Выделение хромосом

В процессе выделения хромосом из клеток на стадии митоза эксперименты проводят при пониженных температурах (-Ь4°С), используя пластиковые пипетки во избежание деструкции хромосом Перед механическим разрушением клеток их суспендируют (10 клеток/мл) в гипотоническом растворе, а затем центрифугируют при 2500 д на холоду (примерно 25 мин при 4°С) Выход хромосом составляет около 10% от всех хромосом клеток-доноров Очищенные хромосомы должны быть использованы в опытах по переносу в реципиентные клетки (трансфекция) немедленно [c.185]

Процесс переноса. Если смешать популяцию клеток Hfr с избытком клеток F то почти каждая клетка Hfr найдет себе партнера F я будет с ним конъюгировать. Из такой смеси через определенные промежутки времени брали пробы и, сильно встряхивая их в смесителе, насильственно разъединяли партнеров. Затем пробы переносили на чашки с агаром для выделения рекомбинантов. И наконец, исследовали рекомбинантные штаммы, чтобы выяснить, какие гены были переданы донорами клеткам-реципиентам. Исследования показали, что каждый ген передается в совершенно определенный момент времени после начала конъюгации (рис. 15.16). Временная последовательность переноса генов соответствовала порядку их расположения в бактериальной хромосоме, установленному в результате генетического анализа. Это значит, что любой штамм Hfr представляет собой гомогенную популяцию, все [c.459]

Если какая-либо бактерия приобрела устойчивость, например, к стрептомицину в результате одного мутационного события, то эта устойчивость может быть также одним этапом передана путем трансформации бактериям, которые прежде были чувствительны к этому препарату. Если, однако, устойчивость возникла в результате нескольких мутационных событий, то для приобретения полной устойчивости требуется также несколько следующих одна за другой трансформаций. В выделенной ДНК представлены все эти локусы, но поскольку каждая поглощенная частица ДНК несет, как правило, только один ген, может потребоваться несколько обработок фильтратом, для того чтобы все гены, обусловливающие устойчивость, проникли в клетку-реципиент и нашли свои места на хромосоме. [c.245]

Изолированный таким способом митотический аппарат несомненно более близок к своему естественному состоянию. Строение его сохраняется до малейших деталей. Преимущество нового метода заключается в том, что здесь сохраняются хромосомы, которые было трудно увидеть в митотических аппаратах, выделявшихся старым методом. Но правильно ли предположение, которое привело нас к успешному выделению митотического аппарата Если оно правильно, то выделенный этим новым способом митотический аппарат должен был иметь еще меньше 8—8-групп и еще лучше растворяться в тио-гликолате, нежели аппарат, выделенный с помощью старого метода. Оказалось, что это действительно так и есть [c.207]

Известно, что после выделения ооцита из фолликула, как и после выброса эндогенного ЛГ в организме животного перед овуляцией, ооцит освобождается из состояния мейотического торможения, что сопровождается так называемым разрывом зародышевого пузырька. В организме крупного рогатого скота разрыв зародышевого пузырька происходит примерно через 5 ч после выброса ЛГ, ооцит достигает метафазы 1 через 12 ч и метафазы П через 24—25 ч. Вне организма ядерная мембрана зародышевого пузырька крупного рогатого скота также исчезает через 5—6 ч, через 12 ч хромосомы достигают метафазы 1 и через 20—24 ч — метафазы И. [c.209]

Любой сегмент локуса w, полученный в таком клоне, может быть использован для выделения всего локуса с помощью метода прогулка по хромосоме , который представляет собой усовершенствованный вариант рестрикционного картирования. Он основан на использовании перекрывающихся фрагментов, полученных в результате разрывов генома в одной и той же области. Принцип метода иллюстрирует рис. 37.5. [c.477]

Молекулы ДНК в эукариотических хромосомах очень велики. Длина молекул ДНК, выделенных из клеток дрозофилы, достигает 1,2 см, и принято считать, что каждая эукариотическая хромосома содержит одну-единственную непрерывную молекулу ДНК. Упаковка таких огромных молекул в ядрах клеток является основной функцией гисто-нов, белков, характерных именно для эукариотических клеток. [c.116]

Двойной линией показаны две полинуклеотидные цепи ДНК хромосомной двойной спирали, прерывистыми линиями — цепи, не содержащие метки, сплошными — меченые цепи. За две генерации до выделения хромосомы (Og) полностью немеченная ДНК родительской клетки находилась в той же стадии на Vs завершенной репликации, как и ее внучатые ядра (2,0 g), показанные на фиг. 98. Допустим, что точка pi является точкой начала репликации, а Рг — точкой, в которой находится репликациоиная вилка. Спустя некоторое время (0,15 g) репликационная вилка передвинулась в точку рз после этого добавляли Н-тимин. и все вновь синтезированные цепи ДНК содержали метку Н. Спустя Ve времени генерации (0,3 g) репликации хромосомы завершалась, так как репликационная вилка достигала р,. Две дочерние хромосомы содержали наполовину меченные двойные спирали от Рз до pi, но были совершенно не мечены в остальной части. Проследим теперь судьбу одной из дочерних хромосом, в которой репликационная вилка достигла точки рз спустя Va времени генерации (1,0 g). На этой стадии участки А к Б. я также участок В от рз до pi содержали наполовину меченные двойные спирали сектор В от рз до Рз совершенно не содержал метки. Спустя /з времени генерации (1,3 g) репликационная Y-вилка снова достигла pi. Две внучатые хромосомы содержали полностью меченные двойные спирали от р, до pi и меченные наполовину в остальной части. Проследим теперь за двумя внучатыми хромосомами, в которых репликационная вилка достигла р, спустя Vs времени генерации (2,0 g), и в результате образовались хромосомы, по характеру распределения метки совершенно подобные той, которую удалось наблюдать на радиоавтографе, приведенном [c.204]

E. oli в течение многих поколений выращивали в среде с а затем мгновенно переносили в среду с N. После одного поколения вся ДНК имела гибридную плотность. До первого поколения не было замечено ДНК с плотностью, меньше гибридной, поскольку во время выделения хромосома расщепляется приблизительно на 250 фрагментов. Справа показано состояние выделенной в различное время ДНК. [c.334]

Рис. 27-19, Электронная микрофотография интактной сверхспиральной хромосомы, выделенной из одной клетки Е. соИ. Интактность хромосомы была установлена с помощью сильно увеличенной фотографии. Чуть влево от центра ввдны фрагменты клеточной мембраны.

Хроматин был выделен из ядер и проанализирован. Он состоит из очень тонких волокон, которые содержат 60% белка, 35% ДНК и, вероятно, 5% РНК (разд. 2.7). Хроматиновые волокна в хромосоме свернуты и образуют множество узелков и петель (рис. 27-21). ДНК в хроматине очень прочно связана с белками, называемыми гистонами, функция которых состоит в упаковке и упорядочении ДНК в структурные единицы - нуклеосол<ы. В хроматине содержится также ряд негистоновых белков. В отличие от эукариотических бактериальные хромосомы не содержат гистонов в их состав входит лишь небольшое количество белков, способствующих образованию петель и конденсации (уплотнению) ДНК. [c.873]

Рис. 15.11. Общая гомологичная рекомбинация обмен между фрагментом ДНК донора (выделен красным цветом) и хромосомой бактерии-реципиента. Согласно одной, из моделей, гомологичные двойные цепи ДНК сближаются и обмениваются участками одной из ц Ьпей, а затем в результате репликации или репарации образуется рекомбинантная хромосома.

Хроматин содержит хромосомную РНК-поли-меразу, связанную с его структурой [26]. Этот фермент может быть выделен из хроматина и очищен [25]. Хроматин транскрибируется также РНК-полимеразой, полученной из источников иных, нежели источник, из которого выделен хроматин [8]. Так, очищенная РНК-полимераза из Е. соИ оказывается активной в транскрипции генетической информации, содержащейся в хромосомах высших организмов (табл. 10). [c.38]

Молекулярный вес выделенных до настоящего времени нуклеиновых кислот (по данным Зигнера) не менее 1 млн. Согласно современным представлениям, каждая пара цепей нуклеиновых кислот соединена водородными связями между nypинoвы m заместителями г образованием палочкообразной двойной спирали (винтовая линия). Каждое основание в одной цепи соответствует определенному основанию в другой цепи. В живом организме водородные связи между обеими цепями при определенных условиях (например, при делении клетки) разрываются и каждая отдельная цепь вследствие необходимости специфической эквивалентности между входящими в ее состав основаниями становится матрицей для создания из элементарных звеньев цепи противоположного строения. Такой направленный синтез, по-види>юму, позволяет считать, что по крайней мере часть заключенных в хромосомах наследственных признаков связана с нуклеиновыми кислотами. Характерное для живого организма создание молекул различных белков также должно протекать по соответствующему матричному механизму. Значительный вклад в химию нуклеиновых кислот внес Тодд. Однако окончательное выяснение состава и строения нуклеиновых кислот — задача еще не разрешенная вследствие многообразия возможных структур, но очень важная как для понимания биологических процессов, так и для изучения структуры белков. [c.97]

Вторым типом эксперимента является трансдукция, когда фрагменты генетического вещества и свойственные им маркеры переносятся из одной клетки в другую бактериофагом вместе с его собственной ДНК. Характерной особенностью трансдукции, так же как и трансформации, является перенос из клетки в клетку именно ДНК, а не нуклеопротеида. Мы знаем, что в хромосоме ДНК не существует в изолированном виде молекулы ДНК застроены в нуклеопротеидную структуру. То же можно утверждать и о вирусах, в частности фагах. Однако по опытам Херши, выполненным методом радиоактивной метки, при заражении клетки фагом последний как бы впрыскивает в клетку свою ДНК, белок же при этом не переходит (с точностью до долей процента). В последнее время удался также опыт заражения клеток выделенной и очищенной вирусной ДНК (подобно тому, как раньше удался опыт заражения растений вирусной РНК). [c.286]

Второе важнейшее обстоятельство, которое следовало проверить на опыте, — возможность образования в одной популяции клеток F разных по свойствам мутантов Hfr с различным положением начала хромосомы О. Само существование двух типов Hfr (типы Хэйса и Кавалли), выделенных из одной культуры F" , указывало на вероятность этого вывода. Необходимо было расширить наблюдения путем селекции разных мутантов Hfr из одной культуры клеток F+. [c.323]

Далее был выделен другой мутант о , ведущий себя как конститутивный, но притом не лишенный вещества ренрессора, т. е. i" . Конститутивность проявлялась нри образовании зиготы, но только по отношению к тем цистронам, которые находятся в положении is относительно точки о =. Например, скрещивание Hfry z"o i X F"y z o =i приводило к зиготе, в которой синтез галактозидазы конститутивен, ибо F являлась мутантом о и цистрон Z+ расположен в той же хромосоме, т. е. в положении is относительно о . Одновременно в тех же клетках синтез нер-меазы оказывался индуцированным, так как цистрон у " находился во второй хромосоме, в которой оператор был в аллели о" ". [c.493]

Попробуем теперь разобраться в том, как можно достигнуть таких правильных геометрических очертаний, какие имеет митотический аппарат, ибо это вскоре станет нашей главной проблемой. Исходя из одного только внешнего вида, старые гистологи пришли к убеждению, что центриоли действительно являются центрами, вызывающими образование нитей митотического аппарата. Так как форма этих телец в разных клетках может быть различной, будем обозначать их общим термином центры . Нити растут, по-видимому, из центров. Другой теории никто не выдвигал, хотя многие предполагают, что часть нитей, а именно те из них, которые связывают хромосомы с полюсами клетки, может возникнуть из хромосом. Переводя это на химический язык, мы можем выдвинуть рабочую гипотезу, заявив, что форма митотического аппарата определяется центрами, в которых путем образования дисульфидных связей возникают нити. Эти центры должны, таким образом, создавать условия для полимеризации. Опыты с митотическим аппаратом, выделенным при помощи дигитонинового метода, свидетельствуют до некоторой степени в пользу этого предположения. Если на митотический аппарат слегка воздействовать тиогликолевой кислотой, то растворяется все, кроме шарообразных участков в области звезд. По-видимому, в этих местах 8—8-мостики белков отличаются наибольшей прочностью. Мы далеки от понимания того, как образуется митотический аппарат, но [c.207]

В дальнейшем выделенные линии можно вновь скрестить, чтобы повыс ить вероятность возникновения генотипов с максимальным числом аддитивно ценных генов, появившихся в результате облучения или воздействия другого мутагена. Следует еще добавить, что с помощью мутагенеза удается разорвать нежелательные корреляции между признаками например, между урожайностью и склонностью к полеганию. Устойчивые корреляции между признаками часто обусловливаются тем, что гены, контролирующие данные признаки, тесно сцеплены, то есть находятся близко друг от друга в одних и тех же хромосомах. Мутагенез вызывает хромосомные перестройки и нарушает эти сцепления, а заодно и нежелательные корреляции. [c.163]

Для иллюстрации представлений, существовавших в то время среди опытных исследователей этой проблемы, рассмотрим статью Мирского, написанную в 1950 г., шесть лет спустя после опубликования открытия Эйвери. Только двумя годами раньше Мирский и Рис, а также Бойвин и Вендрели показали, что в клетках различных тканей одного и того же организма количество ДНК в расчете на гаплоидный хромосомный набор постоянно. Эти данные, как указывал Мирский, согласуются с предположением, что ДНК является генетическим материалом. Однако Мирский сделал лишь следующее заключение Если этот компонент (т. е. ДНК) хромосомы в самом деле представлен в постоянном количестве в различных соматических клетках организма и в половинном количестве в половых клетках, тогда можно считать, что ДНК является частью генетического вещества . Касаясь работы по пневмококковой трансформации, Мирский заявил Весьма возможно, что ДНК — и ничто иное — ответственна за трансформирующую активность, но это еще не доказано. При очистке активного начала удаляется все большее и большее количество белка, связанного с ДНК, как и в случае выделения ДНК из любого другого источника. Однако трудно исключить вероятность того, что незначительные количества белка, которые, вероятно, остаются связанными с ДНК, хотя и недоступны определению использованными методами, необ.ходимы для проявления активности, которая сама по себе — крайне чувствительный тест... Соответственно остаются некоторые сомнения, служит ли сама ДНК трансформирующим началом, хотя можно считать установленным, что ДНК является по крайней мере частью активного начала . [c.160]

В первых опытах Мишера по выделению нуклеина из клеток гноя, проведенных около века назад, было установлено, что в ядрах эукариотов отрицательно заряженная ДНК находится в комплексе с примерно равным по массе количеством положительно заряженных основных белков. В своей работе, проведенной в начале века, Коссель установил не только природу химических компонентов ДНК, но также выяснил состав связанных с ДНК основных белков. Из этих белков наиболее важное значение имеют гистоны, которые представляют собой полипептидные цепи длиной от 50 до 200 аминокислотных остатков. Положительный заряд ги-стонов обусловлен высоким содержанием в них трех основных аминокислот аргинина, лизина и гистидина, в боковых цепях которых имеется вторая аминогруппа (фиг. 15) па их долю приходится почти 25% всех аминокислот гистонов. Интересно сравнить высокое содержание основных аминокислот в гистонах с данными об аминокислотном составе различных белков, представленными в табл. 2, из которых видно, что основные аминокислоты составляют лишь от 8 до 12% всех аминокислотных остатков таких белков, как р-галактозидаза, А-полипептид триптофан-синтазы Е. oli и бычий инсулин. Взаимодействие между ДНК и гистонами в хромосоме происходит, вероятно, благодаря образованию ионных связей между фосфатными группами полинуклеотидной цепи и боковыми аминогруппами полипептидной цепи. На долю ДНК и гистонов приходится около 3 всей массы большинства хромосом остальную часть обычно относят на счет негистонных белков и РНК. [c.498]

О том, насколько неожиданным было это открытие, можно судить хотя бы по тому, что тогда еще не знали даже, что ДНК входит в состав пневмококков, хотя уже в течение нескольких десятилетий было известно, что ДНК является основным компонентом эукариотической хромосомы. Описывая методику выделения ДНК, Эйвери отмечает Когда концентрация спирта достигает примерно 9/10 объема, отделяется волокнистое вещество, которое при помешивании наматывается на стеклянную палочку, как нитка на катушку, тогда как другие примеси остаются в растворе в виде гранулированного осадка. Волокнистое вещество затем снова растворяют и процедуру повторяют несколько раз. Оказалось, что это вещество обладает высокой реакционной способностью и при элементарном анализе совпадает по свойствам с очищенной ДНК. (Кто бы мог догадаться ) Насколько мне известно, этот тип нуклеиновой кислоты пока не был обнаружен у пневмококков, хотя она была найдена у других бактерий . [c.22]

В интерфазном хроматине и митотических хромосомах, выделенных in vitro, наблюдаются большие петли, состоящие из непрерывной нити, которая, очевидно, закреплена у основания и образует независимые домены, подобные тем, которые обнаруживают в бактериональном нуклеотиде. Эти структуры обсуждаются в гл. 29. [c.350]

ДНК вируса SV40 представляет собой кольцевую молекулу в 5200 п.п., контурная длина которой равна примерно 1500 нм. И в состоянии вириона, и будучи инъецированной в ядро, она упакована в серию нуклеосом. В этой форме ее называют мини-хромосомой. При обычном выделении контурная длина мини-хромосомы равна примерно 210 нм, а плотность ее упаковки составляет примерно 7. Изменение в концентрации соли может превратить ее в гибкую нитку бус со значительно более низкой плотностью упаковки. Из этого следует, что нуклеосомные нити in vitro в зависимости от условий могут находиться в более чем одной форме. [c.364]

Отсюда, однако, не следует, что данная ДНК свободна от нуклеосом in vivo, поскольку вполне возможно, что при выделении мини-хромосомы была потеряна какая-то другая белковая структура. [c.391]

ПРОГУЛКА ПО ХРОМОСОМЕ hromosome walking). Термин означает последовательное выделение клонов, содержащих перекрывающиеся фрагменты ДНК. С помощью такого подхода можно картировать ДНК. [c.525]

Первые указания на то, что в системе репликации ДНК участвует целый ряд важных генетических функций, были получены благодаря выделению широкого набора условно-летальных температурочувствительных мутантов Е. соН (dna ), комплементационный анализ которых позволил соотнести их с мутациями в ряде различных генов. Среди них можно выделить два класса мутантов, которые при рестриктивной температуре (1) немедленно прекращают синтез ДНК или (2) в течение относительно протяженного временного интервала постепенно прекращают синтезировать ДНК (рис. 13.5). Первый фенотип связан с нарушением процесса синтеза ДНК в репликативной вилке, а второй-с исчезновением способности инициировать новый цикл репликации хромосомы. (В несинхронизированной культуре индивидуальные клетки мутантов второго класса, находящиеся на различных стадиях репликации, начавшейся еще при пермиссивной температуре, не прекращают синтезировать ДНК после повышения температуры до полного завершения цикла репликации хромосомы.) После сопоставления выделенных мутаций с определенными белками, на которых сказываются эти мутации, можно начать изучение функциональной роли этих белков in vivo. Локализация генов, ответственных за репликацию ДНК, на хромосоме Е. соИ показана на рис. 13.6. [c.112]

Смотреть страницы где упоминается термин Выделение хромосом: [c.136] [c.396] [c.645] [c.984] [c.989] [c.72] [c.337] [c.34] [c.394] [c.83] [c.26] [c.230] [c.97] [c.263] [c.53] [c.222] [c.230] [c.339] [c.488] [c.477] [c.117] [c.245] [c.283]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология