Реакция связывания гаптена

Многие вещества могут быть определены по их способности ингибировать реакции антиген — антитело. Это особенно широко используется при анализе гаптенов, поскольку гаптены обычно реагируют с антителом без фиксации комплемента. Поэтому прямое определение гаптенов по фиксации комплемента невозможно. Однако, если реакция антиген — антитело проводится таким образом, что все антитела полностью связываются антигеном и весь комплемент фиксирован, любой агент, который может связывать антитело без фиксации комплемента, можно определить по восстановлению количества фиксированного комплемента. Таким образом, если с антигеном добавляется гаптен, дающий перекрестную реакцию, этот гаптен может конкурировать с антигеном за центр связывания антигена с антителом и, следовательно, снижать количество фиксируемого комплемента. Путем прибавления различных количеств данного гаптена к данной смеси антиген-антитело можно получить калибровочную кривую, которую затем можно использовать для определения неизвестного количества того же гаптена в смеси. Эта процедура называется тестом торможения фиксации комплемента. Пример показан на рис. 10-5. [c.256]

Зти факты можно объяснить, если допустить, что в молекуле антитела имеются два или несколько участков для связывания антигена. На поверхности молекулы азобелка имеется несколько гаптеновых групп, благодаря чему молекулы антитела связывают молекулы азобелка в сетчатый агрегат, который и составляет основу иммунного преципитата (рис. 15.17). Связанная только с гаптеном молекула антитела остается в растворе, и реакции преципитации не происходит, даже если гаптены соприкасаются с участками связывания на антителе. Од- [c.447]

Гаптены — низкомолекулярные вещества, которые в обычных условиях не вызывают иммунной реакции, но при связывании с высокомолекулярными молекулами приобретают иммуногенность. К гаптенам относятся лекарственные препараты и большинство химических веществ. Они способны вызывать иммунный ответ после связывания с белками организма. [c.54]

Конкурентные методы анализа используют для различных антигенов, но чаще всего для определения гаптенов. Они отличаются простотой постановки реакции, но имеют ряд ограничений. Во-первых, в конкурентных методах предъявляются высокие требования к стандартизации количества связанных и добавленных реагентов. Во-вторых, чувствительность этих методов определяется в основном константой связывания антител. [c.118]

В ходе реакции гаптен-антитело (когда гаптен имеет небольшую молекулярную массу и одновалентен) не происходит никаких взаимных превращений гаптена и антитела. Поэтому о их взаимодействии судят с помощью различных физических и физико-химических методов. Эти методы основаны на оценке количества связанного гаптена по изменению диффузионного равновесия последнего в присутствии антитела (метод равновесного диализа ) или по изменению оптических свойств гаптена после его связывания антителом. [c.104]

Эта процедура довольно громоздка и трудна в исполнении. Наш метод связывания гаптена с -галактозидазой благодаря вовлечению в реакцию конъюгации с гаптеном сульфгидрильных групп фермента прост и легко воспроизводим. [c.273]

Иммунологическая специфичность катехоламинов — адреналина, норадреналина, дофамина и диоксифенилаланина — не меняется при связывании их как гаптенов с бычьим сывороточным альбумином через С(6> ароматического ядра по реакции Манниха [12]. Полученные антитела специфически распознают не только арильную, но и алифатическую часть молекул катехоламинов. [c.84]

Антигены можно определять по ингибированию агглютинации, Суть этого явления состоит в том, что при взаимодействии бактерий и клеток в суспензии с антителами, направленными против компонентов поверхности клеток, клетки слипаются (агглютинируют), что бывает вызвано образованием комплексов антиген — антитело. Рассмотрим модификацию этой реакции, носящую название пассивной агглютинации. Антиген, к которому предварительно было получено антитело, связывается с поверхностью эритроцита или иногда с гранулами полистирола. Эта связь может осуществляться как путем адсорбции, так и с помощью ковалентного связывания. Прибавление антитела, полученного против связанного с поверхностью антигена, приводит к слипанию клеток или гранул, тогда как несвязанный антиген или гаптен будут конкурировать со связанным с поверхностью антигеном и предотвращать агглютинацию. [c.257]

J При этом П. Эрлих представлял, что кЛетка якобы может иметь антитела трех порядков антитела первого порядка, обусловливающие нейтрализацию токсина, имеют одну группу связывания, которая соединяется с гаптеном антигена антитела второго порядка, вызывающие реакции агглютинации и преципитации, обладают группой связывания и эффекторной группой склеивания или осаждения антигенов антитела третьего порядка, связывающие комплемент, содержат две группы связывания, одна вступает в реакцию с антигеном, а другая — с комплементом. [c.49]

В заключение остановимся на реакции химических гаптенов и комплексных антигенов с химической детерминантой с антителами. Известно, что взаимодействие антигена с антителом обусловливается силами, действующими только на очень близком расстоянии. Так, например, активный центр антитела превосходит по своим размерам гаптенную детерминанту всего на 0,3—0,5 нм. На таком расстоянии связь мож т быть обусловлена гидрофобным взаимодействием, электростатическими силами, силами ван дер Ваальса, водородными связями или диполь-дипольным взаимодействием. Каждому гаптену в зависимости от его структуры свойственны те или иные типы связей (табл. 8). При взаимодействии антител против р-азобензойной кислоты со специфичными антителами константа связывания равна 1,0. Если уменьшить (замена гексилом) или полностью исключить (замена ме-тильной группой) гидрофобные взаимодействия, обусловленные бензольным кольцом, то константа связывания уменьшается в 500—1000 раз. Если ослабить электростатические силы, связанные с отрицательным зарядом карбоксильной группы, введением добавочных радикалов в бензольное кольцо или заменой карбоксила на АзОз, то константа связывания также уменьшается в 7—1000 раз. [c.47]

Наиболее часто применяемые методы синтеза КА для гаптенов с карбоксильной группой (если ее нет в исходном ФАВ, то его подвергают обычно 0-, N- или С-сукцинилированию) — метод смешанных ангидридов, карбодиимидный, азидный, имино-эфирный и т. д. [213]. Для связывания гаптенов с белками через углеродный скелет используют азосочетание. Тот же метод пригоден для любых гаптенов, если в них ввести ароматическую аминогруппу через одну из функциональных групп. Среди других методов можно отметить периодатное окисление ви-цинальных гидроксильных групп, например в гликозидной части ФАВ, реакцию Манниха по основному скелету ФАВ или с участием аминогруппы, связанной с ФАВ, и т. д. [c.144]

Синтез антител начинается в ответ на попадание во внутреннюю среду организма чужеродных макромолекул, например белков бактериальной клетки. Антитела способны связывать антиген, вызвавший их образование, и тем самым защищать организм от возможного вредного действия чужеродных макромолекул, бактерий или других частиц. Реакция связывания антигена антителом отличается высокой специфичностью. Так, антитела, индуцированные белками возбудителя дифтерии (С. сИрЫепае), связывают эти белки, но не реагируют с белками дизентерийной палочки или других бактерий. Еще более наглядно специфичность антител обнаруживается в опытах с синтетическими антигенами. Низкомолекулярные вещества сами по себе не индуцируют синтез антител, но после их присоединения к молекуле белка стимулируется образование антител как к белку, так и к присоединенному низкомолекулярному веществу — гаптекгу. Даже если в роли гаптена выступают очень сходные вещества, например изомеры аминобензойной кислоты (рис. 20.2), к каждому из них синтезируются специфические антитела, не реагирующие с двумя другими гаптенами. [c.476]

Применение в ИФА антигенов и антител, иммобилизованных на нерастворимых носителях, дает возможность эффективно разделять компоненты аналитической системы перед стадией определения концентрации ферментной метки. Такой подход универсален и может применяться для широкого круга соединений — от гаптенов до микробных клеток. Однако нерастворимые иммуносорбенты имеют и некоторые отрицательные стороны, а именно 1) возможность неспецифического связывания компонентов с носителем 2) значительное время анализа (до нескольких часов) из-за длительности реакции антиген — антитело, определяемое низкой концентрацией иммобилизованного агента- (например, при использовании непористых сорбентов — полистирольных плат или пробирок) или диффузионными затруднениями при использовании пористых сорбентов (сефароза, пористое стекло, силохром и т. д.) 3) методические сложности, связаниью с трудностями точного дозирования и промывок иммуносорбентов па основе пористых носителей 4) существенное влияние неоднородности сорбциоииых свойств полимерных носителей (микроплаты и пробирки из полистирола, поливинилхлорида, полиметилметакрилата и т. д.) на точность и воспроизводимость результатов анализа. [c.111]

Твердофазные иммунореагенты вначале использовали для выделения антигенов и аитител. Впоследствии иммобилизованные антитела применили для радиоиммуноанализа белков [1, 2] и гаптенов [3,4 ], где с их помощью удалось упростить разделение свободного и связанного с антителами определяемого вещества. Реагенты (антитела или антигены) связывали с носителем или ковалентно, или с помощью пассивной адсорбции. Ковалентное связывание требует проведения химических реакций и тщательной очистки готового продукта. Связывание путем пассивной адсорбции занимает много времени, а полученные таким способом реагенты сложно ис- [c.52]

Реакцию низкомолекулярного гаптена с антителами можно оценить с помощью прямых реакций, сргди которых наибольшее применение получил метод равновесного диализа (см. гл. 12). Полученные в эксперименте данные позволяют рассчитать константу равновесия (Д) в системе гаптен-антитело (см. гл. 4 и 12). Если определять величины константы равновесия при реакции антител к определенному конъюгированному антигену с рядом сходных по строению гаптенов, можно оценить вклад каждого радикала в структуру детерминантной группы. При этом удобно сопоставлять сродство к антителу какого-то аналога детерминантной группы со сродством наиболее близкого к ней по строению гаптена ре-ференс-гаптен). Таким способом получают относительную величину константы связывания Кот) Дотн= = Кх/Кр.г, где Кх — константа связывания исследуемого аналога, Кр.г — константа связывания референс-гаптена. [c.24]

Для ИФА дигоксина осуществляли связывание малеимидного производного дигоксигенин-З-О-сукцината с -галактозидазой. При этом с производным гаптена связывалось около 97% фермента. После завершения реакции конъюгации снижения ферментативной активности не наблюдалось. Результаты, полученные в случае ИФА дигоксина, сходны с результатами тестирования других гаптенов. Антисыворотку разводили в 5000 раз и 0,1 мл разведенного раствора использовали для стандартного анализа. При проведении ИФА с вытеснением [c.272]

Как следует из вышеприведенной схемы получения абзимов, иммунизация экспериментальных животных является основным этапом, определяющим их специфичность. В настоящее время разработаны методы иммунизации, которые позволяют получать каталитические антитела, реализующие механизмы кислотного, основного или ковалентного катализа. Так, использование для иммунизации гаптенов, содержащих положительно заряженные группы, например четвертичные амины, как правило, сопровождается включением в активный центр абзима отрицательно заряженных аминокислотных остатков (Glu, Asp), а для гаптенов с отрицательно заряженными группами наблюдается обратная картина [285]. Иммунизация гаптенами, которые ковалентно взаимодействуют с аминокислотными остатками центра связывания антител, приводит к образованию каталитических антител, содержащих в активном центре нуклеофильные аминокислотные остатки (Lys, Ser), которые участвуют в реакциях ковалентного катализа [286]. Такая схема иммунизации позволяет получать абзимы, осуществляющие специфический гидролиз ароматических эфиров [287]. [c.430]

Центральная роль в сложных взаимодействиях между клетками Лангерганса, Т-клетками С04 , кератиноцитами, макрофагами и эндотелиальными клетками при контактной реакции гиперчувствительности принадлежит цитокинам и простагландинам. Презентация антигена (1) вызывает каскадное выделение цитокинов (2). Это вначале приводит к активации и пролиферации Т-клеток С04 (3), повышению экспрессии 1САМ-1 и молекул МНС класса II на поверхности кератиноцитов и эндотелиальных клеток (4), а также к привлечению в кожу Т-клеток и макрофагов (3, 5). Последующая продукция ПГЕ кератиноцитами и макрофагами может ингибировать образование ИЛ-1 и ИЛ-2. В торможение реакции вносит вклад не только продукция ПГЕ, но и связывание активированных Т-клеток с кератиноцитами, а также ферментативное и клеточное разрушение комплекса гаптен-носитель. [c.477]

В работе по изучению кинетики взаимодействия миеломного монометра IgA (МОРС 460) с ДИФ-Лиз (Lan et, Pe ht, 1976) интерпретация результатов почти полностью совпадает с данной ранее нами для IgG. Авторы приходят к выводу, что молекула (МОРС 460) существуете виде двух конфор меров и в свободном, и в связанном с гаптеном состоянии, Связывание ran гена меняет константу равновесия между конформерами. В упомянутой выше работе обнаружено две стадии реакции — быстрая и медленная, которые в соответствии с нашей моделью означают переориентацию и стабилизацию вариабельных доменов (первая стадия) и релаксационный процесс, приводящий к сдвигу равновесия между А и В-конформерами Fab-фрагментов в сторону компактного А-конформера (вторая). [c.35]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология