Хроматограммы флуоресцирующие

Использование не самого образца, а его производных в жидкостной хроматографии позволяет увеличить чувствительность и селективность метода. Иногда для получения производных необходимо предварительное концентрирование образца. Для многокомпонентных смесей обычно требуется предварительное разделение на более простые по составу фракции, чтобы исключить перекрытие зон в конечной хроматограмме или удалить примеси, влияющие на характеристики колонки. Некоторые соединения не обладают способностью поглощать свет, и для их определения с помощью высокочувствительных фотометрического или флуориметрического детекторов необходимо получить производные, регистрируемые этими детекторами. Присоединяя способную к флуоресценции группу к окси- или аминогруппе образца, можно обнаружить очень малые концентрации флуоресцирующих веществ. [c.68]

Анализ хроматограмм в ультрафиолетовом свете. В колонку из кварца или другого инертного, прозрачного для ультрафиолетовых лучей материала вносят носитель, содержащий подходящий осадитель и люминофоры (2—3% массы смеси в колонке). После образования осадочной хроматограммы флуоресцирующие соединения обнаруживают в колонке (или на бумаге) в результате облучения ультрафиолетовым светом. [c.232]

Поглощение в УФ-свете при 254 нм. Слабая флуоресценция бумаги гасится центрами поглощения, включающими две или более сопряженные двойные связи, например диен-3,5, диен-5,7, ен-4-он-З, ен-5-он-7, ен-16-он-20, ен-4-дион-3,6 и др. чувствительность 0,5 мкг. Чувствительность можно увеличить в пять раз, если использовать для детекции фотографию или пропитать хроматограмму флуоресцирующим веществом, например 0,01 %-ным раствором антрацена (Аи) в петролейном эфире (40-60°С). Антрацен малореакционноспособен и не мешает дальнейшим операциям. [c.414]

Качественный анализ осадочных хроматограмм. Если зоны хроматограммы окрашены, то по их числу, окраске и расположению судят о качественном составе анализируемой смеси. Но иногда хроматограмма получается бесцветной, и обнаружение ионов по ней затруднено. Тогда через колонку с первичной хроматограммой пропускают раствор проявителя, образующего окрашенные соединения с разделяемыми ионами (см. табл. 9). В некоторых случаях проявитель вносят прямо в исследуемый раствор или смешивают его с носителем. Иногда в качестве проявителя используют люминофоры — 2—3% от массы смеси в колонке. Тогда осадки в хроматограмме флуоресцируют в ультрафиолетовом свете, что значительно упрощает их идентификацию. [c.104]

При разделений окрашенных или окрашивающихся при адсорбции веществ можно наблюдать возникновение окрашенных зон непосредственно на бесцветных или светлых адсорбентах (образуется так называемая хроматограмма- ). Флуоресцирующие вещества наблюдают в ультрафиолетовом свете, а разделение поглощающих свет компонентов — по гашению флуоресценции на флуоресцирующем адсорбенте [c.882]

Обнаружение зон. Для обнаружения соединений, флуоресцирующих при облучении светом, применяют физические, но чаще всего химические методы обрабатывают хроматограмму после разделения веществ газами аммиаком, бромом, иодом — или опрыскивают реагентами, которые применяют в бумажной хроматографии. Для обнаружения биологически активных соединений (витаминов, анти [c.358]

Визуальный метод сравнения хроматограмм в тонком слое с помощью свидетелей . На линию старта на носят 2—3 пробы равных количеств анализируемого раствора и постепенно увеличивающиеся количества эталонного раствора определяемого компонента известной концентрации и проводят хроматографическое разделение. После этого сравнивают величину окрашенных или флуоресцирующих под ультрафиолетовыми лучами пятен. [c.102]

Анализ бесцветных осадочных хроматограмм может быть произведен в ультрафиолетовом свете, если образующиеся в хроматограмме вещества флуоресцируют. [c.261]

Если исследуемое вещество поглощает в УФ-области, то для приготовления хроматографических пластинок используют адсорбент, содержащий флуоресцирующее вещество. Хроматограммы, полученные на таких пластинках, рассматривают в УФ-свете. [c.48]

После этого продолжают проявление хроматограммы 75 мл гептана и, когда в элюат начнет поступать флуоресцирующее вещество, меняют приемник и элюируют антрацен смесью й-гексапа и бензола (1 1). После удаления растворителей Б вакууме (лучше при отгонке на водяной бане) получают чистый антрацен, который заметно флуоресцирует при дневном свете. [c.146]

Для определения положения неокрашенного вещества на полученной хроматограмме обычно необходимо обрабатывать хроматограмму реактивом, который либо обугливает разделенные вещества, либо переводит их в окрашенные или флуоресцирующие производные. Часто применяют и другой удобный метод проводят хроматографию на пластинке, пропитанной веществом, сильно флуоресцирующим под воздействием коротковолнового ультрафиолетового света. Площади на пластинке, занятые веществами, поглощающими при той же длине волны, выглядят как темные пятна на флуоресцирую- [c.93]

При хроматографировании р системе метанол-вода (1 1 по объему) (см. примечание) РИТЦ дает одно вытянутое красно-фиолетовое пятно с R/ 0,7—0,8, флуоресцирующее оран-жево-красным светом при УФ-облучении с длиной волны 365 нм. На хроматограмме отсутствуют пятна веществ, содержащихся в препаратах, полученных по методу [1] желтое пятно 2-(2 -окси-4 -диэтиламинобензоил) -4(5)-изотиоцианобензойной кислоты с R/ 0,9 фиолетовое пятно с R/0,1 — 0,3 черное пятно смолистых веществ, остающихся на старте. [c.169]

Г. Родамин В. Около 50 мг этого красителя растворяют а 100 мл этанола. С различными органическими веществами этот реактив дает розовато-лиловые пятна на розовом фоне. При пропускании паров брома над обработанной хроматограммой фон обесцвечивается и пятна становятся более интенсивными. При облучении пластинки ультрафиолетовой лампой с длинноволновым излучением видны оранжевые флуоресцирующие пятна на темном фоне. [c.40]

Обнаружение веществ на хроматограмме (проявление пятен). Многие вещества способны флуоресцировать в УФ-свете. Получаемые при УФ-облучении пятна имеют различный оттенок. Чтобы обнаружить вещества, поглощающие в УФ-области спектра, часто применяют слои сорбента с флуоресцирующим веществом илн опрыскивают хроматограмму после разделения смеси раствором флуоресцирующего вещества. При облучении пластинки УФ-светом вещества, поглощающие в этой области спектра, обнаруживаются в виде темных пятен. Если хроматограмму невозможно проявить оптическими методами, применяют химические, чаще всего проявление парами иода. Высуше1тую пластинку помещают в эксикатор с кристаллами иода и несколькими миллилитрами воды. Через 10—15 мин пластинку вынимают и оставляют на воздухе до кспарения избытка иода. На светлом фоне образуются окрашенные пятна веществ. Проявлять нятна можно, опрыскивая из пульверизатора реагентами, дающими цветные реакции с разделенными веществами. После опрыскивания иногда приходится нагревать пластинку до 80—100" С и выше. [c.72]

Положение аминокислот на бумаге можно установить и без проявления, рассматривая хроматограмму в ультрафиолетовых лучах. Пятна отчетливо флуоресцируют в ультрафиолете. [c.28]

При. хроматографировании в системе метанол—вода (1 1 по объему) на бумаге марки медленная фабрики им. Володарского вещество дает двойное красно-фиолетовое пятно с R/, 0,75—0,85, флуоресцирующее оранжево-красным светом при УФ-облучении с длиной волны 365 нм. ВеШество не содержит примесей, имеющихся в препаратах 4(5)-нитрородамина, полученных по методу ] 2-(2 -окси-4 -ди-диэтил-аминобензоил)-4(5)-нргтробензойной кислоты, дающей на хроматограмме желтое пятно с R/ 0,9 красителя, дающего фиолетовое пятно с 0,1—0,3 веществ, дающпх черное или фиолетовое пятно на старте. [c.141]

Флуоресцирующие гидроксипроизводные. Хроматограмму опрыскивают 0,3%-ным раствором пероксида водорода. Влажную хроматограмму облучают УФ-светом. Через несколько минут некоторые ароматические кислоты дают синие флуоресцирующие пятна. [c.381]

Салициловый альдегид. Хроматограмму опрыскивают 1%-ным раствором салицилового альдегида в этаноле, содержащим 5% (об./об.) уксусной кислоты высущивают при комнатной температуре. Появляются флуоресцирующие пятна. [c.385]

Флуоресценция в УФ-свете. Некоторые пуриновые и пиримидиновые производные могут флуоресцировать под действием УФ-света. Это можно наблюдать визуально или фотографировать контактным методом. Лист нитроцеллюлозной пленки (0,08 мм), помещенный между хроматограммой и фотографической бумагой устраняет УФ-свет, но пропускает видимый свет флуоресценции. Таким образом, вещество проявляется в виде черного пятна на серовато-белом фоне. Чувствительность 0,1 мкг, [c.412]

После хроматографического разделения веществ, что при комнатной температуре достигается через 16—18 час., хроматограммы высушивают в токе воздуха, после чего в ультрафиолетовом свете хеми-скопа (источником света служит ртутная лампа, а определенным фильтром исключаются лучи с волной длиннее чем 385 нм) определяют местонахождение пятен разделяемых веществ на хроматограмме, на той основе, что ИУК и близкие к ней соединения, имеющиеся на хроматограмме, флуоресцируют фиолетово-малиновым светом. Хотя пятна веществ в ультрафиолетовом свете выделяются отчетливо и их мож1ю характеризовать как по величине Rf, так и по цвету флуоресценции, однако для их идентификации этого недостаточно. При идентификации ИУК часто используют следующие реагенты Сальковского, Эрлиха, Прохазки и др. [8, 9]. Они с индольными производными и рядом других соединений дают цветные реакции. Ввиду того, что по отношению к ИУК не имеется специфического реагента идентификации, определение ИУК по Я/, цвету флуоресценции, цветным реакциям с различными реагентами на бумажных хроматограммах недостаточно. Для полной идентификации ИУК следует снимать спектры поглощения в коротковолновой части Спектра (200—400 нм) на спектрофотометре СФ-4А или другой марки. [c.34]

Вещество-проявитель должно взаимодействовать с мало-растворимыми осадками с переведением их в новые менее растворимые, либо совсем раствори.мые, но характерно окрашенные соединения. Иногда в качестве проявителя добавляют люминоформы в количестве 2—3% от массы смеси в колонке. Тогда осадки в хроматограмме флуоресцируют в ультрафиолетовом свете, что значительно упрощает анализ хроматограмм. [c.59]

Б — двумерная ТСХ на целлюлозе продуктов расщепления сериновых тРНК РНКазой первое направление изомасляная кислота — 0.5 М NH,OH (5 3), второе направление трет-бутанол — НС1 — вода (14 3 3). Обведены участки, которые при УФ-облучении хроматограмм флуоресцировали в присутствии кислоты. Хроматографическая подвижность и спектральные свойства продукта N,p и нуклеотида mt Ap идентичны. D,, Dt и D, являются, вероятно, динуклеозиддифосфатами, которые образуются при гидролизе тРНК, содержащей 2-О-метилированные остатки нуклеотидов. [c.166]

Нуклеотиды, как и многие другие поглощающие свет соединения, определяют количественно по их спектрам поглощения (рис. 13-11 и 13-12) 146]. Еще более чувствительным методом является флуоресцентный анализ. Например, он позволяет обнаружить на тонкослойной хроматограмме рибофлавин в количестве 3 пикомоль (1 нг) (рис. 2-34) [147]. Один из новых реагентов, флуорескамин, взаимодействует с любым первичным амином, образуя интенсивно флуоресцирующие продукты. С его помощью можно обнаружить очень малые количества аминокислот— менее 50 пикомолей (рис. 2-36) [148]. [c.180]

Если компоненты смеси окрашены, то они четко видны на пластине после разделения. НеокраЕиенпые соединения обнаруживают различными способами. Если хроматограмму поместить в так называемую йодную камеру (сосуд с кристаллами иода), то компоненты смеси будут проявляться в виде коричневых пятен. Хроматограмму можно проявить, опрыскивая сс каким-либо специ([)ическим реагентом, дающим с ком-пон(М1тами пробы окрашенные соединения. В состав нанесенного слоя в готовые пластины часто вводят люминофор. При облучении такой пластины светом длиной волны 254 нм пластина флуоресцирует, а разделенные компоненты пробы видны в виде темных нятен. [c.613]

По прошествии указанного времени хроматограмму удаляют из камеры и высушивают на воздухе. Хроматограмму разрезают вдоль на три полосы и среднюю полосу обрызгивают из пульверизатора свежеприготовленной смесью, состоящей из 1 ч. 15% раствора NaOH, 2 ч. 96% этилового спирта и 0,05 ч. 2,5% водного раствора красной кровяной соли. Под влиянием щелочного раствора феррицианида калия тиамин фосфорных эфиров окисляется в тиохром с образованием интенсивной синей флуоресценции. При просмотре в ультрафиолетовом свете флуоресцирующие пятна обрисовывают карандашом, и соответственно их местоположению определяют пятна на боковых, не проявленных окислителе м, полосах бумаги. Фосфорные эфиры на хроматограмме располагаются в следующем порядке (от места нанесения анализируемого раствора) [c.104]

Меркурохром. Хроматограмму опрыскать 0,1%-ным раствором меркурохрома в этаноле. Кислоты дают белые пятна на розовом фоне или в УФ-свете фиолетовые пятна на зеленовато-желтом флуоресцирующем фоне. [c.380]

Посторонние примеси. Проводят определение, как описано в разделе Тонкослойная хроматография (т. 1, с. 92), используя в качестве адсорбента силикагель Р4, а в качестве подвижной фазы смесь 5 объемов 1-бутанола Р, 4 объемов воды и 1 объема уксусной кислоты ( 300 г/л) ИР. Наносят отдельно на пластинку по 5 мкл каждого из трех растворов в метаноле Р, содержащих (А) 40 мг испытуемого вещества в 1 мл, (Б) 0,40 мг испытуемого вещества в 1 мл и (В) 0,40 мг бефения оксинафтоата СО в 1 мл. Вынимают пластинку из хроматографической камеры, дают ей высохнуть на воздухе и оценивают хроматограмму в ультрафиолетовом свете (254 и 365 нм). При 254 нм видны два основных пятна на хроматограммах растворов А, Б и В, в то время как при 365 нм флуоресцируют только пятна, близкие к фронту растворителя. Любое дополнительное пятно, видимое на хроматограмме, полученной с раствором А, кроме двух основных пятен, не должно быть более интенсивным при рассмотрении при двух длинах волн, чем пятно, расположенное ближе к стартовой линии при хроматографировании раствора Б. [c.56]

Серусодержащие пестициды после воздействия на них паров Вга на хроматограммах и опрыскивания реактивами, содержащими комплексообразующий агент и ион металла, флуоресцируют в УФ-свете желто-зеленым или голубым цветом. Обнаруживаемый минимум 0,1—0,3 мкг [591]. [c.54]

Флуорескамин. Хроматограмму опрыскивют 0,05%-ным раствором флуорескамина в ацетоне далее вымачивают последовательно в 0,1 М уксусной кислоте в ацетоне, а затем в 0,1 М растворе N-хлоросукцинимида в ацетоне оставляют на 5 мин промываться в ацетоне и нагревают при 110°С 5 ч-10 мин. Вторичные амины превращаются в первичные амины, которые реагируют с флуорескамином и флуоресцируют в УФ-свете (очень чувствительный метод). [c.383]

Флуорескамин. Чувствительный реагент для определения липидов, содержащих свободные аминогруппы. Хроматограмму опрыскивают 0,5 %-ным раствором флуорескамина в ацетоне. Для выявления флуоресцирующих пятен пластинку наблюдают в УФ-свете. [c.407]

Семикарбазидгидрохлорид. Хроматограмму опрыскивают 0,1%-ным раствором семикар-базидгидрохлорида в 0,15%-ном водном ацетате натрия нагревают при 110°С. Свободные кетокислоты проявляются в УФ-свете в виде темных пятен на слегка флуоресцирующем фоне. [c.381]

Реагент Фурта- Хер.маниа. Хроматограмму опрыскивают смесью уксусная кислота-пиридин (1 9) нагревают 5 мин при 100°С. Трикарбоновые кислоты дают пятна от желтого до красного цвета, которые флуоресцируют в УФ-свете. Глюкуроновая и аскорбиновая кислоты дают желтые пятна аконитовая-коричневые итаконовая - оранжевые. [c.381]

Флуорескамин. Этот реагент реагирует с первичными аминогруппами аминокислот и пептидов. Хроматограмму опрыскивают 0,05%-ным раствором флуорескамина в ацетоне и наблюдают флуоресцирующие пятеа. Предварительное и последующее опрыскивание хроматограммы 10%-ным раствором триэтиламина в метиленхлориде повышает чувствт ельность методики (1 нмоль), а также устойчивость образующихся флуоресцирующих пятен. Пятна пролина и гидроксипролина медленно проявляются при нагревании в течение 3 ч при 110°С или через два дня при комнатной температуре. В другом варианте методики бумагу или пластинку, обработанную флуорескамином, вымачивают последовательно в 0,1 М растворе уксусной кислоты в ацетоне и 0,1 М растворе Ы-хлоросукцинимида в ацетоне. Выдерживают 5 мин, промывают ацетоном и нагревают 5-10 мин при 110°С. [c.390]

Поглощение в УФ-свете. Пуриновые и пиримидиновые производные в УФ-свете проявляются в виде темных пятен на слегка флуоресцирующем фоне бумаги. Это наиболее чувствительный метод обнаружения (1 мкг), он позволяет локализовать вещество без химической модификации. Следует защищать глаза от действия УФ-света. Локализацию веществ на хроматограмме можно наблюдать визуально или фотографировать контактным методом. Если в качестве растворителей использовались фенол или коллидин, их следует сначала удалить многократным промыванием эфиром. В случае барбитуровых кислот используют предварительное опрыскивание 0,5 М NaOH. Чтобы увеличить фоновую флуоресценцию, а следовательно, и контрастность, можно использовать опрыскивание 0,005%-ным флуоресцеином в 0,5 М растворе NHj. Однако это не рекомендуется делать, если вещество предполагается элюировать с бумаги для последующей спектрофотометрии. [c.412]

УФ-свет-цианид калия. Хроматограмму пропитывают 1 М K N с помощью пипетки Пастера. Окисленные пиридиннуклеотиды, никотинамидмононуклеотид и никотинамидрибозид образуют продукты присоединения, интенсивно флуоресцирующие в УФ-свете. [c.413]

Формальдегидогенная реакция. Реагент 15 г ацетата аммония растворяют в 85 мл 80%-ного метанола добавляют 1 мл ацетилацетона, 0,3 мл ледяной уксусной кислоты и 0,1 мл НЮ4 (50%-ный водный раствор). Реагент готовят и используют при рассеянном свете. Хроматограмму погружают в реагент и промокают. Через 10 мин появляются зеленовато-желтые флуоресцирующие пятна, которые становятся наиболее интенсивными спустя 1 ч, когда возникает желтая окраска. Реагируют олы-21 с олами-20 или онами-20, чувствительность 5 мкг по цвету и 1 мкг по флуоресценции. Реагент специфичен для всех а-замещенных первичных спиртов. Его нельзя использовать при работе с хроматограммами, пропитанными гликолями. [c.417]

Хроматограмму после выдерживания в течение 20 мин в атмосфере I2 опрыскивают свежеприготовленным раствором 380 г Sb lj в 100 мл уксусного ангидрида. Бумагу высушивают прогреванием при 90-100°С. Пятна на хроматограмме в УФ-свете могут обнаруживать флуоресценцию, но могут и не флуоресцировать. Чувствительность 0,5-5 мкг (кроме кортизона). [c.422]

Хлорид олова. Реагент 0,3 г Sn lj и 4 г мочевины растворяют в 10 мл 40%-ной H2SO4. Хроматограмму погружают в реагент, промокают и прогревают на стекле при 80°С. Эстрогены (2-5 мкг) и кортикостероиды (10 мкг) дают флуоресцирующие пятна (УФ-свет, 360 нм). [c.422]

УФ-свет. На бумажных хроматограммах, пропитанных 7пСОз и содержащих 10 % натрий-флуоресцеина, под действием коротковолнового УФ-света (256 нм) токоферолы могут проявляться в виде темных пятен на флуоресцирующем фоне. Хроматограммы можно также опрыскивать водным раствором натрийфлуоресцеина. [c.423]

Феррицианид калия. Хроматограмму опрыскивают смесью 2,5%-ный раствор КзРе(СМ)б-10%-ный НаОН-55%-ный EtOH (0,1 5 5). Тиамин и его эфиры окисляют до тиохромов, флуоресцирующих в УФ-свете. Чувствительность 0,5 мкг. [c.424]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология