Культуральные пробирки

Содержание и выращивание культуры. Для пересева культуры в другой сосуд необходимо приготовить подходящую питательную среду. Известен ряд питательных смесей, причем они могут быть или жидкими, или отвержденными (гелеобразными), включая такую гелеобразную среду, ка с агар-агар. На языке микробиологов термин среда означает жидкую питательную среду, а агар — твердую (но совершенно не обязательно имеется в виду сам агар-агар). Многие культуральные среды имеются в продаже, включая как твердые среды [в культуральных пробирках или на культуральных пластинках (чашках Петри)], так и сухие смеси. Последние при растворении в воде превращаются в жидкие среды, которые надо стерилизовать. В каталоге АТСС приведены примеры типичных сред и их состав, а также указано, какую среду предпочтительно использовать для каждой культуры. [c.216]

Технология получения аминокислот базируется на принципах ферментации продуцентов и выделении вторичных метаболитов, то есть размножают маточную культуру вначале на агаризованной среде в пробирках, затем — на жидкой среде в колбах, инокуляторах и посевных аппаратах, а затем в головных (основных) ферментаторах. Отработку культуральных жидкостей и выделение аминокислот проводят по схеме, аналогичной схеме получения антибиотиков (см.). Изолированные чистые кристаллы целевого продукта обычно высушивают под вакуумом и упаковывают. [c.446]

Хранение. Часто для хранения на необходимый период времени (3—6 месяцев) культуру, выращенную на агаре, в культуральной пробирке помещают в холодильник. Существуют также способы более длительного хранения культуры, однако в основном это уже больше касается только микробиологов Химик же, у которого случайно погибла нужная культура, может всегда получить ее вновь из коллекции. [c.216]

Инокулят готовят следующим образом. В пробирки вносят полную среду С с двойной концентрацией (табл. 7.14), содержащую 0,2% дрожжевого экстракта, разбавляют равным объемом дистиллированной воды, отбирают аликвоты объемом по 10 мл в культуральные пробирки, закрывают пробками и стерилизуют автоклавированием. Некоторые пробирки с инокулятом можно приготовить заранее и хранить при 5 С. За день до определения с помощью инокулирующей иглы переносят часть бактерий с соблюдением правил асептики с агарового косячка в другую пробирку со средой и инкубируют ее при 37 °С в течение 15—18 ч. Непосредственно перед экспериментом клетки собирают центрифугированием. Надосадочную жидкость декантируют, а клетки суспендируют в 10 мл стерильной воды. Вновь центрифугируют и суспендируют клеточный осадок в 10 мл стерильной воды, получая таким образом отмытую суспензию бактерий для последующей инокуляции. [c.266]

Для размораживания клеток ампулы извлекают из жидкого азота, помещают в водяную баню при 37 °С. После полного размораживания клетки стерильно переносят в пробирки и отмывают центрифугированием в 50 мл ростовой среды. Супернатант удаляют, клетки суспендируют в свежей порции ростовой среды (15—25 мл) и помещают в культуральный матрас. На следующий день 100 мкл суспензии клеток смешивают со 100 мкл трипанового синего и подсчитывают живые клетки в камере Горяева (трипановый синий окрашивает только поврежденные клетки). Жизнеспособность размороженных клеток обычно составляет не менее 80%. [c.314]

На основании морфологических и культуральных свойств трудно дифференцировать пневмококки от зеленящих стрептококков. Для этого применяют реакцию растворения пневмококков желчью 1 мл бульонной культуры вносят в стерильную пробирку и добавляют 0,5 мл бычьей желчи (дезоксихолата). Через 10— 15 мин инкубирования в термостате происходит полный лизис пневмококков, а культура зеленящего стрептококка желчью не лизи-руется. [c.114]

Микологическое исследование. Посев материала дает возможность на основании изучения культуральных свойств определить род грибов — возбудителей дерматомикозов. Исследуемый материал сеют на плотную среду (например, агар Сабуро с глюкозой, гентамицином и пенициллином или агар Сабуро с 2 % дрожжевого лизата, метиленовым синим и стрептомицином). Для этого волосы или чешуйки измельчают и 4—5 кусочков переносят на поверхность среды в пробирке, которую инкубируют при 27 °С или при комнатной температуре. Через 3—4 нед после посева образуются колонии, типичные по морфологии, консистенции и цвету. На основании изучения структуры колоний и данных их микроскопии определяют вид гриба. [c.325]

Более подробно условия оптимизации аэрирования в лабораторных культуральных сосудах описываются в разд. 10.1.2. Условия обеспечения строгого анаэробиоза для культур в пробирках приведены в разд. 6.6. [c.383]

Пробирки с культурами закрывают резиновыми пробками и инкубируют. После того как культуры вырастут, из пространства над культуральной средой отбирают пробы газа, вводя иглу шприца через резиновые пробки. Для этого пользуются 1- или 5-мл пластмассовым шприцем одноразового пользования с иглой длиной [c.48]

Перенесите культуральную среду с митотическими клетками в центрифужную пробирку. [c.267]

Для выяснения антивирусного действия продуктов жизнедеятельности определенного организма кусочки ткани заражают соответствующим видом вирусов и вносят в пробирки, содержащие культуральную жидкость (при pH 7,0) исследуемого организма. Пробирки помещают в барабан на 48 ч. [c.160]

Пробирочный метод. Модификацией чашечного метода служит метод испытания противораковой активности антибиотиков в пробирках. Метод состоит в следующем. В стандартные пробирки вносят 0,5 мл испытуемой культуральной жидкости и 0,5 мл взвеси клеток асцитного рака Эрлиха (конечная концентрация клеток 500 тыс./мл), затем добавляют 2 мл расплавленной агаровой среды, содержащей метиленовый синий. В контрольные пробирки вместо испытуемой культуральной жидкости добавляют 0,5 мл среды, на которой выращивают изучаемый организм. После перемешивания пробирки помещают на 3-4 ч в термостат при 36-37 °С. [c.165]

Метод последовательных разведений. Метод используется для определения количества антибиотика в культуральных жидкостях, растворах или в экстрактах. Он также применяется для обнаружения антибиотика при вьщелении новых продуцентов. Для работы подготавливают питательный бульон, пригодный для развития выбранного тест-организма. Непременное условие бульон должен быть прозрачным. Одновременно с этим подготавливают и культуру тест-организма. Стерильный питательный бульон разливают в чистые стерильные пробирки количество бульона должно обеспечивать нужную степень разведения изучаемого антибиотика. [c.167]

Иногда под действием испытуемого антибиотика возникают устойчивые к нему формы тест-микроба. Появление даже единичных резистентных клеток, которые могут в дальнейшем развиться, приведет к ошибочным результатам при определении биологической активности препарата. Чтобы избежать подобного явления, для разведений используют не бульон, а агаризованные среды, разлитые в пробирки. После разведения пробирки ставят в наклонном положении, с тем чтобы получить косячки застывшего агара. На поверхность скошенного агара микробиологической петлей высевают суспензию тест-микроба. После этого пробирки помещают в термостат на 24 ч при температуре, оптимальной для развития тест-организма. Активность рассчитывают тем же способом, что и при разведении антибиотика (культуральной жидкости) в жидкой среде. Появление одиночных колоний, образовавшихся из резистентных форм, в расчет не принимают. [c.170]

Определение биомассы состоит из трех последовательных операций доведения массы центрифужных пробирок или фильтров до постоянного значения, отделения клеток микроорганизмов от культуральной жидкости, определения их массы. Чаще всего определяют массу сухих клеток, хотя иногда можно ограничиться определением сырой биомассы. В последнем случае первый этап отпадает достаточно только взвесить центрифужную пробирку (фильтр), но не доводить ее массу до постоянного значения. Биомассу обычно выражают в граммах или миллиграммах на литр культуральной жидкости. [c.129]

Пересев культуры. Пересев культуры с одной твердой среды на другую может потребоваться, если культуру необходимо хранить или для ее посева с целью дальнейшей ферментации. Пересев культуры на жидкую среду используют в том случае, когда требуется накопить большее количество культуры, что особенно важно для процесса ферментации. Первый из упомянутых процессов осуществляется с помощью инокуляционной петли или иглы, предварительно стерилизованной прокаливанием в пламени горелки. После этого петлю (иглу) надо охладить. (По одному из способов горячую петлю на мгновение вводят в пробирку, в которой находится агар,) Небольшое количество клеток культуры осторожно соскребают охлажденной петлей со среды и затем стряхивают на другую среду. Если обе среды помещаются в культуральных пробирках или колбах, то закрывающие их пробки (или ватки) удаляют асептически, а горлышки (выходные отверстия) кратковременно нагревают в [c.216]

Если для проведения процесса ферментации культуру пересевают в жидкую среду, то инокулят может состоять из вегетативных (растущих) клеток или спор (остаточные клетки, в какой-то степени аналогичные посевному материалу). Вегетативные клетки обычно, как уже описывалось выше, соскребают с помощью петли со среды в культуральной пробирке в стерильную жидкую среду, помещенную в соответствующим образом закрытую культуральную колбу. По другому способу в культуральную пробирку наливают стерилизованную воду, полученную взвесь перемешивают стерильной петлей, а затем стерильной пипеткой или простой декантацией получившуюся жидкость пересевают в приемиик или ферментер. При этом, естественно, все операции должны быть проведены с соблюдением полной асептики, включая и обработку пламенем горлышек всех сосудов. Пересев в виде взвеси в жидкости обычно используют в случае микроорганизмов, легко дающих обильное спорообразование, поскольку споры могут быть легко пересеяны и без применения петли, причем их можно достаточно быстро с помощью пипетки иноку-лировать сразу в нескольких колбах. В большинстве случаев ферментация протекает лучше (и с минимальным риском загрязнения) при обильной инокуляции, т. е. при условии внесения в новую колбу или ферментер сразу большого числа необходимых для роста клеток. Для осуществления такого рода обильной инокуляции необходимо накопить достаточно большое количество организма это требует неоднократной инокуляции, поэтому обычно необходимо иметь хорошо растущие клетки свежей культуры в количестве до 5—10% от ферментационного объема. [c.217]

Для размножения вирусов используют обычно не сам куриный эмбрион, а только слои клеток его оболочки (мембрана хориоаллан-тоида) перед инокуляцией эмбрион удаляют, и таким образом яйцо служит чем-то вроде культуральной пробирки для вирусов. При обработке (очистка, концентрация в ультрацентрифуге) содержащей вирус жидкости, которая находится между эмбриональными оболочками, получают чистый вирус. [c.151]

Культивирование фрагментов печени, почек, щитовидной железы и яичников кролика на небольших кровяных сгустках в культуральных пробирках впервые проведено Лёбом [1]. Он же показал, что эти ткани сохраняют свою нормальную гистологическую структуру в течение 3 сут. Его работы на Шлет опередили исследования Гаррисона [2] по культуре ткани. [c.214]

Полученный 20-кратный концентрат взвесн вируса распределяют равными порциями в пластиковые культуральные пробирки и храпят при 4°С. [c.273]

Приготовление суспензии миеломных клеток для гибридизации. Работа с клетками и культуральными средами должна проводиться в условиях, абсолютно стерильных 50 мл среды с культивируемыми миеломными клетками, находящимися в логарифмической стадии роста, центрифугируют в течение 8 мин при 800 об/мин, надосадок сливают в отдельную пробирку. Клетки суспендируют в 50 мл холодной ростовой среды без сыворотки (бессывороточная среда), отмывают центрифугированием при тех же условиях и суспендируют в 20 мл холодной бессывороточной среды. Клетки подсчитывают в камере Горяева. Их количество должно быть не менее 10 . [c.311]

После завершения фильтрования мембрану асептически делят на две приблизительно равные части. Переносят одну часть мембраны в сосуд (для этого пригодна пробирка), содержащий 50—100 мл культуральной среды Кс4 (меркаптоуксусная среда), другую часть мембраны помещают в другой [c.174]

В зависимости от размера упаковки берут от 1 до 10 порций, каждая по 0,3 г испытуемого материала, и асептически переносят их в отдельные стерильные сосуды (для этого пригодны пробирки), содержащие 50—100 мл культуральной среды Кеб (меркаптоуксусная среда с пенициллиназой). Помещают порции такого же размера в другой набор отдельных стерильных сосудов, содержащих 50—100 мл культуральной среды Кс7 (гидролизат соевой муки и казеина с пенициллиназой). [c.175]

Трипсинизацию повторяют несколько раз. Взвесь клеток центрифугируют при 600 об/мин в течение 5—10 мин, ресуспендиру-ют в питательной среде и окрашивают фуксином, метиленовой синью или другими красителями, а затем определяют их концентрацию в камере Горяева. Клеточную взвесь разводят питательной средой до концентрации (4 — 8) 10 клеток в 1 мл, разливают в культуральные сосуды, плотно закрывают резиновыми пробками и культивируют в термостате при 35 — 37 °С в течение 48 — 96 ч (пробирки кладут под углом 5°), после чего отбирают культуры с хорошо сформировавшимся монослоем. [c.260]

Определение Staphylo o us aureus. Определенное количество исследуемого материала засевают для накопления стафилококков в солевой бульон, например 1 мл(г) в пробирку с 5 мл среды, инкубируют при 37 °С в течение 24 ч. При наличии роста (помутнении среды) делают высевы на желточно-солевой агар для получения изолированных колоний, которые затем идентифицируют по культуральным свойствам, морфологии (в мазке по Граму), ферментации глюкозы и маннита, наличию плазмокоагулазы. [c.425]

Извлечение витаминов из кормового препарата в циан-формах и очистка производились на основе известных способов [1, 3]. Навеску 1 г препарата суспензировали в 50 см воды, нодкисленной до pH 5 1 М раствором уксусной кислоты, добавляли 0,05 г цианида калия и держали в автоклаве в течение 15—20 мин под избыточным давлением (5-10 Па), затем центрифугировали 25—30 мин при окорости 6000 об./мин. Фугат в делительной воронке экстрагировали фенол-хлороформной смесью (1 1) два раза по 20 см . Фенолхлороформный экстракт витамина про.мывали 30 см воды, добавляли к экстракту равный объем ацетонхлороформной смеси (9 1) и экстрагировали в делительной воронке небольшими порциями (2—4 см ) подкисленной до pH 5 воды. Экстракцию производили 4—5 раз до прекращения окрашивания водного слоя в розовый цвет. Водная вытяжка витамина промывалась 20—25 см эфира для удаления остатков органических растворителей и переносилась в мерную пробирку. Растворенный эфир из водного экстракта удалялся нагреванием пробирки с раствором на водяной бане. После охлаждения устанавливали объем раствора по делениям пробирки. Для анализа культуральной жидкости отбирали ее в количестве 100 —150 см , подкисляли до pH 5 уксусной кислотой, добавляли 0,05 г цианида калия и далее обрабатывали, как описано выше. Полученный витаминный экстракт, стандартные растворы циан-кобаламина и фактора III, а также раствор фактора В хроматографировали. [c.69]

Отобранную пробу высевают в боксе около пламени спиртовки в комплект пробирок по 0,5 мл в каждую. Комплект состоит из трех пробирок скошенного мясо-пептонного агара (МПА) с 1 % глюкозы и из двух пробирок мясо-пептонногй бульона (МПБ) с 1% глюкозы. Пробирки помещают на сутки в термостат с температурой 37°. По помутнению бульона или появлению колоний посторонних микроорганизмов на агаре судят о нестерильности пробы. С агара и бульона делают мазки и микроскопируют их, чтобы установить характер заражения (палочки, кокки и т. д.). Кроме того, микроскопируют пробы культуральной жидкости. [c.148]

Посевной материал можно получать периодически (исходный штамм в пробирке- -выращивание в колбе на качалке-> выращивание в лабораторном ферментаторе, а затем в инокуляторе) или непрерывно, так же как это было изложено в технологии лизина. В зависимости от способа получения посевного материала содержание биомассы продуцента в посевной культуральной жидкости может быть различным — от 3—5 г/л при периодическом способе выращивания до 15 г/л при непрерывном. Установлено, что чем больше вводится посевного материала, тем выше степень трансформации антраниловой кислоты. Выращивают культуру при температуре 30° С в течение 24 ч в каждом пассаже. [c.417]

Потенциал размножения различных разновидностей Вас. thuringiensis проверяли при глубинном выращивании путем перемешивания со 100 мл жидкой питательной среды, выдерживания в пробирке полученной смеси в течение 48 часов при 28°С и при промывании 10 мл стерильной воды. Культуры выращивали в течение 48 часов при 28°С. Спустя сутки были взяты пробы для проверки морфологической картины и определения числа клеток на 1 мл культуральной [c.396]

ОПЛОДОТВОРЕНИЕ. Спермии берут у партнера мужского пола и промывают их в культуральной среде для удаления семенной жидкости. Спустя примерно 6 ч после извлечения яйцеклеток к ним добавляют спермии из расчета 100 ООО спермиев на одну яйцеклетку. Эта процедура проводится в стеклянной чашке Петри или в пробирке. Оплодотворенные яйцеклетки оставляют в культуральной среде примерно в течение двух суток за это время они обычно достигают стадии от 2 до 8 клеток. Их изучают под микроскопом, чтобы убедиться в их пригодности для переноса в матку женщины. Чем больше яйцеклеток пере- [c.114]

К моменту проведения этого эксперимента уже была известна генетическая трансформация пневмококков и было установлено, что она осуществляется бактериальной ДНК- Поэтому на первый взгляд казалось вероятным, что Ледерберг и Татум столкнулись всего лишь с другим случаем такой трансформации. Могло оказаться, например, что при совместном росте двух ауксотрофных родительских штаммов из некоторых клеток Met+ Bio штамма В в результате спонтанного лизиса выделялись молекулы ДНК, несущие гены met bio, и что эти молекулы проникали в компетентные клетки Thr Leu Thi штамма А, приводя к образованию прототрофных трансформантов. Однако весьма скоро выяснилось, что происхождение таких рекомбинантов едва ли можно объяснить трансформацией, поскольку было показано, что для их появления необходим непосредственный контакт между бактериями штаммов А и В. Так, Ледерберг и Татум показали, что если к культуре одного штамма добавить стерильный фильтрат среды, в которой был выращен другой штамм, то образования прототрофов не происходит, даже если клетки этого штамма были разрушены или лизированы непосредственно перед фильтрацией среды. В 1950 г. Дэвис получил дополнительные данные, подтверждающие результаты Ледерберга и Татума, проведя свой эксперимент в U-образной пробирке (фиг. 107). Два ауксотрофных штамма А и В высевали в ветви U-образной пробирки, которые были разделены в нижней части пористым стеклянным фильтром, непроницаемым для клеток Е. соИ, но пропускающим частицы размером менее 0,1 мкм, а следовательно, и свободные молекулы ДНК- Затем обе бактериальные культуры выращивали до насыщения. Повышая и понижая поочередно на одном из концов U-образной пробирки давление, медленно перегоняли культуральную жидкость из одной ветви в другую. В результате два ауксотрофных штамма использовали одну и ту же питательную среду, но между клетками непосредственного контакта не было. Ни в одной из ветвей U-образной трубки прототрофы обнаружены не были. Следовательно, для образования рекомбинантных бактериальных геномов необходимо, чтобы две конъюгирующие родительские клетки пришли в контакт. [c.216]

Впоследствии другие исследователи обнаружили, что трансформация непатогенных штаммов пневмококка в патогенные может осуществляться и в лабораторной культуре клеток. Изредка возникающие трансформированные клетки легко отделить от нетрансформированных, поскольку они не агглютинируются сывороткой, содержащей антитела против клеток типа IIR. Агглютинировавшие клетки IIR осаждаются хлопьями на дно культурального сосуда, тогда как трансформированные клетки не слипаются, а свободно размножаются, образуя мутную суспензию клеток IIIS (рис. 4.4). Развитие такого метода выделения трансформированных клеток in vitro ( в пробирке ) дало важное преимущество, поскольку позволило исследовать природу трансформирующего фактора убитых нагреванием клеток IIIS непосредственно, не вводя их мышам и не дожидаясь гибели последних. [c.94]

Для стерилизации пробки в пробирках или флаконах должны быть закреплены с помощью зажимов. Существует специальный пресс для удерживания в фиксированном положении целого набора культуральных пробирок с пробками, поставляемый фирмой Ве Псо Glass, In . Зажимы для отдельных пробирок можно изготовить самим из вешалки для одежды 17]. В специальных пробирках Хангейта, снабженных завинчивающимися крышками с отверстием диаметром 9 мм (Beli o Glass, In ., № 2047), резиновые пробки с бортиками не нуждаются в зажимах. Используют также пробирки или сосуды с горлышком, как у флаконов для сывороток, осна- [c.190]

Очищенный от кислорода и пропущенный через фильтр газообразный азот пропускают через стерильную культуральную среду, помещенную в пробирки, и одновременно инокулируют среду. Пробирки закрывают стерильными пенициллиновыми пробками. Для факультативно анаэробных бактерий, таких, как Klebsiella, [c.60]

Пожалуй, наиболее убедительные данные в пользу описанной вьшге схемы были получены в экспериментах с мутантными клеточными линиями, отобранными по признаку измененной реакции на кортизол. Мутантные клетки получали из лимфоцитарных опухолей, называемых лимфомами. Подобно некоторым нормальным лимфоцитам, клетки лимфомы гибнут при добавлении к культуральной среде небольшого количества кортизола. Однако мз тантные клетки устойчивы к этому действию кортизола. Оказалось, что у некоторых из них рецепторный белок, связавшись с кортизолом, не переходит из цитоплазмы клетки в ядро (рис. 13-14). Хотя такие мутантные рецепторы нормально связывают кортизол, они почти утратили способность присоединяться к ДНК. Эксперименты с разнообразными мутантными рецепторами выявляют сильную корреляцию между их сродством к ДНК в пробирке и миграцией в ядро при связывании кортизола в клетке поэтому можно предполагать, что ДНК составляет по меньшей мере часть мишени, узнаваемой активированными рецепторами в ядре. [c.258]

Определять антибиотическую активность методом серийных разведений можно и на чашках Петри. В пробирки, содержащие по 9 мл расплавленного питательного агара, вносят по 1 мл изучаемого антибиотика определенного разведения или культуральной жидкости. После тщательного перемешивания содержимое пробирки выливают в чашку Петри и дают агару застыть. Затем по поверхности пластинки штрихами делают посев тест-организ-мов. Чашки выдерживают в термостате при оптимальной для используемых тест-организмов температуре в течение 20-21 ч. [c.170]

Центрифугируйте клетки при 1500 5 мин при комнатной температуре, удалите супериатаит, осторожно ресуспенди-руйте клетки в среде для роста, постукивая по пробирке. Не пипетируйте клетки вверх и вниз для ресуспендирования осадка. Посейте клетки на 10 культуральных чашек диаметром 9 см. [c.14]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология