Вирусы обнаружение

Молекулярно-биологическая диагностика — обнаружение в клиническом материале фрагментов нуклеиновых кислот вирусов-возбудителей с помощью зондов (гибридизация НК) или ПЦР. [c.259]

По-видимому, большое значение в процессах регуляции клеточного деления имеет группа белков, программируемых так называемыми онкогенами. Измененные (мутантные) формы этих генов обнаруживаются в опухолевых клетках и входят в ряде случаев в виде соответствующих РНК-копий в состав онкогенных (т.е. вызывающих опухоли) ретровирусов. Первым открытым онкогеном был ген sr , входящий в состав вируса саркомы Рауса. Программируемый им белок, продукт гена sr , оказался протеинкиназой, которая в отличие от протеинкиназ класса А и протеинкиназы С катализировала фосфорилирование определенного спектра клеточных белков по остаткам тирозина, а не по остаткам серина и треонина, Дальнейшие исследования показали, что такая активность присуща некоторым рецепторам факторов роста, в частности рецептору эпидермального фактора роста. Ген erd, программирующий аналог этого рецептора, был обнаружен в составе онкогенного вируса птичьего миелобластоза, В настоящее время открыто несколько десятков онкогенов. В большинстве изученных случаев продукты этих онкогенов в здоровых клетках являются участниками передачи митогенных (т. е. управляющих, митозами) сигналов. В ряде опухолей, в том числе человеческих, найдены онкогены, программирующие аналоги белка G,воспринимающего сигна-, лы от комплексов эффектор - рецептор (в частности, онкогены Н—ras и К—ras) онкогены, программирующие синтез аналогов самих факторов роста, например онкоген sis, входящий в состав вируса саркомы обезьян, продукт которого является аналогом фактора роста, выделяемого тромбоцитами (клетками крови, участвующими в процессе свертывания) онкогены, продуктами которых являются аналоги ядерных белков, по-видимому, участвующих на заключительных этапах каскада превращений, возникающего в ответ на митогенный сигнал (онкогены туе, fos и др.). [c.428]

Другие методы исследования. Высокочувствительными и специфичными являются молекулярно-биологические методы, в частности ПЦР. Обнаружение ВИЧ в крови методом ПЦР возможно в двух вариантах ПЦР-анализ ДНК провируса ВИЧ, интегрированного в геном мононуклеаров периферической крови, и ПЦР-анализ РНК ВИЧ, входящей в состав вирионов. Качественная ПЦР на ДНК провируса используется для диагностики ВИЧ-инфекции, а ПЦР на РНК вируса — для количественного определения концентрации ВИЧ в крови с целью прогноза уже установленной ВИЧ-инфекции. Чувствительность ПЦР на про-вирусную ДНК в настоящее время составляет от 96 до 99 %, что объясняют очень низким содержанием провирусной ДНК в клетках крови, а также высокой вариабельностью ВИЧ и неравномерным географическим распространением подвидов вируса. В настоящее время ведется работа по подбору новых праймеров, позволяющих с большей эффективностью выявлять разные подвиды и варианты ВИЧ. [c.308]

Необычайный интерес в последние годы вызвали РНК-содержащие онкогенные вирусы. Большинство исследователей, занимающиеся биохимической генетикой и функциями нуклеиновых кислот, считали, что ДНК образуется только за счет репликации других молекул ДНК- Если транскрибирование РНК с ДНК может протекать свободно, то обратный процесс, а именно образование ДНК на РНК-матрице, считался маловероятным. Большой неожиданностью поэтому оказалось обнаружение во многих онкогенных РНК-содержащих вирусах, и в том числе в вирусах, вызывающих у животных лейкоз, РНК-зави-симой ДНК-полимеразы (т.е. обратной транскриптазы). Этот фермент обнаруживается в зрелых вирусных частицах. Наиболее тщательно очищенный фермент вирусов миелобластоза птиц состоит из двух белковых субъединиц, имеющих мол. вес ПО ООО и 70 000, и содержит два атома связанного Zn +. Для функционирования фермента необходима короткая затравка и матричная цепь РНК. При этом сначала получается гибрид ДНК—РНК, из которого затем (вероятно, после гидролитического расщепления цепи РНК под действием РНКазы Н, разд. Д, 5, в) получается двухцепочечная ДНК. Таким образом, заражение РНК-содержащими вирусами сопровождается образованием [c.288]

Нуклеиново-белковые взаимод. в Н. бывают специфическими, когда белок связан с участком нуклеиновой к-ты строго определенной нуклеотидной последовательности (такие взаимод. наз, также нуклеиново-белковым узнаванием), и неспецифическими, когда с белком взаимодействует любая нуклеотидная последовательность. Специфические нуклеиново-белковые взаимод. лежат в основе обнаруженной для нек-рых Н. (напр., рибосом, вируса табачной мозаики) способности к самосборке, когда структура природного Н. может быть полностью реконструирована из его отдельных компонентов-нуклеиновых к-т и белков. Процесс образования Н. всегда сопровождается сильными изменениями конформации нуклеиновых к-т, а иногда и белков, причем в составе Н. нуклеиновая к-та имеет, как правило, существенно более компактную структуру, чем в изолир. виде. [c.304]

Так как техника обнаружения ряда бактериофагов, например дизентерийных и брюшно-тифозных, более проста и надежна, чем методика выделения соответствующих бактерий, то использование бактериофага в качестве санитарно-показательного микроорганизма имеет большие перспективы. Особенно целесообразным представляется использование бактериофагов как показателей фекального загрязнения воды в тех случаях, когда имеется опасность передачи через воду вирусных инфекций. Вирусы-возбудители полиомиелита, эпидемического гепатита и некоторых других заболеваний, передающихся через воду, выживают в воде и почве дольше, чем кишечная палочка. Поэтому, когда появляется опасность возникновения подобных вирусных эпидемий, бактериофаги, которые по своей устойчивости более близки к вирусам, могут быть использованы как санитарно-показательные микроорганизмы, имеющие преимущество перед кишечной палочкой. [c.170]

Перед вами стоит задача разработать простой, чувствительный и воспроизводимый тест для обнаружения содержащего двухцепочечную ДНК вируса, вызывающего летальную инфекцию у крупного рогатого скота. Поскольку эффективность лечения зависит от ранней и точной диагностики заболевания, необходимо использовать методы, позволяющие выявлять вирус при его минимальном содержании в организме инфицированного животного, еще до появления каких-либо симптомов заболевания. Кратко опишите и обоснуйте последовательность ваших действий. [c.203]

Преимущества люминесцентной микроскопии по сравнению с обычными методами микроскопии следующие цветное изображение значительная контрастность возможность исследования как живых, так и погибших микроорганизмов, прозрачных и непрозрачных объектов, обнаружение отдельных бактерий, вирусов и их АГ, установление их локализации дифференцирование отдельных компонентов клетки. [c.10]

Для обнаружения антигена оспенных вирусов применяется прямой или непрямой вариант ИФА. [c.287]

В большинстве случаев перед обнаружением вируса в живой системе его следует освободить от компонентов клеток хозяина. Для этого предусмотрены следующие процедуры. [c.264]

Электронно-микроскопическое выявление ЭМВ). Это исследование дает возможность в зависимости от вида вируса выявить в клетках отдельные вирионы и их кристаллоподобные скопления в ядре или цитоплазме. ЭМВ, как правило, используется для обнаружения возбудителей вирусных инфекций с типичной морфологией (оспенные вирусы), особенно в тех случаях, когда их не удается культивировать обычными методами (вирусы гепатитов А и В, ротавирусы). Вирусы, содержащиеся в исследуемом материале, очищают и концентрируют ультрацентрифугированием, колоночной хроматографией, адсорбцией с помощью специальных сорбентов или антител. Последний способ лежит в основе метода иммунной электронной микроскопии (ИЭМ). [c.267]

Обнаружение вирусов в организме лабораторных животных. Способы обнаружения вируса в организмах чувствительных животных различаются в зависимости от вида животного и типа вируса и будут рассмотрены в главах, посвященных диагностике отдельных инфекций. [c.270]

Экспресс-диагностика. Обнаружение в исследуемом материале вируса гриппа основано на выявлении специфического вирусного антигена с помощью прямой и непрямой РИФ. При наличии вируса гриппа в клетках эпителия обнаруживается зеленовато-жел-тое свечение (см. цв. вклейку, рис. 16). [c.279]

Серологическое исследование позволяет поставить диагноз в случае обнаружения специфических антител в сыворотке больных. Для серологических реакций используют парные сыворотки, которые берут в первые дни от начала заболевания и спустя 1 — 3 недели, но изучают одновременно. Диагностическое значение имеет нарастание титра антител в 4 раза и более. РТГА, PH, РСК, РТГадс, РИФ, РИА, ИФА ставят с антигенами (диагностикумами), приготовленными из эталонных штаммов соответствующих вирусов. [c.282]

Экспресс-диагностика. Быстрое обнаружение вируса осуществляют с помощью ИЭМ, РИА, ИФА. [c.302]

Важным аспектом в проведении иммунологических исследований является подбор источников антигенов для выявления противовирусных антител. В доступных коммерческих тест-системах для обнаружения антител IgM vi IgG к вирусу 5-19 используются рекомбинантные антигены — аналоги белков вируса VPX и VP2. Следует отметить, что использование синтетических пептидов снижает чувствительность метода. [c.309]

В ряду открытий всемирного значения стоит обнаружение в 1892 г вируса мозаичной болезни табака Д И Ивановским (1864 [c.15]

Другая важная задача — выведение трансгенных животных, устойчивых к заболеваниям. Потери в животноводстве, вызванные различными болезнями, достаточно велики, поэтому все более важное значение приобретает селекция животных по резистентности к болезням, вызываемых микроорганизмами, вирусами, паразитами и токсинами. Пока результаты селекщш на устойчивость животных к различным заболеваниям невелики, но обнаде-живающи. В частности, созданы популяции крупного рогатого скота с примесью крови зебу, устойчивые к некоторым кровепаразитарным заболеваниям. Установлено, что защитные механизмы от инфекционных заболеваний обусловлены либо препятствием вторжению возбудителя, либо изменением рецепторов. Вторжению возбудителей, равно как и их размножению, препятствуют в основном иммунная система организма и экспрессия генов главного комплекса гистосовместимости. Одним из примеров гена резистентности у мышей служит ген Мх. Этот ген, обнаруженный в модифицированной форме у всех видов млекопитающих, вырабатывает у Мх -мышей иммунитет к вирусу гриппа А. Ген Мх был вьщелен, клонирован и использован для получения трансгенных свиней, экспрессирующих ген Мх на уровне РНК. Однако данные о трансляции Мх-протеина, обусловливающего устойчивость трансгенных свиней к вирусу гриппа А, пока не получены. Ведутся исследования в целях получения трансгенных животных, резистентных к маститу за счет повышения содержания белка лакто-ферина в тканях молочной железы. На культуре клеток из почек трансгенных кроликов было показано, что клеточные линии, содержащие трансгенную антисмысловую РНК, имели резистентность против аденовируса Н5 (Ads) более высокую на 90 — 98% по сравнению с контрольными линиями клеток. Л. К. Эрнст продемонстрировал также устойчивость трансгенных животных с геном антисмысловой РНК к лейкозу крупного рогатого скота, к заражению вирусом лейкоза. [c.130]

В случаях, когда целевой продукт в виде раствора или жидкости нельзя стерилизовать упакованным в контейнеры, то его фильтруют через стерильный фильтр с диаметром пор не более 0,22 мкм При обнаружении вирусов и/или микоплазм в растворе (жидкости), стерилизуемом (-ОЙ) фильтрованием необходимо предусмотреть возможность использования дополнительного метода стерилизации (физического или химического) [c.254]

Органические вещества, ведущие себя как жидкие кристаллы, изучаются почти столетие. Однако только в последние тридцать лет жидкокристаллический порядок был обнаружен в полимерных системах. Наиболее ранние сообщения о полимерах с жидкокристаллическим порядком содержатся в работах Остера [1] с водными растворами вируса табачной мозаики (ВТМ) и Робинсона [c.253]

Ряд структур, которые являются последовательными стадиями развития полиэдренного вируса, обнаружен и при развитии остальных вирусов. Отдельные вирусная палочка или шарик в собственно оболочке соответствуют оголенному вирусу (вирусу без оболочки). Оболочка развития с вирусной палочкой и белком на поверхности соответствует частицам гранулезных вирусов. Полиэдр, как предельно сложная структура вирусов, является собственно образованием, в котором собрано большое число вирусов гранулеза. Эти морфологические элементы являются признаком общего происхождения энтомопатогенных вирусов, но наблюдения с электронным микроскопом пока еще не позволяют изучить и описать весь сложный процесс развития вирусной частицы, в том числе стадии провируса, механизма возникновения оболочек развития, их отложения в полиэдрах и механизма завершения развития-полиэдров. [c.73]

Статолон выделенный нз грибов антивирусный агент, стимулирующий выработку интерферона. Активным компонентом статолона является двухцепочечная РНК вируса, обнаруженного в грибах. [c.82]

Обнаружение вируса в куриных эмбрионах. Зараженные эмбрионы выдерживают в термостате при 35 — 37 °С в течение 48 — 72 ч в зависимости от вида изучаемого вируса. Затем яйца охлаждают при 4 °С в течение 18 ч для максимального сужения кровеносных сосудов эмбриона и асептически вскрывают. Амниотическую и аллантоисную жидкость отсасывают шприцем, оболочки и эмбрион извлекают в стерильные чашки Петри. [c.268]

Все вирусы — внутриклеточные паразиты. Некоторые из них могут кристаллизоваться наподобие неживого вещества, но, проникая в клетки живых организмов, проявляют все признаки живого. Таким образом, в форме вирусов обнаружен как бы переходной мост , связывающий в единое целое мир организмов с безжизненным органическим веществом. Вироспоры (т. е. вирусы, находящиеся вне клеток), представляют собой лишь одну из стадий существования вируса. Далее в жизненном цикле вирусов можно выделить следующие этапы прикрепление вируса к клетке, внедрение в нее, латентную стадию, образование нового поколения вирусов, выход вироспор. В период латентной стадии вирус как бы исчезает. Его не удается увидеть или выделить из клетки, но в этот период вся клетка синтезирует необходимые для вируса белки и нуклеиновые кислоты, в результате чего обеспечиваются условия для нового поколения вироспор. [c.287]

Вирус обнаружен в 1980 г. при исследовании фекалий больных методом ИЭМ. Содержит РНК, относится к семейству aIi iviridae (от лат. са11х — чаша), роду Нереу1гиз. Вирус гепатита Е имеет небольшие размеры (32—34 нм), сферическую форму, просто организованную структуру, отличается от вирусов гепатита А по антигенным свойствам. С трудом культивируется в культуре клеток, патогенен для обезьян (шимпанзе, макаки). [c.228]

Выделение чистых И. проводится с помощью ионообменных смол с послед, гель-фильтрацией. Для мн. целей используют препараты миеломных И., особенно минорных классов. Антитела выделяют с помощью иммуносорбентов - фиксированных на нерастворимых носителях (напр, целлюлозе) антигенов. Обнаружение и количеств, определение И. разных классов проводят иммунологич. методами с помощью соответствующих антисывороток. Для определения кол-ва антител используют методы преципитации (иммунная р-ция осаждения антигена антителом), агглютинации (взаимод. антитела с двумя клетками), нейтрализации бактерий и вирусов и др. Широкое распространение получают радиоиммунные и ферментно-иммунные методы, обладающие исключительно высокой чувствительностью и позволяющие определять очень малые кол-ва антител (или антигенов) в смесях с др. в-вами. [c.217]

Хотя следует оговориться, потому что природа уже создавала подобные структуры, неизвестные человеку до определенного времени. В 1991 г. следы фуллеренов Сбо и Сто были обнаружены российским геохимиком С.Цьшурским в пленках, заполняющих трещины в углеродном минерале докембрия - шунгите (от названия города Шунга, что вблизи финской фаницы, в Карелии). До этого все попытки найти эти кластеры в природе не приводили к успеху. Ученые из Аризонского университета нащли" бакиболы Сбо и Сто в фульгурите (остеклованном кварцевом песке в виде трубок или сосулек), образующемся при ударе молнии в почву. Находка сделана в щтате Колорадо. Это уже второй случай обнаружения фуллеренов в природе. Фуллереноподобные сфуктуры встречаются и в живой природе - это оболочки вирусов, которые собираются из многочисленных белковых субъединиц. [c.111]

Визуальная идентификация зон лизиса — утомительная и субъективная процедура. Вместо нее для обнаружения рекомбинантных бакуловирусов можно использовать ДНК-гибридизацию или полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Кроме того, если под контроль промотора бакуловируса, активного с ранних и до поздних стадий литического цикла, поместить ген la Z Е. соН, кодирующий -галакгозидазу, и такую конструкцию включить во фрагмент ДНК, встраивающийся в геном A MNPV, то в присутствии хромогенного субстрата -галактозидазы зоны с рекомбинантными вирусами окрасятся в синий цвет. [c.144]

Один из ПЦР-тестов основан на выявлении фрагмента ДНК длиной 188 п. н., который присутствует во множестве копий в геноме Т. ruzi, но отсутствует в геномной ДНК нескольких родственных паразитов. После амплификации этот фрагмент без труда обнаруживается с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. Незначительно варьируя методику проведения ПЦР (например, изменяя нуклеотидную последовательность праймеров), последнюю можно использовать для обнаружения широкого спектра бактерий, вирусов и паразитов. [c.190]

ELISA применяется для обнаружения различных белков, идентификации вирусов и бактерий, а также определения низкомолекулярных соединений в широком спектре биологических образцов. Чтобы повысить специфичность первых антител, для диагностики часто используют моноклональные антитела. При этом для уменьшения стоимости прибегают к технике клонирования их фрагментов в Е. соИ и получают комби-наторггую библиотеку, а на ее основе - широкий спектр комбинаций Fv-фрагментов. [c.201]

Обнаружение вирусов в культуре клеток. Выявление по цитопа-тическому действию ЦПД). ЦПД представляет собой дегенеративные изменения в клетках, которые появляются в результате репродукции в них вирусов. Одни вирусы проявляют ЦПД в первые дни после заражения культур клеток (вирус оспы, полиомиелита и др.), другие — значительно позже, иногда спустя 1 — 2 нед после заражения (аденовирусы, вирусы парагриппа и др.). Характер ЦПД зависит в основном от вида вируса (рис. 3.2). [c.265]

Несколько вариантов ПЦР используют для обнаружения вируса Эпштейна-Барр. Для диагностики хронических герпетических нейроинфекций разработан вариант мультиплексной ПЦР, позволяющий дифференцировать в одной реакционной смеси шести различных герпесвирусов, включая ВЭБ. [c.285]

Экспресс-диагностика. Быстрое обнаружение вируса основано на прямом исследовании материала от больного и дает возможность установить ориентировочный диагноз заболевания, вызванного одним из вирусов оспенной группы. Для выявления вирионов используют электронную микроскопию, а антигенов вирусов — РИФ, РОПГА, РПГ, ИФА. [c.287]

Вирус бешенства относится к РНК-содержащим вирусам рода Lyssavirus, семейства Rhabdovindae. При бешенстве поражается центральная нервная система, поэтому диагностика заболевания ос-нована на обнаружении в ткани мозга телец Бабеша—Негри (в области гиппокампа), вирусного антигена или самого вируса. При исследовании животного, нанесшего укус, определяют наличие вируса или вирусного антигена в ткани слюнной железы с помощью РИФ и биологической пробы. [c.306]

Для определения сероконверсии рекомендуются повторные серологические исследования. Обычно диагноз инфекции В- 9 ставят при обнаружении IgM к вирусу 5-19 в сыворотке (приблизительно через 14 дней после начала инфекции). Специфические IgG выявляются в течение 4 мес и дольше. Обнаружение IgG к вирусу 5-19 свидетельствует о наличии протективного иммунитета. Использование иммуноблотинга позволяет оценить давность инфекции, поскольку антитела к антигену VP2 появляются раньше, чем антител к антигену VPI. Это имеет большое значение для установления сроков инфицирования беременных. [c.309]

Merigan впервые показал, что в крови животных, получавших сополимер ДИВЭМА, был обнаружен ингибитор вирусов интерферон [40]. Интерферон представляет собой белок, продуцируемый [c.172]

Помимо поли-у-бензилглутамата изучались также растворы других полипептидов и различных биологических частиц, таких, как вирус табачной мозаики [71], способные образовывать жидкокристаллические фазы. Для растворов вируса табачной мозаики Бернал и Фанкухен [72] получили рентгенограммы рассеяния, согласующиеся с двумерным гексагональным порядком палочкообразных частиц вируса. Структуры и текстуры, обнаруженные в жидкокристаллических растворах биологических систем, не отличаются от тех, которые существуют в низкомолекулярных термотропных жидкокристаллических системах. [c.37]

Исследование вирусной суспензии. Ни один из обнаруженных вирусов не может быть использован как имитатор всех типов вирусов [13, 14]. Однако бактериофаг Е. oli Т объединяет многие типы вирусов, найденные в бытовых сточных водах, и его довольно легко определить (Т — является двадцатигранным фагом размером приблизительно 500—100 нм). Поэтому с ним и проводили эксперименты. Связь вирусов с кишечной палочкой зависит от типа и концентрации катионов в растворе. [c.80]

Изучение соотношения Е. соИ и цитратположительных кишечных палочек в водоемах в летний период показало, что Е. соН очень быстро отмирала в сточных водах и при сбросе их в водоем составляла только 30% от числа лактозоположительных штаммов, В реках и особенно в во,-дохранилищах Е. соИ была редкой находкой. Обнаружение в этих же пробах воды сальмонелл и кишечных вирусов показало, что оценка качества воды водоемов только по Е. oli недостаточно надежна как с эпидемиологической точки зрения, так и в отношении фекального загрязнения. Боле-е надежным тестом является учет всей группы кишечных палочек (Т. 3. Артемова и др., 1972). [c.21]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология