Крахмал для электрофореза

Еще более успешное разделение белков достигается, если в качестве носителя берут набухший крахмал или полиакриламид (электрофорез на гелевом носителе). Многочисленные модификации этого метода описаны в специальной литературе. [c.216]

Электрофорез проводят либо в свободной незакрепленной среде (в свободной жидкости) — фронтальный электрофорез, либо в закрепленной среде — зональный электрофорез — на крупнопористых носителях (фильтровальная бумага, целлюлоза, порошкообразная пластмасса, агар-агар, ацетилцеллюлоза, стеклянный порошок) или на мелкопористых носителях (силикагель, полиакриламидный гель, целлюлоза, оксид алюминия, крахмал и др.). [c.237]

Электрофорез в гелях- применяют гл.обр. для разделения высокомол. соед., напр, белков. Для этого обычно в виде блоков и колонок используют гели крахмала и полиакриламида. Адсорбция разделяемых в-в и электроосмос в этих материалах незначительны. [c.437]

Принцип и ограничения метода. Техника электрофореза основана на принципе дифференциальной подвижности белковых молекул в поддерживающей среде, или носителе (крахмал, полиакриламид, ацетат целлюлозы и др.), под действием электрического тока. Подвижность есть функция суммарного электрического заряда молекулы, который зависит от ионизации аминокислот белка и отсюда — от pH, а также от размеров молекулы белка. [c.39]

Другой, наиболее употребимый тип электрофореза осуществляется на носителе это классические носители для хроматографического разделения (бумага, ацетат целлюлозы, гели из крахмала и полиакриламида), выбираемые в соответствии с характеристиками (размер, форма) молекул, подлежащих разделению, и их собственными параметрами структуры (пористость, вязкость). [c.87]

Электрофорез в блоке. В качестве носителя используют крахмал, который формируют в виде блока, помещают на лоток, соединенный с двумя электродными сосудами, заполненными буферным раствором. Раствор исследуемого препарата замешивают на сухом крахмале и вносят в узкую поперечную траншею, сделанную в середине блока. После прекращения электрофореза блок разрезают на поперечные доли, из каждой элюируют и количественно определяют исследуемое вещество. Метод применяется для разделения веществ с молекулярной массой выше 30 ООО, так как вещества с меньшей молекулярной массой проникают и адсорбируются внутри крахмальных зерен. [c.146]

Электрофорез в тонком слое проводится в закрепленном толщиной 1—2 мм слое силикагеля, агара, агарозы, крахмала, полиакриламидного геля, сефадекса, целлюлозы, кизельгура, окиси алюминия, алебастра. Проводящую жидкость вводят в слой носителя нли ею опрыскивают слой после его формирования. Раствор исследуемого вещества вносят на поверхность слоя или внутрь отверстий, вырезанных в слое. Электрофоретический процесс можно проводить в устройствах, предназначенных для электрофореза на бумаге. [c.147]

Электрофорез в крахмальном геле. Гель готовят из гидролизованного крахмала. Горячий гель заливают в кювету глубиной 5—6 мм, которую закрывают специальной крышкой, устроенной так, что в застывшем геле остается поперечный ряд узких щелей (0,3—0,7 мм). В щели вносят кусочки фильтровальной бумаги, смоченной раствором исследуемого вещества, и проводят одномерный или двумерный электрофорез в горизонтальных или вертикальных установках. Преимущество горизонтального варианта — простота исполнения, вертикального — большая разрешающая сила. [c.147]

Предложен электрофорез на пластинках из крахмала, погруженных в ванну из плексигласа [562, 1244]. Электрофорез нашел применение также при выделении ртути из различных биологических материалов [57, 202]. Электрофорез проводится в основном при высоком градиенте напряжения (порядка 400 в/см). Предложено электрофоретическое разделение Hg(II) и Ni(II) в растворе электролита, протекающего с постоянной скоростью перпендикулярно направлению электрического поля [958]. [c.74]

Некоторые методические сложности препятствуют широкому распространению электрофореза в крахмальном геле, несмотря на его весьма большую разрешающую способность. По сравнению с электрофорезом на бумаге электрофорез в крахмальном геле включает дополнительные операции, связанные с приготовлением и гидролизом крахмала, сборкой прибора, окрашиванием и количественным определением полученных фракций. Однако присущий крахмальному гелю эффект молекулярного сита увеличивает разрешающую способность данного метода по сравнению с электрофорезом на бумаге, и поэтому его используют для более тонкого анализа. [c.12]

Если для приготовления геля использовать частицы крахмала определенного размера, то электрофорез в таком геле может дать лучшее разделение белков, чем на бумаге. [c.81]

Методика. Закончив электрофорез, крахмальный блок горизонтально разрезают на две половины. Одну половину окрашивают обычным образом, другую переносят на стеклянную пластинку и располагают колонки крахмала так, как показано на фиг. 9. Затем вокруг них наливают горячий раствор агара (приготовление см. на стр. 127), при застывании которого образуется слой толщиной [c.82]

Крахмал суспендируют в 270 мл буферного раствора, предназначенного для геля, в котором растворено 40,0 г мочевины. Все остальные процедуры проводят так же, как и при обычном горизонтальном электрофорезе в крахмальном геле (стр. 80). [c.83]

Препаративный электрофорез в крахмальном блоке. Принцип метода. Под влиянием электрического поля происходит миграция белков в крахмальном блоке, в результате которой белки разделяются, а после разделения их можно элюировать из крахмала. [c.83]

Выделение фракций. Закончив электрофорез, блок извлекают из ванны и, слегка подсушив, разрезают на фрагменты шириной 1 см. Каждый фрагмент переносят в центрифужную пробирку соответствующего размера и размешивают с 3 мл буферного раствора. Осадок крахмала отделяют центрифугированием, а в надосадочной жидкости определяют содержание белка и на основании этих данных строят кривую фракционирования. В соответствии с этой кривой нужные фракции объединяют. [c.84]

Эффективность разделения можно повысить с помощью ионообменной бумаги, полученной окислением целлюлозы окислами азота [137] достигнуто четкое разделение Gr(II), Fe(III), Gu(I), Ni(II) и Mn(II) в ацетатном растворе с pH 1,4. Омесь элементов — щелочные и щелочноземельные металлы, Си, Ni, Со, Fe, Pb, Zn, r, Mn, Al, d, Bi, Sn, Sb, As, Ag, Hg — разделяют электрофорезом в тонком слое, состоящем из смеси очищенного силикагеля и крахмала, с применением растворов лимонной кислоты в качестве электролита [435]. На бумаге Ватман № 1 в 0,1 Af растворе цитрата аммония при Градиенте потенциала 7 в/см осуществлено разделение Сг(П1), r(VI), Mo(VI), W(VI) [623]. В 0,1 М K l при напряжении 1000—1500 в получают четкое разделение ионов Сг(1П) и r(VI) [c.153]

С помощью описанного выше метода электрофореза в растворе полностью разделить компоненты смеси не удается. Более эффективен в этом отношении зонный электрофорез, для которого используются твердые среды (бумага, крахмал или целлю- [c.219]

Область применения. Имеется много примеров применения колонок для препаративного разделения и очистки смесей белков, пептидов, аминокислот и т. д. Библиографию по крахмальным колонкам можно найти в обзоре [30]. Крахмал особенно пригоден для электрофореза сывороточных белков, которые на нем практически не адсорбируются. Но успешно исследовались и другие объекты в диапазоне pH от 2 до И. [c.90]

Структура крахмального наполнителя такова, что после окончания опыта можно вынуть из прибора целиком весь столбик крахмала, разрезать его на слои и элюировать каждый из них отдельно. Целлюлоза и другие пористые материалы мало пригодны для этой цели. Электрофорез в крахмальном блоке был введен Кункелем и Слэтером в 1952 г. [31]. [c.91]

В большинстве современных методов электрофореза для предотвращения смешивания зон миграция ионов проводится в пропитанных электролитом пористых инертных средах. Для этой цели используются фильтровальная бумага, стеклянное волокно, стеклянный или кварцевый порошок, крахмал, агар-агар. Во всех этих наполнителях миграция ионов должна начинаться из первоначально узкой зоны. Различная подвижность ионов приводит к полному разделению смеси с образованием дискретных зон, аналогичных зонам при хроматографическом разделении. [c.36]

В качестве общего метода для фракционирования белковых смесей и для исследования гомогенности белков электрофорез в таких средах, как гранулированный крахмал, целлюлозный порошок [c.251]

Электрофорез в полиакриламидном геле. Полиакриламидный гель (ПАГ) представляет собой синтетический продукт сополимеризации акриламида и сшивающего агента, чаще всего Ы, Ы -метиленбисакриламида. Благодаря образованию поперечных связей между растущими соседними полиакриламидными цепями, возникающими в результате полимеризации Бинильных групп, такой гель имеет структуру трехмерной сетки. В отличие от природного полимера крахмала синтетический гель прозрачен, химически стабилен, инертен, устойчив к изменениям pH и температуры, нерастворим в большинстве растворителей и, наконец, в нем практически отсутствуют адсорбция и электроосмос. [c.147]

В которую переходят из крахмала растворимые примеси, отбрасывают. Отмывание крахмала отстаиванием повторяют дважды, затем осадок переносят в воронку Бюхнера и 3—4 раза промывают буферным раствором. После этого делают пастоподобную смесь крахмала с буферным раствором и примерно 100 мл этой пасты переносят в коническую колбу емкостью 0,5 л. Постоянно размешивая, крахмальную пасту нагревают до получения абсолютно гомогенной массы, причем следует избегать кипения геля. Чтобы удалить пузырьки воздуха, в колбе, содер-жаш ей нагретый гомогенный крахмальный гель, с помош ью вакуумного насоса создают разрежение, и гель на 1—2 мин вскипает. После этого им заполняют ванну прибора для электрофореза избыток буферного раствора удаляют с помош ью толстой фильтровальной бумаги, а для того чтобы предотвратить испарение, поверхность геля заливают тонким слоем расплавленного парафина. [c.79]

Локализация белковых фракций. Закончив электрофорез, ъанну с крахмальным гелем извлекают из прибора и располагают горизонтально на столе. Пленку парафина, закрывающую гель, удаляют, и всю поверхность крахмала покрывают листом фильтровальной бумаги. Лист плотно прижимают к поверхности геля в течение 5 мин, затем снимают его, высушивают в сушильном шкафу при 100 С и окрашивают белковыми красителями (см. стр. 54). Этим способом удается установить локализацию фракций, не прибегая к окрашиванию самого крахмального геля (метод отпечатков), [c.80]

Исс,ледуемый материал наносится в виде узкой полосы иа поддерживающую среду приблизительно посередине между сосудами с буферным раствором, в которых находятся электроды. Каждый из компонентов мигрирует с определенной скоростью, зависящей от его заряда, к катоду или к аноду. В результате все компоненты четко разделяются. После этого носитель можно разрезать на соответствующие части и элюировать каждый из компонентов смеси. Таким образом, зонный электрофорез можно с успехом использовать как для анализа многокомпонентных смесей, так и д.пя препаративного выделения чистых белков. Выбор носителя для зонного электрофореза зависит главным образом от задачи, которая стоит перед экспериментатором. Если основной целью является разделение компонентов, то в качестве носителей используются бумага, крахмал или лучше полиакриламидный гель. Если же целью яв.ляется препаративное получение чистого белка, то лучше всего использовать крахмальный блок, на который [c.77]

Электрофорез на бумаге очень удобен для исследования и очистки различных ферментов, поскольку определять ферментативную активность можно непосредственно на поверхности бумажной полоски. Соответствующие методы разработаны для многих ферментов. Например, амилазу определяют, обработав алектрофореграмму крахмалом. После инкубации оставшийся крахмал окрашивают раствором йода. Светлые места соответствуют положению амилазы. Р-Галактозидазу можно обнаружить по появлению желтой окраски, если обрызгать бумагу раствором специального субстрата, о-нитрофенил-р-П-галактозида. В результате разложения этого бесцветного вещества выделяется желтый нитрофенол. Фосфатазы обнаруживают по появлению окраски при разложении фенолфталеин осфата или п-нитрофе-нилфосфата и т. д. [c.104]

Различают фронтальный и зональный электрофорез [8]. При фронтальном электрофорезе различные компоненты смеси выявляются в виде серии границ, соответствующих зонам веществ, частично перекрывающих одна другую. При зональном электрофорезе каждый компонент смеси выявляется в форме обособленной зоны. Зональный электрофорез проводится на инертном носптеле, пропитанном электролитом. В качестве носителей использовались различные вещества желатин, асбестовое волокно, порошок стеклянной ваты, силикагель, крахмал, бумага и др. Необходимыми требованиями к носителям являются их инертность по отношению к исследуемым веществам н незначительная адсорбирующая способность, Выбор электролита, его концентрация и pH зависят ог разделяемых веществ. [c.245]

С самого начала применения электрофореза для стабилизации зон использовались гели. В 1946 г. с этой целью был применен силикагель, а 1949 г. — гель агара [30]. Эти гели используются и в настоящее время, особенно в аналитических целях. Расширение области применения гелей при электрофорезе белков связано с работой Смитиса [91], который использовал молекулярно-ситовые свойства геля крахмала. Это гель особенно удобен для аналитических работ (см. рис. 12.28). При проведении препаративных разделений следует учитывать некоторую загрязненность элюата полисахаридами, которые вымываются из матрицы геля. Аналогичное загрязнение элюата наблюдается и при разделении на геле агара и силикагеле, который содержит большое количество неорганических примесей. Наличие ионогенных групп подтверждается четким электроосмотическим потоком. Электроосмос вызывает сдвиг зон в одном направлении, что искажает профиль разделения. В агарозном геле, свойства которого по другим признакам сходны с агаровым гелем, содержание ионогенных групп существенно ниже. [c.298]

Более практичным и эф- Поп проницаеыые мембраны фективным оказался, однако, электрофорез с применением тех или иных опорных сред, так называемый зональный электрофорез, т. е. электрофорез в растворах, которыми пропитывается какой-либо твердый пористый или порошкообразный носитель — фильтровальная бумага, крахмал, целлюлоза, стеклянный порошок и др. Еще более эффективным, хотя и менее удобным для препаративных целей, оказалось электрофоретическое разделение в гелях — агар-агаровом, крахмальном, полиакриламидном. [c.31]

В гл. 4 и 9 приведены ссылки на некоторые методики хроматографии, где с успехом применяют концентрированные растворы мочевины интересно отметить, что электрофорез в крахмальном геле также проводят в присутствии высоких концентраций мочевины. Пулик [24] недавно опубликовал убедительные результаты фракционирования продуктов, полученных при восстановительном расщеплении з-макроглобулина с применением геля, приготовленного следующим образом. Гидролизованный крахмал (60—65 г) смешивали с 250 г мочевины и смесь добавляли маленькими порциями к 300 мл буфера при энергичном перемешивании. Затем вязкий раствор нагревали при 70° в течение 10 мин, удаляли пузырьки воздуха и гель выливали в лоток для электрофореза. [c.257]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология