Уреаза молекулярный вес

Уреаза катализирует реакцию гидролиза мочевины до аммиака, а ката-лаза — распад Н2О2 до Ы2О + О2. (Обширный обзор по дыхательным ферментам см. в [99].) В ряде случаев в системе необходимо наличие так называемых коферментов, которые обычно имеют меньший молекулярный вес, чем фермент. Функцию коферментов могут нести витамины и простые нуклеотиды, такие, как адонозинтрифосфат (АТФ). [c.561]

Активными катализаторами биологического действия являются ферменты — некоторые белки с большой молекулярной массой. Так, например, при комнатной температуре половина от имеющегося количества мочевины разлагается водой за 3200 лет, а в присутствии фермента уреазы время ее полупревращения при той же температуре составляет 10 с. [c.137]

Молекулы белков очень большие, поэтому и молекулярная масса ферментов обычно превышает миллион. Однако есть ферменты, молекулярная масса которых составляет 1000. Часть молекулы белка фермента, определяющая его специфичность, термолабильна. Под специфичностью надо понимать способность фермента воздействовать только на определенный субстрат, например сахараза гидролизует только сахарозу, уреаза — только мочевину, не воздействуя даже на ее производные. Фермент- [c.28]

Ферменты — это белки с большим молекулярным весом (порядка 500 000) обладают крайне дифференцированным каталитическим действием, которое определяется так называемыми активными центрами. Ферменты — высокоэффективные катализаторы так, например, времена полупревращения для реакции разложения мочевины водой равны соответственно 10 с при 25°С и 10 с при 25°С, но в присутствии фермента уреазы. [c.152]

Молекулярная масса уреазы 480 000 молекула состоит из шести субъединиц. Последовательность аминокислотных остатков в ее молекуле пока не установлена. [c.395]

О двух последних столбцах речь пойдет ниже, а пока рассмотрим цифры, находящиеся в трех первых столбцах. Белки расположены в порядке увеличения объемов элюции (Уд) — соответственно увеличиваются и значения Следовало бы ожидать, что в этом же порядке будут уменьшаться молекулярные массы (М) белков, однако это не так. Фибриноген выходит из колонки первым, для него Kd = 0,03, т. е. намного меньше, чем для ферритина и уреазы, а между тем его молекулярная масса не больше, а меньше, чем у этих двух белков. Оставим в стороне ферритин — особый белок, в состав которого входит железо. Плотность ферритина р = 1,7, в то время как для подавляющего большинства нормальных белков р = 1,38. Но как объяснить несоответствие между значениями Kd и М для фибриногена и уреазы Kd фибриногена почти в 7 раз меньше, чем уреазы, а молекулярная масса его не больше, а в 1,5 раза меньше. Похоже на то, что основной закон гель-фильтрации ( чем меньше белок, тем больше Fr ) нарушается. [c.146]

Используя данные табл. 20.2, проверить молекулярный вес уреазы. [c.623]

С точки зрения химии полимеров глобулярные белки обладают рядом необычных свойств как уже упоминалось, каждый белок характеризуется точным молекулярным весом. Структура таких макромолекул, вообще говоря, жесткая и довольно компактная. Удельная плотность у разных веществ этого типа одинакова и, следовательно, можно считать, что каждой единице молекулярного веса свойствен определенный объем а это является обязательной предпосылкой для определения молекулярного веса путем сравнения объемов исследуемых молекул с объемом молекул стандартных соединений. Поэтому некоторые авторы [58, 65], которые, количественно оценивая поведение белка при элюировании, пытались исходить из теоретических представлений, связывали радиусы по Стоксу с объемом выхода. Почти во всех рассмотренных выше работах, касающихся определения молекулярного веса с помощью гель-хроматографии, несколько настораживает тот факт, что установленные соотношения предполагают наличие у молекул белков симметричной (сферической) формы. Однако в действительности форма молекул нативных белков не настолько отличается от симметричной, чтобы это могло повлиять на разделение, основанное на различии в размерах. Лишь Зигель и Монти [66] описали два предельных случая, когда высокомолекулярные белки, имеющие небольшой радиус (по Стоксу), элюировались на сефадексе 0-200 после низкомолекулярных компонентов. Однако эти белки — фибриноген (мол. вес 330000), ферритин (мол. вес 1 300000) и уреаза (мол. вес 483 ООО) — еще настолько мало [c.169]

Отсутствие антигенных свойств (точнее, наличие лишь незначительной антигенности) у инсулина и многих гормонов гипофиза, по всей вероятности, обусловлено их низким молекулярным весом. В некоторых случаях мы не знаем причины, почему то или иное соединение лишено антигенных свойств. Так, например, неизвестно, почему желтые ферменты (флавопротеины) не являются антигенами [27], хотя другие ферменты, в частности уреаза, весьма активны в этом отношении. [c.334]

В конце концов процесс оказался, по словам Самнера, до смешного простым . Однажды, в апреле 1926 г., он смешал соевую муку с ацетоном — растворителем, испробовать который ему посоветовал бывший его профессор биохимии в Гарварде, — и оставил фильтроваться раствор на ночь. На следующее утро он посмотрел каплю фильтрата под микроскопом и увидел то, чего он никогда не видел до этого, — мелкие восьмигранные кристаллы. Тогда он отцентрифугировал кристаллы из раствора, перекристаллизовал их и обнаружил, что новый раствор обладает весьма сильной уреаз-ной активностью. В этот день Самнер сообщил по телефону своей жене новость, которая через 21 год принесла ему Нобелевскую премию Я получил кристаллы первого фермента . Уреаза оказалась белком с молекулярным весом 483 ООО. [c.168]

Это первый фермент, полученный в кристаллическом виде (1926.) Кристаллическая уреаза представляет глобулин с молекулярным весом 483 000. Этот фермент работает настолько отчетливо и энергично, что его применяют для количественного определения мочевины. [c.343]

Молекулярный вес уреазы из бобов 480 ООО, pH,- 5,0—5,1. [c.306]

ЭНЗИМОВ на расщепление белков. Было показано, что очищенные кристаллические ферменты по большей части однородны, по молекулярному весу [1]. Изучены многие ферменты и гормоны уреаза. [c.548]

Молекулы белков обладают очень крупными размерами. Молекулярный вес самого простого белка цитохрома равен 13 ООО. пепсина — 35 ООО, уреазы — 480 000, гемоцианина — 8 910 000 и т. д. На рис. 17 показаны сравнительные размеры и форма некоторых глобулярных белков крови. Крупные размеры молекул придают особые физические свойства растворам белков (см. ниже). [c.44]

Однако до полного понимания поведения ферментов in vivo еще далеко. Даже более простая задача выделения каждого из имеющих важное значение ферментов и изучение in vitro кинетики его реакции с соответствующими субстратами является весьма сложной. С одной стороны, активность ферментов, которая в молекулярном масштабе чрезвычайно высока, весьма чувствительна к температурным условиям, к pH раствора и к добавкам следов ингибиторов , по-видимому, блокирующих каталитический процесс. С другой стороны, фермент при обычных условиях реагирует через ряд связанных друг с другом и квазиравновесных реакций, включающих многие промежуточные вещества. Одни ферменты высоко специфичны (например, уреаза, гидролизующая только мочевину и незамещенные производные мочевины), в то время как другие ферменты реагируют только с одной стереохнмической формой оптически активных субстратов, а третьи — с рядом субстратов аналогичной структуры [4]. [c.18]

С помощью гель-хроматографии уже давно уда лось установить наличие ассоциатов в некоторых белковых препаратах. Педерсен [96] на сефадексе G-150 выделил и охарактеризовал чистый димер из старых препаратов сывороточного альбумина. Компоненты, выходящие с колонки еще раньше, представляли собой тример и тетрамер сывороточного альбумина (см. [163]). После того как чистую рибонуклеазу А в 50%-ной уксусной кислоте лиофилизировали, а затем фракционировали на сефадексе G-75, в элюате было обнаружено несколько активных фракций. Главный пик соответствует исходному мономеру белка, тогда как остальные компоненты, судя по объемам выхода, являются ассоциатами [97]. Очевидно, аналогичное явление образования димера и других полимеров обна> ружили Зигель и Монти [98] при исследовании уре-азы. Хроматографией на сефадексе G-200 им удалось из кристаллического фермента (Sigma, тип С 1) выделить несколько более быстро движущихся фракций. На основании объемов выхода для них с помощью уравнения Эккерса [59] был вычислен радиус по Стоксу это дало возможность определить молекулярный вес. Таким образом был установлен чрезвычайно интересный факт из препарата, помимо уреазы (мол. вес 483 000), удалось выделить ее димер и тример. По-видимому, в свободном объеме элюировались также продукты еще более высокой степени агрегации. [c.175]

С исторической точки зрения интересно отметить и первые опыты по кристаллизации чистых белковых ферментов—уреазы и пепсина, осуществленные соответственно Самнером и Нортропом . Учитывая распространенную тогда теорию некристаллизуемости коллоидов, можно сказать, что это явилось важным аргументом в пользу их существования как слабых ассоциатов. Те коллоиды, которые можно было перевести в кристаллическое состояние, могли этому подвергаться только с потерей их коллоидной природы и возвращением к исходной низкомолекулярной форме. Белки и каучук тогда еще не были получены в кристаллическом состоянии. Поэтому считалось по аналогии, что эти вещества еще не выделены в истинной низкомолекулярной форме, в связи с чем предпринимались энергичные поиски таких истинных форм. Кристаллизация уреазы и пепсина, а впоследствии и многих других белков и тот факт, что масса ячейки такого кристалла всегда в целое число раз больше молекулярного веса, определенного в растворе, а не часть его—все это является наиболее важными доказательствами истинно высокомолекулярной природы таких веществ. [c.12]

При приготовлении уреаз-электродов типов I, П и III проводят следующие операции [451, 452]. Сначала получают раствор геля, растворяя 3,0 г мономера акриламида и 0,58 г КН -метил-быс(ак-риламида) в 25 мл 0,1 М трис-буфера (pH 7.0). Для того чтобы катализировать фотополимеризацию, в раствор добавляют 2,7 мг рибофлавина и 2,7 мг персульфата калия. Полученную смесь хранят при комнатной температуре в темноте до тех пор. пока она не понадобится для изготовления электрода свежий раствор готовят каждые два дня или но необходимости. В маленькую центрифужную пробирку, в которой уже находится 175 мг фермента, вливают 1 мл раствора полимера. Суспензию фермента перемешивают 2 мин, после чего выдерживают при комнатной температуре еще 20 мин. После этого смесь ставят в холодильник на 10 мин при 2"С и центрифугируют в течение 20 мин. Электрод I типа представляет собой непосредственно гель фермента (уреаза — акриламид), которым покрывают чувствительную стеклянную головку электрода (Бекман 39137), Б электроде II типа на слой ферментного геля накладывают целлофановую пленку, т, е. получают сандвич стекло — фермент — целлофан. В электроде III типа имеются два слоя целлофана (стекло — целлофан — ферментный гель — целлофан). Молекулярная масса при-.меняе.мого целлофана должна быть не менее 1500, В период. между измерениями электрод хранят в трис-буфере при 25"С. [c.154]

УРЕАЗА (карбамид-амидогидролаза) — фермент, катализирующий гидролитич. расщепление мочевины NH, 0NHj + H20 = G02 + 2NH3 у. (шифр 3.5,1.5, см. Номенклатура и классификация ферментов) — первый фермент, выделенный I кристаллич. виде (Самнер, 1926) из соевых бобов. Кристаллич. У. — глобулярный белок с мол. в. 483 ООО и изоэлектрич. точкой р/5,0—5,1 рН-опти-мум фермента 7,0 Михаэлиса константа для мочевины, й, 3-10 з М нрн pH 7,0 и 25° молекулярная активность 4,6б-10 мин. . У. обладает абс. субстратной специфичностью ионы Ag, Hg, Gu подавляют ее активность даже в мизерных количествах. Ингибиторами У. являются также /г-хлормеркури-бензоат, F и тиомочевина. [c.179]

Фирма Be kman выпустила твердый мембранный электрод с МН+-функцией (по каталогу фирмы Be kman № 39626) в виде стеклянной трубки, на конце которой находится мембрана, содержащая активное органическое вещество (состав или название компаунда не опубликованы) [20]. Этот электрод имеет теоретическую МН+-функцию от 2 до 8,5 pH и позволяет измерять активность NH+ в присутствии других катионов в частности, им определяют содержание мочевины в сыворотке крови при обработке ее уреазой (см. гл. XI). Разработаны системы со стеклянным рН-электродом, чувствительные к молекулярному NHg [21 ]. Работающую поверхность плоской мембраны стеклянного рН-элек-трода плотно прижимают к гидрофобной полимерной мембране, которая удерживает пленку раствора NH4 I. Система выглядит так [c.177]

Уреаза, первый фермент, который удалось выделить в кристаллическом виде, получается из муки бобов СапаьтШа епз1-1огт1з [1]. Молекулярный вес чистого белка 483 000 [101]. Интересно отметить, что продукт деполимеризации уреазы, имеющий молекулярный вес 17 ООО, также обладает ферментативной активностью. Трипсин инактивирует кристаллическую уреазу [103]. [c.294]

Микробные местообитания. Места обитания микроорганизмов имеют сложный и постоянно меняющийся характер и зависят от градиентов питательных веществ, токсических соединений и лимитирующих факторов (температура, pH, свет, активность воды и т.д.). Поэтому экологических ниш для микроорганизмов бесконечное множество, но именно сочетание вышеперечисленных факторов определяет экологическую нишу для конкретного микроорганизма. Ее называют также первичной экологической нишей. Для точной характеристики местообитания микроорганизма нужно учитывать его микроокружение. Многие специализированные группы микроорганизмов существуют в таких условиях микроокружения, что испытывают минимальную конкуренцию со стороны других микроорганизмов. Например, Heli oba ter pylori, обитающий вже-лудочно-кишечном тракте человека и вызывающий образование язв желудка, кишечника, мочевой системы, для защиты от желудочного сока образует большое количество уреазы, которая разлагает мочевину и образует аммоний. Уходить от действия иммунной системы ему помогают липополисахариды, обладающие вариабельностью и молекулярной мимикрией . [c.265]

Рис. 75. Зависимость между наклоном кривой логарифмов подвижности (см. рис. 30) и молекулярной массой белков [538]. 7 —димер пепсина 2 —оваль-бумин 3 — а-амилаза 4 — мономер альбумина 5 — трансферрин человека 5 — яичный трансферрин 7 — гексокиназа 8 — лактатдегидрогеназа 9 — кетозо-1-фосфат—альдолаза 10—Р-амилаза 11 — никотинамидаза 12 — а-уреаза 13 — каталаза 14 — ксангииоксидаза 15 — мономер апоферритина (ферри-тин) 16 — уреаза, 17 — рибулозодифосфат-карбоксилаза.

Первые исследования белков проводились со сложными белковыми смесями, такими, как яичный белок, сыворотка крови, экстракты из растительных и живот ных тканей, а подчас и цельные ткани. Лишь в конце XIX в. получили распространение методы разделения белков с помош ью осаждения нейтральными солями. В 30-е годы XX в. были получены первые белки в кристаллическом состоянии. Получение веш ества в кристаллическом виде служит одним из надежных доказательств чистоты (гомогенности) препарата. В частности, в 1926 г. Д. Самнер выделил из семян канавалии белок (фермент) уреазу в кристаллическом состоянии Д. Нортроп и М. Кунитц в 1930-1931 гг. получили кристаллы пепсина и трипсина. После этих пионерских работ выделение индивидуальных белков стало частым событием в истории биохимии, особенно после 50-х годов, когда начали применять современные методы фракционирования — хроматографию на гидрофильных ионообменниках, гель-фильтрацию ( молекулярное просеивание ), новые методы электрофореза и др. [c.17]

Реагенты. Использовали уреазу соевых бобов производства НПО Биолар (Олайне, Латвия), которая имела активность 1032 ед. Самнера на 1 г и содержала 6 субъединиц с молекулярной массой [c.123]

Совершенно определенно можно утверждать, что в поле УЗ-кавитации, создаваемом низкочастотным (27 кГц) или высокочастотным (2.64 МГц) ультразвуком высокой исходной удельной мощности (2()-60 Вт/см в первом случае) или низкой мощности (1 Вт/см - во втором), уреаза инактивируется по сложной схеме, не исключающей диссоциацию белка главной отличительной чертой УЗ-инактивации уреазы является превалирующая роль активных свободных радикалов в потере каталитической функции фермента. Эффективными протекторами уреазы от УЗ-деградации могут быть пропилгаллат и полидисульфид галловой кислоты, применяя которые следует учитывать возможность окисления ингибиторов молекулярным кислородом и способность полидисульфида образовьтать нековалентные комплексы с белками при pH 6-7 и выше, что приводит к уменьшению активности фермента. [c.130]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология