Седиментация и ультрацентрифугирование

Седиментация — ультрацентрифугирование до равновесия [c.54]

В группу методов, основанных на различиях в скоростях движения разделяемых компонентов, входят также седиментация, ультрацентрифугирование, диализ, осмос н обратный осмос, мембранная фильтрация. [c.82]

Седиментация, ультрацентрифугирование. Метод определения скорости седиментации частиц в процессе центрифугирования применяют в основном для оценки молекулярных весов коллоидных веществ и полимеров /9 n So V з/2 Я-Т.з, [c.385]

Принципы метода скорости седиментации. Ультрацентрифугирование — один из наиболее распространенных физических методов анализа, применяемых для исследования свойств макромолекул в растворе. Этот метод и его разновидности позволяют получать сведения о размере, форме, молекулярном весе, скорости седиментация исследуемых макромолекул, а также об изменениях их структуры [c.14]

Ультрацентрифугирование позволяет, однако, на основании различной скорости седиментации белков, испытывать белковые препараты не однородность в отношении размеров их частиц. [c.396]

При ультрацентрифугировании на макромолекулы, кроме центробежной силы, действует сила трения, тормозящая их оседание. Величина силы трения зависит от размера молекулы и ее разветвленности. Поскольку скорость седиментации является [c.81]

Ультрацентрифугирование используется для исследования процесса седиментации или седиментационного равновесия. В последнем случае требуется меньшая величина ускорения (скорость вращения порядка 10 об/с). Равновесное распределение концентраций описывается уравнением (3.30). Если в нем произвести замену [c.64]

Описанный выше способ разделения высокомолекулярных соединений и определения их молекулярных масс называется методом скорости седиментации, так как в его основе лежит различие скорости движения частиц, которая определяется массой частиц. Наряду с этим существует другой способ разделения с помощью ультрацентрифугирования, называемый методом седиментационного равновесия основанный на различии в распределении частиц с разной массой в поле тяжести или в центробежном поле в условиях равновесия. [c.335]

Методы седиментации позволяют определить среднее значение молекулярного веса. В процессе ультрацентрифугирования происходит фракционное разделение веществ и появляется возможность определения молекулярного веса каждой фракции [741. [c.385]

Методы седиментации и ультрацентрифугирования имеют большое значение для исследования полидисперсности систем. Изучением полидисперсности устанавливается количественное распределение частиц по размерам (кривая, распределения) — определяется относительное содержание в системе фракции частиц различного размера. Такого рода задачи решаются как при изучении теоретических вопросов, так и в производственной практике. [c.313]

Различают аналитические и препаративные ультрацентрифуги. Аналитические ультрацентрифуги имеют оптическую систему, которая позволяет регистрировать на фотопленках результаты ультрацентрифугирования. В аналитических ультрацентрифугах производится также определение констант седиментации частиц, что позволяет затем рассчитывать их молекулярные веса. [c.125]

Ультрацентрифугирование. Оседание частиц коллоидов под действием сил тяжести происходит очень медленно. А. В. Думан-ский в 1912 г. предложил для определения константы седиментации применять центрифугирование. Одиннадцать лет спустя Сведбергом была впервые сконструирована специальная центрифуга, названная ультрацентрифугой. [c.148]

Рассчитать молекулярный вес полиамида в метаноле, пользуясь экспериментальными данными метода ультрацентрифугирования константа седиментации при бесконечном разбавлении раствора Зд = 1,95, константы К = l,86 10- , 6 = 0,47. [c.79]

Определить величину молекулярного веса полиамида в и-крезоле, используя экспериментальные данные метода ультрацентрифугирования константа седиментации при бесконечном разбавлении раствора 5о = 0,77, константа К =8,7-10-3, 6 = 0,45. [c.79]

Изменение концентрации частиц в полимерном растворе дс/д1) при равновесии между седиментацией и диффузией характеризуется дифференциальным уравнением ультрацентрифугирования Ламма-. [c.111]

В отличие от скорости седиментации равновесное ультрацентрифугирование позволяет на основе термодинамики определить молекулярный вес М. В опытах по изучению равновесия, проводимых в ультрацентрифуге, центрифугирование продолжается до тех пор, пока стремление молекул к седиментации не уравновесится противоположным стремлением к диффузии в область с более низкой концентрацией. Поскольку такое перераспределение в растворе является равновесным, соотношение между концентрациями на двух уровнях и молекулярным весом можно вывести с помощью термодинамических методов. Для идеальных растворов молекулярный вес может быть вычислен по формуле [c.616]

Прн экспериментах по ультрацентрифугированию из константы седиментации прн знании стоксовского радиуса можно вычислить отношение осей///д. Под стоксовским радиусом понимают радиус молекулы при наименьшей площади ее поперечного сечения. Он может быть получен из гель-хроматографической константы эксклюзии (г — эффективный диаметр пор) [c.363]

При ультрацентрифугировании раствор исследуемого полимера помещают в кювету, закрепленную во вращающемся роторе. В зависимости от применяемого метода можно получить либо среднемассовое значение молекулярной массы (метод определения скорости седиментации при больших частотах вращения - метод скоростной седиментации), либо средневзвешенное значение (метод седиментационного равновесия, осуществляемый при меньших частотах вращения). Результаты измерения получают в виде кривых распределения по константам седиментации, по которым рассчитывают молекулярную массу. [c.176]

Физические характеристики. Значения pH, плотность, вязкость, мутность, показатель преломления, рассеяние света, скорость седиментации при ультрацентрифугировании. [c.467]

Молекулярную массу и форму молекул полисахаридов можно также определить с помощью метода ультрацентрифугирования. По скорости седиментации при ультрацентрифугировании рассчитывают значение молекулярной массы сравнивая поведение исследуемого образца и молекулярной модели, можно оценить форму молекулы. Этот метод применен [77] при изучении гиалуроновой кислоты. Ультрацентрифугирование не используют как способ очистки, но обычно применяют в качестве теста на гомогенность очищенного образца. [c.234]

Степень полимеризации иолисахаридов ГМЦ в большинстве случаев находится в диапазоне 30—300. Для характеристики величины молекулярной массы широко используются химические методы, основанные на определении восстанавливающей способности полисахарида. Из физических методов находят применение вискозиметрия, осмометрия, светорассеяние, ультрацентрифугирование, определение скорости седиментации и др. [57,77,78]. Распространено определение молекулярных масс полисахаридов с помощью молекулярных сит — сефадексов, биогелей. [c.56]

Классические косвенные методы определения размера частиц основаны на изучении адсорбции, скоростей растворения и седиментации, седиментационного равновесия, осмотического давления, рассеяния света, рассеяния рентгеновских лучей под малыми углами, ультрацентрифугирования и явлений электрофореза [1]. Однако эти методы, как правило, дают возможность определить средний размер коллоидных частиц и нри попытках представить полученные данные в виде кривой распределения частиц по размерам возникают существенные затруднения. Заключения о форме частиц могут быть выведены на основании исследования рассеяния света и двойного лучепреломления в потоке, но и здесь установление распределения связано с математическими трудностями. [c.130]

Если система настолько инертна, что не происходит никакого смещения равновесия во время ультрацентрифугирования, то для каждой осаждающейся формы образуются раздельные границы, и, в принципе, можно получить равновесные концентрации из соответствующих граничащих областей. Сингер и сотрудники использовали этот метод для получения концентрации свободного антигена в растворах растворимых комплексов антиген — антитело [66, 69, 70]. Однако необходима большая осторожность при объяснении измерений в системах, в которых происходит частичное смещение равновесия во время седиментации и последующее расширение границ [70]. [c.386]

Трементоцци [17] фракционировал полиэтилен высокого давления на 17 фракций, а полиэтилен низкого давления — на 12 фракций и определил их расиределение по молекулярным весам. Он также измерил молекулярный вес нефракционированного полимера методом светорассеяния и осмометрическим методом и установил, что соотношение Му, Мп для полиэтилена низкого давления равно приблизительно 2. Это свидетельствовало об отсутствии разветвлений с длинной цепью. Однако для полиэтилена высокого давления соотношение изменялось от 7 до 100, что указывало на присутствие большого числа боковых цепей. Полученные данные Трементоцци использовал для доказательства того, что второй вириальный коэффициент для разветвленного полимера меньше. Однако Мусса и Бильмейер [18] определили молекулярные веса нефракционированного полиэтилена высокого давления методом седиментации (ультрацентрифугирование), светорассеяния и осмометрическим методом. На основании полученных ими данных, соотношения Му, Мп составляют 11—18, что указывало на образование значительного числа разветвлений с длинной цепью. [c.249]

Чем объяснить различия в значениях средних молекулярных масс, определенных методом ультрацентрифугирования по скорости седиментации и при установивщемся равновесии [c.72]

V.8.10. Рассчитать молекулярную массу полиамида в метаноле по опытным данным метода ультрацентрифугирования константа седиментации при бесконечном разведении Граствора So = l,95 константы уравнения /< = = 1,86.10- Ь = 0,47. [c.123]

Примером крупного кластера является описанный выше комплекс Аи55(РРНз) 2С1б с молекулярной массой около 14 000. Вдоль его диаметра размещается около четырех атомов Аи, поэтому 8 (т. е. 2 ) атомов Аи является внутренними. Значительная часть поверхностных атомов экранирована фенильными группами и не связана с донорными атомами лигандов. Растворы этого соединения в пиридине ведут себя как коллоидные. В ходе ультрацентрифугирования происходит их седиментация. [c.144]

Полидисперсность и кривые распределения. Методы седиментации и ультрацентрифугирования применяются для изучения так называемой полидисперсности коллоидных систем. Большинство коллоидных систем характеризуется наличием частиц или молекул различных размеров, что сильно отражается на их свойствах. Изучение полидисперсности для установления количественного распределения частиц или молекул по размерам (так называемых кривых распределения) производится разными методами для различных дисперсных систем. Системы с очень грубыми частицами (свыше 0,2 мм) исследуются простым ситовым анализом. Суспензии же и эмульсии с размерами частиц в интервале 1...200 мкм изучаются методами седимен- [c.307]

Рассчитать молекулярный вес поликапронамида в гексафторизопропаноле, пользуясь экспериментальными данными метода ультрацентрифугирования константа седиментации при бесконечном разбавлении раствора 5о =0,91, константа К =8,7-10-3, Ь =0,45. [c.79]

Для определения чистоты (или гомогенности) ферментных препаратов в настоящее время наиболее широко используются ультрацентрифугирование и диск-электрофорез. В основе первого из них лежит различная скорость седиментации в ультрацентрифуге белков с различной молекулярной массой (и различной формой молекул). Одним из ограничений данного метода является то, что разные белки могут иметь одну и ту же величину седиментации и не разделяться при ультрацентрифугировании. С другой стороны, белок в растворе может находиться в виде нескольких форм, различающихся по степени агрегации, а следовательно, и по молекулярной массе. Если эти формы не превращаются одна в другую или превращения осуществляются достаточно медленно, на седиментограмме обнаружится несколько пиков, что, однако, не будет свидетельствовать о наличии примесных белков в исследуемом препарате фермента. Недостатком метода является также его невысокая чувствительность, что не позволяет обнаруживать малые количества примесных белков. [c.205]

В настоящее время имеется ряд новых методов определения молекулярного веса, которые могут соперничать с ультрацентрифугированием. Один из них — это простая гель-фильтрация. Колонку тщательно заполняют гелем (например, сефадексом) и калибруют, пропуская ряд белковых растворов. Измеряют Уе — объем элюата, собранного с момента нанесения вещества на колонку до момента его выхода из колонки, и делят этот объем на Уо — объем элюата для очень крупных частиц, совершенно не проникающих внутрь частиц геля. Далее строят зависимость Уе/Уо ОТ логарифма мол. веса для ряда белков с известным молекулярным весом. Как и при оценке молекулярных весов по константам седиментации, здесь предполагается, что молекулы всех белков имеют примерно сферическую форму для неизвестного белка значение молекулярного веса определяют по местоположению отвечающей ему точки на описанном выше графике [153, 154]. Модификацией этого метода служит хроматография при высоких концентрациях гуанидинхло-рида — соли, вызывающей денатурацию белков. Предполагается, что в таком растворителе белковая молекула представляет собой статистический клубок [154]. [c.182]

Пользуясь методами седиментации и ультрацентрифугирования, люжио исследовать полидисперсность коллоидных систем. Большинство коллоидных систем характеризуется [c.44]

Методы седиментации и ультрацентрифугирования позволяют также количественно исследовать полидисперсность коллоидных систем и установить кривые распределения по размерам частиц или по люлекулярным весам. В полидисперсных системах методом осмотического давления можно определить среднечислеиный молекулярный вес а методом ультрацентрифугирования — средневесовой молекулярный вес М . [c.51]

Метод ультрацентрифугирования (седиментации в ультрацентрифуге). Этот метод первоначально был разработан для определения размеров коллоидных частиц, а затем усовершенствован для измерения молекулярной массы полимеров. В настоящее время он является наиболее точным и теоретически обоснованньпк , однако сложен в аппаратурном оформлении. В ультрацентрифуге при больших частотах вращения создается сильное центробежное поле, под воздействием которого происходит седиментация (осаждение) макромолекул в растворе. Метод дает возможность определять молекулярные массы в очень широком интервале от 50 до 50-10 [c.176]

Методы исследования, рассмотренные в предыдущих разделах, непригодны для высокомолекулярных соединений. Понятие чистоты и идентичности таких веществ, как нуклеиновые кислоты и белки, должно включать не только идентичность носледователь-ности субъединиц, но и идентичность в организации и пространственном расположении полимерных цепей. Перечисленные Снрин-голлом [471 критерии чистоты для белков могут служить иллюстрацией обычно применяемых тестов. Они включают 1) однозначность электрофоретической подвижности в диапазоне pH, в котором вещество обладает устойчивостью 2) однозначность скорости седиментации при ультрацентрифугировании 3) концентрационные изменения в системе раствор — растворитель, подчиняющиеся гауссовскому распределению 4) независимость растворимости в инертном растворителе от количества нерастворенного вещества, находящегося в контакте с раствором. [c.31]

М определяют осмотическим, криоскопическим, эбулиоскопи-ческим или химическим методами М — методами диффузии, светорассеяния, по скорости седиментации при ультрацентрифугировании Вискозиметрический метод дает средневязкостную молекулярную массу М,, вычисляемую по формуле [c.8]

Автор имел целью изложить основы метода ультрацентрифугирования высокополимерных веществ, стараясь не повторять подробного изложения того же предмета, имеющегося в обзоре Болдуина и Ван-Холда [15]. Из-за недостатка места пришлось оставить в стороне очень большое число работ по белкам. Общий объем литературы, посвященной поведению макромолекул при седиментации, в последние годы настолько возрос, что некоторые работы могли непреднамеренно выпасть из поля зрения. Для того чтобы обзор рассматриваемого метода был достаточно полным, излагаются преимущественно общие вопросы, а детали опускаются. Обзор достижений в методах эксперимента, аппаратуре и в применении ультрацентрифугирования в биохимии имеется в монографии Шахмана [177]. [c.45]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология