Реакция гаптен-антитело

Зти факты можно объяснить, если допустить, что в молекуле антитела имеются два или несколько участков для связывания антигена. На поверхности молекулы азобелка имеется несколько гаптеновых групп, благодаря чему молекулы антитела связывают молекулы азобелка в сетчатый агрегат, который и составляет основу иммунного преципитата (рис. 15.17). Связанная только с гаптеном молекула антитела остается в растворе, и реакции преципитации не происходит, даже если гаптены соприкасаются с участками связывания на антителе. Од- [c.447]

Рис. 7.9-17. Иммунный анализ с помощью фермента, меченного кофактором. Антитело, связанное с меченым гаптеном, не принимает участия в ферментативной реакции.

Многие вещества могут быть определены по их способности ингибировать реакции антиген — антитело. Это особенно широко используется при анализе гаптенов, поскольку гаптены обычно реагируют с антителом без фиксации комплемента. Поэтому прямое определение гаптенов по фиксации комплемента невозможно. Однако, если реакция антиген — антитело проводится таким образом, что все антитела полностью связываются антигеном и весь комплемент фиксирован, любой агент, который может связывать антитело без фиксации комплемента, можно определить по восстановлению количества фиксированного комплемента. Таким образом, если с антигеном добавляется гаптен, дающий перекрестную реакцию, этот гаптен может конкурировать с антигеном за центр связывания антигена с антителом и, следовательно, снижать количество фиксируемого комплемента. Путем прибавления различных количеств данного гаптена к данной смеси антиген-антитело можно получить калибровочную кривую, которую затем можно использовать для определения неизвестного количества того же гаптена в смеси. Эта процедура называется тестом торможения фиксации комплемента. Пример показан на рис. 10-5. [c.256]

Кинетика и термодинамика реакции гаптен-антитело [c.104]

В ходе реакции гаптен-антитело (когда гаптен имеет небольшую молекулярную массу и одновалентен) не происходит никаких взаимных превращений гаптена и антитела. Поэтому о их взаимодействии судят с помощью различных физических и физико-химических методов. Эти методы основаны на оценке количества связанного гаптена по изменению диффузионного равновесия последнего в присутствии антитела (метод равновесного диализа ) или по изменению оптических свойств гаптена после его связывания антителом. [c.104]

На основе сведений, полученных при оценке константы равновесия при нескольких значениях температуры, можно вычислить основные термодинамические параметры реакции гаптен-антитело. [c.105]

Поскольку при взаимодействии антитела с гаптеном подвижность реагирующих соединений (обусловленная броуновским движением в растворе) умень шается, а вместе с этим уменьшается степень неупорядоченности системы, следует ожидать изменения конфигурационной энтропии. При этом величины Л5° должны были бы принимать отрицательные значения. Однако в силу того, что некоторые гаптены имеют заряд, величина которого уменьшается при взаимодействии с антителом, в ходе реакции высвобождается часть связанной гаптеном и антителом воды. Кроме того, при реакции гаптен-антитело изменяется общая конфигурация молекулы антитела, обусловленная изменением подвижности РаЬ-участков относительно Рс-участка (см. гл. 3). Этот факт также способен повлиять на степень гидратации молекулы антитела вне зависимости от заряда гаптена. Обусловленное высвобождением воды положительное изменение энтропии способно в отдельных случаях полностью компенсировать уменьшение энтропии системы за счет самой реакции гаптен-антитело, В свете сказанного сравнительные оценки величин А8° для реакции различных по специфичности антител со своими гаптенами вряд ли правомерны. [c.107]

Сказанное выше применимо также и к оценке результатов реакции гаптен-антитело другими методами. [c.246]

На основании этих данных была разработана техника оценки реакции гаптен-антитело методом ЭПР. Данные, полученные этим и другими методами, совпадают. [c.250]

Для полного подавления реакции между антителами к гаптену и комплексом гаптен — антиген [c.26]

Фиг. 8. Задержка различными гаптенами реакции преципитации антител к бензойной кислоте.

ТАБЛИЦА 2 Подавление различными разведениями гаптенов реакции преципитации антитела с антигеном [c.30]

ДНФ-ОА) наблюдалась сильная реакция образования антител к ДНФ. Этот опыт показывает, что для продукции антител к гаптену [c.199]

Реакции белков, ферментов и т. д. Кинетические исследования взаимодействий белков с красителями и антител с гаптенами показали [28], что это простые реакции ассоциации с константами скорости порядка 10 — 10 Кажется вероят- [c.78]

Антиген, антитело и комплемент смешивают в таких количествах, чтобы количество комплемента соответствовало области избытка антигена на кривой, показанной на рис. 10-4. Перед прибавлением эритроцитов и антител против эритроцитов барана добавляют различные количества гаптена. Гаптен (Г) принимает участие в реакции антиген-антитело, приводя к уменьшению количества фиксируемого комплемента, поскольку Ат-1-Аг-ЬК"->Ат-Аг-К, но Ат + Г-НК Ат-Г+К. При добавлении неизвестного количества гаптена его можно определить по калибровочной кривой. [c.257]

Реакция гаптен-антитело. Равновесный диализ и его модификации. Техника постановки реакции состоит в следующем. В лвухкамерном сосуде камеры разделены мембраной, проницаемой для низкомолекулярного гаптена, но не антитела. Гаптен и антитело помещают в разные камеры. За счет диффузии гаптен, проходя через мембрану, переходит в камеру с антителом к нему и взаимодействует с антителом. В результате в камере, содержащей антитело, будет находиться как связанный, так и свободный гаптен. Количество последнего после установления равновесия окажется равным количеству гаптена в камере, не содержащей антитела. Следовательно, в камере, содержащей антитело, возникнет инкре.мент концентрации гаптена, равный его количеству, связанному антителом. Зная содержание антитела в молях и определив содержание свободного и связанного гаптена, можно определить константу равновесия (К) из уравнения г1с==пК—гК, где г—число молей гаптена на моль антитела, с—молярная концентрация свободного [c.245]

Этот дисахарид - составная часть группоспецифического вещества крови, так называемого вещества Н, которое, как и вещества А и В, определяет специфичность группы крови. Так, смешивание крови разных групп приводит к специфической реакции антиген-антитело, в результате чего происходит агглютинация или растворение красных кровяных телец. Группоспецифические вещества крови представляют собой гликолипиды или гликопротеины, с помощью которых, например, липидная часть нековалентно закрепляется на внешней мембране эритроцита. К липидной части примыкает сердцевинная часть, состоящая из неспецифической олигосахаридной цепи, к которой примыкает детерминирующий олигосахаридный фрагмент (так называемый гаптен), содержащий группоспецифическое вещество крови [76]. Вещество Н, обнаруженное у обладателей группы крови О, содержит в качестве детерминант-ного трисахарид из г-фукозы, о-галактозы и N-aцeтил-D-глюкoзaминa (а-г-Гис-(1 2)-р-о-Са1-(1 3)-о-01с-ЫАс) [77]. [c.570]

Иомплепи Антитело- Гаптен Фиг. 7. Реакция задержки серологических реакций гаптеном. [c.26]

Антитела — не единственные высокомолекулярные соединения, обладающие специфической биологической активностью. Ферменты, которые тоже являются белками, и гормоны, многие из которых — белки, также обладают этим свойством. Ферменты—наиболее яркие представители веществ такого рода—имеют различную степень специфичности. Некоторые ферменты, например мальтаза солода и сук-цинатдегидрогенеза, высоко специфичны каждый из них катализирует одну и только одну реакцию. Специфичность других ферментов проявляется лишь по отношению к определенной химической группе, входящей в состав молекулы их субстрата. Ферменты, катализирующие реакции, в которых принимают участие оптически активные вещества, например сахара или аминокислоты, часто реагируют преимущественно или исключительно с одной из энантиоморфных форм. Даже такой фермент, как трипсин, действует только на некоторые связи субстрата. Действие фермента можно подавлять, увеличивая концентрацию одного из соединений, образующихся в результате той реакции, которую катализирует данный фермент, — явление, очень напоминающее специфическое подавление реакции антиген — антитело гаптеном. [c.81]

Как мы уже видели, несмотря на относительную слабость связи антитело — антиген или антитело — гаптен, антитела обнаруживают чрезвычайно узкую специфичность. Например, когда Каруш сравнивал реакции антител, специфичных к лак-гаптену, с лактозой и реакцию того же антитела с целлобиозой, он нашел величину АР° = —5,52 ккал/моль для лактозы и —1,96 ккал1моль — для целлобиозы, хотя единственное различие между двумя сахарами заключается в расположении водорода и гидроксила у 4-го углеродного атома в концевом гексозном остатке (схема XXXIV). Этот факт снова подтверждает [c.175]

В лаборатории Паулинга на основании исследования влияния сотен различных гаптенов и стереохимически сходных с ними веществ на реакции преципитации противосывороток, приготовленных против большого числа азопроизводных белков, была развита теория дополнительности в реакции антиген — антитело. Помимо использования для серологических исследований, соли диазония широко применялись для введения соединений, представляющих интерес с точки зрения физиологии или фармакологии. Несмотря на общеизвестность реакции сочетания белков с соединениями диазония, мы мало что можем сказать о физических свойствах измененных таким образом белков, хотя часто для этой цели можно было бы применять спектроскопические методы. Во многих случаях в реакцию сочетания с азосолью вступает вся сыворотка целиком, а не один только чистый белок. [c.328]

Реакция антиген — антитело не происходит, если взаимодействующие белки подвергнуты денатурации. Поэтому можно считать, что взаимодействие между ними зависит от точной комплемептарности молекулярных поверхностей двух нативных белков. Эффективный метод исследования специфичности таких взаимодействий был разработан Ланд-штейнером, который получал антигены путем спаривания белков с многочисленными диазотированными производными анилина. Он обнаружил, что специфичность антител, создаваемая такими сопряженными антигенами, определяется в основном заместителями (гаптенами). Так как антитело будет также взаимодействовать с гаптенами, присоединенными к малым молекулам, равновесие при ассоциации может быть определено при диализе [1007]. Типичные данные такого рода были получены Карушем [1099], который изучал антитела к сопряженному белку, несущему D-изомер гаптеновой группы [c.340]

Применение в ИФА антигенов и антител, иммобилизованных на нерастворимых носителях, дает возможность эффективно разделять компоненты аналитической системы перед стадией определения концентрации ферментной метки. Такой подход универсален и может применяться для широкого круга соединений — от гаптенов до микробных клеток. Однако нерастворимые иммуносорбенты имеют и некоторые отрицательные стороны, а именно 1) возможность неспецифического связывания компонентов с носителем 2) значительное время анализа (до нескольких часов) из-за длительности реакции антиген — антитело, определяемое низкой концентрацией иммобилизованного агента- (например, при использовании непористых сорбентов — полистирольных плат или пробирок) или диффузионными затруднениями при использовании пористых сорбентов (сефароза, пористое стекло, силохром и т. д.) 3) методические сложности, связаниью с трудностями точного дозирования и промывок иммуносорбентов па основе пористых носителей 4) существенное влияние неоднородности сорбциоииых свойств полимерных носителей (микроплаты и пробирки из полистирола, поливинилхлорида, полиметилметакрилата и т. д.) на точность и воспроизводимость результатов анализа. [c.111]

Реакцию низкомолекулярного гаптена с антителами можно оценить с помощью прямых реакций, сргди которых наибольшее применение получил метод равновесного диализа (см. гл. 12). Полученные в эксперименте данные позволяют рассчитать константу равновесия (Д) в системе гаптен-антитело (см. гл. 4 и 12). Если определять величины константы равновесия при реакции антител к определенному конъюгированному антигену с рядом сходных по строению гаптенов, можно оценить вклад каждого радикала в структуру детерминантной группы. При этом удобно сопоставлять сродство к антителу какого-то аналога детерминантной группы со сродством наиболее близкого к ней по строению гаптена ре-ференс-гаптен). Таким способом получают относительную величину константы связывания Кот) Дотн= = Кх/Кр.г, где Кх — константа связывания исследуемого аналога, Кр.г — константа связывания референс-гаптена. [c.24]

Вопрос о размере детерминантной группы конъюгированного антигена, вкладе в ее специфичность различных радикалов был изящно проанализирован И. Шехте-ром (I. сЬесЬ1ег, 1970). В качестве антигена использовали конъюгаты белка с олиго-О-аланином (пептиды присоединяли к белку через свободную карбоксильную группу). Реакцию между антителами к поли-О-аланину и тест-антигеном ингибировали с помощью различных по размеру олигопептидов из О- и Ь-аланина. Как оказалось, ингибирующий эффект гаптенов нарастал от ди- к тетра-О-аланнну. Дальнейшее увеличение длины пептида НС усиливало его ингибирующих свойств. Тетра-Ь-ала-нин был совершенно не активен как ингибитор. Эти данные означают, во-первых, что антитела четко различают олигопептиды из право- и левовращающих аминокислот, не имеющие регулярной вторичной структуры. Во-вторых, очевидно, что активный центр антитела соответствует по размеру тетрапептиду. [c.26]

Макса Планка (ФРГ). Этот метод основан на оценке скорости изменения равновесия в системе гаитен-антите-ло ири дискретном увеличении температуры за крайне короткие промежутки времени. Сконструированная аппаратура на основе гигантского конденсатора (10 000 эрстед) при его разряде за 0,1 мкс позволяла повысить температуру смеси гаптен-антитело на 10°С. За это время успевало установиться равновесие, что свидетельствует об очень высокой скорости реакции, реальное измерение которой сложно с технической точки зрения. [c.105]

Таким образом, имеется ряд убедительных доказательств в пользу существования независимого относительного движения отдельных субъединиц иммуноглобулинов. Можно предположить, что такого рода гибкость молекул иммунопобулинов важна дтя оптимальной реакции антител, имеющих одинаковое стерическое строение, с антигенами, пространственная структура которых очень разнообразна. Гибкость, в частности, очень важна для реакции антитела обоими активными центрами с одной молекулой антигена. В этом случае, как следует из данных, полученных в лаборатории Каруша (Karush, 1970), реакция антиген — антитело более эффективна, чем в случае, когда антитело реагирует с небольшим моновалентным гаптеном той же специфичности. [c.29]

Некоторые вещества самостоятельно не вызывают иммунного ответа, но приобретают эту способнорть при конъюгации с высокомолекулярными белковыми носителями или в смеси с ними. Такие вещества называют неполными антигенами, или гаптенами. Гаптенами могут быть химические вещества с малой молекулярной массой или более сложные химические вещества, не обладающие свойствами полного антигена некоторые бактериальные полисахариды, полипептид туберкулезной палочки (РРД), ДНК, РНК, липиды, пептиды. Гаптен является частью полного или конъюгированного антигена. Образующиеся к конъюгату белка с гаптеном антитела могут также реагировать и со свободным гаптеном. Гаптены иммунного ответа не вызывают, но они вступают в реакцию с сыворотками, содержащими специфические к ним антитела. [c.145]

Антигенами обычно являются высокомолекулярные соединения — белки и полисахариды, однако и многие низкомолекулярные соединения ( г а н т е н ы ), присоединенные к белкам, становятся антигенами. Классич. исследования К. Ландштейнера таких конъюгированных антигенов показали, что антигенные свойства гаптенов в сильной мере определяются природой и положением полярных радикалов в их структуре. Например, в исследовании, приведенном в таблице, для реакции была взята сыворотка, в к-рой присутствуют антитела, образовавшиеся при введении животным комплекса, содержащего j№-H2N jH4 OOH и ж-Н.21ЧСбН480зН. При добавлении к этой сыворотке различных аминов были получены след, результаты [c.111]

Гуморальная форма иммунного ответа на аллерген может вызвать, согласно классификации Кумбса и Гелла [82], три типа аллергических реакций, которые в клинической аллергологии обычно объединяют под общим названием аллергические реакции быстрого (немедленного) типа . При тине I (анафилактическом, или реаги-новом) свободно циркулирующий антиген образует иммунный комплекс с тканями, пассивно сенсибилизированными атителами, а клиническая картина реализуется действием биогенных аминов. Типичным примером реакции типа I считают бронхиальную астму, при которой реагины фиксируются клетками слизистых оболочек органов дыхания и кожи. Тип И (цитотоксический), при котором гуморальные антитела при участии комплемента реагируют с аутоантигенами или гаптенами, фиксированными на тканях, имеет место при аллергодерматозах химической этиологии, а в аутоаллергическом варианте — при любой нозологической форме химического аллергоза. Тип П1 обусловлен токсическим действием иммунного комплекса, растворенного в избытке антител, что характерно для сывороточной болезни. [c.20]

Оуогак с соавт. [88, 89] описали еще один тип реакций кожи, названный ими кожной базофильной гиперчувствительностью (КБГ). При сенсибилизации белковыми антигенами она, как и реакция Джонса Мота, выявляется лишь в первые дни сенсибилизации до появления гуморальных антител. При аллергии к химическим соединениям эта реакция длится значительно дольше (несколько недель при экспериментальной сенсибилизации) и может быть выявлена у больных аллергическим контактным дерматитом, вызванным промышленными химическими аллергенами. КБГ характеризуется образованием базофильных инфильтратов, а внешне не отличается от обычной ГЗТ на гаптен. Скопление базо-филов в месте аппликации химического аллергена не сопровождается базофилией и может быть выявлено только при специальной обработке препаратов из биопси-рованной кожи, так как для того чтобы увидеть базофил в обычном световом микроскопе, препарат необходимо [c.21]

Влияние усиливающих реактогенность гаптена радикалов выявляется и при тестировании животных, сенсибилизированных различными производными гаптена. Такие исследования были проведены нами с различными фурансодержащими соединениями при сенсибилизации ими морских свинок в дозе 40 мкг по методу Алексеевой— Петкевич. Перекрестные реакции на фуран выявляли на 14-е сутки в реакции специфической агломерации лейкоцитов (РСАЛ) и на 21-е сутки —по титру ан-тифурановых антител в РИГА (табл. 6). Так как для всех изученных веществ групповой детерминантой было фурановое кольцо, исходный гаптен фуран позволил выявить их аллергенное действие. Однако интенсивность и частота перекрестных реакций зависели от уровня сенсибилизации, обусловленной реактогенной способностью соединения. Так, фурфуриловый спирт, не имеющий заместителей, усиливающих реактогенность молекулы, вы- [c.39]

В заключение остановимся на реакции химических гаптенов и комплексных антигенов с химической детерминантой с антителами. Известно, что взаимодействие антигена с антителом обусловливается силами, действующими только на очень близком расстоянии. Так, например, активный центр антитела превосходит по своим размерам гаптенную детерминанту всего на 0,3—0,5 нм. На таком расстоянии связь мож т быть обусловлена гидрофобным взаимодействием, электростатическими силами, силами ван дер Ваальса, водородными связями или диполь-дипольным взаимодействием. Каждому гаптену в зависимости от его структуры свойственны те или иные типы связей (табл. 8). При взаимодействии антител против р-азобензойной кислоты со специфичными антителами константа связывания равна 1,0. Если уменьшить (замена гексилом) или полностью исключить (замена ме-тильной группой) гидрофобные взаимодействия, обусловленные бензольным кольцом, то константа связывания уменьшается в 500—1000 раз. Если ослабить электростатические силы, связанные с отрицательным зарядом карбоксильной группы, введением добавочных радикалов в бензольное кольцо или заменой карбоксила на АзОз, то константа связывания также уменьшается в 7—1000 раз. [c.47]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология