Электрофорез на бумаге сахаров

Хотя электрофорез на бумаге первоначально был разработан для разделения аминокислот и белков, он в настоящее время применяется в самых различных областях органической химии и биохимии (см., например, [4, 91). При помощи электрофореза на бумаге разделяют сахара, пептиды, алкалоиды, антибиотики, витамины и т. д. [c.541]

Электрофорез особенно успешно применяется для обнаружения моносахаридов, в молекуле которых имеются основные (как в аминосахарах) или кислые (как в альдоновых, уроновых, сахарных кислотах, фосфатах и сульфатах сахаров) группировки (см., например, ). В тех случаях, когда необходимо разделить нейтральные моносахариды, используют их способность образовывать отрицательно заряженные комплексы с борной кислотой или ее солями , с молибдатами , вольфраматами, германа-тами и рядом других неорганических анионов разные анионы предъявляют часто различные требования к стереохимии моносахарида, необходимой для образования устойчивых комплексов. Естественно поэтому, что выбор комплексообразователя и условий проведения электрофореза, в первую очередь pH растворов, весьма существенно влияет на результат разделения (см. ). Для обнаружения зон веществ на электрофореграммах применяется большинство реагентов, используемых при хроматографии на бумаге. [c.411]

Способность к образованию эфиров борной кислоты используют при разделении сахаров методом распределительной хроматографии и электрофореза на бумаге, методом ионообменной хроматографии на смолах и угле. [c.53]

При использовании денситометрического метода интенсивность окраски вещества в зоне измеряется непосредственно на хроматограмме. Впервые этот метод был использован для измерения концентрации аминокислот, разделенных на группы с помощью электрофореза, а позже — в хроматографии на бумаге для определения аминокислот, сахаров и стероидов. [c.79]

В 1952 г. было описано разделение сахаров в присутствии боратов на фильтровальной бумаге методом электрофореза [c.904]

Результаты подострого опыта побудили в хроническом санитарно-токсикологическом эксперименте обратить внимание не только на уровень метгемоглобина в крови, но и на те функции, которые могут нарушаться под влиянием постоянного присутствия хотя бы малых количеств метгемоглобина. Был использован следующий набор тестов наблюдение за общим состоянием и весом животных, определение метгемоглобина в крови, определение гемоглобина в крови, подсчет количества эритроцитов, ретикулоцитов, лейкоцитов и формулы белой кров , определение уровня сахара крови, определение соотношения белковых фракций сыворотки крови методом электрофореза на бумаге, изучение влияния [c.253]

Эфиры борной кислоты и ее производных. При взаимодействии моносахаридов и их производных, содержащих г<ис-а-гликольные группировки, с борной кислотой или ее солями образуются устойчивые отрицательно заряженные комплексы. Это свойство нашло широкое применение для разделения сахаров методом распределительной хроматографии и электрофореза на бумаге а также методом ионообменной хроматографии на смолах и угле Борные эфиры сахаров были в свое время успешно использованы для установления конфигурации аномерного центра (см. стр. 34). Несмотря на то что комплексы сахаров с борат-анионом известны давно, строение их было выяснено только недавно Было показано, что существуют два типа боратных комплексов монокомплекс XXVII и дикомплекс XXVIII [c.148]

Методика опыта. В пробирку вносят 1—2 мл испытуемого раствора сахара (в зависимости от его концентрации). Доводят объем, если это необходимо, дистиллированной водой до 2 мл. Приливают 0,05 мл водного раствора фенола (92 г свежеперегнанного фенола и 8 мл воды) и 5 мл химически чистой концентрированной Н2804 ( 1 = 1,84). Содержимое пробирок перемешивают и дают отстояться в течение 1 ч. Параллельно ставят контрольный опыт пустых непроявленных участков хроматограммы В. Количество сахара в пробе определяют в фотоэлектроколориметре с фильтром № 4 ( 1, = 500 нм) в кюветах с толщиной 1 см. Результат вычисляют по одной из кривых (рис. 38). Для получения достоверных результатов проводят не менее трех параллельных определений. При этом элюаты сахарных пятен необходимо тщательно освободить от волокон бумаги. Погрешность метода 5%. Сахара можно анализировать и методом электрофореза на бумаге, в котором используют боратные буферные растворы. [c.161]

Определение моносахаридного состава проводится анализом продуктов кислотного гидролиза или. чаще, мета-нолиза сахарида. Состав продуктов кислотного гидролизата анализируется с помощью хроматографии или электрофореза на бумаге. Нередко используется коммерческий углеводный анализатор, разделение осуществляется на ионообменных смолах методом распределительной хроматографии в водно-спиртовой смеси или в виде боратных комплексов сахаров. Скорость гидролиза гликозидных связей, образованных остатками нейтральных, амино- и дезокси-сахаров, различна. Легче всего отщепляются остатки сиаловых (N-ацетилнейраминовой, N-гликолилнейраминовой) кислот, труднее всего расщепляются свяэи, образованные остатками амино-сахаров и уроновых кислот. Фуранозиды гидролизуются значительно быстрее пиранозидов. В итоге при гидролизе олигосахарида может иметь место неполное расщепление связей или кислотная деструкция образующихся моносахаридов, что искажает результаты анализа. Лучшие результаты дает метанолиз в присутствии газообразного хлористого водорода (1.7 н. H l, 80 С, 18 ч) — в этом случае образуются метилгликозиды, устойчивые к кислотной деструкции. Качественный и количественный состав продуктов метанолиза определяется методом газожидкостной хроматографии в виде триметилсилильных или трифторацетильных производных. [c.463]

Белки в пробе можно коагулировать, например нагреванием. Липиды, воски, парафины и другие липофильные соединения удается отделить от гидрофильных компонентов методом экстракционного разделения между фазами петролейного эфира и водных спиртов (например, 60- и 95%-ного метанола в зависимости от природы веществ) в одной делительной воронке или в нескольких, применяя метод противоточного распределения. Различные виды аминокислот (основные, кислые и нейтральные) можно предварительно разделить посредством электрофореза на бумаге или в геле. Для отделения различных органических кислот и ряда соединений типа фенолов от сахароподобных веществ пригодны даже такие старые методы, как осаждение ацетатом свинца, основным ацетатом свинца и т. п. Некоторые группы алкалоидов можно высадить из экстрактов с помощью специфических реагентов, а затем выделить их. В тех случаях, когда представляют интерес органические вещества средней полярности, можно иногда очистить пробу непосредственно на бумаге, на которой должен проводиться хроматографический анализ. Неочищенную пробу хроматографируют сначала чистым петролейным эфиром (иногда несколько раз), липиды при этом перемещаются вместе с фронтом растворителя. Далее хроматограмму сущат, после этого можно хроматографировать пробу еще раз чистой водой, если целевое вещество полностью нерастворимо в ней. Вода вымывает из пробы соли, сахара, аминокислоты и т. д., которые перемещаются вместе с фронтом элюента или вблизи него. В заключение пробу хроматографируют специально подобранным элюентом, следя при этом, чтобы фронт растворителя не продвинулся на такое же расстояние, как при предыдущих операциях по очистке. [c.88]

Пуриновые и пиримидиновые компоненты нуклеозидов обусловливают ультрафиолетовое поглощение этих соединений. Природа этого поглощения зависит от природы заместителей в основании и от pH раствора, так как ионизация основания или его заместителей влияет не только на таутомерные превращения, но и на возможность резонанса. Кажущиеся значения р/С (включая рК сахара) могут быть легко определены с помощью как спектрофотометрических методов, так и титрования [160]. Поскольку таутомерная форма обусловливается окружающей средой и каждая форма представляет собой набор многих резонансных структур, характеристика с помощью обычных методов оказывается до некоторой степени ошибочной. Физические свойства нуклеозидов свидетельствуют о значительном вкладе цвиттерионных структур, в частности в циклонуклеозидах, таких, как 0 ,5 -циклотимидин. Этому соединению на основании его растворимости, более высокой по сравнению с тимидином температуры разложения (но не температуры плавления), а также данных хроматографии на бумаге и поведения при электрофорезе следует приписать структуру I, но не П (см. стр. 52). [c.51]

Дальнейших успехов в химии гликонротеинов следовало ожидать на основе развития методов и лабораторной техники идентификации и количественного определения малых количеств сахаров и аминокислот, структурного анализа олиго- и полисахаридов, эффективного разделения и очистки белков, оценки гомогенности макромолекул и определения их молекулярных весов. С введением улучшенных методов исчерпывающего метилирования и периодатного окисления углеводов, реагентов (борогндридов щелочных металлов), избирательно восстанавливающих карбонильную группу, аналитической ультрацентрифуги Сведберга, аппарата Тизелиуса для электрофореза с подвижной границей, ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии, метода меченых атомов, метода фракционирования белков плазмы крови холодным спиртом по Кону, хроматографии на бумаге и на колонках, хроматографии на ионообменниках, полученных из целлюлозы, упрощенных микрометодов электрофореза (электрофорез на бумаге, крахмальном или агаровом гелях), иммуноэлектрофореза и, наконец, последнего по времени, но важного в этой области открытия конститутивных и индуцируемых бактериальных ферментов, действующих избирательно на гетеросахариды, настало время для третьего и наиболее сложного и плодотворного периода исследования гликонротеинов. [c.18]

В ряде случаев наряду с фруктозой и сахарозой в моче и других биологических жидкостях могут присутствовать иные кетрзы. Определить содержание этих моно-или олигосахаридов возможно с помощью хроматографии или электрофореза. Подготовку и очистку пробы про1водят описанным выше методом.-Перед нанесением на, бумагу пробу обычно высушивают в роторном испарителе (так как объем ее бывает слишком большим для нанесения), затем растворяют в 0,1 мл воды и наносят на хроматографическую бумагу Ватман № 1. Проба должна содержать 50—200 мкг кетосахаров. Обычно сахара разделяют методом нисходящей одномерной хроматографии в системе растворителя ацетон и. бутанол вода (7 2 1). Время хроматографирования при комнатной температуре составляет 30—35 ч. Высушенную хроматограмму проявляют резорцином (равномерно опрысканную хроматограмму 5 мин прогревают при 1бО°С) или димедоном (после опрыскивания хроматограмму высушивают при комнатной температуре, а затем 5 мин прогревают при 110°С). При проведении ко- [c.125]

Промежуточные соединения были обнаружены также при образовании меланоидинов из других систем (например, из смеси ароматических альдегидов с аминокислотами, сахаров с белками и т. д.). Темноокрашенные соединения образуются при взаимодействии аминокислот с ацетальдегидом. При этом методом электрофореза на бумаге обнаружено восемь соединений, которые проявлялись нингидрипом и обладали флуоресценцией в ультрафиолетовом свете (Robert, Ranaranda, 1953). [c.77]