Химотрипсин и трипсин

Попытка обобщить данный материал сделана в настоящей книге, которая представляет собой логическое продолжение первой части, опубликованной ранее отдельным томом и посвященной анализу специфичности и кинетических аспектов действия ферментов на относительно простые субстраты, такие как алифатические и ароматические спирты и альдегиды, производные карбоновых кислот, замещенные аминокислоты и их производные (не выше ди- или три-пептидов). Главное внимание в первой части книги уделялось характеру фермент-субстрат ных взаимодействий на достаточно ограниченных участках активного центра и кинетическим проявлениям этих взаимодействий. В основе первой части книги лежит экспериментальный материал, полученный при изучении специфичности, кинетики и механизмов действия цинк- и кобальткарбоксипеп-тидазы, химотрипсина и трипсина из поджелудочной железы быка, алкогольде-гидрогепаз нз печени человека и лошади и пенициллинамидазы бактериального происхождения. Итогом первой части книги явились обобщение и формулировка кинетико-термодинамических принципов субстратной специфичности ферментативного катализа. [c.4]

Полная обработка данной схемы приводит к довольно сложным выражениям для кинетических параметров кат и /Ст(каж) ферментативной реакции. Однако на практике рН-зависимость ферментативных реакций, протекающих по трехстадийному механизму, имеет более простой вид. Как правило, ряд протонированных или депротонированных состояний фермента или не обладают способностью связывать субстрат, или не вступают в реакции ацилирования или деацилирования, что приводит к упрощениям соответствующих схем рН-зависимости. Например, в реакциях гидролиза специфических субстратов, катализируемых а-химотрипсином и трипсином, схема (10.11) упрощается [c.222]

В настоящее время структура химотрипсина и трипсина расшифрована благодаря использованию метода дифракции рентгеновских лучей [29—32], подтвердившего предположения, сделанные на основании химических исследований. Как 5ег-195, так и Н1з-57 находятся в активном центре ферментов (рис. 7-2). Следует иметь в виду, что метод Дифракции рентгеновских лучей кристаллом фермента не дает возможности обнаружить положение атомов водорода в молекуле фермента и что на рисунке они проставлены согласно химической логике. Так, Короткое расстояние (0,30 нм) между азотом остатка Н 15-57 и кислородом остатка 5ег-195 свидетельствует о наличии водородной связи. Аналогичные рассуждения привели к выводу о присутствии других водородных связей, показанных на рисунке. Если гистидин находится в непро-тонированной форме, а гидроксильная группа серина протонирована, то мы видим, что гистидин может выступать в роли акцептора протона от —СНгОН-группы серина (т. е. в роли общего основного катализатора), повышая нуклеофильность кислорода гидроксильной группы. [c.109]

С формальной стороны этот маршрут аналогичен реакциям с участием химотрипсина и трипсина. И все прочие реакции в [c.325]

Таким образом, благодаря совместному перекрестному воздействию химотрипсина и трипсина из химотрипсиногена образуются разные химо-трипсины, различающиеся как ферментативной активностью, так и некоторыми физико-химическими свойствами, в частности электрофоретической подвижностью. [c.422]

Изменения свободной энергии при взаимодействии ароматических углеводородов с а-химотрипсином и трипсином представлены в табл. И. [c.37]

Биоспецифическое элюирование конкурентными ингибиторами применяется при выделении химотрипсина и трипсина нз панкреатических экстрактов с помощью аффинной хроматографии на ага- [c.267]

Когда сорбированное вещество освобождается от специфического сорбента, следует помнить о влиянии гетерогенности иммобилизованного аффинного лиганда [1]. На рис. 10.10 приведены результаты выделения химотрипсина и трипсина из гомогенатов поджелудочной железы мыши на различных препаратах сефарозы с присоединенным соевым ингибитором трипсина. Если допустить, что различия в условиях элюирования отражают различия в биологической активности, картина элюирования может использоваться для характеристики молекулы. Применимость сорбента, таким образом, зависит от функциональной гомогенности иммобилизованного аффинного лиганда. [c.272]

Два факта заставляют думать, что упомянутые группировки действительно расположены в ферменте весьма близко. Во-первых, ароматические соединения, являющиеся конкурентными ингибиторами фермента, ингибируют также реакцию с сульфгидрильной группой, играющей существенную роль в катализе. Во-вторых, ароматические окислители (динитрофенильные соединения), обладающие незначительной реакционноспособностью в отношении обычных сульфгидрильных групп, но способные к образованию комплексов с остатками триптофана, окисляют эту сульфгидрильную группу с большой скоростью. Эти факты убедительно свидетельствуют о том, что остаток триптофана и сульфгидрильная группа расположены поблизости друг от друга и что они близки (по меньшей мере) к центру связывания тиосульфата. В настоящее время метод бифункциональных ингибиторов используется достаточно широко. Шоу [16] описал группу специфических реагентов, взаимодействующих с активными центрами химотрипсина и трипсина. Уолд [17] обобщил опыт применения бифункциональных реагентов для поперечной сшивки пептидных цепей с помощью ковалентных связей. [c.225]

Продукты кислотного гидролиза трипсина и химотрипсина существенно не отличаются по величине отношения емкости их сорбции смолами в водородной и натриевой формах от соответствующих величин для исходных белков. Продукты не очень глубокого кислотного гидролиза химотрипсина и трипсина в основной своей массе характеризуются, по-видимому, далеко расставлен- [c.195]

Авторы (13Й) модифицировали химотрипсин и трипсин акролеином [c.102]

Обширные экспериментальнь1е данные по применению а-химотрипсина и трипсина как катализаторов образования пептидной связи получены в работах Морихара н Ока [350]. Карбоксикомпонент A -Phe-OEt (X = OEt) реагирует с химотрипсином и после образования фермент-субстратного комплекса дает ацилфермент, который может реагировать либо с аминокомпонентом (IN = ) с образованием пептида, либо с водой, давая продукт гидролиза [c.168]

А между атомом углерода карбонильной группы-15 псевдосубстрата и остатком5ег-195фермента. Обычным субстратам химотрипсина и трипсина, в которых осуществляется несколько выгодных контактов, для достижения стадии ацилирования необходима энергия активации от 5 до 4- 15 ккал/моль. Однако при образовании комплекса трипсин — ингибитор оптимизируются многочисленные другие взаимодействия, и величина ЛС оказывается равной —18 ккал/моль, несмотря на напряженность С—О -аддукта (табл. 5.6). Таким образом, различие энергий стабилизации можно объяснить различием контактирующих областей в комплексах, которые трипсин образует с ингибитором и с обычными субстратами [7491. [c.281]

Так, у эстераз и эстеролитически активных протеиназ определено наличие в активном центре функционального остатка Сер, который подвергается ацилированию на промежуточной стадии процесса. Активный серил фигурирует в псевдохолинэсте-разе, фосфоглюкомутазе, в химотрипсине и трипсине и в ряде других ферментов. На рис. 6.7 изображена схема связывания субстрата ацетилхо-лина ацетилхолинэстеразой (АХЭ) и схема ингибирования ее активности при высокой концентрации субстрата [32]. В эсте-разный участок АХЭ входят нуклеофильная группа V и смежная с ней диссоциирующая кислотная Рис. 6.9. Схема действия креатинкиназы. группа НХ. Ацильный ос- Переходное состояние, [c.375]

Ч.Химопсин ( liyraopsinum Ферменты а-химотрипсин и трипсин из поджелудочной железы круп, рогатого скота Порошок во флаконах Россия [c.229]

Крист. 91 - 92. Раств-сть м.р. Н О. Специфический ингибитор химотрипсина и трипсина сульфонилирует белок только по гистидину активного центра. Водн. раств. гидрол. на 50% за 100 мин при 25°С и pH 7. Использ. исходные раств., приготовленные в [c.277]

Клосс и Шрёдер [1263а] предложили способ ферментативного гидролиза эфиров N-защищенных и свободных пептидов в препаративных масштабах на основе использования химотрипсина и трипсина. При этом было показано, что эстеразная активность ферментов весьма мало зависит от природы С-концевого аминокислотного остатка. В то же время эфиры пептидов с С-концевой D-аминокислотой, а также со-эфиры не способны к ферментативному гидролизу. Протеолитическое расщепление пептидных связей в условиях гидролиза сложных эфиров под действием эстераз очень незначительно (ср. [1470]). [c.93]

Вывод, сделанный на основании рассмотренных результатов физико-химических исследований, характеризующих воздействие углеводородов на структуру белков, подтвердился и при изучении влияния углеводородов на биологическую активность ферментов (на примере некоторых протеаз). Углеводороды, солюбилизированные ферментами, тормозят протеолитические реакции пепсина, химотрипсина и трипсина. Однако углеводороды не влияют на лгаксимальную скорость гидролиза, а лишь увеличивают константу Михаэлиса. Эти результаты, а также литературные данные позволяют сделать вывод о том, что углеводороды, являясь конкурентными ингибиторами протеолитических ферментов, существенно не изменяют их структуры [163, 164]. [c.32]

Различие между химотрипсином и трипсином состоит также в том, что химотрипсии свертывает молоко, но не свертывает кровь, в то время как трипсин свертывает кровь и не свертывает молоко (в обычных условиях). Так как поджелудочный сок (после активирования его в кишечнике) содержит трипсин и химотрипсин, то в результате их совместного действия белки и пептоны гидролизуются в кишечнике до низкомолекулярных пептидов. Химотрипсин расщепляет с наибольшей скоростью пептидные связи, в образовании которых участвуют карбоксильные группы тирозина, фенилаланина, триптофана или метионина. [c.334]

В качестве примера комплексного использования ферментного сырья можно привести следующий. Как известно, из поджелудочной железы выделяют ценнейший гормональный белок—инсулин, без которого не могут жить больные диабетом. Остатки ткани железы (после экстракции инсулина) обычно выбрасывали, несмотря на то, что в них содержался целый ряд ферментов. В последнее время в некоторых странах (США, Дания, ФРГ) выданы патенты на способы получения из указанных остатков рибонуклеазы, протеолитических ферментов — химотрипсина и трипсина, а затем и дезоксирибонуклеазы. Имеются также данные, показывающие, что из этих же остатков можно легко получать эластазу, карбоксипептидазу и панкрин. [c.213]

Цыперович А, С,, К о л о д з е й с к а я М, В. Получение и исследование высокоочищенных препаратов и-химотрипсина и трипсина, соответствующих кристаллическим. Биохимия , 31, 1966, стр, 564. [c.349]

Гормоны и ферменты экстрагируют слабоподкисленными растворами, что предотвращает или заметно затормаживает авто-литические процессы. Следует отметить, что при pH 1,5—2,0 устойчивы дезоксирибонуклеаза, рибонуклеаза, химотрипсин и трипсин. [c.56]

Сэнджер и его сотрудники в работах по изучению инсулина применяли гидролиз концентрированной соляной кислотой при 37° в течение 3—8 дней. В одном частном случае, для диизопропилфосфо-рильных производных химотрипсина и трипсина, Ноутон и др. [8] нашли, что частичный гидролиз, проводимый 5,7 н. НС1 при 100° в течение 10 мин эквивалентен гидролизу в 12 н. НС1 при 37° в течение 24 час. [c.118]

Фиг. 52. Кривые скорости гидролиза окисленной рибонуклеазы (1 %-ный раствор) химотрипсином (/) и трипсином (//) при pH 7,0 и 25° (концентрация фермента 0,005%) (по данным Херса и др. [16]).

Химопсин (или аморфный химотрипсин) получается так же, как трипснн и альфа-химотрипсин, из поджелудочной железы крупного рогатого скота. Содержит смесь альфа-химотрипсина и трипсина. [c.135]

В результате структурных исследований удалось показать что а-МСГ представляет собой амид К-ацетилтридекапептида последовательность аминокислотных остатков которого совпа дает с последовательностью первых 13 аминокислот адренокор тикотропина (табл. 6). При этом не найдено каких-либо видо вых различий так, идентичные образцы а-МСГ были выделены из гипофиза свиньи [944, 950, 1357], быка [790, 1396], лошади [609], овцы [790] и обезьяны [1360]. В соответствии с этим обозначения ас-МСГ, аб-МСГ, ад-МСГ, ао-МСГ, об-МСГ и ч-МСГ отвечают меланотропинам гипофиза свиньи, быка, лошади, овцы, обезьяны и человека. Во всех случаях последовательность аминокислот а-МСГ определяли с помощью частичного кислотного гидролиза, а также расщепления карбоксипептидазой, химотрипсином и трипсином. На рис. 47 показаны пептиды, образующиеся при ферментативном расщеплении а-меланотропина гипофиза обезьяны. Строение Рс-МСГ, являющегося, как пока- [c.228]

Прочие протеиназы, обладающие эстеразным действием, при ингибировании их диизопропилфторфосфатом точно так же образуют кристаллические соединения [142]. При данной концентрации ДФФ протеиназная и зстеразная активности а-химотрипсина, j -химотрипсина, у-химотрипсина и трипсина в каждом случае ингибируются почти в одинаковой степени. В каждое из этих производных вводится приблизительно 1 моль фосфора, [c.324]

Пространственная упаковка глобулы химотрипсина показана на рис. 35 и 36. Полипептидная цепь содержит небольшой а-спираль-ный участок, а в остальной части почти не спирализована. Полипептидные цепи многократно протянуты внутрь молекулы, образуя несколько больших петель и плавных изгибов. Цепи на многих участках проходят почти параллельно друг другу с многочисленными межце-почечными водородными связями. В химотрипсине и структурно очень близком к нему трипсине полипептидные цепи складываются в большие петли чаще, чем скручиваются в спираль или свертываются в клубок. Заряженные полярные группы большей частью обращены в сторону раствора, а неполярные заместители располагаются внутри глобулы, однако многие короткие неполярные заместители Ala и Val также обращены в сторону раствора [37]. На рис. 35 показано расположение аминокислот, гомологичных цистеину в трипсине (за счет которых в трипсине возникают S—S-связи). Структуры химотрипсина и трипсина весьма близки. Молекула а-химотрипсина (рис. 36) почти сферическая. [c.122]

Показано, что та же самая гидроксильная группа серинового остатка участвует в реакции а-химотрипсина и трипсина с ацилирующими агентами, например с п-питрофенилацетатом. Образующееся при этом соединение лишено ферментативной активности и содержит одну ацильную группу на молекулу фермента. В отличие от рассмотренных диизопропил-фосфатпых производных ферментов такие ацилферменты неустойчивы. [c.211]

Гидроксильная группа серина, принимающая участие в этих реакциях, должна обладать повышенной реакционной способностью, поскольку из двадцати шести остатков серина, содерн ащихся в а-химотрипсине, только один реагирует с диизопропилфторфосфатом или ацилируется. Свободный серин вообще не реагирует с диизопропилфторфосфатом. Предшественники ферментов (трипсиноген и химотрипсиноген), а также денатурированные а-химотрипсин и трипсин не взаимодействуют с диизопропилфторфосфатом. [c.211]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология