Обнаружение белков

Для обнаружения белков используют характерные качественные реакции, основанные на образовании окрашенных продуктов реакции. [c.361]

Для обнаружения белка обычно используют следующие цветные реакции. [c.388]

В состав белков входят различные функциональные группы, которые способны участвовать во многих органических процессах — реакциях окисления-восстановления, алкилирования, арилирования, ацилирования, этерификации, галогенирования, нитрования, диазотирования, азосочетания и др. Характерные цветные реакции, которые используют для обнаружения белков [c.547]

Важным фактором является также способность белков к агрегации и денатурации. При изучении компонентов живой материи привлекают внимание слаборастворимые белки, входящие в состав клеточных мембран. В последнее время была решена проблема выделения липопротеидов, и интересы исследователей переключились на белки клеточного ядра. Основное внимание здесь уделяется как эффективности хроматографических методов, так и внедрению ускоренных методов, сопровождающихся незначительными потерями материала. Настоящая глава преследует цель дать обзор методов выделения и обнаружения белков, а также сформулировать общие принципы, опираясь на которые можно с учетом основных сведений об исходном материале построить рациональную схему выделения исследуемого белка. Правда, нельзя исключить и того, что при детальной разработке такой схемы иногда придется действовать методом проб и ошибок. [c.421]

В. Флуориметрическое обнаружение белков [c.459]

Следует помнить, что белки вообще неустойчивы к действию интенсивного УФ-облучения, кроме того, в этих условиях может идти фотоокисление остатков триптофана. Следовательно, при обнаружении белков энергия облучения и время экспозиции должны быть по возможности минимальными. [c.459]

Г. Автоматическое спектрофотометрическое обнаружение белков [c.459]

В обычных УФ-денситометрах в качестве источника света используется ртутная лампа низкого давления с интенсивной линией при 253,7 нм. Энергия УФ-излучения такой лампы составляет около Э/мин, т. е. примерно 0,09 мкВ. Для обнаружения белков по поглощению при 280 нм УФ-денситометры снабжены флуоресцентным преобразователем света (свинцовое стекло или кристалл). Если специфичность детектирования и достижение высокой чувствительности не существенны, белки можно определять и при 253,7 нм. [c.460]

Ход работы. Яичный белок смешать с пятикратным объемом воды и выпавший яичный глобулин отфильтровать. В полученном фильтрате определить наличие альбумина осаждением путем нагревания и применением алкалоидных реактивов, а затем для подтверждения альбуминового характера обнаруженного белка- определить границы высаливания. Для этого в девять пробирок налить (в каждую ) по 1 мл раствора белка. После этого долить различное количество воды так, как это указано в приведенной форме, а затем в первые восемь пробирок добавить возрастающий объем насыщенного раствора сернокислого аммония, а в девятую твердой соли (МН4)2304 до полного насыщения. [c.178]

Цветные реакции мало пригодны для обнаружения белка в моче, так как нормальная и патологическая моча содержит ряд веществ, мещающих этим реакциям. [c.280]

Флуоресценция при УФ-освещении является чувствительным методом обнаружения белков, в данном случае амфолиты не препятствуют определению. [c.314]

Цветные реакции на белки. Для белковых веществ характерен ряд цветных реакций, которыми обычно пользуются для обнаружения белков в биологических объектах. Важнейшие из них следующие. [c.213]

Применение. В гистохимии и гематологии для выявления гемоглобина [1] и в сочетании е пероксидом водорода для выявления пероксидазы [2—4]. В микроскопии для выявления пектина [5], обнаружения белка [Пирс, 86] и в качестве реактива на Си +. [c.56]

И. ОБНАРУЖЕНИЕ БЕЛКОВ В МЯСЕ [c.385]

Белок, находящийся в растворе, способен при определенных условиях выпадать в осадок. Это явление используется для обнаружения белков в исследуемом материале и для выделения белков в чистом виде. Выше уже было отмечено, что возможность пребывания белка в растворенном состоянии связана с определенным состоянием его вторичной и третичной структуры. Важно также, что молекулы белков в растворе несут электрический заряд и окружены водными оболочками. Как присутствие водной оболочки, так и наличие электрического заряда препятствуют выпадению белка в осадок. Белки, как и аминокислоты, являются амфотерными электролитами и представлены в растворах в виде амфионов, которые схематически можно изобразить так [c.60]

Обнаружение белка в слюне. Проделывают со слюной реакции биуретовую, Миллона и ксантопротеиновую (см. раздел Химия белков и аминокислот ). [c.260]

Работа 191. Обнаружение белка в кости или зубе [c.269]

Этот метод широко применяется в клинических лабораториях для удаления белков из биологических жидкостей, для количественного определения белков (например, в кровяной сыворотке) и для качественного обнаружения белков в моче и в других биологических жидкостях. [c.18]

Необратимое осаждение белков фосфорновольфрамовой кислотой используется в гистохимии для обнаружения белков в тканевых срезах. Присутствие белка обнаруживают измерением поглощения рентгеновских лучей тяжелым атомом вольфрама в высушенных тканевых срезах [32]. [c.19]

Разработан ряд методов обнаружения белков, позволяющих обойтись без длительной процедуры предварительной промывки. Спенсер и Кинг [427] обрабатывали гели в течение ночи смесью 100 мл 10 %-ной трихлоруксусной кислоты, 100 мл 10 %-ной [c.178]

Применение. Обнаружение белков. [c.259]

Применение. Обнаружение белков [276]. [c.267]

Н. применяют в произ-ве азокрасителей и красителей для меха. 2-Амино-4-нигрофенол-антиоксидант, светостабили-затор резин, катализатор в произ-ве 1,4-гексадиена при попадании на кожу вызывает дерматит. 2-Амино-4,6-ди-нитрофенол-цветной стандарт при определении сахаров, реагент для обнаружения белков и аминокислот при мех. воздействии и нагревании взрывается т. всп. 205-210 °С. [c.264]

Тонкослойный вариант гель-фильтрации был предложен Детер-маном [6], а также Иоханссоном и Римо [11 ] и оказался весьма полезным для микроанализа и быстрого сравнительного анализа нескольких образцов исследуемого материала. Эндрюс [1 ], а позднее Моррис [12] применили тонкослойную гель-фильтрацию для определения молекулярного веса белков на основе установленной ими линейной зависимости между логарифмом молекулярного веса данного белка и расстоянием, пройденным им в слое данного носителя за определенный помежуток времени. В соответствии с этим можно ориентировочно определять молекулярные веса неизвестных белков, если одновременно проводить гель-фильтрацию стандартных белков известного молекулярного веса. Когда исследователь располагает достаточно чувствительными методами обнаружения белка в слое носителя, для определения молекулярного веса достаточно всего лишь нескольких микрограмм исследуемого материала. При определении молекулярного веса белков гель-фильтрацией в тонком слое следует иметь в виду, что подвижность данного белка при хроматографии в гель зависит не только от молекулярного веса, но и от формы его молекул. Поэтому определение молекулярного веса с помощью гель-хроматографии правомерно лишь в том случае, когда форма молекул исследуемого белка незначительно отличается от < рмы молекул стандартных белков, используемых для калибровки. [c.238]

X. Методы обнаружения белков в элюатах [c.454]

Спектрофотометрическое обнаружение белков и пептидов в растворах заключается в измерении поглощения при длине волны, соответствующей максимальному поглощению. Большинство белков содержит остатки тирозина, фенилаланина и в меньшей степени остатки триптофана, характеризующиеся максимумом поглощения в коротковолновой части спектра. В этой же части спектра располагаются полосы поглощения, характерные для пептидной связи, а-спирали пептидной цепи, дисульфидных связей, остатков цистина и др. На практике наибольший интерес представляет широкая полоса поглощения в области 275— 280 нм, характерная для остатков тирозина и триптофана. Поглощение белков в области выше 280 нм сильно зависит от pH среды, что связано с ионизацией гидроксильных групп остатков тирозина в сильнощелбчной среде, вызывающей изменение коэффициента экстинкции и сдвиг максимума поглощения в более длинноволновую часть спектра. Изменение коэффициента экстинкции тирозина в зависимости от pH среды приведено в табл. 35.7. [c.456]

Автоматизировать обнаружение белков в элюатах можно двумя способами либо вести обработку отдельных фракций [83], либо вести анализ в потоке. Наиболее широкое применение [c.459]

В работах с мечением белков флуоресцеином для их обнаружения показана однородность распределения белков в геле. Однако Дэвид и др. [15], которые исследовали распределение белка методом радиоавтографии Ч-меченой перокспдазы, связанной с сефарозой, не обнаружили связывания фермента внутри гранул сефарозы. Лаш и др. [46] нашли, что расхождения объясняются не методами обнаружения белка, а разными методами его иммобилизации. Используя электронную микроскопию ферритииа, связанного с сефарозой, они продемонстрировали, что использование очень эффективного метода связывания, а именно большого избытка ферритина в ходе связывания (>50 мг/мл), с эффективностью связывания >90% приводит к вогнутой кривой распределения ковалентно связанного ферритина, в то время как при эффективности связывания >50% наблюдается снова однородное распределение связанного ферритина. [c.256]

При добавлении к раствору белка трихлоруксусной или сульфосалициловой кислоты белок выпадает в осадок. Реакции осаждения белка органическими кислотами получили широкое практическое применение. Так, трихлоруксусная кислота применяется в микрохимических количественных анализах для получения безбелковых фильтратов сульфосали-г диловая кислота широко используется в клинических лабораториях для обнаружения белка в моче, экссудатах и других биологических жидкостях (чувствительность реакции 0,0015%). [c.42]

Для обнаружения белков на бумажной реплике можно использовать любой метод проявления, рекомендуемый при электрофорезе на бумаге. Преимущество лиссаминового зеленого (в виде насыщенного раствора в 5%-ной уксусной кислоте) по сравнению с амидо-черным В состоит в том, что избыток красителя отмывается полностью [8], давая совершенно чистый фон. В качестве высокочувствительного проявителя Моррис [9] предложил 0,01%-ный раствор нигрозина в смеси метанол — ледяная уксусная кислота — вода (50 40 10) с последующим промыванием в той же системе. Чувствительным красителем для проявления белков на бумаге является также кумасси бриллиантовый синий К-250, введенный Фазекашем де Сан Гро и др. [c.261]

Методика применима и для обнаружения белка в моче она является более чувствительной и специфичной, чем реакция с сульфосалициловой кислотой. [c.510]

Обнаружение белка. Белок открывают биуретовой реакцией. Для этого отливают в пустую пробирку [c.75]

Рассмотрим возможность автоматизации хроматографического анализа ферментов на примере, заимствованном из статьи [42]. Авторы статьи провели хроматографическое разделение ферментов на автоматическом анализаторе фирмы Te hni on (рис. 8.22). В этом приборе используется пропорциональный насос Р с 12 пластмассовыми трубками различного диаметра. Буферный раствор из системы формирования градиента прокачивается в колонку через трубку 1. Разделение белков происходит в колонке К. Основная часть элюата из колонки поступает в коллектор фракций F и затем используется после окончания анализа. В процессе хроматографирования от основного потока элюата отделяется очень небольшая часть, которая поступает в три аналитические секции, где проводится определение основной фосфатазы, трансаминазы и всех белков. После определения основной фосфатазы часть элюата поступает через трубку 2 вместе с пузырьками воздуха, введенными через трубку 3, и субстратом из трубки 4 в аналитическую систему. В короткой стеклянной спирали М происходит тшательное смешивание водных растворов, полученная смесь проводится через термостат I, в котором при определенных условиях происходит расщепление субстрата. Чтобы реакция прервалась, к смеси через трубку 5 добавляется раствор соответствующего реагента. Через смесительную спираль результирующая смесь вводится в проточную кювету колориметра С и затем идет на оброс. Сигнал детектора записывается самописцем Z, фиксирующим концентрацию основной фосфатазы (I). На абсциссу наносятся номера фракций. Определение трансаминазы проводится аналогичным образом. Через трубки 6—9 подаются образец, воздух, субстрат и реагент соответственно. Окончательный продукт реакции проходит через колориметр Сг. Результирующая концентрация трансаминазы пропорциональна кривой III записываемой самописцем. Третья аналитическая система, регистрирующая суммарное содержание белков, несколько проще, чем две другие. Часть элюата поступает через трубку 10, воздух проводится через трубку 11, а реагент для обнаружения белков — через трубку 12. Растворы смешиваются в спирали М, полученная смесь поступает в проточную ячейку колориметра Сз. Содержание белков в смеси записьгеается в виде кривой II. [c.80]

Изоэлектрическое фокусирование в геле имеет определенные преимущества по сравнению с ИФ в среде со стабилизованным градиентом плотности. Эти преимущества состоят в следующем 1) сокращается длительность разделения 2) полностью подавляется термическая конвекция 3) применяется простое оборудование для ИФ 4) возможно одновременное разделение нескольких образцов 5) возможно обнаружение с помощью различных красителей и различных методик 6) возможно объединение ИФ и зонного электрофореза в двухмерном варианте 7) достаточно небольшого количества образца 8) возможно обнаружение белков методом иммунодиффузии. Однако при применении геля возникают проблемы, связанные с молекулярноситовым эффектом, который имеет место в основном при разделении больших молекул. Другой недостаток метода — это низкая точность определения pH в зонах. В настоящее время этот метод (сокращенное обозначение ИФПАА или ПАГИФ) является общепринятым и широко используется. В отдельных случаях, согласно данным [73], при проведении дискретного трубчатого электрофореза в полиакриламидном геле доо пска-ется окрашивание. Для снижения молекулярно-сито<вого эффекта рекомендуется [23] концентрация геля 3,7%. Типичный градиент напряжения для 8-часового разделения составляет 200 В на 60 мм. Если тепло отводится, то напряжение можно увеличить и соответственно сократить длительность разделения. Градиент pH можно измерить после разрезания столбиков с гелем и последующего элюирования сегментов небольшим коли- [c.323]

Применение. Реактив общего назначения для обнаружения белков на полиакриламидных гелях [186а]. [c.238]