Сывороточный альбумин электрофорез

Рис. 124. Диаграмма градиента показателя преломления при электрофорезе нормальной плазмы крови человека при рН=8,6, когда все молекулы белков заряжены отрицательно. Два самых высоких пика представляют сывороточный альбумин аз, р и 7 являются смесями сывороточных глобулинов р представляет фибриноген. Два необозначенных пика являются неподвижными пиками вблизи положений первоначальной границы .

A. Во время электрофореза некоторые белки адсорбируются на фильтровальной бумаге. Адсорбция белка бывает значительной при кислом pH и низкой ионной силе раствора, но наблюдается также и при pH 8,6. Адсорбция происходит в результате взаимодействия положительно заряженных молекул белка и отрицательно заряженных волокон фильтровальной бумаги. Степень адсорбции разных белков широко варьирует например, липопротеиды сыворотки крови адсорбируются сильнее, чем сывороточный альбумин. [c.54]

Для построения калибровочной кривой при определении молекулярных масс используют белки-стандарты тропонин С (18 000 Да), тропонин I (24 000 Да), тропонин Т (38 000 Да), яичный альбумин (42 000 Да) и бычий сывороточный альбумин (68 000 Да), а также стандартный набор для определения молекулярной массы белков. При электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия препарат миозина дает расположенную почти у старта интенсивную полосу тяжелых цепей с м. м. ок. 20 ООО Да и три слабые, но отчетливые полоски легких цепей с м. м. ок. 20 ООО Да для самой тяжелой из них и около 16 000 Да — для самой легкой. Подвижность этих полос в описанных выше условиях высока, поэтому при достаточно большой продолжительности электрофореза эти полоски могут обнаружиться почти у фронта красителя (бромфенолового синего). [c.397]

При каком значении pH будет достигнуто наиболее эффективное разделение методом электрофореза следующих белковых смесей а) многлобин и химотрипсиноген б) яичный альбумин и пепсин в) сывороточный альбумин и гемоглобин (р/ белков приведены в таблице) [c.36]

Реологические характеристики слоев глобулярных белков сывороточного альбумина и лизоцима, вычисленные по измерениям деформаций во времени, приведены в табл. 20 и на рис. 54. При повышении температуры от 20 до 60 С происходит нарастание всех характеристик структуры слоя. С помощью седимента-ционного анализа и электрофореза в растворах ЧСА, подвергнутых нагреванию, обнаружено было три компонента — нативные молекулы, денатурированные молекулы и агрегаты последних. При нагревании в течение некоторого времени устанавливается равновесие между этими компонентами, зависящее от температуры [165]. Образование межфазного слоя ЧСА на границе раздела жидких фаз при повышенных температурах (30—40° С) приводило к усилению твердообразных свойств слоя, о чем свидетельствуют значения модулей эластических деформаций, вязкость эластичности и периоды упругого последействия. [c.232]

Электрофорез сывороточных белков большей частью проводят в буферном растворе при pH 8,6. При этом значении pH белки сыворотки заряжены отрицательно и движутся к аноду. Так как изоэлектрическая точка сывороточного альбумина при рН 5, а -глобулина при рН 7, то при pH 8,6 наибольшей подвижностью обладает альбумин, а наименьшей -глобулин. Остальные белки имеют промежуточную подвижность. Путь, пройденный частицей данного белкового компонента, помимо заряда, зависит от времени, напряженности электрического поля, силы тока, от природы буферного раствора, его pH и ионной силы. [c.122]

Электрофоретическое разделение белков в водной среде основано на способности их заряженных частиц перемещаться относительно растворителя под влиянием внешнего электрического поля. Если концентрация водородных ионов в растворителе не равна изоэлектрической точке, то скорость перемещения частиц зависит от величины их свободного заряда, размера и формы. Поскольку даже близкородственные белки, например, некоторые фракции сывороточного альбумина, имеют весьма различную электрофоретическую подвижность и поскольку их подвижность изменяется неодинаково при изменениях pH и состава буферных растворов, электрофорез может быть с успехом применен для разделения белковых смесей и характеристики отдельных белков. [c.164]

При рассмотрении вопросов, касающихся электрофореза белков, уже указывалось, что водные растворы белков обладают большим показателем преломления, чем вода, и что это обстоятельство может служить для определения положения подвижной границы при электрофорезе. Показатель преломления растворов белка линейно возрастает по мере увеличения концентрации белка в растворе. Разница между показателем преломления 1-процентного раствора белка и показателем преломления воды получила название удельного прироста преломления. Этот прирост слегка варьирует в зависимости от характера белка. Так, например, для сывороточного альбумина быка он равен 0,001901, для сывороточного альбумина человека — 0,001887, для яичного альбумина — 0,001876, для у-глобулинов человека — 0,001875 [106]. Температура и наличие в растворе солей не влияют заметным образом на удельный прирост преломления, поэтому концентрация белка в растворе может быть определена весьма быстро путем измерения показателя преломления раствора и вычитания из него показателя преломления диализата. Необходимо, однако, помнить, что прирост показателя прелом-. ления липопротеидов, равный 0,00171, значительно меньше, чем соответствующая величина для белков, не содержащих жиров [107]. [c.139]

Гель-электрофорез, Электрофорез в полиакриламидном меряют колориметрически с реагентом Фолина [22] для построения градуировочного графика используют растворы, приготовленные из кристаллического бычьего сывороточного альбумина. Если белковый образец содержит тритон Х-100 к анализируемой пробе добавляют додецилсульфат натрия [23. [c.152]

Неиспользованные после посадки F(a )j диазогруппы бумаги блокировали обработкой глицином и бычьим сывороточным альбумином. Когда после электрофореза белки из геля описанным выше приемом блоттинга переносили на диазобумагу, они уже не встречали свободных диазогрупп. Большинство из них, не задержавшись на бумаге, следовало дальше в лежащие сверху фильтры. Только антигены для закрепленных на диазобумаге [c.132]

Рис. 78. Результаты электрофореза на полиакриламидном геле продуктов, полученных при гидролизе бычьего сывороточного альбумина под действием микросфер, содержащих инкапсулированный трипсин. Инкубация с содержанием смеси 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина и микросфер с инкапсулированным трипсином, промытых при pH 7,8, продолжалась при комнатной температуре в течение 5 ч. Продукты гидролиза после удаления микросфер анализировали на полиакриламидном геле.

Иммуноэлектрофорез сыграл существенную роль в развитии исследований сывороточных белков. В свое время свободный и зональный электрофорезы позволили проанализировать сравнительно небольшое число индивидуальных белков сыворотки. За исключением 5 классических белков, выявляемых в свободном и зональном электрофорезе, остальные фракции сыворотки не всегда легко поддаются идентификации. Поэтому специальные виды зонального электрофореза с более высокой разрешающей способностью, чем простой электрофорез на бумаге, так и не вошли в повседневную практику клинических лабораторий, сохранив свое значение главным образом для научных исследований. Определение процентного содержания альбумина, а-, р- и у-глобулинов нередко помогает поставить верный клинический диагноз, но мы должны помнить о том, что фракции белков, гомогенные в зональном электрофорезе, могут включать разные белки, образующие одну фракцию только благодаря сходной электрофоретической подвижности. Об этом свидетельствует также окрашивание липо- и гликопротеидов. [c.20]

В последние годы для определения гомогенности белков пользуются электрофорезом при различных значениях pH (см. гл. V). При помощи электрофореза было показано, что кристаллический яичный альбумин, бычий сывороточный глобулин, Р-лактоглобулин и все остальные исследованные по этому методу белковые препараты представляют собой смесь нескольких белков [25]. Вполне возможно, что совершенно однородных белковых молекул вообще не существует и так называемые чистые белки представляют собой в действительности смесь очень [c.15]

Глобулины в отличие от альбуминов представляют собой сложные смеси белков. С помощью иммуноэлектрофореза и электрофореза сывороточных белков на полиакриламидном геле можно различить аг, aj-, 3-и у-глобулиновые фракции. Таким образом, альбумины и глобулины разделяют с помощью электрофореза. [c.87]

Рис. 6. Двумерное разделение лиофилизованного гормона роста человека сочетанием методов гель-фильтрации и электрофореза на сефадексе 0-200. Разделение позволило обнаружить значительную гетерогенность препарата, а—лиофилизованный гормои роста б—сывороточный альбумин человека 150],

Количество цельной сыворотки, которое удается разделить в препаративном ИЭФ, весьма незначительно из-за избытка альбумина. Не следует наносить более 10—20 мг сывороточных белков при фокусировании в широком диапазоне pH и 80—100 мг — в узком диапазоне. Поэтому лучше предварительно очистить антитела, например, путем осаждения сульфатом аммония, препаративным электрофорезом в блоке агарозы, аффинной хроматографией или комбинацией этих методов (см. гл. 2). [c.141]

При электрофорезе в крахмальном геле фракция альбуминов у некоторых людей иногда делится на две (альбумин А и альбумин В), т.е. у таких людей имеется два независимых генетических локуса, контролирующих синтез альбуминов. Добавочная фракция (альбумин В) отличается от обычного сывороточного альбумина тем, что молекулы этого белка содержат два остатка дикарбоновых аминокислот или более, замещающих в полипептидной цепи обычного альбумина остатки тирозина или цистеина. Существуют и другие редкие варианты альбумина (альбумин Ридинг, альбумин Джент, альбумин Маки). Наследование полиморфизма альбуминов происходит по аутосомному кодоминантному типу и наблюдается в нескольких поколениях. [c.570]

Как уже указывалось, глобулины сыворотки могут быть выделены при помощи электрофореза. Нельзя с уверенностью утверждать, что фракции, полученные этим методом, представляют индивидуальные белки, так как в результате ультрацентрифугирования получаются несколько иные фракции и, вообще говоря, по мере усовершенствования методов разделения белков удается получить все большее число фракции . Некоторые фракции сывороточного альбумина содержат гликопротеид. С другой стороны, состав сывороточных белков непостоянен. Исследование иммунологических реакций показало, что в сыворотке животного могут образоваться многочисленные новые белки, не существующие в сыворотке других индивидуумов этого рода. Установлено, что белки такого типа — антитела — составляют фракцию у-гло-булинов. В случае некоторых заболеваний при помощи электрофореза обнаруживают изменение состава белков сыворотки. Таким образом, эти белки являются чрезвычайно сложной смесью. [c.444]

Рис. 122. Электрофорез кристаллического бычьего сывороточного альбумина в диэтилбарбитуратном буферном растворе при ионной силе 0,10 и рН=8,6. Молекулярный заряд при таком рН —25

Для зонного электрофореза ацетатцеллюлозную мембрану (САМ) первым использовал Кон [51]. По мнению Кона, преимущества этого носителя — его однородность и строго определенная пористость. САМ содержит пренебрежимо малое число ОН-групп, загрязненность органическими и неорганическими примесями также весьма мала. В тех случаях, когда сильная сорбция может приводить к образованию на бумаге полосок сзади зон (как, например, при электрофорезе биополимеров) важным преимуществом становится пониженная сорбционная активность САМ. В отличие от бумаги САМ позволяет получить хорошее разделение агфракции сывороточного альбумина, а также инсулина, фибриногена, гистонов, лизоцимов, глико- и липопротеинов и нуклеиновых кислот. После электрофореза меченых соединений остаточная радиоактивность между зонами и стартом исключительно мала. Обесцвечивание фона, если обнаружение проводится путем окрашивания и последующего обесцвечивания, происходит достаточно быстро. [c.293]

С того времени как Дуррум [18] предложил электрофорез белков на бумаге, описано большое число примеров разделения сывороточных белков, ферментов и других растворимых белков. В настоящее время бумага в качестве электрофоретического носителя для разделения белков вытеснена, например ацетатом целлюлозы. Тем не менее бумага все еще используется, поскольку это дешевый, удобный в обращении материал, который легко хранить. Недостатком бумаги является ее сродство к белкам, например к сывороточному альбумину и гликопротеинам, сорбция которых в процессе разделения приводит к образованию удлиненных пятен. [c.341]

Под дополнительными методами имеются в виду методы хроматографии на колонке (гл. 4), электрофореза и гель-проникающей хроматографии (гл. 5). В первом случае разделение исследуемых полимерных образцов происходит на основании зависимости растворимости от молекулярного веса и химического состава. Нетрудно понять механизм разделения по молекулярным весам, поскольку растворимость уменьшается при увеличении молекулярного веса. Но растворимость зависит также от присутствия в полимере полярных групп в связи с этим при наличии химической неоднородности происходит фракционирование и по составу молекул. Если полярность групп в разных звеньях макромолекулы примерно одинакова, то фракционирование определяется главным образом величиной молекулярного веса. При больших различиях в степени полярности разных групп влияние полярности может оказаться более сильным, чем влияние молекулярного веса, и разделение на фракции сможет осуществляться преимущественно по химическому строению. Именно на этом было основано разделение сывороточного альбумина лошади и яичного альбумина в водном фосфатном растворе на фракции с различным содержанием.кислых фосфатных групп [17]. Белки с большим содержанием серы были разделены методами хроматографии на фракции с различным содержанием серы и азота [18]. Влияние на результаты фракционирования сродства между исследуемым соединением и материалом носителя было изучено на примере рацемической смеси поли-4-метилгексена-1 [19]. При фракционировании методом хроматографии [c.299]

Для опытов использовался хлористый аммоний особой чистоты А-Г, растворы готовились на свежеперегнанном тридистилляте. Исследование проведено с кристаллическим бычьим сывороточным альбумином фирмы Ko h-Light Laboratories, Ltd. и отчасти с кристаллическим препаратом альдолазы, выделенным из мышц кролика по методу, описанному в работе [6]. Гомогенность белковых препаратов проверялась с помощью гель-фильтрации на сефадексе G-100 и электрофореза в полиакриламидном геле. [c.229]

Эти смолы и соответствующие им амберлиты ША-400 и Ш-120 употребляются чаще в виде смесей в целях обессоливания белковых растворов, чем для истинных хроматографических операций [35, 36]. В тонкоизмельченном виде эти смолы иногда дают хорошее хроматографическое разделение, однако они обладают одним серьезным недостатком — низкой емкостью. Боман [37] систематически исследовал смолу дауэкс 2 (200—400 меш), имеющую 8—10% поперечных связей, и выяснил ряд интересных фактов. Перед использованием смолу промывают 1 н. раствором НС1. После насыщения смолы буфером при pH 7,3 на ней адсорбируют белки сыворотки при низкой ионной силе (0,02—0,04 М) и элюируют путем ступенчатого повышения молярпости буферного раствора. При использовании катионного буфера трис-НаХ pH регулируется лучше, чем при использовании анионного буфера, например ацетатного. Емкость дауэкс 2 при pH 7,3 для сывороточного альбумина составляет 0,5 лгг/лгуг смолы, поэтому для разделения следует использовать колонку, близкую к пределу насыщения. Как и при работе с фосфатом кальция, индивидуальный блок может элюироваться в виде нескольких небольших пиков, соответствующих разности между теми количествами белка, которые насыщают смолу при данных концентрациях солей. Боман нашел, что порядок элюирования белков сыворотки с дауэкс 2 отличается не только от порядка распределения их при электрофорезе, но также отданных, полученных при разделении на [c.232]

Проведенные опыты на амфотерной смоле БАК-6 показали необходимость более тонкого разделения белковых гидролизатов, для чего было-применено фракционирование на сефадексе С-25. На колонну с параметрами 10x70 см вводилось 10 г ферментативного гидролизата сывороточного альбумина. Полученный элюат был разделен на 22 фракции, каждая из которых была изучена по следующим показателям определялся среднечисленный молекулярный вес, определялось число компонентов высоковольтным электрофорезом на бумаге, а также проводилось сравнение выходных кривых с аналитической колонки и определение концевых групп до и после превращения на смоле КМТ. Данные такого опыта частично приведены в табл. 2. [c.174]

Для гиалуроновой кислоты Огстон и сотр. [30—32] получили данные, свидетельствующие о том, что гиалуроновая кислота из синовиальной жидкости быка представляет собой комплекс с белком, содержание которого равно 26—30%. При выделении в мягких условиях (дифференциальное фильтрование, использование хлористого цетилпиридиния) гиалуроновую кислоту не удается освободить от этого белка. Белок не отделяется и при электродиализе. Огстон и Шерман [33] сообщили, что электродиализ синовиальной жидкости быка при 37 ма (5,6 ма/см , 0,025 М фосфат, pH 7,0, 2°) вызывает быстрое удаление белка через мембрану (миллипоровые мембраны с диаметром пор 0,4 мк), но даже после 36 час содержание белка в комплексе не уменьшается. Тот же результат был получен при электродиализе чистого комплекса белка с гиалуроновой кислотой при 37 ма в течение 12 час — времени, которое необходимо для удаления 90% общего белка синовиальной жидкости. Сывороточные альбумин и углобулин легко проходят через мембрану. Огстон и Шерман так объяснили свои результаты Поскольку есть основания считать, что присутствующий в комплексе белок обладает нормальным размером молекул, и, следовательно, в свободном виде он должен легко проходить через миллипоровую мембрану (как проходят все остальные белки синовиальной жидкости быка и два исследованных белка сыворотки), полученные данные указывают, что этот белок нельзя выделить из комплекса простым электрофорезом . [c.32]

Как уже отмечалось, качество разделения при проведении электрофореза в градиенте плотности сахарозы зависит от толщины стартовой зоны, которая в свою очередь определяется конструкцией аппарата и способом введения пробы. Однако даже в идеальных условиях стартовая зона, как правило, составляет несколько миллиметров, и в целях повышения разрешающей силы электрофореза ее желательно уменьшить. Принцип диск-электрофореза в полиакриламидном геле позволяет создавать очень тонкие стартовые зоны путем концентрирования белков, находящихся в исследуемом растворе. Именно поэтому он дает более эффективное разделение по сравнению с зональным электрофорезом в градиенте плотности. С другой стороны, извлечение белков из узких зон в полиакриламидном геле сложнее, чем из растворов с градиентом плотности. Процедура, сочетающая преимущества обоих методов, позволяет получать узкие стартовые зоны и легко выделять разделившиеся вещества из градиента плотности. Шастер и Шрир [1150] описали очень простой прибор для практического воплощения этой идеи. Электрофорез проводили в U-образной трубке. В обоих ее коленах над колонкой с градиентом плотности помещали слой полиакриламидного геля. Зоны, разделенные в геле, мигрировали затем в градиент плотности, где расширялись не более чем в 2—3 раза по сравнению с их толщиной в геле. Эта установка отличается довольно большой емкостью за один прием авторам удалось разделить 50 мг бычьего сывороточного альбумина, и, по их мнению, емкость должна быть еще больше при разделении более сложной смеси белков. [c.32]

Белки после электрофореза на бумаге или ацетате целлюлозы окрашивают также бромкрезоловым зеленым (0,2%-ный раствор в этаноле, содержащем 2% ледяной уксусной кислоты). Обесцвечивание фона проводят в 2%-ной уксусной кислоте. После обесцвечивания и высушивания электрофореграммы помещают в пары аммиака. Синняя окраска медленно исчезает [336]. Уэбстер и др., [1381] исследовали возможность применения этого красителя для определения сывороточного альбумина после электрофореза на ацетате целлюлозы. Для количественной оценки окрашенную зону альбумина элюируют 3%-ным (объем/объем) раствором детергента Teepol 610. Элюция занимает всего несколько минут. Количество альбумина определяют по оптической плотности при 520 им. Было изучено также взаимодействие выделенных фракций глобулинов сыворотки с бромкрезоловым зеленым, [1381]. [c.272]

Рис. 77. Результаты электрофореза бычьего сывороточного альбумина на полиакриламидном геле (денситометр Zeiss).

В настоящее время качественный состав и содержание сывороточных белков определяют с помощью электрофореза на бумаге и в полиакриламидном геле в небольшом количестве сыворотки крови. Типичная электро-фореграмма белков сыворотки крови, а также соотношение отдельных фракций представлены в главе 11. Альбумины и глобулины отличаются друг от друга также по молекулярной массе — соответственно 40000—70000 и 150000 и более. [c.74]

Смотреть страницы где упоминается термин Сывороточный альбумин электрофорез: [c.79] [c.103] [c.148] [c.177] [c.222] [c.293] [c.348] [c.303] [c.342] [c.153] [c.303] [c.342] [c.318] [c.353] [c.367] [c.49] [c.109] [c.104] [c.135]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология