Аминокислоты восстановление карбоксильных

Известные в настоящее время методы определения С-концевых остатков менее удовлетворительны. Для этого определения может быть использован фермент карбоксипептидаза (представляющий собой, по существу, группу сходных ферментов). Карбоксипептидаза действует только на свободные а-карбоксильные группы, подобно тому как лейцинаминопептидаза действует на свободные а-аминогруппы. Другой метод, разработанный Акабори, основан на полном гидразинолизе полипептида. Гидразин реагирует с каждой пептидной связью, превращая все аминокислоты (за исключением С-кон-цевой, карбоксил которой не участвует в образовании пептидной связи) в ацилгидразипы. С-концевую аминокислоту отделяют и идентифицируют хроматографически. Значительно реже используется метод, основанный на восстановлении С-концевой карбоксильной группы до спиртовой с помощью подходящих доноров гидрид-иона. При последующем полном гидролизе полипептида образуется аминоспирт, соответствующий С-концевой аминокислоте. Этот аминоспирт может быть выделен и идентифицирован. [c.88]

Гидролиз белков ЗМ /г-толуолсульфокислотой или АМ метан-сульфокислотой [7,8], содержащей 0,2% триптамина, в вакууме при 110°С, в течение 3 суток с хорощим выходом приводит к аминокислотам, включая триптофан, однако углеводы могут мешать. Триптофан можно определять также после щелочного гидролиза, но при этом разрушаются полностью аргинин, цист(е)ин, серин и треонин. Общее содержание амидов, обусловленное наличием аспарагина и глутамина, можно определить после гидролиза 10 М НС1 при 37°С в течение 10 суток и последующего анализа на аммиак с помощью микродиффузионной техники. Раздельное определение аспарагина и глутамина можно провести с помощью предварительной этерификации (метанол-уксусный ангидрид) свободных карбоксильных групп, последующего восстановления (борогидрид лития) образовавшихся сложноэфирных групп и определения аспарагиновой и глутаминовой кислоты после кислотного гидролиза соответственно в виде v-гидрокси-а-аминомасляной кислоты и б-гидрокси-а-аминовалериановой кислоты. Содержание аспарагина и глутамина получают путем вычитания этих величин из содержания аспарагиновой и глутаминовой кислот после полного гидролиза немодифицированного белка. Полный ферментативный гидролиз белков без деструкции аминокислот можно осуществить, используя смешанные конъюгаты Сефарозы с трипсином, химотрипсином, пролидазой и аминопептидазой М [9] [c.260]

Другой метод определения С-концевой аминокислоты основан на восстановлении концевой карбоксильной группы литийалюминийгидридом. Белок перед восстановлением полезно этерифицировать диазометаном. Полный гидролиз дает легко выделяемый и идентифицируемый амино-спирт, соответствующий С-концевому остатку аминокислоты. [c.369]

Восстановление карбоксильной группы аминокислоты в ме-тильную достигается путем превращения соответствующего спирта в ди-0,Ы-п-толуолсульфонильное производное последнее восстанавливают литийалюминийгидридом в N-ra-толуолсульфо-нильное производное желаемого амина [138]. [c.37]

Сложные эфиры нитро-(или амино-) бензойной кислоты и ее производных могут быть получены нагреванием соответствующей карбоновой кислоты с абсолютным спиртом в присутствии серной кислоты или хлористого водорода [ ], при нагревании серебряной соли кислоты с галоидалкилом в запаянной трубке [ ] из хлорангидрида кислоты и спирта. Мы использовали в основном первый метод однако в ряде случаев обращались и к другим. Для получения бутилового эфира 4-нитро-2-хлорбензойной кислоты была использована реакция конденсации бутилового спирта с хлорангидридом кислоты, бутиловые эфиры -4-амино-2-хлорбензойной кислоты и 5-аминосалициловой кислоты были получены как этерификацией аминокислот, так и восстановлением эфиров соответствующих нитрокислот. Все эфиры получены с удовлетворительным выходом, 70—80 /о от теоретического. Несколько ниже выход бутиловых эфиров 5- и 4-аминосалициловой кислот, что,, очевидно, связано со сравнительно легкой окисляемостью этих соединений. Дибутиловые эфиры 5-нитро- и 4-нитросалициловой кислот были получены нагреванием соответствующего монобутилового эфира с бромистым бутилом. Известно Р ], что этерификация фенольного. гидроксила значительно затрудняется наличием -расположенной карбоксильной группы, а также наличием нитрогрупп в ядре [ ]. В описываемом нами случае, для получения удовлетворительного выхода (приблизительно 90% от теоретического) конденсация проводилась, в сравнительно жестких условиях в запаянной трубке при 190—200° [c.504]

Некоторые фенолы, содержащие сильные электроноакцепторные группы, например пикриновая кислота, альдегиды фенольного ряда [277] и оксиметиленкетопы, обладают сильнокислыми свойствами, сравнимыми со свойствами карбоновых кислот присутствие некоторых других групп (например, — SO3H) также придает молекуле кислотные свойства. В карбоновых кислотах, содержащих основные группы (например, в аминокислотах), кислотность карбоксильной группы часто уменьшается однако для соединений, содержащих первичную или вторичную аминогруппу, ацетилирование может привести к восстановлению нормальных свойств карбоксильной группы. Подобные соединения после реакции с формальдегидом также титруются как кислоты [348]. Влияние окружения на кислотность уже обсуждалось (см. кн. I гл. 6). [c.27]

С-концевая аминокислота в белках может быть установлена при помощи восстановления карбоксильной группы (например, литийборгидридом), в спиртовую, после чего в продуктах гидролиза обнаруживают С-концевую аминокислоту в виде соответствующего аминоспирта. С-концевую аминокислоту можно определять и ферментативным Бутем, действуя на белок карбоксипептидазой (стр. 334), которая гидролизует полипептидную цепь с карбоксильного конца. [c.41]

Восстановление карбоксильной группы. При восстановлении аминокислот LiAUij и LiBHi образуются соответствующие аминоспирты, причем эфиры аминокислот восстанавливаются значительно легче, чем свободные аминокислоты [c.38]

Ферментативное расщепление. Хорошие результаты дают протеолитические ферменты, в первую очередь трипсин и химотрипсин а также пепсин Известно, что трипсин разрушает белок преимущественно но пептидным связям, образованным карбоксильными группами аргинина и лизина химотрипсин гидролизует нентидные связи, в образовании которых участвуют карбоксильные группы ароматических аминокислот (фенилаланина, тирозина и триптофана). Снецифичностт. пепсина менее ясно выражена, хотя в принципе близка к химотрипсину (атака вблизи ароматических аминокислот). Другие ферменты, такие, как термолизин плесневая нротеаза папаин тоже находят применение при гидролизе белков. Ферментативный гидролиз проводят при 37—40° С в течение нескольких часов при оптимальном для данного фермента значении pH. Ниже показано действие протеолитических ферментов на полипептидную цепь восстановленного лизоцима белка яиц (Т — трипсин, X — химотрипсин, П — пепсин, СМС — карбоксиметилцистеин) [c.79]

Стрейзингер и Цугита получили двойной мутант фага Т4 с восстановленной фазой считывания, несущий две близко лежащие мутации противоположного знака в гене лизоцима. Из клеток Е. oli, зараженных этим мутантом, выделили лизоцим и сравнили его аминокислотную последовательность с последовательностью лизоцима, полученного из клеток зараженных фагом дикого типа. Оказалось, что лизоцим, образующийся при заражении двойным мутантом с восстановленной фазой считывания, содержит сегмент с ненормальной последовательностью аминокислот этот сегмент представлен на нижеследующей схеме вместе с соответствующим сегментом белка дикого типа. (Следует иметь в виду, что в приведенных аминокислотных последовательностях остатки аминокислот слева находятся в полипептидной цепочке ближе к аминоконцу, а остатки справа — ближе к карбоксильному концу.) [c.445]

Хотя из литературных данных известно, что изучались различные химические методы определения С-концевых аминокислот [206], ни один из этих методов не обнаружил достаточно удовлетворительных результатов, которые давали бы основание к его широкому использованию. Поэтому наибольшее распространение получил способ, основанный не на химической, а на ферментативной реакции с карбоксипептидазой — ферментом, реагирующим лишь с теми пептидами, которые содержат свободную карбоксильную группу. Поскольку рассмотрение ферментативных реакций выходит за рамки настоящего раздела книги, реакция с карбоксипептидазой в данном изложении не описывается. Следует отметить, однако, что проблема развития химии белка настолько важна, что вполне оправданы постоянно продолжающиеся исследования, направленные на поиск и разработку удобных и с широкими возможностями применения химических методов. Было показано, что для установления последовательности аминокислот с С-конца белковой молекулы по крайней мере ограниченное применение могут найти три разных химических метода, так как они дают результаты, подтверждающие данные, получающиеся при использовании карбоксипептидазы. Речь идет о гидразинолизе, этерификации с последующим восстановлением сложноэфирной группы на конце молекулы в спиртовую, а также о реакции с неорганическим тиоци-анатом. [c.376]

Твердофазный синтез правильнее всего рассматривать как особый случай ступенчатого синтеза пептидов с С-конца (т. е. с карбоксильного конца пептида). Соединение С-концевой аминокислоты с полимером в действительности является замещенным бензиловым эфиром, а химические процессы твердофазного пептидного синтеза по существу такие же, как в случае проведения ступенчатого синтеза бензилового эфира пептида в растворе, за исключением того, что пептиды с полимера невозможно удалить путем восстановления эфира водородом. Другая важная отличительная особенность твердофазного синтеза состоит в том, что для получения однородного продукта необходимо, чтобы все реакции протекали со 100%-ным выходом, так как в ходе синтеза очистка промежуточных веществ не проводится. На практике это означает, что по сравнению с обычным методом необходимо использовать более энергичные реагенты и более длительное время реакции для полного деблокирования аминогруппы, а также брать несколько молей каждой новой активированной аминокислоты для обеспечения полного включения этого аминокислотного остатка в пептидную цепь. При этом неизбежно некоторое увеличение расхода аминокислот, особенно при использовании карбодиимидного метода конденсации, так как в этом случае избыток аминокислоты нельзя регенерировать (активное промежуточное производное аминокислоты переходит в стабильную ацилмоче-вину и теряется как побочный продукт). Однако значительно более высокая скорость работы, достигаемая при твердофазном синтезе, и общие выходы, которые обычно очень высоки, в целом компенсируют этот недостаток. Теоретически в случае использования активированных эфиров на стадии конденсации производные аминокислот можно регенерировать. [c.19]

Аспарагиновая и глутаминовая кислоты. -Карбоксильные группы этих аминокислот при твердофазном синтезе удовлетворительно защищаются бензиловыми эфирами, которые удаляются всеми обычными методами деблокирования функциональных групп боковых радикалов аминокислот. В одной из работ, где было желательно сохранить карбоксил глутаминовой кислоты защищенным даже после отщепления пептида от полимерного носителя [143], глутаминовую кислоту вводили в пептид в виде у-п-нитробензилового эфира N -7 peт-бyтилoк икapбoнилпpoизвoднoгo. Указанный эфир был устойчив к действию бромистого водорода в трифторуксусной кислоте позднее его удаляли восстановлением. Из-за плохой растворимости у- г-бен-зилглутамата синтез этого производного вызвал проблему, решить которую удалось путем разработки нового метода введения грег-бутилоксикарбонильной [c.55]

Для восстановления С-концевых аминокислот ди- и трипеп-тидов использовали коммерчески доступный дигидробис(2-мето-ксиэтокси) алюминат натрия [75]. Метод позволяет исключить предварительную этерификацию карбоксильных групп. Аминоспирты идентифицировали бумажной хроматографией. До сих пор неизвестно о применении этого способа восстановления для определения С-концевых аминокислот белков. Сообщалось, что NaBH4 в водном растворе (но не в органическом растворителе) селективно и почти количественно восстанавливает этерифици-рованные С-концевые аминокислоты в соответствующие спирты [32]. При работе с лизоцимом, инсулином быка, конканавалином А были получены ожидаемые производные, при этом не была обнаружено побочных процессов. Этот подход может быть доведен до практической методики С-концевого анализа белков, хотя дальнейшее развитие событий во многом зависит от степени надежности аналитического определения аминоспиртов, получающихся из всех обычных аминокислот. [c.497]

Глутатионпероксидаза. Этот фермент катализирует восстановление пероксида водорода за счет окисления глутатиона. Глутатион представляет собой трипептид т глутамилцистеинилглицин остаток глутаминовой кислоты в этом пептиде соединен со следующей аминокислотой своей т карбоксильной группой [c.455]

Смотреть страницы где упоминается термин Аминокислоты восстановление карбоксильных: [c.513] [c.50] [c.160] [c.38] [c.41] [c.679] [c.315] [c.258] [c.619] [c.152] [c.426] [c.432] [c.257] [c.297] [c.665] [c.510] [c.485] [c.29] [c.303]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология