Изоэлектрическая концентрация определение

Как известно, на свойства белковых веществ оказывает влияние концентрация водородных ионов или pH среды. При низких значениях pH частицы белков заражены положительно, а при высоких — отрицательно. При определенном pH заряд частиц проходит через нуль. Это состояние называется изоэлектрической точкой. Для большинства белков изоэлектрическая точка, при которой происходит их коагуляция, наступает при pH 4,7—5,5. [c.104]

В водном растворе при определенной концентрации водородных ионов, отвечающей изоэлектрической точке, у всякого амфо-лита (амфотерного электролита) число ионизированных основных групп равно числу ионизированных кислотных групп. При этом число как тех, так и других групп минимально.. Молекулу белка в изоэлектрическом состоянии следует считать в целом нейтральной. хотя она и имеет еще ионизированные группы. Условно ее можно изобразить в этом состоянии следующим образом [c.469]

Модель двойного электрического слоя, отвечающая этим простейшим представлениям, ириводит к двум возможным значениям -потенциала. Если предположить, что все заряды, находящиеся в растворе, способны перемещаться вместе с жидкостью или при движ( нии твердого тела относительно жидкости пе увлекаться вместе с ним, то -потенциал по величине -будет совпадать с -потенциалом, и его изменение с концентрацией электролита должно подчиняться формуле Нернста. Если заряды, находящиеся в растворе, при относительном движении жидкости и твердого тела связаны только с последним и перемещаются вместе с ним, то -потенциал всегда будет равен нулю. Ни одно из этих следствий, вытекающих из теории Гельмгольца, не согласуется ни с экспериментально установленным соотно1дением между (или й м.ь) и -потенциалами, ни с найденной экспериментально зависимостью -потенциала от концентрации (если не считать, что -потенциал лзожет быть равен нулю в очень концентрированных растворах электролнтов и ири определенном составе раствора, отвечающем изоэлектрической точке). Теория Гельмгольца не объясняет также причины изменения заряда повер> ности металла в присутствии поверхностно-активных веществ при заданном значении -потенциала. Вместе с тем теория конденсированного двойного слоя позволяет получить значения емкости двойного слоя, согласующиеся с опытом, а при использовании экспериментальных значений емко- [c.262]

Степень ионизации каждой группы зависит от pH среды и ионной силы раствора. Для полиамфолитов характерным является такое состояние, когда число ионизированных кислотных групп равно числу ионизированных основных, т. е. суммарный заряд макромолекул равен нулю. Это наблюдается при определенной концентрации ионов водорода, отвечающей изоэлектрической точке. В изоэлектрическом состоянии макромолекула стремится свернуться в наиболее плотный клубок. [c.152]

Помимо исследования пространственных структур в растворах и студнях желатины (трехмерные структуры) мы изучали образование и структурно-механические свойства поверхностных (двухмерных) слоев желатины, самопроизвольно образующихся на границе раздела фаз. Двухмерное состояние белков имеет важное биологическое значение. Был разработан удобный и достаточно точный статический метод измерения поверхностного натяжения белковых растворов по определению размеров большой лежачей капли или пузырька 103, 104]. С помощью этого метода изучена кинетика понижения поверхностного натяжения водных растворов желатины в зависимости от концентрации и pH среды. Весьма специфичной оказалась зависимость поверхностного натяжения от pH (максимум при рН = 3 и минимум при рН = 4,9) в кислой области и изоэлектрической точке наблюдается значительно большие снижения поверхностного натяжения, чем в щелочной среде. Изучена кинетика образования и дальнейших структурных изменений адсорбционного слоя желатины — весьма медленных процессов. В ходе этих исследований был разработан новый метод и аппаратура для изучения процессов адсорбции и десорбции поверхностно-активных веществ на жидкофазных границах (Р. А. Кульман) [103]. [c.400]

В случае (1) образуется катион, (2) — анион соли аминокислоты. Внутренняя соль существует лишь при строго определенной для каждой аминокислоты концентрации водородных ионов (изоэлектрическая точка). При электролизе такого раствора аминокислота не перемещается ни к катоду, ни к аноду. [c.167]

Однако уже в их работах встречались несовпадения изоэлектрических точек, определенных по переносу воды и по изменениям концептрации (отсутствие изменения концентрации в изоэлектрической точке). [c.270]

Внутренняя соль I существует только при строго определенной для каждого из изомеров концентрации протонов в растворе, которую называют изоэлектрической точкой (см разд 8 2 2 1) Как уже отмечалось, сульфаниловую кислоту используют в качестве полупродукта в синтезе азокрасителей Кроме того, амид сульфаниловой кислоты и его произввдные (замещенные по амидной группе) широко применяют в качестве лекарственных средств-так называемых сульфамидных препаратов Простейший из них-белый стрептоцид - получают по следующей схеме [c.222]

Значение pH раствора полиамфолита, при котором средний суммарный заряд на цепи равен нулю, называется изоэлектрической точкой (ИЭТ). Величина ИЭТ не зависит от концентрации полиамфолита и является важной константой полиамфолита. На различии в ИЭТ основано фракционирование смесей белков, например, методом электрофореза. При определении ИЭТ учитывается суммарный заряд макромолекул, обусловленный не только диссоциацией кислотных и основных групп полиамфолита, но и специфическим связыванием посторонних ионов из раствора. ИЭТ определяется с помощью электрокинетических методов (в частности, электрофореза) либо косвенным путем по изменению свойств, связанных с зарядом макромолекул. Значения степени набухания, растворимости полиамфолитов, осмотического давления и вязкости их растворов в ИЭТ проходят через минимум. Вязкость в ИЭТ минимальна (рис. IV. 7), поскольку вследствие взаимного притяжения присутствующих в равном количестве противоположно заряженных групп полимерная цепь принимает относительно свернутую конформацию. При удалении от ИЭТ цепь полиамфолита приобретает суммарный положительный (в кислой области pH) или отрицательный (в щелочной области pH) заряд [c.127]

Механизм электролитной коагуляции. Как известно, гидрофобные коллоиды неустойчивы в изоэлектрическом состоянии, т. е. электронейтральные частицы коагулируют с наибольшей скоростью. На рис. 111 показана схема снятия заряда с коллоидной частицы при добавлении электролита с двухзарядными анионами. Как видим, гранула становится электронейтральной в том случае, если противоионы диффузного слоя, заряженные отрицательно, перемещаются в адсорбционный слой. Чем выше концентрация прибавляемого электролита, тем сильнее сжимается диффузный слой, тем меньше становится дзета-потенциал и, следовательно, тем быстрее начинается процесс коагуляции. При определенной концентрации электролита практически все противоионы перейдут в адсорбционный слой, заряд гранулы снизится до нуля и коагуляция пойдет с максимальной скоростью, так как отсутствие диффузного слоя обусловит значительное понижение давления расклинивания. [c.370]

Если такой раствор охладить до 20°, то при определенных Словиях (изоэлектрическое состояние, отсутствие пептизато-ров) произойдет разделение раствора на две фазы. Здесь мы имеем Р==2, С = 2 н, следовательно, F = 2, т. е. раствор желатины над осадком должен иметь постоянную концентрацию, если давление и температура постоянны. Однако в действительности этого также нет. Объясняется это тем, что альбумин, желатина и многие другие вещества образуют коллоидные растворы, в которых очень важную роль играет поверхностная энергия, между тем как правило фаз этого вида энергии не учиты-ьает. Присутствие же в системе незначительного количества по-верхностно-активного вещества (оно может образоваться и в результате термолиза, например, желатины при нагревании) вызовет адсорбцию, и равновесие в системе будет нарушено. В этом случае, как мы уже видели, оправдывается правило осадков. [c.312]

В изоэлектрической точке белки обладают наименьшей способностью связывать воду, происходит разрушение гидратной оболочки вокруг белковых молекул, поэтому они соединяются, образуя крупные агрегаты. Агрегация белковых молекул происходит и при их обезвоживании с помощью некоторых органических растворителей, например этилового спирта. Это приводит к выпадению их в осадок. При изменении pH среды макромолекула белка становится заряженной, и его гидратационная способность меняется. При ограниченном набухании концентрированные белковые растворы образуют сложные системы, называемые студнями. Студни не обладают текучестью, они упруги, обладают пластичностью, определенной механической прочностью, способны сохранять свою форму. Глобулярные белки могут полностью гидратироваться, растворяясь в воде (например, белки молока), образуя растворы с невысокой концентрацией). [c.16]

Ее +. В дальнейшем эти результаты были подтверждены, расширены и обоснованы [102, 464]. Не только наличие определенных катионов, особенно ионов водорода в среде, но и их концентрация оказывает влияние на адсорбцию микроорганизмов. В отсутствие катионов многие культуры не поддаются адсорбции. Адсорбция спорообразующих микроорганизмов подчиняется правилу Шульце—Гарди для того, чтобы вызвать адсорбцию бацилл, трехвалентного катиона нужно в 10—100 раз меньше, чем двухвалентного, которого достаточно в 10—100 раз меньше, чем одновалентного, за исключением иона водорода, которого требуется примерно столько же, сколько трехвалентного. Д. Г. Звягинцев [103] на основании данных литературы и собственных исследований пришел к выводу, что влияние pH и катионов на адсорбцию коррелирует с их влиянием на величину электрокинетического потенциала, на агрегативную устойчивость бактериальной суспензии — при приближении к изоэлектрической точке дзета-потенциал уменьшается и адсорбция увеличивается. Следует, однако, учитывать возможность образования координационных связей через ионы металлов, установление химических связей и т. д. [c.191]

Если ионный осадок, например иодид серебра, поместить в чистую воду, то через некоторое время достигается равновесие растворимости, выражаемое величиной произведения растворимости этого соединения. Однако твердое вещество совсем не обязательно должно притягивать с одинаковой силой оба своих иона. Фервей и Кройт показали, что в указанном выше примере притяжение твердым веществом иодид-ионов значительно сильнее, чем притяжение ионов серебра в связи с этим изоэлектрическая точка наблюдается не при равных концентрациях этих ионов, а при [Ag+]=10" и [1"]= 10" °. Ван-Лаар з сравнил различные методы определения изоэлектрической точки иодида серебра и приводит как наиболее вероятную величину pAg=5,52. [c.169]

При введении полярного модификатора в малых концентрациях его молекулы адсорбируются полярной частью на кристаллах с ориентацией углеводородных радикалов в дисперсионную среду. Заряд частиц снижается, и при определенной концентрации модификатора имеет место межэлектродная циркуляция. Одновременно с адсорбцией модификатора на кристаллах происходит взаимодействие его молекул с молекулами смол, содержащихся в дисперсионной среде. Дальнейшее увеличение концентрации модификатора приводит к укрупнению кристаллов за счет образования нового слоя с обратной ориентацией молекул модификатора. Кристаллы при этом приобретают положительный заряд и осаждаются на катоде. В области малых концентраций присадок (0,001-0,01%) частицы дисперсной фазы крупные и разобщенные и имеют мицеллярный характер. При добавлении модификатора в больших концентрациях происходит сжатие диффузионного слоя, уменьшение размера частиц и переход системы в изоэлектрическое состояние, что подтверждается отсутствием электрофореза. В области еще больших концентраций полярного модификатора в зависимости от его природы на поверхности крупных частиц могут возникать как положительные, так и отрицательные заряды. При таких концентрациях размеры частиц дисперсной фазы увеличиваются за счет развития их сольватных оболочек. [c.97]

Хотя в настоящее время существуют методы определения изоэлектрической точки исследуемых белков с достаточной точностью (например, изоэлектрическое фокусирование в градиенте плотности сахарозы), знание изоточки вовсе не обязательно для выбора ионообменника. Пригодность того или иного ионита легко определить по степени связывания белка в статических условиях. В случае анионита смолу приводят в равновесие с буферным раствором, pH которого соответствует верхней границе области устойчивости исследуемого белка. В случае катионита pH буфера будет соответствовать нижней границе этой области. Обессоленный белок растворяют в соответствующем буфере, осторожно (избегая вспенивания) перемешивают с порцией ионита, отделяют надосадочную жидкость. По концентрации белка в надосадочной жидкости судят о степени связывания его с соответствующим ионообменником. [c.431]

При определенных значениях pH, характерных для каждой аминокислоты, они индифферентны к действию электрического тока. В этом случае концентрации анионов и катионов в растворах равны. Подобные значения pH называются изоэлектрической точкой ами- [c.268]

Электрохимические данные также указывают на биполярное строение в кислой среде аминокислоты мигрируют к катоду и проявляют свойство катиона, в щелочной среде аминокислоты устремляются к аноду и являются, следовательно, анионами. При определенных значениях pH, характерных для каждой аминокислоты, они индифферентны к действию электрического тока. В этом случае концентрации анионов и катионов в растворах равны. Подобные значения pH называются изоэлектрической точкой аминокислоты (рН1). (Структурные модели глицина и метионина см. на цветной табл. V.) [c.272]

Метод электрофореза широко применяют в клинике для анализа белков плазмы и сыворотки крови. Концентрация белков плазмы составляет 60—80 г/л. Сыворотка крови представляет собой плазму, лишенную фибриногена. При заболеваниях может изменяться как общее количество белков плазмы, так и содержание отдельных белков или белковых фракций без изменения общего количества белка. При некоторых заболеваниях, например при воспалении почек, циррозе печени и др., наблюдается уменьшение содержания белков плазмы (за счет снижения количества альбуминов). Напротив, острые инфекционные заболевания, возникновение некоторых злокачественных новообразований сопровождаются повышенным содержанием белков в крови, чаще всего глобулиновой фракции. Поэтому анализ белков сыворотки крови имеет большое диагностическое значение и позволяет наблюдать за ходом лечения. Суммарный заряд белковой молекулы изменяется в зависимости от pH и при определенном значении pH (изоэлектриче-ская точка) равен нулю. Белок в изоэлектрическом состоянии при электрофорезе не передвигается ни к катоду, ни к аноду, наименее устойчив в растворе и при стоянии выпадает в осадок. [c.31]

Изоэлектрическая точка. Теоретически изоэлектрическая точка может быть определена как величина pH, при которой средний заряд молекулы Z равен нулю. Согласно экспериментальному или рабочему определению, изоэлектрической точкой называют такое значение pH, при котором в среднем никакого переноса белка в электрическом поле не происходит. Поскольку опыты можно вести только в буферных растворах, содержащих соли, взаимодействие потоков (см, разд. 4 гл. IX) может привести к ошибкам и отклонениям, так как в присутствии некоторых солей даже сахара могут перемещаться в электрическом поле. Однако в большинстве случаев теоретическое определение и то, которое принято в повседневной практике, почти идентичны. Изоэлектрическая точка не зависит явным образом от концентрации белка, но зависит от состава растворителя. [c.119]

Электрофорез зарекомендовал себя как полезный метод при анализе сложных смесей, например сыворотки крови, на содержание в них альбумина и различных фракций глобулина. Поскольку растворителем служит обычно вода и разделение ведется большей частью при температурах 1°, белки подвергаются в этом случае довольно мягкому воздействию. Электрофорез служит высокочувствительным методом определения чистоты препарата (при благоприятных обстоятельствах удается обнаружить примеси в количестве менее 1%). Для контроля чистоты используются два метода. Первый состоит в том, что электрофорез проводят в возможно более широкой области изменения pH, буфера, ионной силы и концентрации белка. Обычно pH выбирают вдали от изоэлектрической точки с тем, чтобы свести к минимуму взаимодействие белковых молекул. Вторым методом является метод обращения направления распространения границы при pH, соответствующем изоэлектрической точке. При наличии примесей в белке граница будет расплываться быстрее, чем это должно было бы происходить за счет одной лишь диффузии. Конвекция за счет градиентов температуры также будет обусловливать размытие границы, однако этот эффект не изменяется при перемене полярности электрического поля. [c.219]

При концентрации урана 5-10 м. зависимость адсорбции его на стекле от pH раствора такая же, как и при концентрации 10 м. По данным электрофоретического определения знака заряда урапа (рис. 93 и табл. 62) до pH примерно 6—7.5, уран существует в виде положительно заряженных коллоидных частиц. В таком случае адсорбцию урана на стекле в этих условиях можно рассматривать как коагуляцию положительных коллоидов на отрицательно заряженной поверхности стекла. Увеличение адсорбции с ростом pH можно объяснить двумя причинами 1) уменьшением устойчивости коллоидов урана по мере приближения к изоэлектрической точке и 2) увеличением отрицательного заряда стекла. [c.194]

Как указывалось выше, для того чтобы границы при электрофорезе были стабильны в поле тяжести, нужно работать при достаточно высокой весовой концентрации исследуемого веш,ества. В то же время эквивалентная концентрация последнего должна быть как мон но меньше по сравнению с концентрацией буфера — иначе невозможны точные измерения. Таким образом, фронтальный метод особенно удобен для исследования белков, эквивалентный вес которых очень велик, особенно вблизи изоэлектрической точки (р1). Кроме того, малый коэффициент диффузии макромолекул приводит к сравнительно небольшому размыванию границ даже при длительных опытах. Для малых ионов метод непригоден из-за их большого коэффициента диффузии и малого эквивалентного веса, а главное потому, что инкремент показателя преломления у них не от.личается от инкремента ионов буфера. Это делает невозможным сколько-нибудь точное рефрактометрическое определение концентрации. [c.62]

Степень связывания ионов белками можно определять различными методами из них наиболее широко распрострапен метод равновесного диализа. При диализе (так же как и при осмометрии) используют мешочек, стенки которого непроницаемы для молекул белка, но проницаемы для небольших ионов. Диализный мешочек с раствором белка помещают в раствор, содержащий необходимый ион. После установления равновесной концентрации диффундирующего иона по обе стороны мембраны измеряют концентрацию иона в растворе, не содержащем белка разность начальной и конечной концентраций иона в не содержащем белка растворе позволяет определить концентрацию иона в растворе белка. Если концентрации иона по обе стороны мембраны равны друг другу, то это означает, что связывания не произошло. Если связывание имело место, то концентрация иона в белковом растворе должна быть выше, чем в растворе, не содержащем белка разность концентраций может служить мерой числа ионов, связанных с одной молекулой белка. Для того чтобы исключить влияние эффекта Гиббса — Доннана, равновесный диализ проводят обычно либо в изоэлектрической точке белка, либо при высокой ионной силе. Такие методы, как ультрафильтрация, распределительный анализ, а в некоторых случаях и адсорбционная спектрофотометрия, также могут служить для определения степени связывания ионов с белками. [c.73]

Интересной разновидностью является электрофорез в изоэлектрической точке [133], который проводят, если ее значение известно для нужного фермента. Белковую смесь готовят в буфере при pH, соответствующем изоэлектрической точке этого, фермента. Образец помещают в канавку, сделанную в агарозном геле, и начинают электрофорез. Фермент остается в канавке, тогда как загрязняющие белки движутся в обоих направлениях (рис. 5.15). Исходное требование — найти значение рН при котором фермент не будет двигаться. Оно может отличаться-от изоэлектрической точки, определенной методом изоэлектрического фокусирования (см. разд. 5.3). Изоэлектрическая точка часто зависит от используемого буфера из-за связывания белком буферных ионов. Связывание фосфат- и цитрат-ионов — это-обычное явление, которое приводит к снижению изоэлектриче ской точки. При изоэлектрическом фокусировании проводится аппроксимирование к нулевой концентрации буфера, и найденное при этом значение на самом деле представляет собой изо-ионную точку , т. е. значение pH, при котором отсутствует связывание ионов с белковой молекулой. [c.218]

Такое состояние носит название изоэлектрического состояния и для каждого белка в зависимости от его химических свойств наблюдается при определенной концентрации водородных ионов, которая поэтому называется изоэлектрической точкой данного белкового амфолита. При любой другой [Н+] белок уже не будет электронёйтральным. В средах с концентрацией водородных ионов большей, чем изоэлектрическая точка данного протеина, его молекулы находятся в состоянии белковых катионов [c.153]

Если прибавить к раствору белка слабую кислоту, то диссоциация карбоксильных групп на поверхности белковых молекул будет подавляться, и в конечном итоге в молекулах белка установится равенство положительных и отрицательных зарядов. При этом количество заряженных белковых молекул станет минимальным, а электронентральных молекул — максимальным. В зависимости от числа и природы основных и кислых групп в белке такое состояние достигается при разных концентрациях водородных ионов. Кислотность раствора, при которой в белках наблюдается равенство положительных и отрицательных зарядов, получила название изоэлетрической точки. Определения изоэлектрических точек различных очищенных белков показали, что ИЭТ большинства растительных белков находятся в слабокислой среде. Значения pH, соответствующие изоэлектрическим точкам некоторых белков, приводятся ниже [c.214]

Следует отметить, что получить изоэлектрическую точку в растворе чистого амфолита невозможно. Концентрация водородных ионов в последнем, определяемая уравнением (15), будет равна концентрации водородных ионов в изоэлектрической точке, определяемой уравнением (16), только в отдельных случаях. Поэтому, чтобы получить изоэлектрический раствор, обычно добавляют небольшие количества щелочи или кислоты. В изоэлектрической точке аминокислота диссоциирует, давая равные количества ионов ЯН и но если концентрация водородного иQнa превышает теоретическое значение для этой точки, то водородные ионы будут реагировать с или КН, образуя КН или ЯН соответственно. Наоборот, в растворе с меньшей концентрацией водородных ионов ионы КНг" или КН будут проявлять тенденцию к дальнейшей диссоциации. Эти выводы были использованы для определения изоэлектри- [c.566]

При определенной величине pH раствора в молекуле белка устанавливается равенство пололсительных и отрицательных зарядов. В зависимости от числа и природы основных и кислых групп в белке это равенство (изоэлектрическая точка) достигается у разных белков при разных концентрациях водородных ионов. Так, например, у клупеина (белок спермы рыбы), содержащего большое количество основных аминокислот, изоэлектрическая точка лежит в щелочной зоне. [c.699]

Изоэлектрическое фокусирование в геле имеет определенные преимущества по сравнению с ИФ в среде со стабилизованным градиентом плотности. Эти преимущества состоят в следующем 1) сокращается длительность разделения 2) полностью подавляется термическая конвекция 3) применяется простое оборудование для ИФ 4) возможно одновременное разделение нескольких образцов 5) возможно обнаружение с помощью различных красителей и различных методик 6) возможно объединение ИФ и зонного электрофореза в двухмерном варианте 7) достаточно небольшого количества образца 8) возможно обнаружение белков методом иммунодиффузии. Однако при применении геля возникают проблемы, связанные с молекулярноситовым эффектом, который имеет место в основном при разделении больших молекул. Другой недостаток метода — это низкая точность определения pH в зонах. В настоящее время этот метод (сокращенное обозначение ИФПАА или ПАГИФ) является общепринятым и широко используется. В отдельных случаях, согласно данным [73], при проведении дискретного трубчатого электрофореза в полиакриламидном геле доо пска-ется окрашивание. Для снижения молекулярно-сито<вого эффекта рекомендуется [23] концентрация геля 3,7%. Типичный градиент напряжения для 8-часового разделения составляет 200 В на 60 мм. Если тепло отводится, то напряжение можно увеличить и соответственно сократить длительность разделения. Градиент pH можно измерить после разрезания столбиков с гелем и последующего элюирования сегментов небольшим коли- [c.323]

ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКАЯ ТОЧКА — концентрация водородных ионов в р-ре белка, амфотерного полиэлектролита или в нок-рых дисперсных системах (коллоидных растворах), нри к-рой общее число положительных зарядов у макромолекул или у частиц дисперсной фазы равно общему числу их отрицательных зарядов, вследствие чего при этом pH отсутствует передвижение частиц в электрич. поле. Для определения И. т. измеряют pH, при к-ром электрофоретич. подвижность растворенных макромолекул или дисперсных частиц равна нулю. Если заряд коллоидных частиц определяется не Н+ и ОН -иопами, а другими, папр. ионами Ag+" и в золях AgJ, то соответственно измеряют не pH, а pAg (или pJ) для характеристики точки нулевой электрофоретич. подвижности в этом случав И. т. называют точкой нулевого заряда. Отсутствие электрофоретич. подвижности может также наблюдаться во многих высокоочищенных коллоидных системах, частицы к-рых практически не имеют двойного электрич. слоя на своей поверхности, или при таких концентрациях электродатов, при к-рых отсутствует диффузная часть двойного слоя, однако в таких системах отсутствует перезарядка частиц, и они не имеют И. т. или точки нулевого заряда. Положение И. т. белков и точки нулевого заряда нек-рых коллоидных р-ров указано в табл. 1 и табл. 2. [c.106]

В водных растворах при определенных значениях концентрации водородных ионов количества ионизированных основных и кислотных групп могут быть равны, при этом количества тех и других (основных и кислотных) являются минимальными. Такое состояние называется изоэлектр ическим. Молекулу белка в изоэлектрическом состоянии можно считать электронейтральной, хотя [c.356]

Определение этого фактора затрудняется тем обстоятельством, что значение коэффициента активности у не всегда известно. Однако при бесконечном разбавлении значение этого фактора становится равным единице. Следует помнить, что в уравнениях (VI. 1), (VI. 2) и (VI. 3) можно использовать только такие данные, которые относятся к бесконечному разбавлению или по крайней мере к таким малым концентрациям, при которых термодинамический фактор очень мало отличается от единицы. Наилучшие результаты получаются для компактных, слабо заряженных молекул некоторые же молекулы вызывают особые затруднения — это сильно асимметричные или сильно заряженные молекулы, например нуклеиновые кислоты. Что касается электростатических эффектов, то их можно устранить, используя растворы, содержащие соли, например 0,1 Ai K I. Кроме того, можно уменьшить заряд белковой молекулы. Для этого подбирают такое значение pH раствора, которое близко к изоэлектрической точке белка. Фрикционные свойства макромолекул при седиментации обычно не зависят от скорости вращения ротора, так как даже при больших скоростях не наблюдается предпочтительной ориентации макромолекул. Поэтому можно использовать различные скорости вращения, так как это дает полезную информацию. Так, при анализе данных, относящихся к области мениска, как, например, в методе Арчибальда, путем изменения скорости и времени вращения можно обнаружить в исследуемом образце легкий компонент. Особенную трудность представляет определение молекулярной массы ДНК- Один из подходов к определению величины М для ДНК — измерение характеристической вязкости. К этой теме мы вернемся в гл. VII. Более подробные сведения о проблеме определения молекулярной массы ДНК можно найти в работе Эйтена и Коэна [4]. [c.99]