Хлорофилл разделение иа колонках

Основоположником хроматографического анализа является русский ботаник Михаил Семенович Цвет, изучавший состав хлорофилла. Он настойчиво искал эффективный метод разделения сложных смесей органических соединений, которые извлекал неводными растворителями из свежих и сухих листьев растений. Анализируя причины неполной экстракции, М. С. Цвет высказал предположение, что полному извлечению пигментов препятствует их адсорбция тканью листа. Опыты с различными порошкообразными сорбентами подтвердили это—при пропускании растворов сложных смесей через заполненную мелом колонку они разделялись на отдельные окрашенные зоны. [c.5]

Хлорофилл — зеленый пигмент растений — состоит из смеси нескольких пигментов. При пропусканий раствора хлорофилла через колонку происходит сорбция и разделение пигментов в соответствии с их избирательной сорбируемостью. [c.295]

Хлорофилл — зеленый пигмент растений — состоит из смеси нескольких пигментов. При пропускании вытяжки из зеленого листа через сорбционную колонку происходит разделение пигментов в соответствии с избирательной адсорбируемостью, при этом химический состав пигментов не изменяется, что и позволяет использовать хроматографический метод для препаративного получения отдельных пигментов в чистом виде. [c.28]

Эти закономерности адсорбции веществ из многокомпонентных растворов легли в основу хроматографии — метода разделения и анализа многокомпонентных смесей. Впервые этот метод был применен М. С. Цветом (1903 г.) для разделения на составные компоненты сложного растительного пигмента— хлорофилла. Пропуская раствор хлорофилла через слой оксида алюминия, помещенного в стеклянную трубку (колонку), М. С. Цвет обнаружил, что отдельные компоненты этого сложного вещества адсорбируются на разных уровнях по высоте колонки. В верхней части накапливается компонент, обладающий наибольшей адсорбционной способностью (рис. 68 а, компонент С), последующие зоны соответствуют компонентам со все более уменьшающейся адсорбционной способностью. Так как отдельные компоненты хлорофилла окрашены, то эти зоны легко различить по окраске. Такой окрашенный столбик адсорбента М. С. Цвет назвал хроматограммой, а сам метод анализа — хроматографическим, [c.176]

В подготовленную колонку вводят порцию (5 уил) экстракта. Полученную первичную хроматограмму промывают смесью бензина и бензола (9 1). При промывании колонки происходит разделение зон, вверху колонки образуется зеленая зона р-хлорофилла, затем сине-зеленая а-хлорофилла, несколько ниже располагается зона желтого цвета (каротиноиды). [c.296]

Явление адсорбции из растворов широко используется для разделения многокомпонентных систем. Этот метод анализа и разделения, называемый хроматографией, был разработан русским ученым Цветом в начале XX в. Пропуская раствор хлорофилла через колонку с адсорбентом (окисью алюминия), Цвет установил, что различные компоненты сложного раствора адсорбируются на разных уровнях высоты колонки. После нескольких циклов промывания растворителем в колонке обнаруживаются расположенные одна над другой резко очерченные (по-разному окрашенные) зоны. Очевидно, что верхняя зона будет занята компонентом, обладающим наибольшей адсорбционной способностью последующие зоны располагаются сверху вниз в порядке уменьшения адсорбционной способности. Разрезая колонку по зонам (в том случае, если они окрашены ) и затем десорбируя, можно препаративно разделить компоненты. [c.177]

Хроматографический анализ. М. С. Цвет установил (1903), что многие твердые материалы, весьма различные по химическому характеру, обнаруживают способность избирательного и последовательного поглощения из растворов тех или других растворенных веществ, что дает возможность достигать с их помощью разделения на составные части таких сложных естественных продуктов, как хлорофилл и др. Этот метод получил название хроматографического адсорбционного анализа, так как при разделении окрашенных веществ путем пропускания раствора их через колонку с адсорбентом различные зоны последнего приобретают разную окраску. Однако под тем же названием этот метод применяется для разделения и неокрашенных продуктов. В настоящее время выработаны новые приемы и методы хроматографического анализа. [c.373]

Вещества, сильно адсорбируемые, будут находиться в верхней части колонки, а вещества, менее адсорбируемые, по мере уменьшения их адсорбционной способности будут располагаться ближе к нижней части колонки. Наблюдать разделение хлорофилла на составляющие его компоненты. Отметить число цветных полос и их окраску. [c.149]

В хроматографическую колонку вводят 5 мл экстракта. Образуется первичная хроматограмма, которую промывают смесью бензина и бензола (10 1). При промывании колонки происходит разделение зон вверху колонки образуется зеленая зона чистого хлорофилла р, далее — зона хлорофилла а и ниже располагается зона желтого цвета — каротиноиды. При дальнейшем промывании колонки растворителем в фильтрат переводятся сначала желтые пигменты (каротиноиды), затем хлорофилл а и последним хлорофилл р. Каждую фракцию собирают в отдельный приемник. [c.30]

В 1906 г. Цвет обнаружил, что если налить раствор хлорофилла, приготовленный из листьев, в верхнюю часть колонки с подходящим адсорбентом, образующаяся окрашенная полоса при последующем промывании колонки растворителем разделяется на ряд полос, движущихся с различными скоростями. Каждый компонент исходной смеси представлен отдельной полосой его можно получить в чистом виде, собирая разные растворы по мере того, как они выходят из колонки, или разрезая колонку по длине на части и вымывая пигмент из каждой такой части. Этот метод нашел широкое применение для разделения веществ, которые трудно разделить другими методами. Он оказался чрезвычайно ценным при обнаружении и разделении биологических веществ. Использование хроматографического метода для разделения радиоактивных веществ дает возможность обнаруживать и разделять очень малые количества этих веществ. [c.252]

Рис. 5. Адсорбционная хроматография по М. С. Цвету. Разделение на адсорбционной колонке смеси, содержащей ксантофиллы, хлорофиллы, р-каротин и а-каротин.

В качестве одной из фаз можно использовать порошок или мелкие частицы ими заполняют вертикальную колонку или наносят их тонким слоем на стеклянную пластинку. Все эти методы называются хроматографическими— термин, предложенный М. Цветом, который впервые в 1903 г. описал разделение пигментов, присутствующих в листьях растений (хлорофилла и каротинов). Пропуская пигменты, растворенные [c.159]

Теперь надо подготовить колонку с адсорбентом (поглотителем), чтобы провести разделение составных частей хлорофилла. Для этой цели можно использовать стеклянную [c.402]

Теперь надо подготовить колонку с адсорбентом (поглотителем), чтобы провести разделение составных частей хлорофилла Для этой це [c.402]

Один или два листка растирают в ступке, экстрагируют сначала метиловым спиртом, а затем—смесью петролейного эфира и бензола, взятых соответственно в отношении 9 1. Прибавлением воды пигменты полностью переводят в смесь петролейного эфира с бензолом. Полученный зеленого цвета раствор пропускают через адсорбционную колонку (рис, 332), которая в верхних двух третях содержит измельченный сахар, в следующей одной шестой части колонки—карбонат. кальция и в нижней одной шестой— окись алюминия. При таком расположении адсорбирующая способность увеличивается сверху вниз от одного адсорбента к другому, так что легко адсорбируемые компоненты задержатся сахарозой, более трудно адсорбируемые—карбонатом кальция или окисью алюминия. Хроматограмму проявляют смесью петролейного эфира с бензолом, взятых в отношении 9 1. Зеленый хлорофилл адсорбируется сахарозой, желтый ксантофилл —карбонатом кальция и оранжевый каротин —окисью алюминия. Растворитель удаляют из колонки отсасыванием досуха, отделяют каждый слой и экстрагируют пигменты эфиром. Эфирные растворы разбавляют до определенного объема и анализируют колориметрическим методом, сравнивая их со стандартными растворами тех же самых соединений. Большое число таких разделений детально описано Стрейном. [c.410]

Мейер [49]). Мейер описывает некоторые флуоресцирующие растворы хлорофилла в этаноле как коллоидные, однако не приводит в пользу этого никаких доказательств (см. Смит [52]). Полученные Мейером водные коллоиды хлорофилла, в которых плотность частиц была такой же, как и в гранулах хлоропластов, не давали флуоресценции. Хлорофилл не флуоресцирует также и в адсорбированном состоянии, например, на колонке из крахмала при хроматографическом разделении [51]. [c.186]

Получаемая при этом хроматограмма аналогична хроматограмме сырого хлорофилла вверху образуется зеленая зона, а ниже расположена зона каротиноидов, которые могут быть полностью выделены промыванием бензином. Для удаления жиров колонку промывают десятикратно бензином и затем бензолом или смесью бензола с бензином. При этом из зеленой зоны выходит второй каротиноид. Одновременно замечается разделение зеленой зоны на две части желто-зеленую (верх) [c.103]

Если разделению подвергаются окрашенные вещества, то слои адсорбента окрашиваются и разделены бесцветными промежутками одного адсорбента. Этим методом М. С. Цвет доказал, что природный хлорофилл состоит из нескольких компонентов. Для выделения адсорбированных веществ колонка адсорбента может быть целиком или по частям извлечена из стеклянной трубки и разделена на части, на которых адсорбирован только один из компонентов смеси. Выделение индивидуальных адсорбированных компонентов можно осуществить также путем элюирования, т. е. последовательным вымыванием отдельных слоев адсорбированных веществ, пропуская соответствующие растворители порциями через колонку. [c.250]

Разделение феофитинов проводят также на смоле дауэкс 50W-X4 (№), которая переводит хлорофиллы в феофитины [31]. Смолу в термостатированной колонке (1,0x20—24 см) обезвоживают ацетоном и сразу же вводят раствор пигмента в ацетоне. Феофитин Ь и сопутствующие каротиноиды элюируют ацетоном (скорость подачи 2— 3 мл/мин). Затем нагретым почти до кипения 85%-ным ацетоном элюируют феофитин а. [c.275]

Возникновение и дальнейшее развитие хроматографии связано с анализом нестабильных соединений. Когда М. С. Цвет [1 ] в своем первом опыте провел разделение хлорофилла — красящего вещества зеленого листа — на компоненты а и б, его оппоненты, в том числе и Р. Вильштеттер, подвергли результаты опыта сомнению, поскольку разделяемые соединения чрезвычайно реакционноспособны и нестабильны, и были основания считать, что они под действием сорбента превращаются в другие вещества. Однако М. С. Цвет доказал, что в данном случае происходит прямое хроматографическое разделение реакционноспособных веществ, ибо он применил сорбент с малой сорбционной емкостью, который не катализировал превращений этих соединений и слабо удерживал тяжелые компоненты, т. е. они сравнительно быстро продвигались по хроматографической колонке. [c.5]

Наиболее ценным вкладом в разрешение этого вопроса была разработка новых, хроматографических методов разделения аминокислот. Сама хроматография была изобретена русским ботаником М. Цветом в 1906 г. и получила такое название потому, что вначале ею пользовались для разделения пигментов. Цвет занимался выделением хлорофилловых пигментов из зеленых листьев. У него возникла мысль, что их можно быстро разделить, используя различную скорость их адсорбции на адсорбирующем материале. Сам он описывал это так Если раствор хлорофилла в петролейном эфире профильтровать через колонку адсорбента (я пользуюсь преимущественно карбонатом кальция, которым плотно набиваю узкую стеклянную трубку), то пигменты... разделяются, образуя на колонке ряд различно окрашенных зон более интенсивно адсорбирующиеся пигменты замещают более слабо адсорбирующиеся и оттесняют их дальше, вниз. Это разделение становится практически полным, если после пропускания раствора пигментов пропустить через адсорбирующую колонку еще и чистый растворитель. Подобно полосам светового спектра, на колонке из карбоната кальция разделяются различные компоненты смеси пигментов. .. которые можно теперь определить и качественно и количественно. Такую колонку я называю хроматограммой, а соответствующий метод — хроматографическим методом . [c.69]

Закономерности, наблюдающиеся при адсорбции из смесей, легли в основу метода хроматографии, которая за последние десятилетия приобрела особое значение для очистки, препаративного разделения, анализа различных сложных объектов, в том числе лекарственных веществ, витаминов, антибиотиков, алкалоидов, пигментов. Адсорбционная хроматография была открыта М. С. Цветом (1903), впервые применившим ее для разделения компонентов хлорофилла. Опишем кратко этот метод. Исследуемый сложный по составу раствор в подходящем растворителе пропускают через адсорбционную колонку (в П( остейшем [c.191]

Слово хроматография происходит от греческого слова hromatismos, что означает цвет. В ранних вариантах хроматографии разделение проводили иа бумаге, а объектами разделения обычно были окрашенные природные продукты. [Приведенное в примечании объяснение причины возникновения слова хроматография не является точным. Этот метод открыт в 1903 г. выдающимся русским ученым-ботаником М. С. Цветом, разделявшим окрашенные компоненты хлорофилла растений на колонках, заполненных сорбентами белого цвета (крахмал, карбонат кальция, тальк и т. п.). Хроматография на бумаге была введена в практику Мартином и Синджем в 1941 г., т. е. через 35 лет после открытия хроматографического метода и появления соответствующего термина. — Прим. ред.]. [c.431]

Колоночную хроматографию применяют для разделения экстрагированных из растений природных белковых комплексов хлорофиллов или протохлорофиллидов. Так, на колонке (1Х Х5,5 см) с гидроксиапатитом (предварительно промытым 5 мл 1%-ного додецилсульфата натрия в 0,1 М фосфатном буферном растворе, pH 7,0) в ступенчатом градиенте концентрации фосфатного буферного раствора (0,1 и 0,35 М, pH 7,0) удалось разделить два хлорофилл-белковых комплекса [32]. На одном из этапов очистки комплекса протохлорофиллид-белок (про-тохлорофиллидголохром) разделение проводили на колонке (7,5х1 5 см) с гидроксиапатитом путем последовательного, элюирования 0,2 М. КС1 и 0,25 М фосфатом калия в три-циновом буферном растворе (pH 8) при скорости подачи 20 мл/мин [33]. [c.275]

Адсорбенты. Выбор адсорбента до настоящего времени частично производится опытным путем. В то же время накапливается все больше данных о пригодности тех или иных адсорбентов для разделения веществ с определенным химическим строением, приводится несколько примеров применения специфических адсорбентов. В каждом отдельном случае выбирают такой адсорбент, который обладает наибольшей избирательностью по отношению к отдельным компонентам смеси, подлежащей разделению. Выбор адсорбента частично зависит от характера применяемых растворителей. Для анализа веществ с полярными группами в молекуле могут применяться окись алюминия и окислы других металлов. Для разделения кароти-1ЮНД0В обычно используются окись алюминия, гидрат окиси кальция, углекислый цинк и углекислый кальций, адсорбирующая способность которых уменьшается в приведенной последовательности. Стрейн исследовал последовательность адсорбции некоторых каротиноидов на колонках из сахара, целита и окиси магния. Относительная способность к адсорбции в значительной мере определялась избирательным сродством адсорбентов к характерным группам или частям молекул пигментов. Сахар преимущественно притягивает полярные гидроксильные группы ксантофиллов, а окись магния — ненасыщенные части молекул каротинов и ксантофиллов, а также и гидроксильные группы ксантофиллов. Стрейн применил колонки пз окиси магния для исследования ксантофиллов и хлорофиллов и показал, что распределение растворенных веществ в зонах адсорбции зависит от многих условий. Например, пигменты, образующие обычно одну окрашенную зону, могут образовать две зоны, в присутствии некоторых бесцветных примесей. Для разделения карбонильных соединений в виде 2,4-динитрофенилгидразонов был применен порошкообразный сернокислый магний.Брокманн показал, что растворимые в воде соли, например сульфаты меди и цинка, могут служить хорошими адсорбентами для хроматографического разделения производных азобензола. Сернокислый алюминий можно применять для разделения оксиантрахинонов, причем очень прочно адсорбированные вещества удается выделить только после растворения адсорбента в воде. [c.1491]

Для получения хроматограммы в стеклянную трубку помещают ватный тампон, а затем вносят небольшими порциями сорбент—сахарный порошок. Уплотнение сорбента проводят постукиванием трубки о твердую поверхность. Вводят в хроматографическую колонку 5 мл экстракта. По мере фильтрования последнего получается первичная хроматограмма. Колонку промывают смесью, содержащей бензин и бензол (10 1). При промывании происходит разделение зон вверху колонки образуется зеленая зона чистого хлорофилла-р, затем сине-зеленая зона чистого хлорофилла-а, несколько ниже располагается зона желтого цвета (каратиноиды). [c.200]

Это явление впервые (1903 г.) наблюдал русский ботаник М. С. Цвет, которому удалось разделить сложное зеленое красящее вещество растений—хлорофилл—на 8 составных частей различных окрасок картина цветных полос в адсорбционной колонке получила название хроматограммы. Самый метод разделения компонентов при помощи избирательной адсорбции, впервые разработанный М. С. Цветом, получил наименование хроматографического адсорбционного анализа ( цветовского анализа). [c.109]

В 1903 г. русский ботаник М. С. Цвет впервые осуществил оригинальный метод разделения и определения содержания веществ. В вертикально закрепленную стеклянную трубку, снабженную внизу краном или зажимом, насыпали твердый адсорбент, например, сахарную пудру (рис. 3). Далее через такую трубку сверху вниз пропускали исследуемый раствор — бензол-бензиновый раствор хлорофилла. Обладая большой удельной поверхностью, порошок сахарной пудры адсорбировал на своей поверхности пигменты, составляющие хлорофилл (ксантофиллы, хлорофиллины и каратиноиды). При этом в первую очередь, т. е. в верхней части колонки, задерживался тот пигмент, который наиболее прочно адсорбируется на поверхности адсорбента. Остальные пигменты располагались по длине колонки в соответствии с их адсорбционной способностью. В результате такой последовательной адсорбции содержимое колонки по высоте окрашивалось 3 разные цвета — происходило распределение пигментов по высоте колонки. Визуально на основании числа полученных зон можно было судить о количестве пигментов, а по высоте отдельных слоев — и о их относительном количестве. Поскольку М. С. Цвет разработал свой метод для окрашенных соединений, то такой метод получил название хроматографического, а трубка с адсорбентом стала называться хроматографической колонкой. [c.70]

Другой русский ученый — М. С. Цвет (1903 г.) использовал адсорбционную методику для анализа и разделения растительных пиг ментов зеленого листа. Адсорбентами являлис различные порошковидные вещества, в ток числе углекислый кальций, инулин и т. п. Порошками подобного типа плотно забивали стеклянные трубки (адсорбционные колонки) и через них пропускались вытяжки пигментов Растворителем являлся петролейный эфир ил1 другие органические растворители, посредствоь которых извлекался хлорофилл и его окра щепные спутники. [c.258]

За последние два десятилетия особенно широкое применение для анализа и разделения сложных смесей веществ получил метод хроматографии. Метод был создан Цветом, им же были изложены основные принципы хроматографии и дана правильная оценка возможностей метода для разделения окрашенных и неокрашенных веществ. Цвет воспользовался этим методом для разделения пигментов листьев — хлорофилла и др. Через стеклянную трубку (колонку) заполненную адсорбентом — сахаром, крахмалом, пропускался экстракт из зеленых листьев в бензине. Пигменты адсорбировались в верхней части колонки. Затем сверху наливался чистый растворитель, бензин. При этом окрашенный слой начинал передвигаться вниз вдоль трубки, разделяясь на ряд окрашенных слоев (рис. 58). Этот процесс называется проявлением. Разрезав трубку на части соответственно окрашенным зонам, можно проэкстрагировать отдельные компоненты. Большим преимуществом мето-Рис 58 Хро является проведение процесса в мягких ус-матогр афия" ловиях, при которых вероятность разложения на колонке вещества невелика, а также большая эффек- [c.238]

Явления ионного обмена и молекулярной адсорбции (см. 73) приобрели особое значение в хроматографии, ставшей в последние годы одним из важнейших методов препаративного разделения и аналитического исследования смесей различных соединений, в частности, антибиотических и лекарствеппых веш,еств. Адсорбционная хроматография была открыта М. С. Цветом (1903), применившим ее для разделения компонентов хлорофилла (рис. 106). Экспериментально адсорбционная хроматография проводится в колонке, заполненной адсорбентом. Исследуемый раствор смеси веш,еств непрерывно пропускается через колонку и изучается концентрация вещества С в выходящей жидкости ввиду неодинаковой адсорбируе- [c.238]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология