Сорбция белков

Синтез полимерных суспензий с заданным комплексом свойств. В процессе работы были получены устойчивые полимерные суспензии с узким распределением частиц по размеру и заданной поверхностной концентрацией функциональных групп. Иммобилизацию белков на латексе проводили двумя способами - физической сорбцией белка или ковалентным связыванием макромолекулы с поверхностью активированного латекса. Первый способ использовали для иммобилизации антител к наркотикам и конъюгированных антигенов К-ОВА и Г-ОВА на поверхность латекса, не [c.201]

При фракционировании белков методом ионообменной хроматографии большое внимание уделяют выбору ионообменника (природе матрицы и емкости ионита) и буферного раствора, при котором осуществляется сорбция белков (величине pH и ионной силы, природе буфера и буферной емкости). [c.108]

Эффективная сорбция белков происходит при значениях pH, отстоящих не менее чем на единицу от р1. В области рН<р1—I белки можно хроматографировать на катионитах, а в области рН>р1 + 1 — на анионитах. Изменение pH в направлении к ИЭТ способствует десорбции белков. При работе с белками используют буферные растворы с низкой ионной силой, но высокой буферной емкостью. Для этого пользуются буферными растворами, рК которых отстоит от величины pH, используемой в эксперименте, не более чем на 0,3—0,5 единиц pH. Хроматографию на анионитах ведут в таких системах, где диссоциируемым компонентом является катион (буферы трис, пиридин, имидазол и др.), [c.109]

Фракционирование белков сыворотки крови можно проводить с использованием градиентной или ступенчатой элюции. Сорбцию белков на колонке осуществляют при pH 5,65. При этом значении pH белки сыворотки крови могут сорбироваться на слабых анионитах. [c.111]

Фракционирование белков сыворотки крови на КМ-целлюлозе рекомендуется проводить путем создания ступенчатой элюции. Это обусловлено достаточно большими различиями в сродстве отдельных белковых фракций к иониту. Сорбция белков на колонке осуществляется при pH 4,6 ( стартовый буфер). При таком значении pH белки сыворотки крови сорбируются на слабых катионитах. [c.112]

Рассмотренные выше обстоятельства приходится учитывать в процессе разделения белков и пептидов [106, 107]. При КЗЭ белков с немодифицированным капилляром рекомендуется после каждого проведенного разделения при вводе пробы из биологических матриц тщательно промывать капилляр раствором едкого натра. При этом молекулы, адсорбированные на стенках капилляра, удаляются. Если значения pH вьппе изоэлектрической точки (р/), то белки находятся в анионной форме, т.е. имеют тот же заряд, что и стенки кварцевого капилляра. Предпочтительный pH буфера составляет 9-11. При pH < 2 адсорбция белков уменьшается вследствие протонирования силанольных групп. Возникают проблемы иного рода очень малый ЭОП и возможная денатурация белков. Для предотвращения сорбции белков стенками капилляра к буферу добавляют соли щелочных металлов, низших полиаминов, цвиттер-ионов, обладающих большой буферной емкостью. Перспективно использование неионных ПАВ в качестве динамических покрытий. [c.350]

Если объектами химико-токсикологического исследования являлись внутренние органы трупа или другие объекты животного происхождения, изолирование алкалоидов из которых связано с большими трудностями, количественное определение в таких случаях не всегда возможно и не всегда обязательно. Последнее обстоятельство обусловлено двумя основными причинами а) аналитическая химия алкалоидов, изолированных из относительно больших количеств биологического материала, разработана недостаточно б) в процессе обработки биологического материала для изолирования из него ничтожно малых количеств алкалоидов происходят значительные потери этих веществ. Потери только за счет сорбции белками при исследовании по способу Стаса — Отто достигают 24—28% кодеина и морфина, 10— 16% стрихнина и кокаина (Е. А. Грязнова). Значительные потери алкалоидов обусловлены также возможностью перехода некоторых из них (кофеин, стрихнин, вератрин) в кислое хлороформное извлечение. [c.176]

Сорбция белков на ионитах основана ка образовании электростатических связей между заряженными группировками белка и ионообменными центрами матрицы, имеющими противоположный заряд., Сродство ионита к молекуле белка, а также его емкость зависят от ионной силы и pH буферного раствора. Фракционирование белков основано на изменении заряда под действием pH или на введении в элюент веществ, конкурирующих за ионогенные группировки матрицы. Для достижения высокого разрешения приходится очень тщательно подбирать ионную силу, величину pH и в особенности концентрацию противоионов. [c.430]

В случае колоночной хроматографии ионообменники работают в условиях, далеких от насыщения. Например, при сорбции белков емкость ионита составляет не более 5—10% от его полной емкости. Образец следует вносить в колонку в небольшом объеме только в том случае, если все операции (приведение в равновесие колонки и элюента, растворение образца и элюирование) проводят в одном, рабочем буферном растворе. Если элюирование будут вести в градиенте pH или ионной силы, образец можно вносить в большом объеме разбавленного раствора. [c.434]

Изотерма неспецифической адсорбции характеризует сорбцию белков на неспецифических участках матрицы и на молекулах уже сорбированного белка. [c.63]

Нативная сефароза или сефароза, блокированная этанолами-ном сразу же после активации бромцианом, не адсорбируют белки [16]. Однако, если сефароза не блокирована тотчас же после активации, наблюдается неспецифическая сорбция белков, которая становится тем сильнее, чем больше проходит времени между активацией бромцианом и блокированием активных центров. Препарат человеческий сывороточный альбумин—сефароза, блокированный после 12 ч после присоединения сывороточного альбумина,, сорбирует только 0,4 мг белка на 1 мл геля. [c.277]

Предварительные опыты, поставленные нами по изучению сорбции белков карбоксильными смолами в Н-форме, показали, что сорбция в [c.96]

Основные успехи разделения биополимеров в гетерогенных системах достигнуты при использовании равновесия между раствором и твердой фазой. Одними из наиболее ранних приемов, сохранивших свое значение и до настоящего времени, являются методы осаждения и кристаллизации. Еще большее значение в настоящее время играют процессы сорбции и их динамическая модификация — процессы хроматографии. Одноактная сорбция белков на окислах металлов и других минеральных сорбентах служит для очистки белков и ферментов уже несколько десятилетий. К этим процессам присоединилась избирательная сорбция белков ионообменными смолами. Одним из наиболее значительных достижений современной физической химии в области фракционирования сложных смесей веществ, в частности белков, нуклеиновых кислот, полипептидов, аминокислот и нуклеотидов, явилась хроматография, особенно в виде ее ионообменной модификации и гельфильтрации на сефадексах. [c.7]

Сорбция белков ионообменными смолами [c.192]

Результаты исследования сорбции белков на сульфокатионитах были сопоставлены с опытами, выполненными на других типах смол. В табл. 3 приведены результаты определения сорбционной емкости для белков на карбоксильном катионите КМТ. [c.194]

Различие между водородными и молекулярными связями обусловливает различие в растворимости и реакционной способности целлюлозы и ее производных. Таким образом, линейные цепочки целлюлозы сшиты между собой весьма непрочно и могут разрушаться в процессе хроматографирования различных веществ. Так, например, при пропускании через целлюлозоионитную колонку раствора смеси белков, сорбция белковых молекул происходит не только за счет ионных и полярных связей, но и за счет водородных связей. Возникает своего рода конкуренция за водородные связи между макромолекулами целлюлозы, с одной стороны, и молекулами целлюлозы и белков, с другой. Этим объясняется высокая емкость поглощения ионообменных целлюлоз в процессе сорбции белков и других высокомолекулярных веществ. Макромолекулы целлюлозы могут соединяться между собой также и через обычные валентные связи (глюкозидные и сложноэфирные). [c.62]

По незамещенным силанолам может происходить неконтролируемая сорбция белков или малых молекул, например ионов при так называемой ион-парной хроматографии (см. ниже), от чего страдают разрешающая способность и воспроизводимость хроматографического процесса. Во избежание этого силикагель после модифика ции обрабатывают еще и низкомолекулярным модификатором гидрофобной природы — триметилхлорсиланом. О том, какой эффект дает такая дополнительная обработка, молено судить по следующему примеру. Для фенилтиогндантоинового производного аргинина (ФТГ-Arg) на колонке Ultrasphere ODS , не обработанной триметилхлорсиланом, при элюции 50%-ным метанолом значение составляет 4,33. После такой обработки задержание ФТГ-Arg на колонке уменьшается настолько, что ему отвечает значение = 1,67. Между тем для ФТГ-Val подобного эффекта не наблюдается. Очевидно, что положительно заряженный остаток аргинина взаимодействует с отрицательным зарядом ионизированной силанольной группы. Из этого примера ясно, что экспериментатору следует знать, был ли имеющийся в его распоряжении сорбент дополнительно об- [c.189]

Обычно для обеспечения эффективной сорбции белка на ионооб-меинике и одновременно снижения опасности многоточечной сорбции белка прп низкой концентрации соли ( <0,01 М Na l) предпочитают выбирать значение pH, примерно на одну единицу отличающееся от р1 белка — разумеется, в ту сторону, которая обеспечивает знак суммарного заряда белка, противоположный знаку зарядов сорбента. [c.265]

Можно ступенчато или постепенно изменять и значение pH элюирующего буфера, с тем чтобы, например, ослабить прочность сорбции белка 5, но уже после того, как белкп 1 — 4 выйдут из колонки или [c.266]

После описанной обработки ионит уравновешивают буферным раствором, в котором осуществляют сорбцию белков на ионообменнике (исходный буферный раствор). Эту процедуру можно проводить как на колонке, так и пне ее. Обработку исходным буферным раствором осуществляют до тех пор, пока не произойдет выравнивания pH элюата на выходе из колонки (или жидкости, в которой суспендируют ионит) с pH исходного буферного раствора. Уравновешивание — процесс медленный. Для его ускорения ионит можно сначала обработать раствором того же состава, что и исходный, но с большей концентрацией, а после достижения нужного значения pH уравновешивание продолжают исходным раствором. Другой способ уравновешивания заключается в том, что ионит суспендируют в исходном буферном растворе до получения достаточно жидкой суспзнзии. Добавлением раствора, содержащего соответственно кислый или основной компонент исходного буфера, доводят pH (на рН-метре) до нужного значения. Затем сорбент уравновешивают исходным буферным раствором. Во всех случаях конечное состояние равновесия (величину pH) необходимо контролировать. [c.110]

В качестве характеристики общей сорбционной активности часто применяют сорбцию метиленового голубого из водного раствора ( Карбовит ВФС 42У-9-93). Однако одного этого показателя совершенно недостаточно для характеристики качества сорбента, который предлагается для сорбции каких-то определенных соединений. Если сорбент предлагается для сорбции белков или тяжелых (радиоактивттх) металлов, то именно сорбцию их и нужно контролировать при определении специфической сорбционной активности. С другой стороны, одного контроля специфической сорбционной активности мало, поскольку общая сорбционная активность также характеризует качество сорбента—его способность (возможно, даже нежелательную) сорбировать другие вещества. Показатели общей и специфической сорбционной активности должны быть обязательно ограничены снизу (поскольку низкая сорбционная активность не позволяет достичь нужного фармакологического эффекта) и сверху (поскольку слишком высокая сорбционная активность не позволяет добиться стандартного эффекта и может быть даже вредна). Рекомендуемые пределы 10% от номинальных значений. [c.452]

Однако при ферментативных воздействиях всегда приходится учитывать, что препарат фермента может обладать неизвестной активностью, способной изменить выделяемый полисахарид. Удаление белка после ферментативной обработки достигается обычно одним из методов денатурирования. К ним относятся нагревание, действие щелочи , хлороформа с амиловым спиртом (особенно распространеньый метод ), трифтортрихлорэтана , трихлоруксусной кислоты фссфоЕольфрамовой кислоты и т. д. Кроме того, используется избирательная сорбция белков на геле фосфата кальция , бентоните или каолине . Зти же методы, конечно, могут применяться и для удаления неферменткых белков, загрязняющих растворы полисахаридов. [c.486]

Прежде чем приступить к разделению на колонках, белки необходимо перевести в раствор. Этого достигают путем экстракции биологических препаратов буферными растворами соответствующего состава (т. е. с правильно подобранной ионной силой, величиной pH, типом детергента). После удаления механических примесей раствор концентрируют либо путем осаждения белков (и последующего растворения в меньщем объеме), либо сорбцией на ионитах (с последующей десорбцией в меньшем объеме). Удаление солей и перевод белка в соответствующий буферный раствор осуществляют с помощью ГПХ одновременно проводят первичное фракционирование по величине и форме молекул. Следующим этапом обычно бывает сорбция белка на заряженной матрице, либо на матрице с фиксированным специфическим лигандом (гл. 7 и 36). На завершающей стадии часто вновь используют ГПХ, которая обычно предшествует лиофилизации. Конечно, в конкретном случае отдельные стадии могут оказаться излишними. [c.422]

Для успешного выделения фермента с помощью аффинной хроматографии необходимы очень низкие значения К[ или Кь- Обе константы должны быть много меньше, чем любая константа диссоциации для неспецифической сорбции белка на поверхности матрицы. Максимум для Кь может быть оценен следующим образом. Исходя из концентрации ингибитора в нерастворимом аф-финанте, равной 10" моль/л, и требования 99%-ного связывания фермента при хроматографии неочищенного материала, содержащего 10 моль/л фермента в объеме, равном тройному объему нерастворимого аффинанта, в качестве верхнего предела для Кх получают значение 10 моль/л. В 3%-ном растворе белка, содержащем активный фермент с молекулярной массой 10 в количестве [c.62]

Работы О Карра и др. [26] показали, однако, что наиболее часто причиной мнимой аффинности систем является неспецифическая сорбция на незаряженной пространственной группе или даже не-биоспецифнческая сорбция белков, обусловленная гидрофобными взаимодействиями. При близком рассмотрении становится очевидным, что эти гидрофобные взаимодействия могут быть полезны для разделения многих веществ для этого типа хроматографии [c.95]

Порат и сотр. [39] приготовили хелатообразующие сорбенты для белков и пептидов из производных агарозы. Поскольку перечисленные ионы металло1В относятся к переходным элементам, их аффинность зависит от pH. При pH 6—8 сорбция белков избирательна для гистидина и, возможно, также для цистеина. При щелочных pH имеет место координационное связывание аминокислот, что приводит к более эффективной, но в то же время менее избирательной сорбции. [c.170]

Способность белков сорбиро- Рис. 4. Изотерма сорбции аланина сульфо-ваться карбоксильными смола- смолой СДВ-3 из нейтральных растворов, ми в Н-форме [И] приводит к предположению, что эти кинетические препятствия отсутствуют при сорбции белков и других диполярных ионов. [c.95]

В книге содержится изложение исследований и взглядов советских ученых наряду с рассмотрением успехов в соответствующих областях иностранных исследователей. Это относится, в частности, к процессам ионообменной сорбции белков и других цвит-терионов, к развитию теории хроматографии, анализу свойств и структуры сорбентов, а также к ряду других вопросов. [c.5]

Потребовалось выполнить исключительно большую экспериментальную работу по выбору п синтезу сорбентов и изучению условий проведения хроматографических процессов, прежде чем были созданы современные весьма изяш,ные хроматографические методы фракционирования макромолекул. Затруднения, возникшие при разработке этих методов, связаны прежде всего с необратимостью сорбции и малой емкостью сорбции белков. Период поисковых работ включал изучение распределительной хроматографии [1, 4] и молекулярной сорбционной хроматографии, в том числе весьма удачный для своего времени разработанный Тизелиусом метод хроматографии на фосфате кальция [2] и высаливающий хроматографический процесс [3], в котором емкость сорбции белков резко увеличивалась при высоких концентрациях электролита в растворе. Все эти методы, однако, уступили свое место высокоэффективной хроматографии белков на некоторых типах ионообменных смол, на модифицированных целлюлозах и методу гельфильтрации на сефадексах. Имеется значительное число обзоров по хроматографии белков, среди которых наиболее подробными являются статьи Циттла [4] и Мура и Штейна [5]. [c.188]

Сорбция белков солевыми формавш ионообменных смол из водно-ацетоновых растворов [c.194]

Из приведенных данных видно, что молекулы трипсина, а еще в большей мере химотрипсина, теряют способность проникать в зерно сорбента, что связано, естественно, с увеличением размеров макромолекул. У химотрипсина это происходит даже несмотря на образование трех осколков из каждой макромолекулы. Совершенно иначе ведет себя рибонуклеаза. Разрушение дйсульфид-ных мостиков и дальнейшее ацетамидирование приводят к увеличению проницаемости смолы этими макромолекулами, т. е. к уменьшению их размеров. Метод одноактной сорбции белков ионообменными смолами с целью анализа размеров макромолекул может быть сопоставлен с хроматографическим фракционированием белков методом гельфильтрации на сефадексе. Одноактная сорбция на ионитах и гельфильтрация на сефадексах приводят к идентичным суждениям об изменчивости морфологии белков после разрыва дисульфидных групп в трипсине, лизоциме и рибонук-леазе. [c.198]