы, содержащие в общей цитоплазме ядра обеих родительских клеток. Большинство многоядериых гетерокарионов быстро погибает, но те из них, которые содержат по одному ядру обеих исходных клеток, часто выживают и размножаются делением. После митоза и деления цитоплазмы из двуядерного гетеро-кариона образуются две одноядерные клетки (синкарионы), т. е. настоящие гибридные соматические клетки (рис. 66). Каждая из них содержит один набор хромосом линии А и один набор линии Б. [c.168]

Рис. ПЛ. Метафазные пластинки (фото Т. Н. Игнатовой, Т. М. Гринчук и Е. А. Сорокина) А — фибробласта легкого китайского хомячка линии У-79Я1К Б — мышиной гепато-мы линии МГ ХХПа В — гибридной клетки, образовавшейся при их слиянии.

Относительный уровень этого гликопротеида в клетках коррелирует со способностью к аллотрансплантации 6 гибридных клеточных линий (ТАЗ-На -f нормальные мышиные эмбриональные фибробласты), Пассирование клеток ТАЗ-St в организм больных пневмонией сингенных мышей в течение первой недели приводит к исчезновению с поверхности клеток эпигликанина и появлению клеток ТАЗ ММ [c.90]

Рис. 2. Прямой анализ продуктов, секретируемых гибридными клетками. Культуры гибридом получали, проводя слияние спленоцитов мышей, иммунизированных линией опухолевых клегок человека, с клетками мышииой мне ломы Х63-Аё8. Взвесь, содержащую 5-10 клеток гибридомы в 1 мл, культивировали в течение ночи в полной среде для тканевых культур в присутствии 100 мкКи/мя 5-метионина. Культуральную жидкость центрифугировали 15 мин при 20 000 Затем 100 мкл надосадочной жидкости смешивали перед ДСН-ПАГЭ с 50 мкл 3-кратного концентрата ДСН-буфера для образца. На гель наносили пробы по 50 мкл. Электрофорез проводили при постоянном токе 25 мА на пластинку геля в течение 3,5 ч. Т и Л —соответственно тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов 1 и — окрашенные элек трофореграммы и радиоавтографы одних и тех же образцов. Стрелками указаны легкие цепи пмм ко лобулино8, кодируемые геномом клеток Х63-Ай8.

Был проведен эксперимент по слиянию клеток человека и мыши и получены гибридные клеточные линии. При дальнейшем культивировании таких 1 ибридных линий in vitro происходила утрата определенных хромосом человека либо отдельных их частей (только короткого или длинного плеча). Хромосомы мыши наследовались гибридными клетками стабильно. Этот прием часто используется для установления местоположения отдельных генов на хромосомах человека. В табл. 41 представлены результаты изучения кариотипа гибридных клеточных линий через определенный промежуток времени. [c.67]

Гибридные клетки (гибридомы) отбирали по их способности размножаться на НАТ-среде. Присущая клеткам миеломы способность к быстрой пролиферации в этом случае восстанавливалась за счет привнесения клетками селезенки упомянутого фермента запасного пути синтеза АМФ. Этот этап селекции гибридных клеток играет ключевую роль ввиду очень малого выхода процесса гибридизации. Достоверность получения гибридом была подтверждена не только фактом их пролиферации на селективной среде, но и прямым анализом кариотипа этих клеток было обнаружено почти суммарное число хромосом родителей . Методом гемолиза было показано, что эти гибридомы образуют антитела к эритроцитам барана. Более того, путем селекции удалось отобрать такие штаммы гибридом, которые выделяли в питательную среду только эти селезеночные антитела и не синтезировали иммуноглобулинов миеломного происхождения. Использовав изначально мышей линии BALB, авторы смогли путем инъекции отобранных таким образом гибридом мышам этой же линии стимулировать развитие у них злокачественных новообразований, ведущих массированный синтез антител к эритроцитам барана. [c.113]

Эффективно продуцировать моноклональные антитела могут любые В-клетки, необходимо лишь сделать их для этого бессмертными и пролиферирующими. Чаще всего для этой цели получают гибридные клетки — путем слияния мышиных спленоцитов с миеломными В-клетками от мышей той же линии, не секретирующими собственных антител. Возможно также получить межлинейные или межвидовые гибриды, однако они часто нестабильны. Другой метод имморта-лизации — это трансформация клеток, например в случае В-клеток человека путем инфицирования вирусом Эпштейна—Барр. [c.537]

Для соматических клеток уже в 60-х гг., т.е. в самом начальном периоде развития генетики соматических клеток, для проведения генетического анализа, был предложен своеобразный метод парасексуального процесса (Barski et al., 1960, 1961). Оказалось, что при совместном культивировании, клетки разных линий способны сливаться, образуя двуядерные и многоядерные гетерокарионы. В конечном счете возникают две одноядерные дочерние клетки, содержащие хромосомы, полученные от исходных родительских клеток, которые во многих случаях могут дать начало длительно раз-множаюш имся гибридным клеточным линиям. Такие гибриды могут содержать полный набор хромосом одной из исходных клеток и одну или несколько хромосом из другой. Такие гибридные клетки служат мощным орудием исследования функций индивидуальных хромосом. Методы гибридизации получили широкое распространение и стали совершенствоваться во всех лабораториях, изучающих генетику соматических клеток. В Советском Союзе гибридизация соматических клеток впервые была осуществлена в Лаборатории соматических клеток ИАЭ (Волкова, Какпакова, 1972). [c.252]

В этой же лаборатории в 1986 г. в состав Ad5A 7/dl309 встроили ген-эквивалент большого Т-антигена вируса полиомы (Ру), объединенный с MLP аденовируса типа 2. В клетках линии 293, инфицированных полученным гибридным вирусом Ad5PyR39, наблюдали синтез Т-антигена Ру. Причем уровень продукции этого белка был в 5 раз выше, чем в клетках мыши, инфицированных вирусом полиомы. [c.378]

Одну из первых подобных работ выполнили С. Бэллей с соавторами (1985 г.). В район El вируса Ad5 встроили кодирующие последовательности гена S или пре-52-5 -области HBV, поместив их под контроль промотора гена Ela. Гибридные аденовирусы продуцировали в клетках линии 293 полноценные белки вируса гепатита В, которые формировали иммуногенные HBsAg-частицы. [c.381]

Если отобранные гибридные клетки выращивать в неселективных условиях, то донорные хромосомы в конце концов утратятся в силу более или менее случайных причин. Но клоны гибридных клеток можно получить в любой момент и идентифицировать резидентные донорные хромосомы по характеру исчерченности, выявлению ранее картированных последовательностей ДНК или ферментативных мар1жров либо (последнее более предпочтительно) с использованием всех трех методов. Таким способом можно получить банки различных линий гибридных оеток, каждая из которых содержит определенный набор донорных хромосом. [c.337]

Смотреть страницы где упоминается термин Гибридные клетки линии: [c.460] [c.296] [c.207] [c.208] [c.171] [c.200] [c.89] [c.91] [c.100] [c.404] [c.415] [c.171] [c.252] [c.254] [c.137] [c.348] [c.375] [c.207] [c.208] [c.208] [c.226]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология