Метод выделения бактерий

Методы выделения нуклеиновых кислот. При изучении химического состава и строения нуклеиновых кислот перед исследователем всегда стоит задача выделения их из биологических объектов. В главе 2 было указано, что нуклеиновые кислоты являются составной частью сложных белков — нуклеопротеинов, содержащихся во всех клетках животных, бактерий, вирусов, растений. Нуклеиновые кислоты обладают сильно выраженными кислыми свойствами (обусловлены остатками ортофосфорной кислоты в их составе) и при физиологических значениях pH несут отрицательный заряд. Этим объясняется одно из важных свойств нуклеиновых кислот—способность к взаимодействию по типу ионной связи с основными белками (гистонами), ионами металлов (преимущественно с М "), а также с полиаминами (спермин, спермидин) и путресцином. Поэтому для вьщеления нуклеиновых кислот из комплексов с белками необходимо прежде всего разрушить эти сильные и многочисленные электростатические связи между положительно заряженными молекулами белков и отрицательно заряженными молекулами нуклеиновых кислот. Для этого измельченный путем [c.96]

МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ В ЧИСТУЮ КУЛЬТУРУ [c.208]

Существуют следующие принципы и методы выделения чистых культур бактерий. [c.25]

Для выделения бактерий в виде чистых культур известно сравнительно мало методов. Чаще всего это делают путем изолирования отдельных клеток на твердой питательной среде, используя метод посева штрихом или разлива по чашкам небольшого количества жидкой культуры. Однако получение отдельной колонии не всегда гарантирует чистоту культуры, поскольку колонии [c.318]

Принципы и методы выделения чистых культур бактерий..............................................................................25 [c.457]

Принципы и методы выделения чистых культур бактерий [c.25]

Выбор того или иного метода для выделения ДНК в каждом конкретном случае определяется природой использованного биологического материала. С подробным описанием методов выделения ДНК из животных и растительных тканей и из бактерий можно познакомиться в другой работе [9]. При работе с микроорганизмами одним из наиболее подходящих является метод Мармура [10]. Он сводится к разрушению клеток, денатурации клеточных остатков и удалению РНК при помощи рибонуклеазы с последующим избирательным осаждением ДНК изопропанолом. С целью предотвращения загрязнения ДНК двувалентными ионами металлов и разрушения ее дезоксирибонуклеазой добавляют хелирующие агенты и додецилсульфат натрия. [c.63]

Метод выделения бактерий [c.65]

Для размножения любой бактерии (независимо от целей) необходимо обеспечить подходящее биофизическое окружение и биохимические питательные компоненты. В гл. 6 приведены методы контроля таких биофизических факторов, как pH, температура, подача и удаление кислорода, и другие. В гл. 7 рассмотрены потребности в питательных веществах, состав синтетических и комплексных сред и количественные определения роста бактерий. Умелое обращение с биофизическими, биохимическими и биологическими факторами приобретает особую важность в получении накопительных культур и последующего выделения бактерий в виде чистой культуры (гл. 8). [c.163]

В этом разделе мы рассмотрим основные этапы выделения и идентификации чистых культур аэробных и анаэробных бактерий. Методы выделения и идентификации отдельных возбудителей инфекционных заболеваний представлены в соответствующих разделах, посвященных их лабораторной диагностике. [c.30]

Гликоген [31,32,33]—важнейший резервный полисахарид животных организмов — содержится во всех органах животных и во многих микроорганизмах (как дрожжи и бактерии). Особенно высоко содержанке гликогена в печени (до 20%) и в мышцах (до 4%). Старыми классическими методами выделения гликогена являются 1) метод Пфлюгера (кипячение животной ткани в растворе крепкого КОН, растворяющего [c.108]

Бактериологический метод. Выделение чистой культуры микоплазм является наиболее точным способом подтверждения диагноза. Микоплазмы относят к прихотливым бактериям. Для их культивирования используют питательные среды с добавлением лошадиной сыворотки (источник холестерина) и дрожжевого экстракта (источник компонентов для синтеза нуклеиновых кислот). [c.251]

Другой промышленный метод выделения казеина основан иа введении бактерий в обезжиренное молоко, которые выделяют молочную кислоту из имеющейся в молоке лактозы. [c.228]

В элективных средах (методика Виноградского) создаются благоприятные условия для развития определенного вида, который в этих условиях развивается. Этот метод требует продолжительного времени для выделения культуры. Например, для выделения бактерий, сбраживающих клетчатку, потребовалось около 60 суток. [c.277]

НЕКОТОРЫЕ МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИЗУЧЕНИЯ ДНК БАКТЕРИЙ [c.129]

Из накопительных культур бактерии обычно выделяют путем их пространственного отделения от других форм на твердой среде, где они растут в виде колоний. Для микроорганизмов, не растущих на твердых средах, можно использовать метод предельного разведения, последовательно перенося клетки в отдельные пробирки с жидкой средой. Поскольку обычные методы выделения не дают абсолютной гарантии чистоты получаемых культур, некоторые исследователи применяют более [c.278]

В этой главе мы приведем специфические примеры огромного многообразия и нередко изощренности методов накопления, используемых в бактериологии. Во многих случаях для получения накопительной культуры определенной бактерии используют несколько различных подходов. Основное внимание в этой главе будет уделено практическим аспектам получения накопительных культур и выделения бактерий, однако в конце главы приведены ссылки на общие обзоры [1—4], в которых можно найти подробную информацию об используемых при этом принципах. Получение накопительных культур и выделение мутантных штаммов рассматриваются в разд. 13.4—13.6. [c.279]

Основными целями хранения является поддержание жизнедеятельности клеток и чистоты культур, а также предупреждение изменений и мутаций, т. е. сохранение микроорганизма в состоянии, максимально близком к исходно выделенному штамму. Существует много методов хранения бактерий, однако не все штаммы при использовании какого-либо из них ведут себя одинаково. Выбор метода часто определяется наличием оборудования, места для хранения и квалифицированных сотрудников. [c.512]

Для выявления и предварительной характеристики ДНК плазмид, присутствующих в клиническом материале или лабораторных штаммах грамотрицательных и грамположительных бактерий, подходят обычные методы электрофореза в геле с незначительными модификациями [10, 23]. Метод выделения плазмид с ДСН (разд. 15.1.3) широко применяется в сочетании с анализом ДНК гель-электрофорезом [26]. При этом, однако, в частично очищенных клеточных лизатах могут быть выявлены лишь те плазмиды, молекулярная масса которых лежит в пределах от 0,6-10 до 100-10 . Мы же используем метод, описанный в разд. 15.2, который позволяет выявлять плазмиды с мол. массой от 0,6-10 до 350-10 . [c.139]

Для выделения бактерий группы oli-aerogenes методом прямого посева Кичепко (1942) рекомендует применять МПА с желчью и розоловой кислотой. На этой среде хорошо задерживается рост сапрофитных бактерий нефекального происхождения. Микроорганизмы же группы кишечной палочки на ней прекрасно размножаются. Мы обычно работали с этой средой. [c.571]

Броцкая С. 3. Термофильные протеолитические бактерии. III. Распространение и методы выделения культур. Микробиология, 1946, [c.613]

Этот первый метод выделения генов был разработан в конце 1960-х — начале 1970-х гг. Его появление стало возможным благодаря открытию ферментов, называемых рестрикционными (от англ. restri ting — ограничивающий) эндонуклеазами или рестриктазами. Эти ферменты обнаруженные в бактериях, способны разрезать ДНК, например они разрезают любую вторгающуюся в бактериальную клетку вирусную ДНК, ограничивая (рестрицируя) таким образом размножение вирусов внутри клетки. Разные виды бактерий продуцируют различные рестрикционные эндонуклеазы. Каждая из них разрезает нуклеиновую кислоту (отсюда, нуклеаза ) в строго определенных точках ( эндо означает, что фермент разрезает молекулу изнутри, а не атакует ее с концов). Фермент распознает некую последовательность оснований и взаимодействует именно с ней. Точки разрезания называются сайтами рестрикции. К настоящему времени выделено более 2000 рестриктаз, активных в отнощении 230 разных последовательностей. Свою собственную ДНК бактерия защищает путем присоединения к определенным основаниям в сайтах рестрикции метильной группы. [c.219]

Френкель Г. М. и Липшиц В. В. Простые методы выделения культур анаэробных бактерий. Мшроб1олог1чн. журн. (АН УССР), [c.640]

Систематика бактерий проводится на основании определенных признаков у группы микроорганизмов. Для выделения бактерий в определенную систематическую группу необходимо тщательное изучение морфологии, способности к перемещению, спорообразованию. Отличительным признаком служит отнощение клеток к окрашиванию. Наиболее употребительным методом дифференциации клеток микроорганизмов является окрашивание по Граму. Сущность этого метода заключается в выяснении возможности удерживания клеткой красителя (кристаллический фиолетовый — иод) при последующей обработке препарата спиртом. Использование этого индикаторного метода позволяет выделить две группы микроорганизмов грамположительные, сохраняющие окраску и грамотрица-тельные, обесцвечивающиеся при обработке препарата спиртом. [c.204]

В проведенных опытах изучали интенсивность включения N в разли1чные фракции азота, выделенные из отдельных органов люцерны, красного клевера, гороха и люпина, при экспозиции этих растений в атмосфере, обогащенной N2 , от 12 до 90 часов. В ходе исследований был разработан метод препаративного выделения бактерий Rhizobium из клубеньков, что позволило одновременно изучать также и скорость включения N в бактериальные клетки. [c.212]

Применение изотопа М при изучении биологической фиксации атмосферного азота в клубеньках бобовых позволило установить новые положения о механизме этого процесса [9]. Был разр-аботан метод препаративного выделения бактерий из клубеньков бобовых, и это позволило детально изучить распределение меченого азота как в отдельных фракциях и органах высшего растения, так и в клубеньковых бактериях. [c.229]

Проходивший летом 1946 г. в Колд-Спринг-Харборе 11-й симпозиум по количественной биологии был посвящен Наследственности и изменчивости у микроорганизмов . Этот симпозиум стал памятным событием в истории молекулярной генетики, так как именно на этом симпозиуме было сделано сообщение о существовании пола у бактерий. (К этому вопросу мы вернемся в последующих главах.) Однако для участников симпозиума вопросом первостепенной важности были не эти совершенно неожиданные открытия, а несомненный триумф теории один ген —один фермент. Несколько докладчиков сообщили о своих исследованиях ауксотрофных мутантов у грибов и бактерий. Изложенные ими факты показывали, что рост большинства ауксотрофных мутантов действительно можно восстановить, добавляя к минимальной среде лишь один какой-нибудь метаболит. После одного из таких докладов выступил Макс Дельбрюк и указал, что, как ни убедительны на первый взгляд эти данные, они все же не доказывают правильности теории один ген —один фермент, хотя, безусловно, они и не противоречат тезису, что каждый ген контролирует образование отдельного фермента, катализирующего отдельную стадию реакции огромного метаболического ансамбля. Сам метод выделения ауксотрофов, говорил он, исключает объективность выводов, так как дает возможность обнаруживать мутанты именно такого типа, которые, судя по всему, всем хочется обнаружить. Так, если допустить, что существуют гены, контролирующие не один, а сразу очень много ферментов, то по крайней мере один из этих ферментов мог бы быть связан с незаменимой для клетки функцией. И тогда ни одно из присутствующих в полной среде относительно простых веществ не могло бы компенсировать отсутствие такой незаменимой функции. Иными словами, даже если бы допущение один ген — много ферментов было правильным, мутации в таких генах при использовании описанного метода отбора мутантов все равно бы обнаружить не удалось, так как соответствующие мутантные клетки вообще не образовывали бы колоний на агаре с полной средой. В заключение своей критики Дельбрюк предложил, чтобы поборники теории один ген — один фермент разработали такие опыты, которые бы дали возможность опровергнуть предложенную им теорию, так как если мы такими методами не располагаем, то вся масса совместимых с этим тезисом доказательств ничего не дает в его подтверждение . [c.122]

Берг [71] отмечает, что в большом европейском городе только в 1962 г. вирусы были выделены в 18% из более чем 200 образцов, полученных из системы распределения воды. При этом данные получены с применением малочувствительных методов выделения. Уже упоминалось [45], что прн исследовании водопроводной воды г. Москвы удалось выделить энтеровирусы из 13,3% образцов. Следует также учитывать, что кишечные вирусы выделяются из водопроводной воды при использовании недостаточно совершенных методов изоляции, кроме того, они выделены из воды, которая по подготовке относится к высококачественным. Приведенные примеры показывают, что водоподготовка, эффективная для освобождения воды от бактерий кишечной группы, может быть недостаточной для удаления устойчивых бактерий, болез- [c.84]

Крошечные вибрионы, названные бделловибрионами, способны прикрепляться к различным грамотрицатель-ным бактериям, проникать через их клеточную стенку и размножаться в периплазматическом пространстве с последующим лизисом бактерии-хозяина. Метод выделения бделловибрионов во многих отношениях напоминает метод, используемый для бактериофагов. [c.316]

Среды в твердом состоянии в форме плотных гелей используются в бактериологии с времен Роберта Коха. Наиболее важным преимуществом использования твердых сред является то, что на них можно выращивать микроорганизмы в виде колоний, образующихся из отдельных клеток популяции. Поэтому посев щтрихом представляет собой простой и эффективный метод выделения чистых культур бактерий (разд. 8.4.1). Методы посева нанесением жидкой культуры на поверхность твердой среды, глубинного посева и послойного посева также пригодны для подсчета жизнеспособных бактерий (разд. 11.2). Другими методами, основанными на использовании твердых сред, являются посев с помощью бархатных репликаторов (разд. 13.6.2 и 20.2.5), а также ауксанографический метод (разд. 20.2.6). [c.356]

Оптимальный метод выделения высокомолекулярной ДНК из донорного штамма или трансфецирующей ДНК бактериального вируса часто зависит от особенностей соответствующих бактерий ил1/ вирусов. Общие принципы и методы разрушения клеток грамотрицательных и грамположительных бактерий с целью выделения ДНК приведены в гл. 22. Чаще других для выделения и очистки высокомолекулярной ДНК из микроорганизмов применяется метод, описанный Мармуром [29]. Он подробно изложен в разд. 22.2.1. Однако в большинстве случаев использование высокоочищенных препаратов ДНК, не содержащих РНК и другие примеси, необязательно поэтому можно обойтись без обработки рибонуклеазой. Специальные методы выделения ДНК плазмид описаны в гл. 15. [c.67]

Было бы нецелесообразно описывать здесь все методы выделения и определения характеристик структурных компонентов клеточных стенок. Выбор метода зависит от исследуемого организма, имеющихся возможностей и целей исследования. Для одних исследований не требуются интактные высокоочищенные полимеры, для других, наоборот, необходимы и нативные, и чистые макромолекулярные вещества. Тот, кто хочет всесторонне охарактеризовать один из рассмотренных здесь полимеров бактерий, прежде всего должен ознакомиться с литературой, в которой описаны различные методы выделения, а также преимущества и ограничения каждого из них [35, 36, 57, 58]. Здесь даны самые простые методы выделения и получения предварительных характеристик пептидогликанов и липополисахаридов из наиболее распространенных в лабораторных исследованиях бактерий. [c.328]

Применение осмотического шока оказалось очень полезным при изучении некоторых ферментов грамотрицательных бактерий. Эти ферменты локализуются между плазматической мембраной и наружными слоями клеточной стенки в периплазматическом пространстве, и поэтому их называют периплазматическими ферментами [32, 33]. Обычно это гидролазы, такие, как щелочная фосфатаза, рибонуклеаза I и циклическая фосфоди-эстераза. Метод выделения этих Лерментов из клеток Е. oli описан Хьюзом и др. [22]. Он включает следующие этапы 1) тщательное промывание клеток свежей средой или соответствующими буферами 2) суспендирование промытого осадка клеток в растворе 0,5 М сахарозы (80 частей) 3) центрифугирование и декантирование надосадочной фракции 4) быстрое диспергирование осадка путем сильного встряхивания в холодном [c.380]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология