Ассоциация белков

Свободная энергия ассоциации белка [c.124]

Изучение обратимой ассоциации белков.....40 4 [c.197]

Изучение обратимой ассоциации белков.....404 [c.197]

Как видно из рис. 3, при добавлении к ЛДГ ПГ в концентрации 2,6-10- М константа ассоциации белка меняется от 6,8-10 до 2,4-10 М- , а при концентрации ПГ 1 10 Л/ — до 0,50 10 [c.153]

Особенно заманчиво пренебречь этим правилом в случае ионных взаимодействий и, например, считать, что заряженные труппы создают движущую-силу ассоциации белка, если белок может диссоциировать при добавлении соли. Допустим, что заряженные группы на полимере примыкают к диполям пептидных связей и что свободная энергия их переноса в воду равна нулю или даже отрицательна (рис. 9). Другая возможность состоит в образовании ионной пары в полимере, но это не будет сказываться на стабильности полимера, так как одно-одновалентная ионная пара, как известно, обладает малой устойчивостью в воде. В любом случае добавление соли, которая энергетически благоприятно взаимодействует с заряженными группами, будет способ- [c.296]

Однако экспериментальные данные, полученные Шубертом с соавторами [30, 57] (см. также обзор [43]), показали, что белок полосы 3 способен к образованию ассоциатов большего размера, чем димер. Тип ассоциации белка полосы 3 пока не известен. В соответствии с представлениями о структуре интегральных мембрано-связанных белков, изложенными в предыдущей главе, мы полагаем, что ассоциация белка полосы 3 ведет к образованию замкнутых структур, а именно к образованию тримера димеров (то есть гексамера). [c.178]

Мембранные ферменты изменяют свою активность под влиянием продуктов ПОЛ, что может быть обусловлено образованием комплекса окисленный липид — белок, ассоциацией белко- [c.240]

Для детального описания мембранных белков требуется знать ие только то, на какой поверхности они находятся, но и их распределение по этой поверхности. Белки могут перемещаться в мембране независимо, а могут быть связаны с другими белками. Они способны образовывать симметричные олигомеры, спиральные или пластинчатые структуры. О четвертичной структуре мембранных белков почти ничего не известно. Этот вопрос вызывает особый интерес в связи с возможностью образования каналов в мембране либо при участии отдельных молекул белка, имеющих внутреннюю полость, либо в результате ассоциации белков с образованием структуры с полостью посередине. Предположение о наличии каналов возникает всякий раз, когда мембрана становится хорошо проницаемой для ионов, так как чистые липидные бислои являются хорошими изоляторами. Однако о механизме образования каналов и о регуляции их проницаемости на молекулярном уровне известно очень мало. [c.224]

Модель Эдера является самой общей из возможных моделей связывания лиганда чистым неассоциирующим белком в равновесных условиях. Под чистым белком понимается белок, способный находиться в различных изомерных формах, равновесие между которыми устанавливается очень быстро кроме того, подразумевается, что изомеризация не включает процессы диссоциации—ассоциации белка. Рассмотрим модель Эдера для белка, содержащего четыре связывающих центра на молекулу и представленного двумя находящимися в равновесии формами — активной (Е) и неактивной (Е ) [c.173]

Пример 14-И. Ассоциация белка. Изменения спектров в процессе ассоциации белка могут быть вызваны следующими причинами либо хромофоры, находившиеся на поверхности, попали в участок связывания и стали недоступны растворителю, либо произошла конформационная перестройка, в результате которой хромофор стал недоступным или доступным, но в другой части молекулы. Следовательно, как в примере 14-3, по спектральным изменениям можно контролировать наличие взаимодействия молекул белка и посредством этого определять условия, кинетику этого процесса и т. д. (рис. 14-20). [c.404]

При исследовании влияния pH на реакции ассоциации белков всегда следует иметь в виду, что изменение суммарного заряда составляет только часть тех изменений, которые происходят в макромолекуле белка в зависимости от pH. Мы уже отмечали, что при этом могут происходить конформационные превращения, но даже и в отсутствие их будут происходить изменения, которые могут влиять на равновесие реакции ассоциации. Например, на рис. 154 показана зависимость молекулярного веса Р-лактоглобулина от величины pH. В нормальном состоянии его макромолекула состоит из двух рыхло соединенных полипептидных цепеч, каждая из которых имеет молекулярный вес 17 500, и только когда величина положительного заряда приближается к максимальной, макромолекула диссоциирует на две отдельные цепи. Одна (О при температуре 2 °С появляются также агрегаты более высокого молекулярного веса, имеющие наибольшую устойчивость вблизи рН=4,6. Характер диссоциации этих агрегатов при значениях pH более кислых, чем 4,6, находится в согласии с нашими ожиданиями и действительно, как было показано Таунендом и Тимашевым , хорошо согласуется с тем, что предсказывает уравнение [c.590]

Экстракция растворимых белков из тканей может происходить только после разрушения клеточных оболочек, так как последние непроницаемы для больших белковых молекул. Разрушения клеток можно достичь механическим путем, растирая их с песком или с кизельгуром однако при этом наблюдается некоторая потеря белка за счет денатурации, вызываемой адсорбцией белка на силикате. По этой причине лучше разрушать клетки такими приборами, как мясорубка Латапи или гомогенизаторы. Структура клетки разрушается также при действии органических растворителей, например спирта, ацетона или глицерина. Если концентрация глицерина не превышает 85%, то в глицериновый экстракт переходит значительная часть растворимого белка. Этим способом можно экстрагировать гидролитические ферменты из поджелудочной железы и из других органов. Глицериновые экстракты при комнатной температуре относительно стабильны. Повидимому, рыхлая ассоциация белка с полярными гидроксильными группами глицерина уменьшает скорость его денатурации. Однако эти же полярные группы в молекуле глицерина обусловливают взаимное притяжение его молекул и высокую вязкость этого растворителя. Из глицериновых экстрактов очень трудно поэтому получить чистые препараты белков. В связи с этим глицерин в настоящее время редко применяется для разрушения клеточных оболочек. Вильштеттер и его сотрудники для разрушения клеток пользовались ацетоном. Этот метод основан на том, что многие белки при концентрации ацетона выше 80—90% денатурируются очень медленно. Для экстракции размельченный или пропущенный через мясорубку орган помещают в ацетон. Преимущество этой процедуры заключается в том, что ацетон не только разрушает клеточные оболочки, но одновременно экстрагирует из клеток и большинство липидов. Липиды можно затем удалить количественно при последующей обработке эфиром. Остаток после удаления липидов высушивается на листе фильтровальной бумаги и экстрагируется водой, разведенными растворами солей или буферов. Хотя большинство белков, в том числе много важных ферментов, можно получить из ацетоновых вытяжек в нативном состоянии, однако надо помнить, что некоторые лабильные белки при действии этого растворителя денатурируются. [c.10]

Вторая стадия этой реакции протекает сравнительно медленно, и ее можно проследить в любом направлении, наблюдая за изменениями интенсивности рассеянного света [970]. Температурная зависимость равновесия при ассоциации показывает, что процесс димеризации протекает эндотермически, причем его движущей силой является, очевидно, гидрофобное взаимодействие. Такая зависимость характерна для ряда процессов ассоциации белков, которые к тому же, как правило, связаны с точным геометрическим соответствием белковых молекул в агрегате. [c.336]

При изучении белков плазматической мембраны эритроцитов человека методом электрофореза в ПААГ в присутствии ДСП удается идентифицировать около 15 главных белков с молекулярной массой от 15000 до 250000. Три из них - спектрин, гликофорин и так называемая полоса 3- составляют в сумме более 60% (по весу) всех мембранных белков (рис. 6-24). Все три белка связываются с мембраной по-разному. Поэтому мы рассмотрим данные белки в качестве примеров трех главных способов ассоциации белков с мембранами. [c.365]

Участие посторонних белков в сборке, как оказалось, не соответствует традиционному представлению о наличии прямой аналогии между механизмами свертывания полипептидных цепей в искусственных условиях и клетке. Ставшие известными функции молекулярных шаперонов потребовали определенной коррекции давно сформулированного и многократно подтвержденного в опытах in vitro принципа не нуждающейся в каких-либо посредниках самосборки белка. Выяснилось, что это не совсем так. Более того, оказалось, что в сложных клеточных условиях нужны белки, ассистирующие не только котрансляционное и посттрансляционное свертывание полипептидных цепей, но и помогающие транспорту белковых молекул через мембраны, реорганизации, диссоциации и ассоциации белков в олигомерные комплексы, сборке олигомеров внутри органелл и ликвидации белковых повреждений, вызванных стрессовыми и иными внешними воздействиями. [c.420]

Таким образом, различные химические и физические воздействия, ведущие к возникновению новых молекулярных форм, должны, по-видимому, осуществляться на более ранних стадиях секреции. Среди возможных причин образования множественных форм целлюлаз — наличие подлинных изоферментов, кодируемых отдельными генами и выполняющих различные функции, неодинаковые способы сплайсинга мРНК, транскрибируемых с одного гена, комплексирование с индивидуальными углеводными компонентами, ассоциация белков и диссоциация надмолекулярных образований, модификация ферментного белка протеолити-ческимп ферментами и, наконец, воздействие физико-химических факторов среды при соответствующих условиях культивирования микроорганизма-продуцента. Множественность компонентов, кроме того, может выступать как артефакт в процессе выделения ферментов (Рабинович,1987). [c.47]

Пример 15-Н. Обнаружение ассоциации белков. Поляризация флуоресценции ДНС-производных а-химотрипсина, химотрипси-ногена и лактатдегидрогеназы возрастает, когда белки самоас-социируют, так как увеличение размера частицы приводит к понижению подвижности (следствие 3 в табл. 15-2). Следовательно, измеряя изменения поляризации, можно исследовать само-ассоциацию и диссоциацию. Этим путем можно изучать эффекты pH, ионной силы и состава растворителя, так как они оказы-вают небольшое влияние (или совсем не влияют) на саму поляризацию (т. е. если ферменты так разбавлены что ассоциация невозможна изменений поляризации под действием этих факторов не наблюдается). [c.441]

Некоторые стрессовые белки оказывают протекторное действие, ассоциируя с митохондриями во время теплового стресса (Войников, Рудиковский, 1988 hou et al., 1989). Быстрое разобщающее действие БХШ 310, известные случаи ассоциации белков с митохондриями и приведенные выше данные о наличии БХШ 310 в цитоплазме и митохондриях холодостойких злаков позволили предположить, что во время холодового шока происходит ассоциация БХШ 310 с митохондриями. Для проверки этого предположения был проведен модельный эксперимент инкубации изолированных митохондрий с БХШ 310 в условиях гипотермии. ДДС-Na электрофорез в ПААГ с последующим вестерн-блоттингом (рис. 32,А-Б, 3) выявил увеличение содержания субъединиц БХШ 310 в митохондриях после 30 мин их инкубации с БХШ 310. [c.64]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология