Флуоресценция исправление

При использовании любого метода для исправ.тения спектров флуоресценции исправленный спектр будет являться истинным спектром испускания в том случае, если приняты меры предосторожности для предотвращения значительного поглощения флуоресценции самим раствором (см. раздел П1, 3 об эффектах внутреннего фильтра). [c.243]

Большую информацию можно получить из спектра возбуждения люминесценции. При измерении спектров люминесценции сканируется длина волны излучаемого света. При изучении спектров возбуждения, наоборот, монохроматор анализатора устанавливается на определенной длине волны (например, в максимуме спектра флуоресценции), а сканируется длина волны возбуждения. Щели монохроматора возбуждения должны быть достаточно малыми, чтобы получить хорошо разрешенный спектр. Получаемая при этом зависимость интенсивности флуоресценции от длины волны, прокалиброванная с учетом интенсивности возбуждающего света, и является спектром возбуждения данной люминесценции. После исправления полученного спектра с учетом спектрального распределения источника возбуждения он должен совпадать со спектром поглощения люминесцирующего вещества. [c.68]

Измеряют площади под исправленными спектрами флуоресценции исследуемого и стандартного вещества. [c.69]

При измерении флуоресценции очень разбавленных растворов существенный вклад в общее измеряемое испускание вносит флуоресценция кюветы и растворителя. Всегда следует проверять флуоресценцию чистого растворителя при тех же условиях, в которых измеряется и флуоресценция самого раствора. Если она значительна, получаемый спектр следует вычитать из спектра раствора до его исправления. Для веществ, имеющих относительно долгоживущую флуоресценцию, существенное значение может иметь тушение растворенным кислородом. Кислород обычно удаляют пропусканием через раствор тока азота или вакуумированием. [c.70]

Система записи результатов. Сигнал от разностного самописца поступает на перо, которое рисует зависимость исправленной интенсивности флуоресценции 1[ от длины волны, давая истинные спектры флуоресценции. [c.271]

Применяя уравнения (27) — (29), следует помнить, что интегрировать нужно только в пределах первой полосы поглощения, и на рис. 7 эта полоса ради удобства показана в изолированном виде. Однако на самом деле коротковолновый край первой полосы поглощения почти неизменно перекрывается с длинноволновым краем второй полосы (перекрывание отсутствует только для некоторых красителей). Перекрывание можно учесть (и внести соответствующие исправления), если оно мало и первая полоса поглощения достаточно сильна. Но если она относительно слаба и перекрыта сильной второй полосой, то чрезвычайно трудно, а иногда и невозможно точно определить вклад первой полосы поглощения. В тех случаях, когда перекрывание не слишком велико и можно идентифицировать 0-0-переходы в спектрах поглощения и флуоресценции, можно воспользоваться способом, показанным на рис. 8. Предполагается, что в области 0-0-перехода первой полосы поглощения коэффициент погашения второй полосы равен нулю. Масштаб спектра флуоресценции [c.33]

Большинство разрядных ламп дает несколько неустойчивый поток света, и при измерениях флуоресценции, возбуждаемой такими лампами, необходимо тем или иным способом компенсировать колебания светового потока. Паркер [143] описал использование для этой цели счетчика квантов с флуоресцентным экраном. Он имеет то преимущество, что позволяет непосредственно регистрировать исправленные спектры возбуждения флуоресценции. Это подробно описано в разделе П1, К, 2. Мы опишем здесь (рис. 77) удобную входную схему самописца, которую можно использовать для регистрации отношений сигналов. Батарея, питающая потенциометр Р на рис. 76, отключена, и теперь через потенциометр Р проходит ток (приблизительно 1 мА) от усилителя (Лг на рис. 77) сигнала счетчика квантов с флуоресцентным экраном. (Схему можно превратить в однолучевую, [c.207]

Рис. 94. Исправление спектра возбуждения вручную [158]. Бисульфат хинина в 0.1 н. серной кислоте Л —относительная квантовая интенсивность света, выходящего из кварцевого монохроматора с широкими щелями, при использовании ксеноновой лампы Б (сплошная линия) — спектр поглощения Б (кружки) —исправленный спектр возбуждения, полученный путем деления ординат кривой В на ординаты кривой Л — неисправленный спектр возбуждения (интенсивность флуоресценции в зависимости от волнового числа, установленного на монохроматоре возбуждения при постоянной ширине

В литературе описано много приборов для непосредственной записи спектров возбуждения флуоресценции [153—157]. В некоторых приборах используются счетчики квантов и регистрируется величина Еф/, как описано выше. В других используется термобатарея для регулирования пучка возбуждающего света и регистрируется ефД, величина, менее важная, чем еф/. В ряде приборов применяется фотоумножитель, термобатарея или другое приспособление для регулирования пучка возбуждающего света и используются электронные устройства для исправления изменений квантового выхода регулирующего устройства с длиной волны, так что регистрируется точная кривая еф/. Для химиков, желающих изготовить свой прибор, метод Паркера наиболее прост, так как с его помощью записываются исправленные спектры возбуждения с точностью 10%, что вполне приемлемо для большинства целей. Записанные спектры более точно можно исправить последующим расчетом, определив сигнал счетчика квантов методами, описанными в разделе П1,Д, 5. [c.236]

По причинам, рассмотренным в разделе I, Б, 4, теоретически более важными являются исправленные спектры флуоресценции [c.242]

Рис. 101. Схема Га.мильтона для непосредственной регистрации исправленных спектров флуоресценции [167].

Определение относительных квантовых выходов флуоресценции двух веществ в растворе при комнатной температуре является довольно простой операцией [158]. Используя современные спектрофлуориметры высокой чувствительности, можно работать с очень разбавленными растворами, когда избыточным поглощением возбуждающего света и самопоглощением флуоресценции можно пренебречь. При этих условиях полная скорость испускания флуоресценции пропорциональна произведению /оес/фу [см. уравнение (21)]. Площадь под исправленным спектром флуоресценции также пропорциональна полной скорости испускания флуоресценции (см. раздел III, К, 3), и, следовательно, если измерять спектры флуоресценции двух растворов при таком же геометрическом расположении (в одном и том же растворителе) и одинаковой интенсивности возбуждающего света, отношение интенсивностей равно [c.247]

Если известен абсолютный квантовый выход флуоресценции одного из веществ фь легко можно вычислить квантовый выход флуоресценции другого вещества. Практически записывают оба неисправленных спектра в разных опытах и исправляют их, как описано в разделе III, К, 3. Затем измеряют площади под исправленными спектрами и для каждого вещества вычисляют отношение площади исправленного спектра к высоте неисправленного пика в одних и тех же единицах (например, в делениях шкалы самописца). Затем по возможности точнее определяют интенсивности флуоресценции в максимумах спектров. Умножая отношение интенсивностей пиков на ранее определенное отношение факторов, получают отношение которое подставляют в уравнение (247). [c.247]

Для расчетов и исследований механизмов нужно знать квантовый выход флуоресценции Ои представляет собой отношение числа излученных при флуоресценции фотонов к числу поглощенных и может быть определен либо при помощи актинометрических систем, либо относительно какого-нибудь стандарта с известным квантовым выходом (например, бисульфата хинина или специального стеклянного эталона), либо но площадям полос исправленных спектров. Зная квантовый выход флуоресценции фР и излучательное (естественное) время жизни возбужденного состояния т Фл> которое определяют по интенсивности полос поглощения (см. раздел 3.8), можно вычислить реальное время жизни флуо-ресценции .Л, 2, [c.96]

Рис. 12. Спектры флуоресценции, возбуждаемой в тонких кристаллах антрацена с тетраценом при различных молярных соотношениях. а — 2-10- б — 10-5 в — 3 10-6 г — 10- . Прерывистыми линиями обозначены максимумы, лежащие за пределами измерений, не исправленные на самопоглощение [84].

Важно знать, что при представлении спектров флуоресценции в журнальных статьях не часто делаются различия между исправленным и неисправленным спектром. Обычно вычерчивают спектр в виде зависимости выходного сигнала фотоумножителя от длины волны. Это неисправленный спектр. Нанесение на график интенсивности флуоресценции или квантового выхода дает исправленный спектр. Если на графике отложена величина выходного сигнала фотоумножителя, то называть ее флуоресценцией или интенсивностью флуоресценции неправильно. Вероятно, если не оговорено, как получен данный спектр, надежнее допустить, что он является неисправленным. [c.420]

Выходы долгоживущей флуоресценции и фосфоресценции определяются тем же методом, что и выходы быстрой флуоресценции, т. е. сравнением площади под исправленным спектром испускания с площадью под спектром быстрой флуоресценции стандартного соединения. Для получения соответствующей величины площади интенсивность долгоживущей люминесценции нужно разделить на коэффициент фосфориметра. [c.70]

При измерении квантовых выходов флуоресценции относительно стандартного вещества возможны ошибки за счет эффектов внутреннего фильтра (реабсорбция), немонохроматичности возбуждающего света, флуоресценции кювет, тушения кислородом и фоторазложения. Ошибку, обусловленную первым фактором, легко устранить, используя достаточно разбавленные растворы. Для предотвращения немонохроматичности следует проверять чистоту возбуждающего света. Во избежание ошибки при измерении оптической плотности следует по возможности измерять оптическую плотность раствора пучком света того же спектрального состава, что и при возбуждении флуоресценции. Необходимо проводить дополнительные измерения для учета флуоресценции растворителя, стенок кюветы. Для этого при исследовании растворов необходимо измерить в тех же условиях спектр флуоресценции растворителя. Спектр, полученный при измерении флуоресценции растворителя, вычитается из спектра, полученного при измерении раствора, до его исправления. [c.160]

Выходы долгоживущей флуоресценции и фосфоресценции определяются тем же методом, что и выходы быстрой флуоресценции, т. е. сравнением площади под исправленным спектром испускания с площадью под спектром быстрой флуоресценции стандартного соединения. Для получения соответствующей величины площади интенсивность долгоживущей люминесценции нужно разделить на коэффициент фосфориметра. Иногда соединение имеет и долгоживущую люминесценцию, и быструю флуоресценцию. Если квантовый выход последней уже определен обычным способом, отношение выхода замедленной флуоресценции к выходу быстрой флуоресценции можно вычислить по сравнению интенсивности одного из максимумов в спектрах, которые идентичны по форме. Измеряемый спектр испускания не надо исправлять по чувствительности фотоумножителя, но необходимо сделать поправки на коэффициент фосфориметра и чувствительности прибора, при которых измеряются оба спектра. [c.160]

Паркер [143] вмонтировал флуоресцентный счетчик квантов в спектрофлуориметр для непрерывного измерения квантовой интенсивности возбуждающего света. Это позволяет непосредственно измерять исправленный спектр возбуждения, компенсировать флуктуации света лампы при измерении спектра флуоресценции и определять кривую спектральной чувствительности монохроматора флуоресценции в ультрафиолетовой области. Эти приспособления будут подробно обсуждены в разделах III, Ж, 3 и III, К, 1—3, а здесь мы рассмотрим преимущества и недостатки их применения для измерения интенсивности света. Предположим, что пучок света из монохроматора М фокусируется вогнутым зеркалом R (см. рис. 74, Б) на кювету С, в которой происходит фотохимический или фотофизический процесс. Для регулирования светового потока, падающего на кювету С, разделитель пучка В, представляющий собой прозрачную кварцевую пластинку, помещают в пучок света под углом, при этом он отражает часть света на флуоресцирующий экран F, от которого свет попадает в фотоэлемент или фотоумножитель Р. Если раствор F подобран удачно (согласно условиям, описанным выше), то сигнал фотоумножителя будет приблизительно пропорционален квантовому потоку, попадающему на С, независимо от длины волны. Слово приблизительно необходимо по нескольким причинам. Во-первых, отралотельная способность разделителя пучка изменяется с длиной волны. Во-вторых, световая волна с электрическим вектором, параллельным поверхности В, будет отражаться более эффективно, чем свет с электрическим вектором, перпендикулярным этому направлению. Если бы пучок света был совершенно неполяризован при всех длинах волн, это не имело бы никакого значения. Однако свет, выходящий из монохроматора, особенно в случае решеточных монохроматоров, заметно поляризован, а степень поляризации может меняться с длиной волны, следовательно, есть дополнительная причина для изменения полной отражательной способности разделителя пучка. [c.196]

Флуоресцеин в карбонат-бикарбонатном буфере Л (сплошная линия) — спектр поглош.ения А (кружки) — исправленный спектр возбуждения — неисправленный спектр возбуждения Оштенсивность флуоресценции в зависн.мости от волнового числа, устанозлеииого на монохроматоре возбуждения при постоянной ширине ш ели). [c.234]

В зависимости от волнового числа или частоты, т. е. dQldv в зависимости от V. Площадь под исправленной кривой пропорциональна Q, общей скорости испускания флуоресценции при всех длинах волн. Если для анализа спектров испускания используется решеточный монохроматор, то неисправленный спектр-автоматически регистрируется в шкале, линейной по длинам волн. При такой записи значительно проще вычислять исправленный спектр в шкале длин волн, т. е. изображать dQid k в зависимости от К. Интегрирование исправленного спектра будет по-прежнему давать Q — общий поток флуоресценции при всех длинах волн. Для получения dQldX из регистрируемой кривой необходимо знать различные значения спектральной чувствительности (5>,). Они связаны с Sy соотношением [c.242]

Хотя до сих пор нет общепринятых методов изображения спектров флуоресценции, следует придерживаться предложений, выдвинутых группой международных экспертов [164]. На рис. 2 (см. гл. I) изображены исправленные спектры, представленные двумя из трех способов, описанных в гл. I. Следует отметить, что для фотохимических целей наиболее удобно изображать dQldv в зависимости от v. Изображение dQfdK в зависимости от л используется в случае решеточного монохроматора из-за удобства вычисления. Интегрирование последней кривой по-прежнему даёт общий квантовый поток флуоресценции, как уже указывалось ранее. Изображение dEldX в зависимости от Я (см. рис. 2) в фотохимических исследованиях большого смысла не имеет, так как интегрирование кривой дает поток общей энергии, а последний не имеет никакой связи с выходом флуоресценции. [c.243]

Если спектры поглощения и флуоресценции заметно перекрываются, то следует избегать ошибок за счет самопоглощения флуоресценции (см. раздел И1, 3, 2). Наиболее простой способ — использование достаточно разбавленных растворов, чтобы самопоглощением можно было пренебречь. Если, однако, надо проводить измерения с более концентрированными растворами, то следует определить истинную форму спектра флуоресценции, измеряя флуоресценцию более разбавленного раствора. Таким образом можно установить соотношение между площадью исправленного спектра и интенсивностью при длине волны X вне рблзсти самопоглощения. С помощью этого соотношения можно [c.248]

Один из наиболее широко используемых стандартных растворов— это раствор бисульфата хинина в разбавленной серной кислоте. Его используют как стандарт сравнения для проверки чувствительности спектрофлуориметра (раздел III, Ж, 1). как стандарт для определения чувствительности прибора (раздел V, Б,2), как стандарт для определения кривой спектральной чувствительности в коротковолновой области видимого спектра (раздел III, К, 3) и как стандарт для определения выхода флуоресценции (см. ниже). Исправленный спектр флуо ресценции (см. рис. 2) и абсолютный квантовый выход флуоресценции в 1 н. серной кислоте измерил Мельюиш [162, 175], и оказалось, что квантовый выход равен 0,508 при концентраций 5-10-3 М с константой самотушения 14,5, соответствующей квантовому выходу при бесконечном разбавлении, равному [c.250]

Выход фосфоресценции определяется аналогичным образом, за исключением того, что сначала исправляют спектр, а затем площадь под исправленным спектром сравнивают с площадью под исправленным спектром быстрой флуоресценции. Как и в предыдущем случае, учитываются коэффициент фосфориметра и [c.266]

Если нужно получить спектры люминесценции, используют спектрофотометр Кэри. Исправления на чувствительность могут быть сделаны сравнением со стандартной вольфрамовой лампой при определенной температуре [20]. В лаборатории авторов для изучения спектров флуоресценции применили модель [14] спектрофотометра Кэри, использующую внешний вращающийся сектор, синхронизированный с вращением внутреннего прерывателя. Для измерения убыли фосфоресценции при использовании прибора Кэри выводные концы усилителя присоединялись к осциллографу с медленной разверткой. Выпускаемый промышленностью флуороспектрофотометр Аминко — Баумана дает возможность измерять время жизни молекулы в возбужденном состоянии и спектр излучения фосфоресцирующего материала. [c.178]

Существенные влияния среды (тяжелых атомов) были показаны для В и М1 -фосфоресценции бензола в кристаллических растворах в инертных газах при 4,2° К. Яркие примеры, полученные в лаборатории Робинсона, приведены в табл. 4-15. Наблюдаемые времена затухания фосфоресценции бензола падают от 16 сек в кристаллическом аргоне в качестве растворителя до 0,07 сек в ксеноне [ИЗ, 167, 168]. Кроме того, отношение квантового выхода флуоресценции ф/ к исправленному квантовому выходу фосфоресценции фр (где фр = Фр -Ь фикк( 1-->- о), т. е. фр — сумма выходов излучательного и безызлучательного Г1 1 о-процессов) падает от 0,6 в растворе в кристаллическом метане в качестве растворителя до 0,06, О и О в аргоне, криптоне и ксеноне соответственно. [c.243]

Пердейтеробензол Отношение квантового выхода флуоресценции к исправленному а) квантовому выходу фосфоресценции, ф//фр Бензол Нафталин [c.244]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология