Элюирование двухмерное

В двухмерном варианте тонкослойной хроматографии образец наносят (в виде единственного пятна) в "нижний правый" угол пластинки (рис. 98). после чего проводят обычное элюирование растворителем А. Пятно смещается вдоль правого ребра пластинки. После этого элюирование повторяют (обычно пользуясь другим растворителем) в перпендикулярном направлении. Компоненты образца располагаются не вдоль линии гг-го, а идеально распределяется по всей площади (гг-а) . Пространство, на котором распределяются разделенные вещества, оказывается увеличенным возведением в квадрат. Это дает возможность иногда прибегать к сокращенному обозначению метода (ТСХ) , поскольку число разделений тоже возрастает, примерно до (SN) . [c.274]

В плане этих общих подходов электромиграционный метод близок к хроматографии (те же два основных направления повышения эффективности разделения) — поиск методических приемов лучшего разрешения зон при постоянных Кс и использование химических превращений с целью увеличения Кс. Похожи и основные схемы практического осуществления процесса разделения на колонке, на бумаге, в тонком слое. Возникший на заре развития электромиграции метод подвижной границы внешне аналогичен фронтальному анализу в хроматографии. В этом случае движение разделяемых ионов в электрическом поле происходит непосредственно из раствора их смеси. В наиболее распространенном случае зонного электрофореза просматривается общность с проявительным режимом элюирования в хроматографии. Узкая полоса исходной смеси веществ в среде определенного электролита разделяется на индивидуальные зоны. Существует внешняя аналогия противоточного и двухмерного электромиграционного разделения с соответствующими способами осуществления хроматографического процесса. Поэтому при всем принципиальном различии методов по природе химических процессов, лежащих в их основе, хроматографию и электрофорез иногда даже рассматривают как смежные методы [95]. [c.243]

Самый точный метод количественного анализа, основанный на элюировании производного, дает точность ниже 1%. Однако использование элюирования преду сматривает предварительное полное хроматографическое отделение определяемого вещества от сопутствующих. Поэтому элюирование чаще применяют для определен ния веществ в зонах двухмерных хроматограмм. Недостатком элюирования яв ляется то, что для последующих точных измерений необходим раствор достаточной концентрации, следовательно, на бумагу требуется наносить сравнительно большие количества вещества. Раствор следует наносить на линию старта не пятном, а длинной полосой для создания высокой загрузки хроматограмм. , [c.265]

В зависимости от положения пластинки и направления потока элюента различают восходящую, нисходящую и горизонтальную ТСХ. По технике работы выделяют фронтальный анализ (когда подвижной фазой служит анализируемая смесь) и обычно используемый элюционный вариант. Применяют также круговую (когда анализируемый р-р и р-ритель последовательно подаются в центр пластинки) и антикруговую ТСХ (когда анализируемый р-р наносится по окружности и элюент перемещается от периферии к центру пластинки), ТСХ под давлением (когда р-ритель под давлением пропускают через слой сорбента, покрытый плотно прижатой полиэтиленовой пленкой), а также ТСХ в условиях градиента т-ры, состава сорбента н т. п, В т. наз. двухмерной ТСХ хроматографич. процесс осуществляют последовате.чьно в двух взаимно перпендикулярных направлениях с разл. элюентами, что увеличивает эффективность разделения, С этой же целью применяют многократное элюирование в. одном направлении. [c.608]

Ес1И символами (5Ы)1 и (5Ы) обозначить разделительные числа, получае.мые путем одномерного тонкослойного хроматографического разделения, а символом -(5Ы) - число разделений, достигаемое после соответствующей схемы элюирования в двухмерном режиме, последнее из разделительных чисел окажется несколько меньше произведения (5Ы)1 (SN) . что обусловливается двумя причинами 1) когда приступают ко второму элюированию, пятна оказываются на старте более крупными, чем при первом элюировании 2) пятна размыты также и в боковом направлении. Таким образом, прн втором элюировании оказывается уничтоженной некоторая часть разрешающей способности, достигнутой в ходе первого элюирования. Гиошоном [92] были подсчитаны значения -(5Ы) для некоторых типичных хроматографических условий. Полученные данные представляют собой [c.276]

Ппвпды против 1) умеренная потеря разрешающей способности (для веществ, характеризующихся почти одинаковой степенью удерживания) в диапазоне высоких значений Кг 2) относительно низкая скорость потока при гг - а 4 см (если не повышена приложением давления) 3) метод не так прост и доступен, как линейное элюирование 4) относительно мало число одновременно анализируемых образцов (5-10) 5) не может быть реализован двухмерный вариант тонкослойной хроматографии. [c.289]

Элюирование в тонком слое обычно рассматривают как двухмерный процесс. Именно такому случаю соответствуют модели Беленького и Гиошона, рассмотренные в гл. II. Однако в отличие от условий, характерных для колоночной жидкостной хроматографии, в хроматографическом процессе, реализуемом в камере для ТСХ, очень важную роль играет газовая фаза. В главе, посвященной "активности" сорбента, уже было описано, насколько сухая поверхность адсорбента может быть "занята" сорбированными молекулами воды и, соответственно, дезактивирована. Аналогичным образом, помимо сорбционной способности к воде сухой слой сорбента обладает и способностью насыщаться (перед началом элюирования) находящимися в газовой фазе молекулами растворителя, неизбежно присутствующими в окружающей пластинку атмосфере, более или менее насыщенной парами растворителя камеры. И, наконец, жидкость, поднимающаяся по слою за счет действия капиллярных сил, тоже может взаимодействовать с газовой фазой. Находящиеся в газовой атмосфере молекулы растворителя оказывают влияние на взаимодействие сорбента с растворителем, сорбента с водой, сорбента с водой и растворителем, воды с растворителем, растворителя с растворителем, не говоря уже о взаимодействиях, в которые вовлечено растворенное вещество. [c.87]

Кетокислоты в растительных продуктах можно определить методом распределительной хроматографии на бумаге, разработанным И. А. Егоровым и М. Б. Борисовой для анализа кетокислот в вине. В основу этого метода положена реакция образования гидразонов кислот при взаимодействии их с фенилгидразином. Гидразоны разделяют с помощью бумажной двухмерной хроматографии. Количество гидразона каждой отдельно выделенной кетокислоты, в том числе и пировиноградной, определяется после элюирования пятен в фотоэлектроколориметре по цветной реакции гидразона с NaOH. Р. Я- Школьник (1954) разработал метод количественного разделения органических кислот с помощью распределительной хроматографии иа силикагеле. Этот метод применяют для разделения кислот, находящихся в растительных тканях. Разделение кислот ведут на хроматографической колонке. Элюируемые кислоты титруют 0,01 н. спиртовым раствором NaOH. [c.215]

При работе с сульфидами и их производными целесообразно проверить устойчивость органического соединения серы в предполагаемых условиях хроматографии. Одним из методов, позволяющих во многих случаях получить на это ответ, является двухмерная ТСХ. На несколько стеклянных пластинок размером 13X13 см наносят слои адсорбента толщиной 0,5 мм. На один из углов каждой пластинки одновременно впитывают исследуемый образец органического соединения серы и также одновременно элюируют все пластины (в условиях движения образца). После этого одну из пластин тотчас же подвергают элюированию в направлении, перпендикулярном первому. Остальные пластины перед повторным (двухмерным) хроматографированием выдерживают в течение различных промежутков времени. Если изменений вещества за время контакта не произошло, то, после проявления хроматограммы, пятна находятся на диагонали при изменениях образца пятна сходят с диагонали (часто появляются стартовые пятна). [c.86]

Проявление тонкослойных или бумажных хроматограмм может осуществляться путем восходящего, нисходящего, горизонтального или радиального движения растворителя. При восходящей хроматографии ослол непия, связанные с образованием каналов при движении растворителя, сводятся к минимуму. При непрерывном проявлении растворитель продвигается до конца бумаги или тонкого слоя в одном опыте. При многократном проявлении после того, как фронт растворителя достигает края листа, растворителю дают испариться и повторяют проявление при том же направлении движения растворителя. Ступенчатое проявление включает проявление на пластинке в неполярном растворителе, испарение растворителя и второе проявление в более полярном растворителе. При двухмерном проявлении также последовательно применяют два растворителя сначала проводят хроматографирование в одном направлении, затем высушивают пластинку для испарения первого растворителя, поворачивают пластинку на 90° и проводят проявление вторым растворителем. При градиентном элюировании состав растворителя меняется в ходе проявления [94]. Эта методика, однако, сложна, в ней теряется простота тонкослойной или бумажной хроматографии. [c.553]

Янак [97] описал комбинацию тонкослойной и газовой хроматографии как форму двухмерной хроматографии. Некоторые смеси можно подвергнуть предварительному разделению методом тонкослойной хроматографии для удаления нежелательных примесей. Для других смесей элюированные при газохроматографическом отделении вещества наносят в виде пятен на пластинку для дальнейшего разделения методом тонкослойной хроматографии. Такое сочетание методов возможно только тогда, когда проба достаточно летуча для газовой хроматографии, но не настолько, чтобы происходили потери при разделении в тонком слое. Этот метод был применен, например, для разделения эфиров высокомолекулярных жирных кислот и триметилсилпловых эфиров стероидов. [c.554]

Удовлетворительного разделения можно добиться получением двухмерной хроматограммы на пласгинке из силикагеля. В первом направлении элюирование проводят бензолом во втором направлении пластинку, за исключением полосы в 4 см шириной, закрывают пластмассовой пленкой, а остальную часть хроматограммы опрыскивают 2 н. раствором К агСОз и проявляют ди-изопропиловым эфиром. [c.124]

Изоэлектрическое фокусирование в геле имеет определенные преимущества по сравнению с ИФ в среде со стабилизованным градиентом плотности. Эти преимущества состоят в следующем 1) сокращается длительность разделения 2) полностью подавляется термическая конвекция 3) применяется простое оборудование для ИФ 4) возможно одновременное разделение нескольких образцов 5) возможно обнаружение с помощью различных красителей и различных методик 6) возможно объединение ИФ и зонного электрофореза в двухмерном варианте 7) достаточно небольшого количества образца 8) возможно обнаружение белков методом иммунодиффузии. Однако при применении геля возникают проблемы, связанные с молекулярноситовым эффектом, который имеет место в основном при разделении больших молекул. Другой недостаток метода — это низкая точность определения pH в зонах. В настоящее время этот метод (сокращенное обозначение ИФПАА или ПАГИФ) является общепринятым и широко используется. В отдельных случаях, согласно данным [73], при проведении дискретного трубчатого электрофореза в полиакриламидном геле доо пска-ется окрашивание. Для снижения молекулярно-сито<вого эффекта рекомендуется [23] концентрация геля 3,7%. Типичный градиент напряжения для 8-часового разделения составляет 200 В на 60 мм. Если тепло отводится, то напряжение можно увеличить и соответственно сократить длительность разделения. Градиент pH можно измерить после разрезания столбиков с гелем и последующего элюирования сегментов небольшим коли- [c.323]

Наиболее точные данные о продуктах, образующихся при поликонденсации в различных условиях, можно получать с помощью бумажной хроматографии [54]. Впервые этот метод (одномерную хроматографию) для фенолоформальдегидных смол применил Фримэн [55]. В качестве элюента он брал смесь бутано.яа с аммиаком (в соотношении 4 1), с помощью которой можно разделять одноядерные фенолоспирты и двухъядерные и,и -бис(2,6-диоксиметилоксифенил)метаны. Позднее с помощью двухмерной хроматографии удалось добиться значительно лучшего разделения фракций [8]. По этому способу в качестве элюента сначала применяют воду, а затем — смесь бутанола с аммиаком- Элюирование водой обеспечивает разделение по числу фенольных ядер, содержащихся в молекуле, а элюирование смесью бутанола с аммиаком — дифференцирование по числу метилольных групп. [c.59]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология