Химотрипсин выделение

Расщепление модифицированного химотрипсина и выделение пептидов, содержащих фосфосерин, показало, что последовательности асп— сер — гли — глу — ала — вал и гли — асп — сер — гли — гли — про — лей входят в состав активного центра. Последовательность гли—асп—сер— гли имеется в трипсине и в химотрипсине. [c.714]

Тринадцать основных пептидов, выделенных при гидролизе рибонуклеазы, содержат все аминокислотные остатки, входящие в состав этого фермента исследование осколков позволило точно определить количество остатков двух аминокислот [152]. Порядок соединения пептидов между собой в исходном белке был установлен по результатам исследования пептидов, полученных из рибонуклеазы под действием химотрипсина [154]. [c.191]

Химотрипсин использовался для гидролиза полипептидов и белков до выделения пептидов с целью изучения последовательности аминокислот. Полученные до настоящего времени данные о том, какие типы связей подвергаются разрыву под [c.202]

Окисленная рибонуклеаза. Действие химотрипсина на рибонуклеазу менее специфично, чем действие на этот субстрат трипсина. Об этом свидетельствуют более низкие выходы полипептидов при разделении гидролизата методом ионообменной хроматографии [154]. В выделенных полипептидах установлено наличие 151 аминокислотного остатка, в то время как в полипептидах, полученных в результате расщепления трипсином, обнаружено всего 124 остатка. По-видимому, это объясняется тем, что некоторые участки полипептидной цепи появляются более чем в одном из пептидных обломков. О более сложном составе гидролизата можно судить по небольшим количествам примесей (как правило, не выше 15%), присутствующих в большинстве основных фракций. Эти примеси не мешали определению аминокислотного состава фракций, но их присутствие еще раз подчеркивает трудности, которые встречаются при фракционировании смесей пептидов, полученных менее специфическими методами гидролиза. Гидролизаты рибонуклеазы были получены инкубированием в течение 24 час с ферментом при pH 7. При более кратковременном инкубировании гидролизат содержал дополнительно [c.204]

Эта теория требует, чтобы промежуточный комплекс был реакционноспособным и нестабильным, и, следовательно, весьма маловероятно, чтобы какой-либо промежуточный комплекс удалось выделить и непосредственно изучить. С другой стороны, эта теория постулирует, что ингибиторы действуют, кроме того, путем комплексообразования с ферментом, давая относительно стабильные соединения. Успешное выделение и идентификация некоторых соединений ингибитор — фермент дают существенное подтверждение теории. Такие комплексы образуются между трипсином 114] или химотрипсином [15] и ингибитором следующего строения . 0 [c.112]

Нативная рибонуклеаза не чувствительна к действию трипсина и химотрипсина. Поэтому сначала проводили окисление рибонуклеазы (остатки цистина при. этом окислялись до остатков цистеиновой кислоты) и окисленный препарат подвергали затем действию протеолитических ферментов. При помош,и хроматографии на дауэкс 50-Х-2 [82] из триптического гидролизата было выделено 15 пептидных фрагментов [82], а из гидролизата после действия химотрипсина — 32 фрагмента [83]. Для количественного определения аминокислотного состава выделенных пептидов и для достижения их чистоты необходимо использовать достаточное количество исходного материала (200 мг). Фракции, содержащие более одного компонента, подвергают повторному фракционированию в несколько измененных условиях. Расщепление с помощью пепсина [6], хотя оно и не столь селективно, позволяет, однако, получить другие пептиды, которые помогают воссоздать полную структуру рибонуклеазы. [c.415]

Под влиянием кислот инсулин претерпевает денатурацию, но основания регенерируют исходную физиологически активную форму. Агенты, разрывающие связи 8—8 необратимо денатурируют инсулин. Инсулин образует соединения с двухвалентными металлами из поджелудочной железы выделяют, как правило, хорошо кристаллизующееся соединение с цинком. Инсулин переваривается пепсином и химотрипсином и незначительно атакуется трипсином. Инсулин не проявляет антигенных свойств при впрыскивании животным, относящимся к другим родам, чем тот, из которого он был выделен. Как уже отмечалось инсулин быка, овцы и лошади различаются между собой последовательностью трех аминокислот определенного участка молекулы. Однако эти аминокислоты не имеют значения для физиологической активности гормона поэтому инсулин, выделенный из животных, может служить лекарственным препаратом для человека. [c.447]

Растворимые пептиды, выделенные после дигерирования с химотрипсином, содержат большое количество (около 40%) [c.293]

Для выделения ингибиторов и кофакторов наиболее часто в качестве аффинных лигандов используются связанные ферменты. На рис. 6.5 сопоставлены данные по выделению ингибитора химотрипсина из неочищенного экстракта картофеля на сфероне с ук- [c.113]

Биоспецифическое элюирование конкурентными ингибиторами применяется при выделении химотрипсина и трипсина нз панкреатических экстрактов с помощью аффинной хроматографии на ага- [c.267]

Когда сорбированное вещество освобождается от специфического сорбента, следует помнить о влиянии гетерогенности иммобилизованного аффинного лиганда [1]. На рис. 10.10 приведены результаты выделения химотрипсина и трипсина из гомогенатов поджелудочной железы мыши на различных препаратах сефарозы с присоединенным соевым ингибитором трипсина. Если допустить, что различия в условиях элюирования отражают различия в биологической активности, картина элюирования может использоваться для характеристики молекулы. Применимость сорбента, таким образом, зависит от функциональной гомогенности иммобилизованного аффинного лиганда. [c.272]

В последнее время появились экспериментальные возможности выделения и изучения некоторых промежуточных продуктов ферментативных реакций, например ацильных производных ферментов гидролиза сложных эфиров (трипсин, химотрипсин и пр.) и некоторых других. Однако в области исследования фермент-субстратных комплексов кинетический метод пока, пожалуй, единственно реальный. [c.50]

Изучение гормонов роста, выделенных из гипофизов людей и обезьян, показало, что оба эти гормона весьма близки по химическому составу, структуре и свойствам, но оба резко отличаются от гормона роста, выделенного из гипофиза крупного рогатого скота. Молекулярный вес соматотропина человека и обезьяны — 27 100 и 25 400 соответственно. С-концевой и N-концевой аминокислотами является фенилаланин, находящийся, следовательно, на обоих концах в единственной полипептидной цепи, из которой состоит молекула обоих соматотропинов. Если расщепление химотрипсином не превышает 10% возможного, то уменьшения активности не наблюдается. Более глубокое расщепление ведет к потере активности. [c.198]

Рис. 9. Строение активного центра а-химотрипсина по Блоу с сотр. [29]. [Боковая группа субстрата — Ы-формил-А-триптофан (выделен жирно) расположена в гидрофобной полости активного центра]

При эгом они основывались на специфическом действии ферментов. В пептидах, образовавшихся в результате трипсинного гидролиза, С-концевыми аминокислотами являются аргинин и лизин. Пептиды, выделенные из гидролизата рибонуклеазы химотрипсином, содержат основном в качестве концевых С-аминокислот остатки тирозина и фенилаланина. [c.524]

После разъединения полипептидных цепей белка удается выделить отдельные цепи в чистом виде, что сложнее сделать в случае длинных полипептидных цепей [306], чем коротких цепей, для выделения которых в чистом виде можно применять различные методы, например хроматографию на бумаге [320] и на колонке [219, 277], противоточное распределение [331] и ионофорез [10, 266]. В окисленном инсулине, в котором обе цепи сильно различаются по кислотности из-за неодинакового аминокислотного состава, разделение цепей удается осуществить фракционированием солей [263], ионофо-эезом [143, 263], распределительным хроматографированием 6] или противоточным распределением [190, 240]. Окисленный химотрипсин, содержащий три пептидные цепи, дает три фракции с характерными свойствами, позволяющими разделять их. комбинацией метода осаждения при pH 6 и ионообменного хроматографирования створимого вещества. [c.177]

Этот фермент может быть выделен из экстрактов поджелудочной железы в чистом виде [128], но до использования для определения последовательности аминокислот его рекомендуется инкубировать с диизопропилфторфосфатом, чтабы инактивировать возможные примеси химотрипсина, трипсина и субтилизина [122, 267, 300]. Основные свойства и специфич-кость действия карбоксипептидазы подробно рассмотрены в ряде работ [228 293]. В Других работах [114, 136, 226, 320] приводятся данные об использовании фермента для определения последовательности аминокислот в белках. Карбоксн-Пептйдаза специфична в отношении С-концевых аминокислот [c.232]

Наиболее изученным ферментом семейства сериновых протеаз является химотрипсин. Реакции гидролиза, катализируемые этим ферментом, включают по крайней мере три кинетически различимые стадии [уравнение (6.8)]. На первой стадии, про-текаюш,ей с очень высокой (контролируемой диффузией) скоростью, образуется нековалентный фермент-субстратный комплекс. На второй стадии (стадии ацилирования) ацильная группа субстрата переносится на гидроксил серина, входящего в активный центр фермента, с одновременным выделением первого продукта (Pi) — аминной части амидного субстрата. Вслед за этим происходит гидролиз промежуточного ацилфермента с регенерацией свободного фермента и выделением карбоновой кислоты— второго продукта реакции гидролиза (Рг) [c.142]

Выделение и характеристика нового ингибитора трипсина и химотрипсина из клубней картофеля /Ревина ТА.. Валуева ТА., Ермолова Н.В. и др.//Биохики1я.-I995.-T.60, N 11.-С.1844-1852. [c.244]

Для разрушения пептидной части гликопротеинов широко применяется протеолиз, особенно часто под действием проназы (обычно из 81гер1от св5 г15тч), которая является набором мощных протеиназ, способных разрушать пептидные цепи, устойчивые к другим протеолитиче-ским ферментам. Часто употребляются также трипсин, химотрипсин, па-паин. Гидролизат, полученный после обработки протеиназами, подвергают фракционированию с применением диализа, гель-фильтрации и хроматографии (см., например, ), выделяя один или несколько низкомолекулярных гликопептидов, структуру которых устанавливают обычными методами и иногда подтверждают встречным синтезом. Впервые гидролиз гликопротеина трипсином был применен Нейбергером для выделения фрагмента овальбумина, содержащего узел связи олигосахаридной и пептидной части молекулы в дальнейшем для этой же цели использовали также химотрипсин, пепсин и другие фepмeнты " . . Протеолиз проназой очень широко применялся при выделении узловых фрагментов из 7-глобулина , тиреоглобулина фибриногена и особенно му- [c.571]

Форма выделяемых частиц не всегда сферическая, и тогда в используемые методы вносят необходимые поправки, или выбирают какие-либо другие способы изоляции и расчета Ферменты — глобулярные белки, поэтому при их разделении играют роль, в основном, молекулярные массы (ММ) молекул, а не число субъединиц (С) в них В качестве примера можно назвать химотрипсин (ММ = 24500 Да, С = 3), щелочную фосфатазу (ММ = 80000 Да, С = 2), лактатдегидрогеназу (ММ = 140000 Да, С = 4), триптофаназу (ММ = 220000 Да,С = 8), и др Более того, известны ферменты, катализирующие одну и ту же реакцию в организме одного вида, но представляющие собой различные молекулярные формы Их называют изоферментами, выделение которых по высказанным причинам заметно осложняется [c.49]

Трасилол — полипептид, выделенный из околоушных желез крупного рогатого скота. Он ингибирует ряд протеолитических ферментов трипсин, фибринолизин, химотрипсин. [c.81]

Выделение и очистку S, М. и L вариантов вируса Mengo проводили на колонке с гидроксиапатитом [6]. Обогащенную вирусом фракцию, полученную осаждением метанолом, обрабатывают в ультразвуковом дезинтеграторе, а затем инкубируют с а-химотрипсином (при концентрации фермента 0,8 мг/мл и температуре 37°С в течение 45 мин). Далее добавляют рибо- [c.314]

В последнее время все шире применяются некоторые биохимические методы, более быстрые, чем химические. Один из них состоит в превращении D, L-аминокислоты в эфир и гидролизе последнего такими ферментами, как панаин или химотрипсин, атакующими только эфиры L-форм. Во-втором, очень сходном методе, N-ацилпроизводные (ацетилированные, хлорацетилированные или трифторацетилированные) D, L-аминокислот подвергаются асимметрическому гидролизу ферментами (ацилазами), выделенными из почек свиней или крыс, или сырой карбо-ксипептидазой. При этом получается L-аминокислота наряду с D-ацил-аминокислотой [c.383]

Используются в медицине ингибиторы протеиназ, в частности плазмина и трипсина. Если плазминоген крови активируется слишком интенсивно и в ней возникает слишком много плазмина, то при этом сильнодействующий фермент разрушит и фибриноген, и другие факторы из системы свертывания крови. При этом свертываемость крови сильно снижается и это часто является причиной обескровливания больных. Синтетический ингибитор — е-аминокапроновая кислота — тормозит активацию плазминогена в плазмин, а при более высоких концентрациях — и действие плаз.мина, предотвращая этим опасные изменения. Так называемый фактор Кунитца и Нортропа (инипрол) тормозит действие трипсина и химотрипсина. Он представляет собой полипептид (М = 6000) и используется при избыточном выделении ферментов, которое встречается при острых панкреатитах (заболеваниях поджелудочной железы, вырабатывающей целый ряд ферментов). Ингибиторы подобного рода защищают организм от ферментной интоксикации. [c.321]

Смотреть страницы где упоминается термин Химотрипсин выделение: [c.93] [c.428] [c.108] [c.186] [c.222] [c.233] [c.273] [c.396] [c.213] [c.296] [c.16] [c.68] [c.108] [c.200] [c.357] [c.143] [c.244] [c.245] [c.197] [c.25] [c.382]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология