Обнаружение пятен или полос

Все современные разнообразные методы хроматографии имеют один принцип любое хроматографическое разделение происходит благодаря перемещению анализируемой пробы через сорбент. Причем перемещение может производиться как газом, так и жидкостью. В результате различной сорбции компонентов смеси наблюдается при перемещении (фильтрации) через сорбент разделение ее на полосы, пятна и т. д., содержащие индивидуальное вещество. Обнаружение этих полос или пятен,может быть осуществлено различными приемами. [c.110]

Обнаружение веществ на бумажных хроматограммах можно осуществить двумя способами. По первому способу хроматограмму после проявления разрезают на поперечные полосы и каждую из полос анализируют отдельно (см. стр. 477). По второму способу пятна веществ обнаруживают обработкой всей хроматограммы. Последний способ более употребителен. [c.462]

При плоскостной хроматографии вещество регистрируют непосредственно на пластинке с тонким слоем неподвижной фазы или на бумаге. При этом в качестве количественной характеристики поведения компонента принято использовать отношение скоростей перемещения компонента и растворителя, которое легко определяется как отношение расстояния, пройденного компонентом от точки старта (точки нанесения пятна или полосы разделяемой смеси), к расстоянию, пройденному за то же время фронтом растворителя. Это отношение обозначают Ri и так же, как время удерживания, широко используют для обнаружения веществ в анализируемых смесях. Принято считать, что если в трех достаточно сильно различающихся по своим характеристикам системах значения Rf некоторого вещества, подвергающегося анализу, совпадают со значениями для вещества известного строения, то можно считать эти вещества идентичными, т. е, фактически приписать анализируемому веществу определенное строение. Эту процедуру, конечно, нельзя рассматривать как установление строения анализируемого вещества, так как она основана на сопоставлении с веществом уже ранее установленного строения. Обычно в этом случае говорят об идентификации вещества по значениям 7 /. [c.342]

Для обнаружения витамина В0 и пантотеновой кислоты нижнюю часть второй, до этого времени защищенной хроматограммы опрыскивают дихлор-хинонхлоримидом (реактив № 41 0,1%) и обрабатывают парами аммиака, в результате витамин Ве окрашивается в голубой цвет. Затем 0,5 час нагревают при 160°, опрыскивают верхнюю часть полосы нингидрином (реактив № 108 0,5% в этаноле). После повторного кратковременного нагревания до 160° появляется пантотеновая кислота в виде фиолетового пятна. [c.237]

Поперек полосы на ее середине проводят простым карандашом стартовую линию. На нее наносят небольшое пятно исследуемого раствора смеси солей висмута, меди и кадмия и подсушивают на воздухе или в сушильном шкафу. Осторожно смачивают полосу раствором соляной кислоты и опускают ее концы в два сосуда с раствором соляной кислоты, в которые погружены электроды. Электрофорез проводят при 110 В в течение 2 ч. После этого бумажную полосу высушивают и обрабатывают проявителем для обнаружения зон элементов (см. табл. 17). [c.177]

Обнаружение меназона с помощью микрокристаллоскопических реакций. Спиртовой раствор сухого остатка предварительно очищают от примесей. Для этого на линию старта на хроматографической пластинке в виде полосы (длиной 3 см, шириной 1 см) наносят спиртовой раствор сухого остатка. Правее через 2 см на линию, старта наносят каплю раствора свидетеля . Пятна подсушивают на воздухе, затем пластинку вносят в камеру для хроматографирования. После того, как жидкость поднимется по пластинке на 10 см выше линии старта, пластинку вынимают из камеры и подсушивают на воздухе. [c.133]

В капельном анализе можно использовать целый ряд известных реакций. Однако значительное распространение этого метода стало возможным в первую очередь благодаря широкому применению органических хелато-образующих реагентов, способных к образованию внутрикомплексных соединений . Изменение pH капли чаще всего представляет простую задачу — для этого достаточно подержать б>магу с пятном над открытой склянкой с хлористоводородной или уксусной кислотой или с раствором аммиака. При выполнении реакций на капельной пластинке реакционную смесь можно [нагреть даже до кипения, для чего в каплю погружают горячую платановую проволоку или нагретую палочку из магнезии. Так можно, например, удалить окислы азота. Микропробирки нагревают в водяной, глицериновой или масляной бане или, контролируя температуру, в металлическом блоке. В капельном анализе отдельные компоненты смеси стремятся обнаруживать избирательно. Выбирая подходящую методику выполнения реакции, можно избежать нежелательного влияния мешающих компонентов. Отсутствие длительных и трудоемких процессов разделения составляет большое преимущество капельного анализа и позволяет экономить время. Разумеется, требуется хорошее знание реакций отдельных элементов, чтобы в каждом конкретном случае при заданных условиях можно было выбрать оптимальный вариант их выполнения. По незначительному количеству пробы капельный анализ является разновидностью ультрамикрохи-мического метода. Часто без затруднений можно обнаружить до 0,1—0,01 мкг вещества. Чувствительность капельной реакции можно повысить, используя особую технику ее выполнения. Подсушивание первоначально взятых капель пробы и реактива уже повышает концентрацию реагирующих веществ и тем самым понижает открываемый минимум. Если нанесение капель чередуют с подсушиванием, то открывается еще меньшее количество вещества. Еще более эффективна техника концентрирования ( концевая , акротех-ника), предложенная Скалос 120]. Острым кончиком полоски фильтровальной бумаги впитывают небольшую часть капли пробы и высушивают ее. Такую операцию повторяют до тех пор, пока вся капля не будет сконцентрирована на кончике полосы бумаги. Аналогичным образом можно также сконцентрировать вещество в тонкой нити и после добавления реактива рассмат-ривать ее под микроскопом. Эти приемы увеличивают чувствительность на два-три порядка. Чувствительность можно повысить, используя также ионообменные смолы. Так, при обнаружении кобальта 121] можно провести [c.54]

Для обнаружения пятен радиоактивных веществ на пластинках после тех или электрофореза не всегда удобно пользоваться авторадиографией или флюорографией. При малом уровне радиоактивности это отнимает много времени. Значительно проще добавить в исходную смесь избыток холодных свидетелей , разумеется, если состав смеси известен (аминокислоты, нуклеотиды и др.). Соответствующие пятна и полосы в этом случае легко локализовать окраской, а затем вырезать, элюировать или соскрести с пластинки и просчитать радиоактивность в жидком сцинтилляторе. [c.296]

Обнаружение и локализацию белковых зон после их разделения электрофорезом в ПААГ в большинстве случаев осуществляют путем их прокраски в геле. Зоны проявляются как окрашенные полоски или пятна различной интенсивности, в зависимости от содержания в них белка. Для окраски гель вымачивают в растворе красителя, который диффундирует внутрь него и прочно связывается с белками. Процесс диффузии, как правило, занимает несколько часов. Во избежание размывания полос за это время белки иногда предварительно фиксируют осаждением. Для этого гель сначала вымачивают в 10%- или 50%-ной трихлоруксусной кислоте (ТХУ). Чаще фиксацию совмещают с окрашиванием, используя раствор красителя в. смеси уксусной кислоты и метанола или в ТХУ. [c.88]

Джонс и Пеннеман [106] исследовали системы Ад (I) — цианид и Ап (I) — цианид в воде. При этом установлено, что в первой системе имеются комплексы [Ад(СМ)2], [Ад(СМ)з]2 и [Ад(СМ)4] , а во второй — только [Аи(СМ)2]. Были измерены константы равновесия в системе с серебром. Такие измерения были возможны потому, что у каждого комплекса в системе с серебром положение полос активного в инфракрасном спектре валентного колебания СМ несколько иное, чем у других комплексов. Интересно отметить, что эта частота постепенно смещается от 2135 см у [Ад(С М)2] до 2105 у [Ад(СМ)д]2 и до 2092 смГ у [Ад(СМ)4]з-. Последнее значение очень близко к величине 2080 см" - для изолированного иона СМ", следовательно, с увеличением числа координированных цианидных групп связь становится более ионной. Джонс и Пеннеман изучили также спектры комплексов, адсорбированных на анионных обменных смолах. Опыты проводили с корольками, доведенными до равновесия с растворами, промытыми и высунгенными на воздухе и затем размазанными по окошку из галогенида. Для уменьшения помех из-за рассеяния на размазанное пятно наносили пленку из нуйола. Авторы обнаружили, что [Ад(СМ)2] и [Аи(СМ)2] сильно адсорбируются на смоле. В системе с серебром был обнаружен еще второй пик, но не удалось установить, обусловлен ли он [Ад СМ)з] ", [Ад(СМ)4] " или обоими этими веществами. [c.311]

Основы этого метода изложены в гл. 3. Б данном разделе мы только обсуждаем его применение для разделения ароматических аминов. Предложено хроматографировать смеси бензидина, его аналогов и 1-и 2-нафтиламина на бумаге, импрегнированной формамидом, используя циклогексан в качестве подвижной фазы [112]. Пятна затем обнаруживали, подвешивая бумагу в цилиндре с окислами азота, а затем опрыскивая ее раствором Л -( 1-нафтил) этилендиамина нли раствором другой азосоставляющей. Ароматические амины (бензидин, о-толидин, дианизидин, дихлорбен-зидин, 1- и 2-нафтиламины) разделяли на различных субстратах, применяя элюент изобутиловый спирт — уксусная кислота — вода (3 1 1). Бумагу разрезали на две части одну половину использовали для обнаружения и идентификации полос аминов, а со второй половины амины раздельно элюировали 1 н. соляной кислотой, диазотировали, вводили в реакцию азосочетания с Л -(1-нафтил )этилендиамином, спектрофотометрически измеряли количества красителей (и соответственно аминов) [120]. [c.562]

Фактически метод тонкослойной хроматографии был впер-вые применен голландским биологом Бейеринком в 1889 г. [21], который наблюдал диффузию капли смеси соляной и серной кислот по тонкому слою желатины. Соляная кислота переме-щалась быстрее, чем серная, и образовывала кольцо вокруг пятна серной кислоты. Зона соляной кислоты становилась видимой при нанесении на слой раствора нитрата серебра, а зона серной кислоты обнаруживалась при нанесении раствора хлорида бария. Девятью годами позднее Вийсмен [22] с помощью аналогичного метода доказал присутствие двух ферментов в диастазе солода и показал, что только один из них расщепляет мальтозу в растворимом крахмале. Вийсмен первым использовал явление флуоресценции для обнаружения зон на тонком слое. Он ввел живущую в морской воде флуоресцирующую бактерию в слой желатины, содержащей крахмал, и наблюдал диффузию амилазной смеси по слою. Флуоресцирующая полоса появлялась только в том месте, где р-амилаза реагировала с крахмалом. Этот реактив оказался одним из наиболее чувствительных в тонкослойной хроматографии. Вий-смену удалось обнаруживать до 1/28000000 мг мальтозы, т. е. около 40 пг. История этого откры дча№С5 а [23 -— [c.17]

Бирн [61] в своей работе подчеркивает, насколько важно, чтобы стартовое пятно было маленьким. Когда нерастворимое вещество, например грыс-(ДНФГ)-мезоксальдегид, наносят на пластинку из смеси летучих растворителей, вещество часто осаждается на адсорбенте и при последующем элюировании остается в исходной точке или распределяется в виде полосы. В такой ситуации рекомендуется использовать в качестве растворителя пробы нитробензол его удаляют повторным элюированием петролейным эфиром (80—100°С), который смещает нитросоединения к верхнему краю пластинки, откуда эти соединения перед обнаружением хроматограммы удаляют. Бирн провел хроматографический анализ группы из 41 карбонильного производного на силикагеле G и оксиде алюминия со смесями петролейный эфир (80—100°С)—диэтиловый эфир (7 3), бензол— тетрагидрофуран (от 98 2 до 7 3) и бензол — тетрагидрофуран— уксусная кислота (15 9 1). Соединения, не полностью разделяющиеся при хроматографировании обычным методом, анализируют горизонтальной ТСХ. Пластинки опрыскивают этаноламином, который дает более характерное и более прочное окрашивание, чем гидроксид натрия или калия. [c.597]

Рис. 2 относится только к тиосульфату, тиомочевине и тиозинамину. Эти три вещества могут быть разделены за весьма короткое время (порядка 30 мин.) при помощи н-бутанола в качестве растворителя, хотя изображенная хроматограмма получена после 3-часового разделения. Рис. 2 позволяет сделать несколько интересных заключений. Во-первых, он показывает, что Rw данного вещества на одной и той же хроматограмме не зависит от концентрации. Во-вторых, он показывает, как и следовало ожидать, ЧТО интенсивность окраски пятна зависит от концентрации, т. е. хроматография может служить методом полуколичественного анализа. Наконец, зная концентрацию каждого вещества в исходной смеси, можно составить себе некоторое представление о минимальном количестве каждого сенсибилизатора, которое еще может быть обнаружено. Исходная смесь содержала эквимолекулярные количества трех сенсибилизаторов, а именно 0,33% тиосульфата (0,15% тиосульфат-иона), 0,1 % тиомочевины и 0,15% тиозинамина. Пятна лежат на пределе чувствительности для раствора, разбавленного в 20 раз. Следовательно, предельные концентрации, которые еще могут дать положительный результат на хроматограмме, составляют 0,008% для тиосульфата и тиозинамина и 0,005% для тиомочевины. Чтобы выразить эти концентрации в весовых единицах твердого вещества, необходимо знать объем капель, нанесенных на бумажную полосу. Измерением объема жидкости, израсходованной для нанесения большого числа капель равной площади, было найдено, что объем капли равен 1,3 v-л. Следовательно, минимальные весовые количества веществ, обнаруженные этим способом, равны 0,2 лгдля тиосульфата натрия, 0,07 для тиомочевины и 0,1 рг для тиозинамина. [c.124]

На рис. 3 изображена хроматограмма экстракта, полученная немедленно после его концентрирования. Полоса 4 является повторением полосы 1 на рис. 2 она приведена в целях сравнения. На полосе 2 для экстракта имеется только одно пятно, соответствующее тиосульфату. После добавления к экстракту смеси хроматографированных выше сенсибилизаторов (полоса 3) наряду с пятном тиосульфата появляются пятна двух других сенсибилизаторов, что указывает на возмол<ность их обнаружения в случае присутствия в экстракте. Это испытание было произведено для обнаружения двух возможных источников ошибок 1) присутствие минеральных солей и протеинов в экстракте могло бы помешать продвижению сенсибилизаторов 2) одновременно с сенсибилизатором могло происходить продвижение какого-либо замедлителя, который мог бы помешать образованию сульфида серебра. Как показывает испытание, эти опасения оказались напрасными. Полоса 1 относится к инертной желатине. Можно видеть, что она не дает пятен сенсибилизаторов. Две последние полосы отнсюятся к аллилизотиоцианату, добавленному к экстракту (полоса 6) или [c.124]

Не очень чувствительные, но быстрые и простые методы позволяют обнаружить полосы белка после электрофореза в присутствии ДДС-Na по осаждению этого детергента. Наиболее простой способ состоит в охлаждении геля до температуры 0—4°. При боковом освещении на фоне черного бархата непрозрачные белковые полосы и пятна хорошо видны среди почти прозрачного геля. По-видимому, комплексы белок—ДДС-Na служат ядрами конденсации большого количества мицелл ДДС-Na, растворимость которого очень сильно зависит от температуры. При отогревании геля полосы и пятна исчезают. Нижний порог чувствительности этого метода — 0[j2 мкг белка на 1 мм площади пятна [Walla e et al., 1974]. Попутно отметим недавно описанный, аналогичный способ обнаружения белков в ПААГ, содержащем 8 М мочевину. Гель выдерживают 5—10 мин при —70°. В местах расположения белковых зон за счет связывания части свободной воды белками мочевина кристаллизуется, давая непрозрачные полосы. Остальной гель при этом остается прозрачным [Ba hra h, 1981]. [c.104]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология