Метод антигенного анализ

Последние достижения в развитии новейших технологических приемов значительно расширили наши возможности в определении генетического строения и молекулярной структуры вирусов, а также выявлении сходства штаммов и идентификации различий между вариантами вирусов. Наиболее важные из этих методов — клонирование и определение последовательности нуклеиновых кислот, картирование РНК и пептидов, а также антигенный анализ белков с помощью моноклональных антител. Задача последней обзорной главы данной книги — обсуждение эпидемиологии вируса гриппа в свете применения этих новых методов. Особое внимание уделено оценке последних достижений и изучению вопросов эпидемиологии, которые могут быть успешно решены при использовании молекулярных методов. [c.313]

Среди -различных требований, предъявляемых к современному биохимическому анализу, самым важным является специфичность, т. е. способность детектировать данное вещество в сложных многокомпонентных средах, таких, как сыворотка крови, сок растений или ферментационная среда. Наибольшей специфичностью обладают иммунохимические методы, основанные на реакции антител с антигеном, образующие друг с другом прочные комплексы. Возможность получения высокоспецифичных антител к широкому кругу различных веществ в сочетании с чувствительными методами регистрации образовавшихся комплексов обусловливают широкое практическое использование методов иммунохимического анализа в различных областях медицины, ветеринарии, растениеводства, охраны окружающей среды, контроля биотехнологических процессов, научных исследованиях. [c.99]

Из схемы, описываемой уравнением (3), вытекают следующие основные задачи, связанные с разработкой методов иммунохимического анализа а) получение специфических антител б) выбор и получение высокоочищенных антигенов в) введение маркера в исследуемое вещество г) разделение связавшихся и свободных компонентов д) выбор метода определения концентрации маркера е) оптимизация и стандартизация условий проведения анализа. [c.107]

Рис. 22. Принципиальные схемы гомогенных методов иммуноферментного анализа а—Г — свободный гаптен Е—Г — меченный ферментом гаптен АЬ — антитела 5 н Р — субстрат н продукт ферментативной реакции б — Ag—5 — меченный субстратом антиген Ag — свободный антиген Е — фермент Р — продукт ферментативной реакции символ х — ингибирование ферментативной реакции

Классические методы иммунохимического анализа основаны на образовании антителами в присутствии антигена преципитата (осадка), однако для визуальной регистрации процесса преципитации необходимы высокие концентрации компонентов и длительное время проведения реакции. Результаты такого анализа не всегда можно однозначно интерпретировать и, кроме того, в большинстве случаев они носят качественный или полуколичественный характер. Кроме того, для многих одновалентных антигенов (гап-тенов), например гормонов, лекарственных соединений, эти методы непригодны. [c.5]

При разработке методов иммунохимического анализа, базирующихся на реакции антиген — антитело, знание физико-химических характеристик специфических взаимодействий очень важно, поскольку позволяет оценить чувствительность и специфичность метода, осуществить правильный подбор реагентов для анализа. [c.39]

Истинные значения констант связывания важны для определения термодинамических характеристик процесса взаимодействия антиген--антитело. Для практических целей, в частности для разработки методов иммуноферментного анализа, достаточно знать эффективные значения, характеризующие свойства используемых антител. [c.41]

Вопрос о роли Рс-рецепторов макрофагов и других клеток в иммунологических реакциях рассматривался в гл. 6. Здесь следует лишь сказать, что сравнительное изучение строения рецепторов лимфоцитов и макрофагов оказалось полезным инструментом для понимания организации пх молекул. Из-за трудностей, связанных с на-копленпем достаточного количества материала для химического изучения особое значение прп исследовании структуры F -рецептора приобрел метод антигенного анализа. Приведем схематически результаты такого анализа, выполненного И. Сычевой с соавторами (1982, 1983). [c.206]

Эволюционная биохимия. Вопросы, связанные с изучением сходства строения белков разных бноло1Ических видов, с успехом могут решаться, в том числе с исиоль-зованием методов антигенного анализа. Примером такого анализа служат собственно иммуноглобулины н многие другие белки. [c.269]

Особое распространение получили методы, основанные на использовании антигенов и антител, меченных ферментами, — так называемый иммунофермеитный анализ. Они используются для изучения широкого круга соединений — антител, пептидных и стероидных гормонов, вирусных и бактериальных антигенов, различных белков и ферментов. Существуют гетерогенные (твердофазные) и гомогенные методы иммуноферментного анализа, принципиально различающиеся способом разделения компонентов иммунохимической реакции. Твердофазные методы основаны на применении антител или антигенов, иммобилизованных на нерастворимых носителях. [c.306]

Определение константы связывания. Используют метод радиоиммунного анализа (РИА). Постановка метода сходна с постановкой ИФА (с. 320), с тем исключением, что вместо конъюгатов антител с ферментной меткой для выявления связывания антител с антигеном используют антимышиные антитела с радиоактивной меткой. В каждую лунку вносят по 50—100 мкл антимышиных антител (10—30 нг около 20 000 срт). Инкубируют при комнатной температуре около 2 ч. Затем микропланшеты тщательно отмывают (с. 321), разрезают и индивидуальные лунки просчитывают в Y-счетчике. [c.324]

В медицине моноклональные антитела применяют прежде всего для диагностики различных заболеваний. Такие бактериальные заболевания, как кокковые, паразитарные инфекции, малярия, а также грибки хламидии, при помощи мкАТ диагносцируются гораздо точнее, чем другими, традиционными методами. В вирусологии использование мкАТ дало возможность разработать условия антигенного анализа вирусов гораздо более информативного, чем при использовании поликлональных антител. Этот метод позволил получить уникальную информацию об антигенных детерминантах ДНК- и РНК-содержащих вирусов и их изменчивости. В частности, были идентифицированы антигенные детерминанты вирусов гриппа, полиомиелита, гепатита А и др. [c.495]

Методы радиохимриеского анализа широко ирименяются в клинических лабораториях. Об использовании в этих целях изотопов С [24] уже упоминалось выше. Возможно, более обычными являются методы, основанные на проведении радио-иммуиных испытаний [25]. Они лежат в основе чувствительного способа определения концентрации антигенных вепдеств в образце при сопоставлении его ингибирующего влияния на связывание антигена, меченного радиоактивной меткой, с ограниченным количеством специфических антител и ингибирующего влияния известных эталонов. Обычно методики основаны на измерении уровня радиоактивности образцов, содержащих и Со. [c.30]

В настоящее время с помощью флуоресцентно-цитохимических методик можно специфически выявлять все основные компоненты клеток — белки, ДНК, РНК, липиды, отдельные классы мукополи-сахарпдов, а также основные структуры клеток — ядро, ядрышко, цитоплазму митохондрии, вакуоли и т. д. Хорошие обзоры по применению методов флуоресцентного анализа для обнаружения различных клеток, клеточных веществ и антигенов можно найти в работах Мейселя [24, 25]. [c.293]

Рис. 24. Основные методы иммунометрического анализа поливалентных антигенов

В медицинской диагностике методы иммуноферментного анализа все активнее внедряются для обнаружения микробных и вирусных возбудителей, а также антител против них. Весьма сложной является проблема обнаружения таких возбудителей паразитарных инфекций, как гельминты, малярийный плазмодий, и других организмов, имеющих сложный и изменчивый антигенный состав. Но и в этих случаях выбор наиболее диагностически значимых антигенов позволяет проводить эффективную диагностику. Все шире применяется иммуноферментный анализ в диагностике неинфекционных болезней, таких, как диабет, р [c.120]

Величина эпитопа, с которым взаимодействует антитело или иммуноглобулиновый рецептор В-клеток, как правило, должна соответствовать размеру антигенраспознающего участка. Методами рентгенострукгурного анализа комплексов антиген антитело (лизоцим куриных яиц и нейраминццаза гриппа) выявлено, что в контактную область включены 15-22 поверхностных аминокислот белю)вого антигена. Однако не совсем ясно, все ли эти аминокислоты определяют эпитоп, взаимодействующий с антигенсвязыва-ющим участком антител, или часть из них находится в пограничной с эпитопом области. Обычное число аминокислот или сахаров, составляющих эпитоп, равно 6-8 мономерам. [c.42]

Многообразие методов гетерогенного анализа, относящихся к типам I и II, обусловлено возможностью введения ферментной метки как в молекулу антигена, так и в молекулу антитела. Кроме того, для конкретной схемы анализа определяющим является, какой из реагентов—антитело или антиген, использован в иммобилизованном виде для разделения иммунохимических комплексов от несвязавщихся компонентов. Поэтому принцип разделения гетерогенных методов может быть представлен схемой 4.3. [c.83]

Переход к новым принципам ре11истрации взаимодействия антиген - антитело связан с развитием иммуносенсоров. В основе этих методов лежит идея совмещения в пространстве и времени двух процессов узнавания образа антигена и одновременной модуляции свойств маркера. Одним из таких подходов является метод возбуждения флуоресценции на поверхности кюветы светом, проходящим в специальной оптической среде. Этот метод очень перспективен и создает много возможностей для развития новых методов иммунохимического анализа на основе новых для иммунохимии носителей. [c.6]

Наличие в рецепторнйх белках шарнирных участков, богатых остатками пролина, можно установить и на основании методов иммунохимического анализа. Установлено, что часть антител, появляющихся у кролика в ответ на иммунизацию очищенными препаратами Рсу-рецепторов лимфоцитов и макрофагов (связывающих агрегированный IgG), реагирует с очищенным коллагеном и коллагено-подобной частью молекулы одного из белков системы комплемента — lq. Показано, что антигенное сходство Рсу-рецепторов лимфоцитов и макрофагов обеспечивается именно этими участками их молекул, в то время как лигандсвязывающие участки различаются по своему антигенному строению (И. М. Сычева и др., 1984, 1985). [c.21]

Вообще спонтанное восстановление конформации де-натурироваиного белка ведет к восстановлению его антигенной структуры. Это продемонстрировано на совершенно различных по степени сложности структурной организации белках, в том числе на таких, как рибонук-леаза и иммуноглобулин G. Тем самым антигенный анализ может служить одним из надежных методов оценки степени ренатурации белка. [c.32]

Помимо выявления аитигенной неоднородности метод двойной диффузии в геле позволяет сравнить антигенное строение нескольких веществ и выявить наличие сходства и различий между ними. Как всякий иммунологический метод, метод двойной диффузии в геле имеет ограничения, основное из которых — спектр антител в исследуемой антисыворотке. Так, в ранних работах при сравнительном изучении антигенного строения IgG кролика и его Fab- и F -фрагментов использовали антисыворотку против IgG кролика, полученную от коз. Исследователям не было тогда известно, что животные этого вида не образуют практически антител против детерми-Бант Fab-участка молекулы. Поскольку при использовании этой антисыворотки F -фрагмент давал реакцию антигенной идентичности с нерасщепленной молекулой IgG, сделали ошибочное заключение об отсутствии в РаЬ-участке видоспецифических антигенных детерминант. Ошибка была исправлена после исследования фрагментов молекулы IgG с помощью антииммуногло- булиновых сывороток, полученных от животных других видов, в антисыворотке осла против IgG кролика содержится примерно равное количество антител против антигенных детерминант Fab- и F -участком. На этом примере можно еще раз убедиться в необходимости использования при антигенном анализе антисывороток, полученных от животных разных видов (см. гл. 2). [c.255]

Следующий этап в истории создания чувствительных методов иммунологического анализа связан с открытием Фарром в 1958 г. [13] и Яллоу и Берсоном в 1960 г. [14] технологии мечения антигенов, антител и небольших пептидных гормонов радиоизотопами. Радиоиммунологический анализ позволил определять чрезвычайно малые концентрации (вплоть до пмоль/л) таких молекул, как инсулин, и выдвинул новые специальные требования к технологии получения антисывороток. Для иммунизации животных стали использоваться конъюгаты гаптенов (гормонов) с молекулами-носителями. Именно этим способом удалось получить антитела с такой степенью специфичности и аффинности, какая раньше никогда не требовалась. [c.13]

Реакция преципитации относится к числу наиболее простых и ускоренных методов серологического анализа. В оско-ве реакции лежит образование видимого осадка, состоящего из вступивших друг с другом в соединение антител и молекулярных антигенов (например, бактериальных белков или полисахаридов, образовавшихся при разрушении микробных тел). По своей сущности реакция преципитации аналогична реакции агглютинации. Основным различием между ними является то, что в первом случае применяется корпускулярный антиген, а во втором — антиген представляет собой коллоидное вещество белковой или полисахаридной природы. [c.128]

Таким образом, реакция приципитации, представляя собой метод качественного анализа, позволяет изучать антигенный состав бактериальных препаратов. [c.132]

Работа по секвенированию мембранных белков традиционными методами может длиться годами и в конце концов не привести к полной расшифровке их структуры. Существенным подспорьем для исследований первичной структуры служат методы иммунохимического анализа родственных белков. С их помощью можно определять степень иммунологической близости белков, изолированных из различных органов и тканей. Считают, что участки полипептидной цепи, локализованные во внутренней области белковой молекулы, весьма консервативны в процессе эволюции и близки (если не идентичны) у гомологичных ферментов различных животных модификации (замене одной или нескольких аминокислот) подвергаются пептиды на поверхности белков. Именно там располагаетсуГ большинство антигенных участков. На основании иммунологического индекса различия можно достаточно адекватно оценивать различия в аминокислотной последовательности белков в соответствии с эмпирической формулой (Е. М. Prager, А. С. Wilson) [c.65]

Если весь процесс иммуноферментного анализа условно разделить на три основные стадии - формирование специфического комплекса антиген — антитело (иммунохимический процесс), введение в него метки и ее визуализация тем или иным физическим способом, то можно заметить, что основное внимание в данной книге фокусируется на второй и третьей стадиях, представляющих преимущественно энзимологический аспект проблемы. В книге рассмотрены практически все известные способы регуляции активности ферментов, как химические (с помощью активаторов, ингибиторов, субстратов, простетических групп), так и физические (путем изменения активности ферментов при образовании комплекса антиген — антитело, с помощью ультразвука, конформационных и диффузионных ограничений). Главное достоинство монографии состоит в том, что в ней, по-видимому, впервые комплексно рассмотрены возможности регуляции активности ферментов, которые могут быть использованы для создания методов иммуноферментного анализа. В этом смысле оправдано английское название книги Enzyme-mediated immunoassay , которое буквально переводится, как Иммунный анализ, опосредованный через ферменты . [c.5]

Следует обратить внимание читателей на те основные тенденции развития иммуноферментного анализа, которые прослеживаются в представленной книге сокращение времени анализа и упрощение методик благодаря переходу к гомогенным методам анализа применение двойных меток (два фермента, фермент и якорная группа и т. д.), которые повышают специфичность детектирования ферментной метки использование моноклональных антител и множественный антигенный анализ для повышения специфичности иммунохимической стадии детектирования. Принципиально новым является создание методов иммунохроматографии, в которых концентрация вещества определяется не по активности ферментного конъюгата, а по его хроматографической подвижности. [c.6]

Антигенные варианты NA вируса гриппа А/Токуо/3/67 (H2N2) были селекционированы при проведении одного пассажа вируса в куриных эмбрионах в присутствии моноклональных антител к NA. Варианты были отобраны с частотой 10 из клонированного вируса [116]. Частота выделения вариантов NA подобна частоте выделения вариантов НА [128]. Был селекционирован ряд вариантов и использован для построения экспериментальной карты молекулы NA методом сравнительного антигенного анализа мутантных вирусов с моноклональными антителами в ELISA и в тесте ингибиции нейраминидазной активности. Эти эксперименты подтвер- [c.144]

In vitro с помощью антител можно определять клеточное происхождение недифференцированных опухолей (рис. 20.15) и выявлять микрометастазы в костном мозге, спинномозговой жидкости, лимфоидных органах и т. д. (рис. 20.16). Разработаны также методы иммунологического анализа для выявления нескольких опухолеассоциированных антигенов в сыворотке крови. К таким антигенам относятся, например, раково-эмбриональный антиген (РЭА) и а-фетопротеин (АФП). Повышенный уровень указанных антигенов может быть полезным диагностическим признаком, однако АФП и РЭА не ассоциированы только с каким-либо одним типом опухолей и поэтому их определение важно главным образом для контроля эффективности лечения (рис. 20.17). [c.385]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология