Сила буфера

Изменение концентрации в зависимости от объема может быть либо линейным, либо нелинейным (рис. 501, б). В большинстве случаев выгодно, чтобы pH или ионная сила буфера при элюировании непрерывно возрастали. [c.559]

Влияние соотношения фаз на разрешение показано на рис. 76. Рост соотношения фаз приводит сначала к улучшению разрешающей способности, которая однако при дальнейшем увеличении соотношения фаз ухудшается. В представленных хроматограммах речь идет о расчетных величинах, которые делают этот эффект более наглядным. Вследствие того, что повышение концентрации детергента влияет также на ЭОП, вязкость и ионную силу буфера, на практике хроматограммы выглядят иначе. [c.84]

Мы приводим общую процедуру заполнения колонки смолой. Ее можно использовать в различных описанных ниже методиках с учетом небольших изменений скорости, величины pH и ионной силы буферов, а также температуры колонки. [c.57]

Влияние pH и ионной силы буфера [c.245]

Ионная сила буфера выражается уравнением [c.247]

Кривая силы буфера [c.224]

Рис. 4.4.А. Соотношение между кривой титрования, значением и силой буфера.

Рис. 4.4 А иллюстрирует еще один важный момент рабочий участок буфера имеет протяженность по 1,5 единицы pH с каждой стороны от значения рЛ а. Вне этого интервала сила буфера быстро падает до нуля.

Высокая концентрация буфера приводит к образованию более четких зон. Следует избегать применения разбавленных буферов (с молярностью ниже 0,01), так как в опытах с колонками биогеля было показано, что при низкой ионной силе буферного раствора РНК может связываться с полиакриламидным гелем. Оптимальная нагрузка зависит от ионной силы буфера и подвижности его аниона. Чем выше ионная сила буфера, тем больше РНК можно нанести. Поэтому при разделении [c.374]

Этот выбор определяется, в первую очередь, условиями растворимости и сохранности материала препарата. Эти соображения мoгy J диктовать pH и ионную силу буфера, наличие в нем мочевины и детергентоп. Одпако надо иметь в впду и возможное воздействие выбора элюента на ход самого хроматографического процесса. Во-первых, такое воздействие может проявляться в изменениях конформации пли плотности упаковки макромолекул, диссоциации белков па субъединицы, диссоциации кофакторов от ферментов и др. Во-вторых, следует проверить устойчивость материала матрицы к выбранному значению pH и диссоциирующим добавкам. Наконец, не следует упускать пз виду возможности влияния элюента на взаимодействие разделяемых веществ с материалом матрицы, т. е. [c.135]

Плавное изменение ионной силы буфера или pH дсстигается различными способами [19, 27, 29, 32, 33, 43, 45, 46, 83, 92, 99, 102, 105, I20J. Из них мы отметим три основных [c.558]

Впоследствие мы остановимся на некоторых из этих причин более подробно. Особый интерес при этом будут представлять прежде всего эффекты перегрузки, ионной силы буфера, адсорбции на стенках, температурные эффекты и разница в подвижности ионов пробы и буфера. [c.17]

Тщательно отмытые от питательного раствора водоросли помещают в сосудик с 5—7 мл 0,1 М карбонатно-бикарбонатного буфера, который создает в манометрическом сосудике насыщающую фотосинтез концентрацию углекислоты 78,7X10 жл в водной фазе и около 0,3% в воздушной. Известно, что насыщающей для большинства растений является концентрация СО2, равная 0,3%, и что pH 9,4 и осмотическая сила буфера не изменяют интенсивности фотосинтеза (Рабинович, 1953). Таким образом, буфер представляет собой достаточно благоприятную среду для того, чтобы на время опыта помещать водоросли непосредственно в буфер. Плотность суспензии водорослей не должна превышать 20 млн. кл/мл при толщине слоя 1,0 см. Испытываемые вещества вносятся или непосредственно перед измерением в сосудик, или в опытные колбы с водорослями, откуда отбирается определенное количество водорослевых клеток, которые отмываются от питательного раствора и помещаются в буфер. Для установления темнературного равновесия, т. е. [c.229]

Так как ионные силы буферов, изученных Хичкоком и Тейлором, превышали 0,01, экстраполяция данных дала ° + д= = 0,2441 в при 25° С. С другой стороны, ацетатные и хлорацетат-ные буферные растворы, на которых основаны стандартные потенциалы, выбранные Мак-Иннесом, Бельчером и Шедловским, попадают в диапазон ниже / = 0,01, поэтому для ° -ь д была получена величина 0,2446 в. Эта разница в стандартных потенциалах вызывает разницу, равную 0,008 ед. в величинах ран, основанных на двух шкалах. [c.72]

Ионоселективные электроды реагируют на изменение активности ионов, поэтому электродная функция зависит от ионной силы раствора. Необходимо при измерении ионные силы анализируемого и стандартного растворов поддерживать одинаковыми. Франт и Росс [128] рекомендовали применять для поддержания постоянной ионной силы буфер, содержащий уксусную кислоту и цитрат натрия (T1SAB) pH раствора доводят до б—5,5 добавлением [c.353]

Разделение смесей белков. Фронтальный электрофорез широко применялся для анализа белковых смесей, особенно белков сыворотки крови, а также смесей, экстрагированных из самых различных органов и тканей животных и растений. Качество разделения и точность определения состава резко зависят от состава, pH и ионной силы буфера. Так, для сыворотки крови обычно рекомендуют вероналовые буферные системы при pH около 8. Важным правилом является такой выбор pH, когда все компоненты смеси заряжены одноименно — это уменьшает опасность ассоциации компонентов и выпадения осадка. [c.64]

На рис. 9 приводится пример фронтального процесса на ТЭАЭ-целлюлозе [49]. Смесь глюкозидаз в 0,070 М фосфатном буфере pH 6,0 непрерывно фильтровали через колонну с целлюлозным ионитом. Белки смеси, вследствие их неодинакового сродства к сорбенту, взаимно вытесняют друг друга и выходят в виде отдельных фронтов. Первый фронт образован наименее сорбируемой инвертазой, а последующие — тремя различными мальтазами. Увеличение ионной силы буфера приводило к тому, что глюкози-дазы не разделялись и выходили в виде одного фронта. Таким образом, вытеснение белков друг другом и разделение их на от- [c.220]

Этот н в принцип лежит в основе разделения олигонуклеотидов с помощью хроматографии на ДЭЛЭ-бумаге. Однако при этом нельзя использовать солевой градиент, что создает дополнительные ограничения при разделении олигонуклеотидов по длине. Ионную силу буфера подбирают в зависимости от величины разделяемых фрагментов. При использовании буферных растворов с высокой hohhoii силой низкомолекулярные соедц-нения движутся вместе с фронтом растворителя. В буферных растворах с низкой ионной силой высокомолекулярные вещества остаются на старте. При использовании 0,2 М ацетата аммония с pH 7,5 в 7 Л/ мочевине происходит удовлетворительное разделение [9] всех типов фрагментов (от нуклеозидов до тетрануклеотидов). Несмотря на несколько ограниченные возможности, хроматография на бумаге имеет существенное преимущество перед колоночной хроматографией с бумаги удалить мочевину значительно проще, чем с колонок. [c.14]

При градиенте нанряже1шя Е молекула в жидкости двин ется со скоростью V=EQ K, где — суммарный заряд молекулы (алгебраическая су.чма зарядов, образующихся при частичной диссоциации групп, способных к ионизации при данном pH) и — константа, зависящая от размера и формы молекулы и от замедляющего действия других ионов в растворе. Величина К возрастает с увеличением ионной силы буфера и уменьшается с повышением температуры. [c.52]

Ионообменную хроматографию белков [20] выполняют на ионообменниках, имеющих гидрофильную матрицу, например на целлюлозе и декстране. Анионообменники, особенно ОЕАЕ-целлюлозу и ОЕАЕ-сефадекс, используют чаще, чем катионооб-менники типа СМ-целлюлозы. Ионообменники на основе целлюлозы имеют открытую сетчатую структуру с ионизованными центрами, легкодоступными для белков. Число ионных связей, образующихся между обменником и белком, зависит не только от используемого материала, но также в большой степени от pH и ионной силы буфера. Эти ионные пары постоянно диссоциируют и образуются вновь, так как ионы элюента конкурируют за центры обмена. Обменники, пригодные для фракционирования белков, имеют низкую плотность зарядов, поэтому число ионных связей между ионитом и отдельными молекулами белка не столь велико, чтобы вообще воспрепятствовать продвижению последних вдоль колонки. Хотя ионные связи постоянно диссоциируют и образуются вновь, в начале хроматографирования белок связывается с ионообменником и не элюируется с колонки. Однако когда концентрация небольших конкурирующих ионов буфера возрастает до такого уровня, что все связи одновременно разрываются, белок начинает двигаться вниз по колонке. Если в процессе разделения используют градиент ионной силы, белок, перемещающийся в стартовой зоне медленнее, чем буфер, элюируется им при увеличении концентрации ионов. Таким образом, элюирующая способность буферного раствора постоянно увеличивается и макромолекула перемещается все быстрее и быстрее. Скорость ее перемещения становится сравнимой со скоростью движения жидкости, когда в элюенте достигается такая концентрация соли, которая эффективно препятствует взаимодействию молекулы белка с обменником. Важное значение в каждом отдельном случае имеет профиль градиента чтобы увеличить разрешение пиков в определенных участках хроматограммы, используемый градиент должен быть сравнительно пологим, но в то же время достаточно крутым в других участках, чтобы избежать уширения пиков. [c.108]

Устойчивость комплексов, образуемых борат-ионами с сахарами и полиолами, зависит от различных структурных факторов, которые обусловлены числом соседних ис-гидроксиль-ных групп, а также от экспериментальных условий, в частности от pH и ионной силы среды и концентрации в ней борат-ионов. Первые сообщения о разработке метода разделения смесей сахаров на сильноосновной анионообменной смоле дауэкс 1 в боратной форме в ступенчатом градиенте pH (от 8 до 9) и концентрации боратного буфера появились около 30 лет назад [70, 71]. В дальнейшем этот метод нашел применение для фракционирования полиолов [72]. Однако предложенные первоначальные условия не обеспечивали удовлетворительного разделения, а время анализа составляло примерно 60 ч. Данный метод обычно не находил применения в качестве аналитической методики до тех пор, пока интенсивные исследования влияния различных факторов, в частности температуры, ионной силы буфера и размера частиц смолы, на эффективность и скорость хроматографии не привели к значительному улучшению характеристик разделения. Использование смолы со средним размером частиц 20 мкм и подогрева колонки до температуры 50°С при градиентном элюировании буферами с увеличивающейся концентрацией бората (0,1—>-0,2 М) и хлорида (О—>-0,2 М), [c.21]

Обычно для того, чтобы сделать грамположительные бактерии чувствительными к лизису под действием ДСН, клеточные стенки расщепляют лизоцимом, который добавляют к суспензии клеток в разведенном солевом буфере (1 5), как описано выше. Инкубационный период может составлять от иескольких минут до нескольких часов. Периодически отбирают пробы и проверяют клетки на лизис под действием ДСН. Перед добавлением ДСН к основной суспензии ионную силу буфера вновь увеличивают до исходного значения. Так же как в случае с грамотрицательными бактериями, лучше брать клетки в экспоненциальной фазе роста. Другие пути повышения способности грамположительных бактерий лизироваться под действием ДСН заключаются в добавлении пенициллина к активно растущим культурам или в выращивании культуры при высоких концентрациях глицина [60]. [c.114]

Дальнейшая очистка пероксидазы проводилась на ионообменнике ДЭАЭ-сефадексе А-50. Не удерживаемые ионообменником белки снимались исходным буфером, затем для элюирования использовали ступенчатый градиент буфера с добавлением хлористого натрия. При изменении ионной силы буфера элюировались искомые анионные изопероксидазы. Каталитическая активность этих пероксидаз с бензидином для вирозных растений оставалась в 2 раза выше контрольной (табл. 19). На рис. 19 дан спектр пероксидаз, элюируемых с колонки исходным буфером (а), и двух анионных изоэнзимов фермента (б), элюируемых буфером с добавлением 0,2 М Na l. Спектр, приведенный на рисунке, соответствует только изопероксидазам вирозного растения, так как он для изоэнзимов пероксидазы здорового растения был идентичным. [c.84]

Как и в других видах горизонтального зонального электрофореза, положение стартовой линии следует выбирать, принимая во внимание свойства подлежащих разделению макромолекул и уровень электроосмоса при данных условиях. Этот уровень, разумеется, зависит от свойств поддерживающего материала (в крахмале он заметно выше, чем в певиконе), а также от pH и состава буфера. Если производится разделение бесцветных веществ, то за их перемещением можно следить, добавляя в пробу краситель, например бромфеноловый синий. Для предотвращения испарения с поверхности блока края полиэтиленовой пленки осторожно загибают вверх и укладывают на блок (лоток первого типа) или накрывают поверхность блока куском оберточного материала фирмы Saran (лоток второго типа). Электрофорез обычно проводят в холодной комнате. Перед включением напряжения блоку нужно дать остыть до температуры окружающего воздуха. При ионной силе буфера 0,05 целесообразно применять градиенты напряжения в 3,5—5 В/см. [c.49]

Чтобы получить хорошие результаты при проведении препаративного электрофореза, необходимо подобрать для него оптимальные усло вия (pH и ионную силу буфера, напряженность-электрического поля, высоту и концентрацию геля, количестворазделяемого материала [232, 450]) при помощи аналитического электрофореза. Простое увеличение размеров геля при- [c.113]

Антисыворотки к растворимым антигенам можно исследовать с помощью обычных методов иммунопреципитации. При этом более оптимальными условиями для преципитации будет половинная ионная сила буферов, используемых обычно в работе с млекопитающими (Roth, S hneider, 1971). Если имеются [c.487]

Конформация ДНК. Суперскрученная, кольцевая и линейная молекулы ДНК имеют различную подвижность в агарозных гелях. Их относительная подвижность зависит от концентрации геля, напряженности поля, ионной силы буфера. Обычно максимальную подвижность имеет суперскрученная форма, затем линейная, а минимальную - кольцевая. [c.21]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология