Мечения метод цепей

Метилциклогексан при нагревании с бромистым или хлористым алюминием практически не изменяется [18]. При помощи метода меченых атомов с применением метилциклогексана, содержащего С1 -метильную группу, удалось показать, что изомеризация идет и что после реакции. 31% метилциклогексана содержал радиоактивный углерод в кольце [58]. Реакция проводилась при 25° в течение 21 часа, в качестве катализатора были взяты бромистый алюминий и бромистый водород, а в качестве инициатора цепи — вто/ -бутилбромид. В отсутствии инициатора в кольце оказалось только около 1% радиоактивного углерода. [c.46]

Приведенную выше общую схему подтверждает ряд дополнительных наблюдений. Факт внедрения осколков инициирующего вещества в полимерные цепи наблюдался рядом исследователей как при помощи обычных методов, так и с применением меченых атомов для определения конечных групп. На большую длину кинетических цепей указывают высокий молекулярный вес образующихся полимеров и эффективность действия следов (0,01% мол. или менее) инициирующих веществ и ингибиторов. Короткая продолжительность жизни цепей и правомерность предположения о существовании устойчивого состояния вытекают из следующих наблюдений часто реакции полимеризации, прерываемые на различных стадиях, дают полимер того же молекулярного веса в отсутствии ингибиторов (включая кислород) реакции полимеризации не имеют измеримых периодов индукции (в течение которых должны были бы создаваться соответствующие концентрации радикалов) и, наконец, из измерений истинных констант скоростей развития и обрыва цепей (см. ниже). Предположение, что константы скорости не зависят от длины цепи по- [c.118]

Для некоторых систем было установлено, что инициаторы полимеризации включаются в цепь полимера. Применение метода меченых атомов позволило не только определить места включения инициаторов в полимерную молекулу, но и найти количество (долю) молекул инициатора, приходящееся на одну полимерную цепочку. Так, при [c.219]

Резкое уширение этих полос при температуре ниже Tt обусловлено потерей подвижности углеводородных цепей (дополнение 5-А). Аналогичные выводы были сделаны при исследовании спин-меченых бислоев, содержащих ковалентно связанные стабильные свободные радикалы, неспаренные электроны которых можно обнаружить методом электронного парамагнитного резонанса (ЭПР, ом. дополнение 5-Б). [c.343]

В исходном варианте для изложенного метода определения последовательности нуклеотидов использовали дезоксинуклеозид-5 -трифосфат, меченный радиоактивными изотопами Щ или в а-положении трифосфатной группы. Радиоактивная метка попадала в каждое звено синтезируемой цепи, что обеспечивало высокую чувствительность метода. [c.282]

Это содержание очень мало и может оказаться за пределами обычных методов химического анализа (уже при Л/ч = 50 000 оно составляет 0,1%). В этом случае применяют метод меченых атомов (радиоактивные С, и др.), которые вводят в полимерную цепь вместе с инициатором. [c.96]

Благодаря этому становится возможным пометить одну цепь (например, заменив в ней ядра водорода ядрами дейтерия) и наблюдать именно эту индивидуальную цепь в море химически идентичных немеченых цепей. Подобная процедура неосуществима в случае рентгеновских лучей, поскольку здесь, чтобы пометить цепь, надо ввести в нее тяжелые атомы, а это делает меченую и немеченую фракции существенно различающимися, что часто приводит к паразитным эффектам расслоения. С появлением метода нейтронного рассеяния на системах с мечеными фракциями открылась новая обширная область исследований быстро становятся доступными весьма точные данные о далеких корреляциях и конформациях в больших масштабах. [c.10]

В на оящее время нет экспериментальных данных о диффузии цепей, заключенных внутрь сетки. Однако имеются данные по коэффи циенту диффузии меченой цепи в полиэтиленовых расплавах, полученные двумя методами 1) с помощью ЯМР [12] 2) при использовании (в качестве меченых) дейтерированных цепей и измерении локальной концентрации дейтерированного компонента с помощью рассеяния инфракрасного излучения [13]. [c.257]

Применение динитрофенильных производных, введенных в практику Зангером [25] с целью идентификации и количественного определения концевых аминогрупп, позволяет получить ценные сведения о количестве открытых цепей в белке. Кроме того, такие меченые аминокислоты служат в качестве реперных точек при исследовании неполного гидролиза (1346). В этом отношении полезными являются также е -аминогруппы лизина. Путем неполного гидролиза, осуществляемого с помощью кислоты и различных типов ферментов, оказалось возможным разрывать длинные полипептидные цепи в различных точках и путем анализа установить единственно возможную конфигурацию. Этим способом Зангер и Таппи[99]и Зангер и Томпсон [100] определили порядок чередования аминокислот в двух типах цепей, входящих в состав инсулина (табл. 27). Такой подход к проблеме структуры белка был облегчен широким применением новейших микрометодов хроматографии на бумаге и силикагеле и ионофореза. Таким образом, оказывается, что одна из крупнейших проблем химии белка поддается изучению с помощью весьма простых и экономичных методов. Цепи в инсулине имеют различную длину, причем цепь с N-концевым фенилаланином (цепь В) состоит из 30 остатков, а соответствующая глициновая цепь (цепь А) — из 21 остатка. Порядок чередования аминокислот и их содержание даны в табл. 27. Можно отметить следующее. Цепь А не содержит лизина, гистидина, аргинина, треонина, фенилаланина и пролина все эти компоненты входят в состав цепи В, в которой, в свою очередь, совсем нет изолейцина. Не наблюдается ни регулярного чередования аминокислот, ни тенденции к чередованию полярных и неполярных групп. Три ароматические аминокислоты (фен.фен.тир.) расположены последовательно, и два остатка глутаминовой кислоты связаны с двумя остатками ци-стеина (глу.глу.цис.цис.). В обеих цепях содержится шесть цистеиновых остатков, четыре из которых расположены врозь, а только что упомянутые два — рядом друг с другом в молекуле нативного белка все они существуют в форме цистина, но какие из них расположены между пептидными цепями, а какие в самих пептидных цепях — неизвестно. Часть дикарбоновых кислот присутствует в виде амидов — четыре в цепи А и две в цепи В. [c.255]

НИН. Во-вторых, сам процесс отщепления можно провести в течение ночи. В наших условиях выходы составляют 92—97% и практически всегда совпадают с результатами анализа миоглобина. В-третьих, можно смешать миоглобин с меченой легкой цепью, провести 12 циклов отщепления (Val-Leu-Ser-Glu-Gly-Glu-Trp-Gln-Leu-Val-Leu-His-Val-Trp- -) и продукты отщепления циклов 1, 2, 10, 11 анализировать методом ГЖХ и ВЭЖХ, а циклов 4, И, 13 —оценить на содержание радиоактивности. При расхождении постадийных выходов для этих двух стандартов (обычно выходы дляJ миоглобина ниже, чем для меченой легкой цепи) причиной этого расхождения чаще всего является неэффективная работа системы превращения ТА в ФТГ-производные аминокислот (плохое качество этилацетата, перегрев конвертора, загрязнения в системе продувки азотом, перегрев испарителя, и т. д.) [c.435]

Рис. 1. Структура и схема синтеза проб для метода геномных отпечатков. Маленькие стрелочки обозначают тандемно повторяющиеся единицы гипер-вариабельной последовательности, а большие стрелки показывают направление синтеза меченых комплементарных цепей (методика приведена ниже в тексте). (Г) — радиоавтограф геля из легкоплавкой агарозы, в котором миии-сателлитная проба 33.6 была очищена электрофорезом (см. табл. 2). Отмечены начало дорожки и положение полосы, соответствующей меченой пробе.

Выделение иммуноглобулинов, связанных с поверхностью клетки, а также их внутриклеточных предшественников (или предшественников секреторных Ig) всегда сопряжено со значительными трудностями. Радиомаркирование, позволяющее выявить следовые количества Ig, облегчает решение этой задачи. После маркирования клетки солюбилизируют в детергенте и обрабатывают лизаты сывороткой анти-Ig, полученной у другого вида иммунные комплексы обычно осаждают затем второй антисывороткой к Ig первой антисыворотки. Меченые клеточные lg, находящиеся в преципитате, исследуют методом электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (ДСН) в присутствии восстанавливающих агентов или без них (Laemmli 1970). Меченые полипептидные цепи, разделенные в геле, опре- [c.77]

Даниэльс с сотрудниками [88] показали, что разложение С2Н5 Вг протекает по цепному механизму, причем цепи зарождаются и обрываются на стенках и, хотя реакция малочувствительна к изменению отношения величины поверхности к объему, стенки всегда оказывают влияние на ход реакции. Эти результаты были получены методом меченых атомов. [c.232]

Штокмейер, применив к изучению системы, состоящей из винилацетата и бензола, метод меченых атомов, нашел, что на полимерную цепь в полимере приходится 20 молекул бензола он высказал предположение, что при этом может происходить также и реакция сополимеризации (см. ниже) [141]. Фактически же вся проблема об атаке радикалов на ароматические системы в настоящее время является невыяснешшм разделом химии радикалов. [c.126]

Первое поколение дочерних молекул ДНК состоит наполовину из старых и наполовину из новых полинуклеотидных цепей. Зто было подтверждено замечательным экспериментом на бактериальных культурах с использованием меченых атомов ( N разд. 20.17). Об этом опыте в 1958 г. сообщили М. Мезельсон и Ф. У. Шталь. Они выращивали несколько поколений кишечной палочки Es heri hia oli) на питательной среде, в которой присутствовало соединение азота с высоким содержанием тяжелого изотопа Выделенная в этом случае бактериальная ДНК имела большую молекулярную массу (атомы в молекуле были те же) и большую плотность, чем ДНК, полученная из бактерий, выращенных на обычной среде. Различие плотности определяли методом, называемым ультрацентрифугированием в градиенте плотности. Раствор хлорида цезия помещают в центрифужную пробирку и вращают ротор с такой скоростью, чтобы получить центробежное ускорение, в 100 000 раз превышающее ускорение земного тяготения. В центробежном поле концентрация ионов цезия, имеющих высокую плотность (вместе с компенсирующими их заряд ионами хлора), будет выше в периферическом конце пробирки. Таким образом, по направлению к периферии в пробирке создается градиент плотности. Большие молекулы, вроде ДНК, при введении в пробирку и создании силового поля концентрируются в зонах, где их плотность равна плотности раствора хлорида цезия, т. е. в периферическом конце пробирки. Мезельсон и Шталь перенесли бактерии, выращенные в среде, обогащенной [c.460]

Энзиматический метод секвенирования основан на энзиматическом введении нуклеотида, терминирующего полинуклеотидную цепь (рис. 5.4). В этом случае обычно используют дидезоксирибо-нуклеозидтрифосфаты, в которых дезоксирибоза-З -ОН, представленная в нормальных нуклеотидах, отсутствует. Такой модифицированный нуклеотид, внедряясь в цепь ДНК с помощью ДНК-полимеразы, блокирует присоединение следующего нуклеотида. Синтез in vitro молекулы ДНК в присутствии затравки (праймера) и небольшого количества одного из таких модифицированных нуклеотидов приводит к образованию фрагментов ДНК в виде лесенки . Если для получения таких фрагментов применять меченую ДНК (обычно проводят четыре реакции синтеза с использованием различных нуклеотидов, терминирующих цепь), а электрофоретический анализ проводить на четырех дорожках геля, то можно определить последовательность нуклеотидов. В настоящее время используют модифицированный метод, сводящийся к флуоресцентному анализу наборов фрагментов ДНК в процессе движения по одной дорожке геля. [c.109]

Для введения С в цепь можно пользоваться одним из описанных методов, например, малоновым, азлактоновым и т д. Галоидалкилы или другие применяемые компоненты должны содержать С . Например, для синтеза серина, меченного С в положении 3, можно воспользоваться описанным выше синтезом — конденсацией ацетиламиномалонового эфира с НС ОН (см. стр. 444). Валин с С в одной из СНз-групп можно получить следующими последовательными реакциями малоновый эфир конденсируют с ацетальдегидом и на полученный этилиден-малоновый эфир действуют метилмагнийиодидом, содержащим С . Из образовавшегося изопропилмалонового эфира получают изовалериано-вую кислоту, содержащую в метильной группе, ее подвергают последовательно действию галоида и аммиака и получают валин. [c.453]

Эта реакция лежит в основе широко используемого метода обнаружения шиффовых оснований в белках и введения изотопных меток. Например, можно использовать меченный изотопом альдегид или амин либо ввести радиоактивную метку, используя Н-содержащий боргидрид натрия (так называемый бортритид) для восстановления в реакции (7-39). Последующий гидролиз белка (кислотный или ферментативный) позволяет установить, с боковой группой какой аминокислоты был связан субстрат, а частичный гидролиз позволяет локализовать центр связывания в пептидной цепи. [c.144]

Еще задолго до того, как был разработан метод радиоактивных меток, Кнооп в 1904 г. синтезировал жирные кислоты, которые в качестве метки содержали на конце, противоположном карбоксильному, ковалентно связанное бензольное кольцо. Он синтезировал меченые жирные кислоты, содер-жавщие как четное, так и нечетное число атомов углерода в неразветвленной цепи, и ввел их с пищей собакам. Затем из мочи собак он выделил два соединения, гиппуровую кислоту и фенилацетуровую кислоту — амиды глицина соответственно с бензойной и фенилуксусной кислотами. Кнооп показал, что фенилуксусная кислота образовалась из жирных кислот, имевщих четное число атомов углерода, тогда как бензойная кислота — из жирных кислот с нечетным числом атомов углерода. Отсюда Кнооп сделал вывод, что при окислении жирных кислот происходит отщепление сразу двух атомов углерода, и предложил свою знаменитую теорию р-окисления. [c.311]

Разделительная способность таких сорбентов зависит от целого ряда факторов. Наиболее существенными являются зависимость от типа заместителей в цепи полимера, от степени сщивки, от природы сшивающего реагента и состава подвижной фазы. Систематическое исследование этих факторов началось в 1974 г., когда было изучено частичное разделение двукратно-меченной ( Н и ">С) миндальной кислоты и ее амида энантиомерный состав элюируемых фракций был представлен с помошью сцинциляционного счетчика [56]. Поскольку отношение активностей н/ С пропорционально энантиомерному составу, этот метод обнаружения позволяет довольно точно определять а даже при очень плохом разделении пиков, но он, естественно, применим лишь в тех случаях, когда возможно введение соответствующих радиоизотопов в оба энантиомера. Соответственно профиль элюирования обоих энантиомеров был получен из единственного хроматографического эксперимента. [c.124]

Синтезирован ряд спин-меченных фосфолипидов (4) с нитроксидной группировкой в различных положениях одной из алкильных цепей фосфатидилхолина. Введение таких спин-меченных молекул в бислои позволяет следить за поведением различных областей этих бислоев с помощью ЭПР. Этот метод позволяет различать два других типа движения молекул помимо быстрого вращения вокруг продольной оси [17]. Во-первых, вся молекула липида прецессирует вокруг перпендикуляра к поверхности бислоя как жесткий стержень с точкой заякоривания на этой поверхности. Амплитуда такого движения зависит от того, в каком состояния (гелеобразном или жидкокристаллическом) находится липид, из которого состоит слой, а также от наличия других мембранных компонентов так, например, наличие холестерина снижает амплитуду прецессионного движения [11]. Во-вторых, наблюдается движение сегментов жирнокислотных цепей вокруг углерод-углерод-ных простых связей за счет быстрых переходов между гош- и транс-конформациями такое движение может накапливаться вдоль цепи, т. е. терминальная метильная группа в центре бислоя может быть более подвижна, чем метиленовые группы, примыкающие к [c.116]

Метод спектроскопии ЯМР был использован [37] для изучения взаимодействия между белком гликофорином из мембран эритроцитов и дипальмитоилфосфатидилхолином, меченным изотопом по метнльным группам холиновой головки. При температурах ниже температуры фазового перехода фосфолипидов в спектре ЯМР наблюдались два сигнала узкий и широкий. Узкий пик был отнесен к холиновой головке, которая, как полагают, более подвижна в непосредственной близости к белку этот вывод не исключает возможности иммобилизации алкильных цепей таких пограничных липидов и. гледпвятельно, может не противоречить результатам, полученным при изучении поведения пограничных липидов в цитохромоксидазе и кальцийзависимой АТР-азе. [c.125]

В очень близкой группе рифамицинов, изучавшейся аналогичными методами, стартовое звено, образованное из углевода, лишено С-метильной группы в других отношениях продукт сборки (157) идентичен соединению (154) [93]. Однако дальнейшие превращения (157) протекают другими путями (схемы 39—41). Уже в самом раннем из идентифицированных макроциклических предшественников, рифамицине W 157), метильная группа при С-14 подверглась гидроксилированию. Как было показано с помощью меченых соединений [94], рифамицин W является предшественником рифамицина S (158) механизм этого превращения включает стадию внедрения кислорода, которая, возможно, протекает путем раскрытия кольца промежуточного эпоксида и последующего отщепления окисленной метильной группы в виде СОг (схема 40). Протекают также незначительные трансформации в различных участках цепи (схема 41). В ходе дальнейших превращений, связанных, очевидно, с окислительным сужением цикла, из соединения (158) образуется пироновый аналог (159). [c.464]

Информация о механизме окислительного декарбоксилирования копропорфириногеиа III до протопорфириногена IX может быть получена при изучении превращений карбоксиэтильных боковых цепей, меченных дейтерием или тритием, в винильные группы. В ходе этого превращения биохимические процессы, происходящие с участием а- и Р-положений карбоксиэтильных боковых цепей, могут быть охарактеризованы по содержанию дейтерия или трития в кольцах А и В относительно колец С и О гема. С целью изучения такого рода превращений химическими методами были синтезированы [68] порфобилиногены (55) и (55а), содержащие дейтерий [c.655]

Рис. 4.12. Получение меченого ДНК-зонда методом случайных праймеров. К денатурированной двухцепочечной ДНК, содержащей нуклеотидную последовательность, которую предполагается использовать в качестве зонда, добавляют гексануклеотиды (смесь всех возможных комбинаций из шести нуклеотидов) и отжигают смесь. Некоторые из олигонуклеотидов гибридизуются с немеченой денатурированной ДНК, и в присутствии фрагмента Кленова и четырех с1НТР (один из которых меченый [ ]) служат затравкой для синтеза комплементарной цепи. После денатурации синтезированной ДНК получают смесь меченых фрагментов ДНК, которые вместе составляют практически полноразмерную исходную ДНК-матрицу.

Метод Эдмана заключается во взаимодействии М-концевой 1МИН0КИСЛ0ТЫ с фенилизотиоцианатом в щелочной среде. При 1ьнейшей обработке слабой кислотой без нагревания проис-гит отщепление от цепи меченой концевой ФТГ-аминокис-гы (см. 11.1.4). ФТГ-аминокислота идентифицируется мерами тонкослойной или газожидкостной хроматографии л. 15.1). [c.349]

Уменьшение количеств белков и пептидов, необходимых для анализа их структуры, является одной из центральных проблем, стоящих перед исследователями. С целью ее решения ведется поиск новых методов изучения структуры, в частности более чувствительных способов идентификации производных аминокислот (см. с. 61). Один из перспективных подходов заключается в широком использовании радиоактивных методов анализа. В ряде лабораторий при деградации пептидов в секвенаторе применяется радиоактивный или С-ФИТ1Д. Можно вводить радиоактивную метку непосредственно в анализируемый белок. Для многих белков это достигается добавлением радиоактивно меченных аминокислот непосредственно в питательную среду, на которой выращивается культура, являющаяся источником исследуемого белка. Таким же путем оказывается возможным радиоактивно метить белок избирательно по определенным аминокислотным остаткам. Если белок, радиоактивно меченный, например, по остаткам лейцина, анализировать с помощью секвенатора, то простое измерение радиоактивности экстрактов, содержащих анилинотиазолиноны, позволяет безошибочно определить, в каких положениях полипептидной цепи в N-концевой области белка расположены остатки лейцина (рис. 31). Аналогичным образом можно определить положение и других аминокислотных остатков. Такой прием используется для анализа N-koh-цевой последовательности предшественников белков, доступных лишь в ничтожно малых количествах. Для исследования полной структуры он, однако, не применяется из-за дороговизны и трудоемкости. [c.79]

Б- Ввиду отсутствия специфического метода расщепления ДНК по остаткам аденина применяется неполное расщепление цепи по пуриновым звеньям. Сравнительный анализ результатов двух типов расщепления (суммарно по пуриновым остаткам и только по гуано-зинам) дает возможность дифференцировать олигонуклеотиды, являющиеся продуктами расщепления по А. Для фрагментации по остаткам пурииа используется лабильность N-гликозидной связи пуриновых дезокснрибопроизводных в кислой среде. ДНК подвергается кратковременной обработке мурааьиной кислотой, в результате которой часть пуриновых оснований удаляется, и поли-нуклеотидная цепь затем расщепляется по образующимся дезокси-рибозным остаткам под действием пиперидина. Из модельного олигонуклеотида при этом должны образоваться следующие меченые соединения [c.322]

Проблемой, которую каждый раз приходится решать при использовании метода Максама — Гилберта, является получение полинуклеотидов, меченных только по одному из концов. Обычно для анализа используются двухцепочечные фрагменты ДНК (например, образовавшиеся после расщепления рестриктазами), а все методы введения концевых меток приводят к образованию фрагментоа, меченных по двум 5 - нлн двум 3 -концам. Поэтому приходится прибегать к дополнительным операциям, таким, как разделение комплементарных цепей ДНК после введения метки. [c.325]

ДНК-полимераза I (но не фрагмент Кленова) широко используется для получения меченых ДНК методом так называемой /шк-трансляции (от англ. ni k, обозначающего одноцепочечный разрыве). Если одна нз цепей ДНК содержит одноцепочечный разрыв так, что З -концевой нуклеотид в месте разрыва имеет З -ОН-группу, то ДНК-полимераза 1 в присутствии четырех нук-леозидтрифосфатов осуществляет матричный синтез. Одновременно она гидролизует существовавшую цепь за счет 5 З -экзоиук-леазной активности, как показано на схеме [c.350]

Т оличественная оценка связана с значительными экспериментальными трудностями. Если боковые цепи соединены с основной при помощи сложноэфирных связей, как, например, в случае поли-винилацетата (с. 63 ), можно судить о величине исследуя продукты гидролиза вместе с тем такой метод может привести к зани-женн1 м результатам, так как возможно параллельное протекание других процессов передачи цепи на полимер без участия группы 00СС1 з, приводящих к возникновению стойкой к гидролизу связи ветвлен ия с основной цепью. Лучшие результаты получаются при полимеризации стирола, меченного в присутствии обычного линейного полистирола с последующим определением радиоактивных ветвлений. Перспективен прямой метод, основанный на применении ЯМР 13С. [c.109]

Предварительно метилируя концевые гидроксильные или карбоксильные группы, можно определить степень полимеризации по числу метоксильных групп. Пригодны также методы, основанные на ацилировании гидроксильных групп. Если ацильный остаток содержит галоген, азот или другой элемент, отсутствующий в самом полимере, определение молекулярной массы полимера сводится к элементарному анализу. Эти меченые концевые группы, могут быть введены в макромолекулу во время самого синтеза полимера (полимеризация в присутствии галогензамещенных перекисей, передача цепи при полимеризации в присутствии ССЦ, СНС1з и т. д.). Во всех случаях необходимо пользоваться такими реакциями, в которых участвуют только концевые группы. Нельзя, [c.545]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология