Динитрофторбензол, реакция с аминокислотами

Наилучщий метод установления природы аминокислоты, которой принадлежит концевая аминогруппа пептидной цепи (М-концевая кислота), состоит в действии на кислоту 2,4-динитрофторбензолом — соединением, высокореакционноспособным при нуклеофильном замещении с участием аминов, но не амидов (см. гл. 23). В результате этой реакции образуется М-2,4-динитрофенильное производное пептида, которое после гидролиза по амидной связи дает N-2,4-динитрофениламинокислоту. [c.116]

Гидразиды аминокислот удаляют реакцией с бензальдегидом, изо-валериановым и другими альдегидами, а находящуюся в водной фазе С-концевую аминокислоту анализируют методами хроматографии или электрофореза на бумаге и в тонком слое или с помощью аминокислотного анализатора. Смесь, получаемую после гидразинолиза, можно обрабатывать динитрофторбензолом или дансилхлоридом. Это дает возможность идентифицировать С-концевые аминокислоты в виде ДНФ- (с. 145) или ДНС-производных (с. 148). [c.156]

Аналогичным образом 2,4-динитрофторбензол взаимодействует с пептидами и белками эта реакция используется для анализа на концевые аминогруппы в аминокислотах, входящих в состав полн-пептидных цепей (см. разд. 20-6,А). [c.245]

Аналогичные превращения протекают в реакциях свободных аминогрупп концевых аминокислот в пептидах и белках, например, с 2,4-динитрофторбензолом при гидролизе пептидных связей 8] образующиеся динитрофениловые кислоты можно идентифицировать. О методах определения концевых групп см. раздел 2.3.2.2. [c.239]

Образование 2,4-динитрофениловых эфиров с 2,4-динитрофторбензолом проходит количественно в присутствии бикарбоната натрия без нагревания, тогда как реакция с 2,4-динитрохлорбензолом требует нагревания. Определению мешают амины, аминокислоты и амиды. [c.69]

Для выяснения строения аминокислот, находящихся на концах молекул белка, проводили реакцию конденсации белка с 2,4-динитрофторбензолом. Затем полученный продукт гидролизовали и колориметрическим методом определяли количество концевых аминокислот, вступивших Б реакцию конденсации. Этот метод применялся также для определения аминогрупп в полиамидах [25]. [c.80]

Рнс. 4.9. Реакция аминокислоты с 1-фтор-2,4-динитробензолом (реагентом Сенгера). Реагент назван в честь нобелевского лауреата (1958 г.) биохимика Фредерика Сенгера, который использовал его для определения первичной структуры инсулина. Вначале арилируют (с количественным выходом) всех свободные аминогруппы, после гидролиза пептида образуются 2,4-динитрофенил-производные аминокислот, обладающие яркой желтой окраской. Количественный анализ этих производных осуществляют спектрофотометрическими методами. С динитрофторбензолом реагируют также Е-аминогруппа лизина, имидазольная группа гистидина, ОН-группа тирозина и 8Н-группа цистеина. Динитрофе-нильные группы не отщепляются при кислотном гидролизе и используются для идентификации N-кoнцeвыx аминокислот в полипептидах. [c.38]

При исследовании структуры белков используются эти и другие методы расщепления. Предложен ряд технических приемов для идентификации конечных аминокислот. Один из них широко применяется для идентификации аминокислот, содержащих концевую аминогруппу. Согласно этому методу, проводят реакцию полипептида с 2,4-динитрофторбензолом, при этом свободная аминогруппа превращается в 2,4-динитрофенил-производное (разд. 4.2.2). Последовательный гидролиз полипептидов дает обычные аминокислоты, за исключением конечной N-apилaмииoки лoты, которую можно отделить и идентифицировать хроматографически. [c.297]

В основе метода динитрофенилирования лежит реакция свободных ЫНг-групп белка или пептида с 2,4-динитрофторбензолом (ДНФБ) в щелочной среде, при которой образуются соответствующие динитрофенильные производные (ДНФ-производные). В реакцию с ДНФБ, кроме свободных а-ЫНг-групп, вступают также е-ННг-группа лизина, 5Н-группа цистеина, ОН-группы оксиаминокислот и имидазольный гетероцикл гистидина. ДНФ-производное белка или пептида подвергают полному кислотному гидролизу. Ы-концевые ДНФ-амино-кислоты экстрагируют из гидролизатов эфиром, отделяя их от свободных аминокислот и ДНФ-производных по другим функциональным группам аминокислот, которые растворимы в воде. Идентификацию [c.145]

Из химических методов определения С-концевой аминокислоты наибольшее значение имеет метод Акабори [99]. При кипячении с безводным гидразином (100 °С, 5 ч) все аминокислоты, за исключением С-концевой, превращаются в гидразиды. Отделение значительного избытка гидразидов аминокислот осуществляется реакцией с изовалериановым (или другим) альдегидом. Можно также смесь, полученную непосредственно после гидразинолиза, обработать динитрофторбензолом и после подкисления выделить ДНФ-аминокислоту. [c.368]

Одни из первых методов определения N-концевых аминокислотных остатков был предложен Ф. Сенгером в 1945 г. При реакции а-аминогруппы пептида или белка с 2, 4-динитрофторбензолом получается динитрофенильное (ДНФ) производное, окрашенное в желтый цвет. Последующий кислотный гидролиз (5,7 н. H l) приводит к разрыву пептидных связей и образованию ДНФ-производ-ного N-кониевой аминокислоты. ДНФ-Аминокислота экстрагируется эфиром и идентифицируется методом тонкослойной хроматографии в присутствии стандартов. [c.37]

Динитрофенил аминокисл оты (ДНФ-аминокислоты) ифенилтиогидантоины (ФТГ-аминокислоты) образуются при действии динитрофторбензола [151 — 154] или фенилгорчичного масла [155] на протеины или пептиды продукты конденсации разделяют соответствующим методом. Их выделение из реакционной смеси, и в особенности их идентификация, имеет большое практическое значение, так как указанная последовательность реакций делает воз- [c.412]

Одной из важнейших вех в химии белков было введение Зангером [52, 200] 2,4-динитрофторбензола (ДНФБ) как реагента для определения и идентификации свободных аминогрупп в белках и пептидах. Рассматриваемая реакция заключается в нуклеофильном замещении атома фтора в ДНФБ аминогруппой белка, в результате чего образуется динитро-фенильное (ДНФ) производное белка условия проведения этой реакции таковы, что пептидные свяди белка не изменяются. Последующий гидролиз ДНФ-белка или ДНФ-пептида приводит к выделению свободных аминокислот и ДНф-нроизводных К-концевых аминокислот. ДНФ-производ-ные аминокислот представляют собой соединения ярко-желтого цвета, которые могут быть экстрагированы подходящими органическими растворителями, фракционированы хроматографически и определены колориметрически. Последовательность реакций может быть изображена следующей схемой [c.374]

Количественное динитрофенилирование смеси аминокислот (например, продуктов гидролиза протеина). По Валленфелсу [159],. сухой остаток после гидролиза 2—5 мг-окисленного надмуравьиной кислотой воздушносухого протеина растворяют при комнатной температуре и сильном перемешивании (магнитной мешалкой) в 2 мл воды, не содержащей СО2. Пипеткой переносят аликвотную часть (1,2 мл) в небольшой сосуд, с магнитной мешалкой, разбавляют 1,8 мл воды, свободной от СО2, добавляют 0,1 мл 3,1 н. КС1 и нагревают при 40 0,1 (термостат). При сильном перемешивании устанавливают pH 8,90 добавлением 0,2 н. NaOH с помощью автотитратора. В темноте вносят 0,1 мл (что соответствует небольшому избытку) 2,4-динитрофторбензола и с помощью-автотитратора поддерживают pH 8,90 в течение 100 мин. Самописец титратора регистрирует расход щелочи во времени реакция заканчивается уже через 50 мин, вторая половина опыта служит для установления скорости гидролиза динитрофторбензола (образование динитрофенола). После окончания реакции избыточный 2,4-динитрофторбензол удаляют экстракцией эфиром, очищенным от перекисей, двумя порциями по 5. ил [160,. 161]. Реакционную смесь подкисляют 0,5 мл соляной кислоты (1 ч. НС1 = 1,19 + -Ь1 ч. НпО) и эфирный раствор ДНФ-аминокислот 5 раз экстрагируют свободным от перекисей эфиром порциями по 4 мл экстракты объединяют и эфиром доводят объем точно-до 25 мл. Отбирают 1 мл для хроматографического анализа, упаривают пробу и количественно наносят капиллярной пипеткой. [c.414]

Sanger реакция Сэнгера (избирательное отщепление N-концевых аминокислот полипептидов под действием динитрофторбензола) Sawdey реакция Содн (превращение 4-арил-оксазолидинонов-5 в триазолы) [c.430]

Дженкинсон и Тинслей [19] идентифицировали с помощью хроматографии на бумаге состав аминокислот, гидролизат которых был получен в ходе изучения аминокислот растительного происхождения, выделенных из компоста. Десять мл гидролизата, содержавшего приблизительно 1 мг связанного азота, запаривали досуха при пониженном давлении, растворяли в 5 мл воды и снова упаривали досуха. Остаток растворяли в 1,5 мл воды и центрифугировали. Осветвленную жидкость в количестве 0,04 мл наносили на бумагу Ватман № 1. Разделение проводили элюентом, предложенным Вольфом [20]. Хроматограмму проявляли, окуная лист в 0,2%-ный раствор нингидрина в ацетоне. Были идентифицированы следующие аминокислоты цистеиновая, аспарагиновая, глутаминовая, лизин, аргинин, глицин, гистидин, серии, аланин, тирозин, пролин, валин, треонин, изолейцин, лейцин и фенилаланин. Метионин не поддавался определению, поскольку его трудно было отделить от глицина в описанных системах растворителей. Метио-нин-5-оксид тоже не отделялся от валина. Хроматограммы опускали в 0,1%-ный раствор изатина в ацетоне для обнаружения про-лина и подтверждения отсутствия оксипролина. Детектирование и определение содержания пептида с остатком лизина в середине цепи проводили с помощью 2,4-динитрофторбензола [21]. Эта реакция протекает, поскольку е-аминогруппа, в отличие от а-амино-группы лизина, свободна и может вступать в реакцию. [c.306]

Динитрофторбензол был известен как реактив для спектрофотометрического определения некоторых жирных аминов и аминокислот, причем продукт динитрофепилирования после экстракции спектрофотометрировали в ультрафиолетовой области. Нами же было показано, что если продукты реакции динитрофенилиро-вания перевести в окрашенное соединение но реакции Яновского и проводить спектрофотометрирование в видимой области, то чувствительность реакции увеличивается. [c.224]

С-концевых аминокислот в этих соединениях Продукты реакции восстановления в среде Л/ -этилморфолина гидролизуются кислотой и полученные аминокислоты, а также аминоспирты, образовавшиеся из С-концевых аминокислот, разделяются с помощью бумажной хроматографии [1093, 1094]. Определение аминоспиртов методом бумажной хроматографии с помощью нингидрина как проявителя в смеси со значительно большими количествами различных аминокислот представляет значительные трудности. Однако можно провести разделение обоих компонентов, если продукты гидролиза обработать динитрофторбензолом согласно методу Зангера. При этом образуются Л/ -динитрофенильные производные аминокислот и аминоспиртов. Л/ -динитрофенильные производные аминоспиртов извлекаются из водных растворов щелочей диэтиловым эфиром, тогда как соответствующие производные аминокислот остаются в водной среде [1206, 1611]. [c.454]

Sanger реакция Сэнгера (избирательное отщепление М-концевых аминокислот полипептидов под действием динитрофторбензола) [c.430]

В качестве первого подхода к анализу последовательности Сэнгер использовал реактив динитрофторбензол, который взаимодействует со свободной а-аминогруппой аминокислоты, расположенной на одном из концов полипептидной цепи —так называемом аминоконце, или Н-конце. Реакция с динитрофторбензолом дает сильно окрашенное динитрофениль-ное (ДНФ) производное Ы-концевой аминокислоты (фиг. 41). На другом конце полипептидной цепи, так называемом карбоксильном, или С-конце, расположена аминокислота со свободной а-карбоксильной группой. У всех других аминокислот, входящих в полипептидную цепь, а-амино-группы и а-карбоксильные группы участвуют в пептидных связях и поэтому не являются свободными . После реакции с динитрофторбензолом полипептидную цепь можно подвергнуть полному кислотному гидролизу и получить в свободном виде входящие в нее аминокислоты. Из этих аминокислот с помощью хроматографии легко можно выделить и идентифи- [c.88]

Здесь в реакцию вступает своей аминогруппой остаток аминокислоты, находящийся с краю полипептидной цепи. Если с конца молекулы белка (или полипептида) будет находиться диаминомонокарбоновая кислота, например лшшн, то к ней присоединятся две молекулы динитробензола. Связь аминогруппы аминокислоты с 2,4-динитробензолом оказывается более стабильной, чем обычная кислотоамидная (пептидная) связь. Поэтому при гидролизе, после разрушения пептидных связей, остается нерасщепленным производное — 2,4-динитробензол-аминокислота. Соединение это выделяется, и затем устанавливается химическая природа входящей в его состав аминокислоты. Для выяснения размещения аминокислот внутри полипептидной цепи последнюю путем постепенного гидролиза расщепляют с образованием низкомолекулярных полипептидов, их отделяют друг от друга и в каждом из них определяют с помощью 2,4-динитрофторбензола концевой аминокислотный остаток. Так шаг за шагом выясняют последовательность расположения аминокислотных остатков в полипептидных цепях белковых молекул. Существуют также методы, позволяющие определить аминокислотный остаток, находящийся с краю молекулы и имеющий свободную карбоксильную группу. К ним относится гидразиновый метод , основанный на том, что гидразин (НзЫ—ННз) реагирует со всеми аминокислотами, связанными друг с другом пептидной связью. Концевая же аминокислота (со свободным карбоксилом), не прореагировавшая с гидразином, остается в свободном виде и ее идентифицируют. [c.32]

Так как эта реакция при нормальной температуре протекает ко 1ичественно и достаточно быстро, 2,4-динитрофторбензол применяют для определения и блокирования конечных групп аминокислот в химии пептидов. [c.213]

Для обнаружения белков после электрофореза можнО также применять хорошо известную реакцию белков с 2,4-динитро-фторбензолом [200, 1154]. Гели погружали в 2,5%-ный раствор . 2,4-динитрофторбензола, выдерживали их в течение 16 ч в темноте и затем многократно промывали эфиром, подкисленным НС1. Чувствительность обнаружения БСА этим методом была почти такой же, как и при использовании амидового черного 10 В. Окрашенные 2,4-динитрофторбензолом белки, присутствующие в вырезанных зонах, можно прямо подвергать гидролизу для определения N-концевой аминокислоты, что позволяет получить представление о чистоте разделенных белков. [c.275]

Смотреть страницы где упоминается термин Динитрофторбензол, реакция с аминокислотами: [c.384] [c.25] [c.1049] [c.314] [c.53] [c.314] [c.407] [c.193] [c.242] [c.50] [c.67] [c.68] [c.206] [c.319] [c.495] [c.314] [c.193] [c.295] [c.134]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология