Сефадексы ионообменные

Весьма часто при исследовании гемицеллюлоз получают гидролизаты, содержащие одновременно моносахариды, уроновые кислоты, нейтральные и кислые олигосахариды. В этом случае для разделения и идентификации компонентов применяют хроматографию на бумаге, разделение на колонках с ионообменными смолами, углем, сефадексом, газожидкостную хроматографию. Ниже на примере фракционирования гидролизатов гемицеллюлоз люцерны [177] показан метод разделения такой смеси. [c.125]

Для фракционирования нуклеозидов можно использовать продажные гель-фильтрующие материалы Сефадекс G10 и G15 и Биогель Р2. Преимущества этих материалов в том, что элюируемые вещества не размываются по колонке, количественно снимаются с колонки и нет необходимости применять солевые градиенты. Также маловероятно, что в условиях гель-фильтрации будут протекать какие-либо химические процессы деградации лабильных нуклеозидов, т. е. что-либо похожее на процессы, обязательно происходящие при ионообменной и адсорбционной хроматографии. 127]. [c.74]

Во влажном состоянии при нейтральных значениях pH сефадек-сы можно стерилизовать при температуре 110°. В сухом виде они выдерживают нагревание до 120°, однако при более высокой температуре начинается карамелизация. О сорбционных и ионообменных свойствах сефадексов было сказано выше. Добавим, что окисление кислородом, содержащимся в элюенте, приводит к появлению новых карбоксильных групп и постепенному усилению ионообменных свойств сефадекса, поэтому водные элюенты следует деаэрировать. Сильные окислители разрушают сефадексы степень их устойчивости к действию кислот и щелочей рассмотрена в гл. 2. Сефадексы не растворяются в органических растворителях, хотя и набухают во многих из них (особенно хорошо — в формамиде и диметилсульфокси- [c.116]

Для дальнейщего исследования РОВ в составе природных вод используют методы фракционирования на ионитах и сефадексах, причем наиболее эффективным приемом является сочетание сорбции на целлюлозных ионитах и фракционирования на сефадексах. Ионообменные целлюлозы — волокнистые гидрофильные сорбенты, хорощо набухающие в воде. Ионообменные целлюлозы неустойчивы в растворах щелочей и окислителей, и вследствие деструкции ионитов в растворе могут появляться примесные компоненты (например, полисахариды). Поэтому хроматографирование проводят при постоянных значениях pH. [c.251]

Рис. 114. Изменение степени набухания ионообменных сефадексов в зависимости от концентрации соли в элюенте и его pH

У ионообменных сефадексов типов А-50 и С-50 емкость по низкомолекулярным ионам примерно такая же, как у целлюлоз, а емкость по белку в 2—4 раза выше, чем у микрокристаллических целлюлоз, и в 4—7 раз выше, чем у волокнистых набухают они тоже примерно в три раза сильнее. Зато зависимости объемов этих сефадексов от pH и пониой си.лы элюента вт.гражены очень сильно (рис. 114). Обращает [c.273]

Соль в составе элюента в момент посадки препарата иа обменник может быть необходима для растворимости биополимера или сохранения его нативности, однако чаще всего ее вводят изначально для предотвращения слишком прочно сорбции исходного препарата. Обычно для обменников на основе целлюлозы исходная солевая концентрация должна быть около 0,01 М, для ионообменных сефадексов — на порядок выше. [c.291]

Обессоливание и смена буфера с помощью гель-фильтрации широко используются в ходе очистки белков и пептидов для освобождения от сульфата аммония или в качестве промежуточной операции, подготавливающей препарат к последующему этапу хроматографии (ионообменной, аффинной или других видов). Если объем раствора белка изл еряется миллилитрами, то рутинную операцию его очистки нередко ведут вслепую . Однажды откалибровав небольшую колонку с сефадексом С-25, последующий отбор фракций, содержащих высокомолекулярные компоненты, производят по объему элюата, нередко просто путем отсчета капель. Соотношение объемов исходного раствора и колонки в этом случае может составлять примерно 1 10. В препаративных вариантах обессоливания, когда желательно максимально использовать объем колонки и избежать разбавления препарата, 5то соотношение можио увеличить до 1 3, контролируя выход хроматографических зон по УсГ-поглощению. Скорость элюции в таких опытах может быть значительной, порядка 20мл/см -ч (скорость продвижения фронта зоны очищаемого вещества по колонке — 20 см/ч). [c.137]

Способы набивки колонки, ее уравновешивания прокачкой исходного элюента, внесения препарата, а также варианты и методы осуществления элюции подробно описаны в хл. . Однако следует отметить некоторые особенности, присущие использованию ионообменников. Главная из них связана с возможностью изменения объема обменника (высоты его столба в колонке) при изменении pH и концентрации соли в ходе элюции, особенно для ионообменных сефадексов типов А-50 и С-50. В связи с этим использование адаптора может оказаться неуместным, так что препарат приходится вносить в открытую колонку. Поверхность ионообменника в таком случае иногда защищают от взмучивания слоем сефадекса G-25 толщиной около 5 мм или кружком фильтровальной бумаги (следует убедиться, что препарат пе сорбируется на нем). В ответственных случаях фракционирования препарат имеет смыс. г подслаивать под буфер, как было описано в гл. 3. Следует помнить, что ионообменные сефадексы типов А-50 и С-50 гораздо мягче, чем сам сефадекс G-50. Их следует набивать в колонку с теми же предосторожностями, что были описаны в гл. 4 для сефадекса G-100. [c.281]

В последние годы вместо ионообменных смол при работе с белками применяют производные углеводов, в которые соответствующими методами введены ионизированные группы. К таким производным углеводов относятся ионообменные целлюлозы и ионообменные полимеры декстрина (сефадекс). По сравнению с ионообменными смолами эти ионообменники имеют определенные преимущества. Их гидрофильный матрикс очень хорошо связывает воду в результате они весьма интенсивно набухают в водной среде, что обеспечивает лучшие условия проницаемости для крупных белковых молекул по сравнению со смолами, имеющими гидрофобные [c.21]

По размеру пор ионообменные сефадексы подразделяются на два вида и имеют индексы 25 и 50. Ионообменник с индексом 25 [c.217]

Ионообменные сефадексы производятся в виде гранул диаметром 40—120 мкм, шарообразная форма которых обеспечивает высокую скорость протекания жидкости через колонку. Однако не следует забывать, что набухшие гранулы сефадекса легко подвергаются деформации. Поэтому попытка увеличить скорость протекания повышением давления подаваемого на колонку раствора выше определенного предела может, наоборот, привести к ее уменьшению. [c.218]

X600X 1050 мм 50 кг Проведение молекулярной адсорбции, распределительного обмена между двумя жидкими фазами, гельфильтрации с использованием сефадексов ионообменный хроматографический анализ очистка хроматографической бумаги, смол и сефадексов получение сухих веществ из элюатов. [c.328]

Для ТФЭ ионов высокотоксичных металлов наряду с ионообменными сорбентами наибольший интерес в настоящее время представляют пафоны, содержащие привитые комплексообразующие реагенты, которые образуют комплексы различной устойчивости с широким кругом ионов переходных металлов. Это позволяет при варьировании pH осуществлять их избирательное или фупповое концентрирование. В качестве твердых матриц для иммобилизации органических [юагентов применяют кремнеземы, целлюлозу, активный уголь, сефадексы, полимеры линейного и сетчатого строения и др. [70 . В частности, концентрирование РЬ, d, [c.215]

Декстран ( Sephadex ) — очень гидрофильный материал. Присоединение ионогенных групп происходит также по гидроксилалг полисахарида. Пористость и жесткость матриц на основе сефадексов зависит от процентного содержания сшивки (эпихлоргидрина). Модифицированные сефадексы для ионообменной хроматографии выпускаются на основе только двух типов сефадексов G-25 и G-50. Размеры пор у модифицированных сефадексов значительно выше, чем у двух исходных типов матриц, за счет уже знакомого нам эффекта расталкивания одноименно заряженных ионогенных групп. Ионообменные сефадексы соответственно и менее жестки их объемы тоже могут изменяться в зависимости от pH и ионной силы элюента. Особенно сильно это выражено у ионообменников, полученных на основе сефадекса G-50. Рабочий диапазон pH 2—12. [c.251]

В ионообменной хроматографии целлюлозоиониты применяются либо в виде порошка, которым заполняют колонку, либо в виде сефадексов и химически сшитых агарозных гелей в тонкослойной хроматографии (см. гл. IV). [c.117]

Сефадексы широко используются в последнее время для обес-солнвапия растворов белков вместо диализа, а также для концентрирования белка в растворе, что основано на большой гидрофиль-ности матрицы. Синтез ионообменных материалов на базе сефадекса значительно расширяет сферу использования гельфильтрации. [c.172]

Для бобовых многие авторы предпочитают использовать ионообменную хроматографию (DEAE — целлюлоза, DEAE — сефадекс и др.) гель-фильтрации. Этот метод в целом обеспечивает достаточное разрешение и использовался для фракционирования белков сои [20,60, 116], гороха [40,47] и люпина [34]. [c.154]

Ниже приведены параметры ионообменных сефадексов для 0,1 М Na l в качестве элюента (степень набухания здесь сильно зависит от концентрации соли) [c.273]

Рис. 115. Зависимость скорости течения элюента (и) от гидравлического напора hIL) для ионообменных сефадексов Размеры колонки 2,5 Х 45 см элюент — 0,1 М Na l

Отсюда можио сделать два практически важных вывода. Во-первых, колонки, заполненные крупнопористыми ионообменными сефадексами, должны быть с самого начала уравновешены элюентом, содер/кащ им не менее 0,1 М Na l, иначе в ходе элюции с увеличением концентрации соли их объем (высота набивки) может уменьшиться в 2—3 раза, что приведет к сущ ественному ухудшению разрешения пиков. Во-вторых, даже при использовании для элюции солевых растворов с концентрациями в диапазоне 0,1—0,3 М колонка сожмется весьма сущ ественпо, во всяком случае настолько, что ее уже нельзя будет регенерировать промывкой элюентом с исходной концентрацией соли. Прп такой промывке столб обменника не сможет подняться до прежнего уровня. Вместо этого увеличиваюш иеся в объеме гранулы будут деформироваться, утрачивать сферическую форму и заполнять свободные промежутки между ними — протекание элюента по колонке резко затруднится. Для регенерации ионообменных сефадексов типов А-50 и С-50 после элюции с увеличением концентрации соли колонки приходится опорожнять и обменники промывать декантацией в свободном объеме. [c.274]

Ионообменная хроматография. После диализа раствор наносят на колонку (4x20 см), заполненную ДЭАЭ-сефадексом А-50, уравновешенную буфером В. Колонку промывают тем же буфером (500 мл), после чего проводят элюцию 0,3 М трис-фосфатным буфером, pH 8,0, содержащим 0,1 мМ ЭДТА (500 мл). Фракции, содержащие фермент, объединяют и добавляют сульфат аммония до 807о-ного насыщения. Продолжают перемешивание в течение часа, центрифугируют (20 мин при 15000 ). Осадок осторожно суспендируют в буфере В, насыщенном сульфатом аммония, и хранят при 4° С. [c.245]

Частачно гидролизованные, т.н. клинические, Д. с мол. м. 30-80 тыс. (содержат не менее 95% 1 - 6-связей) используют для приготовления плазмозаменителей противошокового и гемодинамич. действия. Д., сшитые поперечными связями эпихлоргидрином (т.н. сефадексы), и их производные-сорбенты в гель-хроматографии, ионообменной и гидрофобной хроматографии и электрофорезе. [c.20]

Л. извлекают из водорослей горячей водой или разб. к-тами сопутствующие кислые полисахариды отделяют осаждением в виде нерастворимых солей (напр., с катионными детергентами типа цетилтриметиламмонийбромида) или ионообменной хроматографией. М-Цепи и G-цепи разделяют хроматографически с использованием в качестве сорбента диэтиламиноэтилцеллюлозы (ДЭАЭ-сефадекс) в мо-либдатной форме. [c.577]

Хюбнер и др. [98] разделяли глютенины после восстановления и алкилирования (Я -глютенины) гель-фильтрацией на сефадексе G 200 (0,03М уксусная кислота, 4М мочевина) на три фракции (А, В, С) равной величины, из которых первая (А) обнаружена в агрегированной форме. Две неагрегированные фракции (В, С) были повторно фракционированы ионообменной хроматографией на сульфоэтилцеллюлозе. В таких условиях фракция В разделяется на 7 фракций, из которых некоторые, хотя состоят из нескольких субъединиц с разными молекулярными массами, при электрофорезе в кислом pH ведут себя как гомогенные. Аналогичные результаты получены [89] при фракционировании на сефадексе G 100. Данно и др. [58] добивались аналогичного разделения путем. избирательного осаждения субъединиц этанолом. Для фракционирования субъединиц глютенинов используются также гель-фильтрация и ионообменная хроматография после избирательного растворения в уксусной кислоте [127]. [c.200]

В настоящее время применяют ряд усовершенствованных методов разделения нуклеиновых кислот на фракции из суммарного препарата, полученного описанным методом. Это прежде всего хроматография на геле фосфата кальция, ионообменная хроматография (в качестве адсорбентов используют ДЭАЭ-целлюлозу, ДЭЛЭ-сефадекс и др.), ультрацентрифугирование в градиенте плотности сахарозы, хроматография по сродству на белковых носителях, фильтрация через гели агарозы и сефарозы, гель-электрофорез и др. [c.97]

НОЧНОЙ хроматографии. Привитые и обращенные фазы не являются новинкой упомянем использование бумаги и слоев на основе ацетилированной целлюлозы, сефадекс Ш-20, хроматографию с высаливанием на ионообменной бумаге и слоях, применение полиамидных слоев [121]. К сожалению, все эти методы и теоретические обоснования протекающих процессов разработаны в основном специалистами, занимающимися ВЭЖХ, и тонкослойная хроматография буквально плетется в хвосте. Полезно было бы обратиться к старым публикациям, посвященным этим вопросам. [c.83]

Фирма Pharma ia (Швеция) выпускает 18 типов сефадексов (без ионообменных свойств), которые отличаются друг от друга частотой поперечных сшивок. Важнейшие свойства сефадексов приведены в табл. 2. Символ, указывающий тип сефадекса (G-25, G-50 и т. д.), обозначает пористую структуру (G) и величину поглощения воды на грамм сухого веса сефадекса, т. е. указывает частоту поперечных сшивок декстрана. У сефадексов с высоким значением индекса цифра указывает нижний предел молекулярного веса веществ (в тысячах), не проникающих внутрь гранул геля. Например, вещества с молекулярным весом меньше Д00 ООО могут проникать внутрь гранул сефадекса G-100, тогда как вещества с более крупными молекулами выходят в свободном объеме раствора. [c.24]

При уменьшении ионной силы буферного раствора ионообменные сефадексы очень сильно набухают, поэтому не рекомендуется применять растворы, ионная сила которых ниже 0,05—0,1. Если хроматографию начинают в слишком разбавленном буферном растворе, то при последующем значительном увеличении ионной силы элюирующего буферного раствора происходит уменьшение объема гранул сефадекса, которое может вызвать образование полостей в колонке геля. Образование полостей нарушает равномерное протека-ние жидкости через колонку и неблагоприятно отражается на результатах хроматографии. [c.217]

В последние годы все большее распространение получает хроматографическое разделение веществ по их молекулярному весу, причем первое место среди таких вариантов хроматографии принадлежит гель-фильтрации на сефадексах . Сефадекс представляет собой полусинтетический -сорбент полисахаридной природы, гранулы которого обладают порами определенного размера, так что диффузия внутрь этих гранул возможна только для молекул, величина которых не превышает величину пор. Поэтому сефадекс работает как своего рода молекулярное сито , задерживающее проникающие внутрь гранул низкомолекулярные вещества и не задерживающее полимеры. Гель-фильтрация незаменима для быстрого отделения полимера от низкомолекулярных примесей (неорганических солей, мономеров и т. д.). Ее применяют и для разделения полимеров, причем одновременно можно приблизительно оценить их молек лярный вес, так как существует набор сефадексов, различающихся величиной пор. Есть все основания полагать, что в химии полисахаридов этот перспективный метод будет находить все большее применение. Особенно интересным является использование сефадексов для разделения высоко- и низкомолекулярных осколков, образующихся при расщеплении биополимеров различными реагентами , и для выделения полисахаридов из различных природных источников Хроматография на модифицированных сефадексах, обладаюш.их ионообменными свойствами, например на диэтиламиноэтилсефадексе, также может служить эффективным приемом фракционирования полисахаридов . [c.487]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология