Методы определения белка

I. Колориметрические методы определения белка [c.30]

II. с п е к т р о ф о т о м е т р и ч е с к и й метод определения белка [c.33]

Спектрофотометрический метод определения белка основан на способности ароматических аминокислот (триптофан, тирозин и в меньшей степени фенилаланин) поглощать ультрафиолетовый свет с максимумом поглощения при 280 нм. [c.33]

Методы определения белка [c.464]

Недостатком метода определения белка по Лоури является то, что интенсивность окраски различна у разных белков и не прямопропорциональна концентрации белка в растворе. [c.72]

С. В. К о и е в, И. И. К о а у н и я, [11],стр. 137. Новый флуоресцентный метод определения белка в молоке. [c.240]

Воронин П. Ф. К сравнительной оценке методов определения белков и >киров в пищевых рационах. Воен.-мед. журн., 1951, № 5, с. 71—72. 6892 [c.265]

Кульберг Л. М. и Сойфер П.А. Быстрый колориметрический метод определения белков в однородных, богатых белками пищевых концентратах животного происхождения. Биохимия, 1947, 12, вып. 1, с. 1 — 6. Резюме на англ. яз. 7560 [c.287]

Недостаток спектрофотометрического метода определения белков состоит, очевидно, в том, что содержание тирозина и триптофана (от которого зависит величина е) в разных белках варьирует. Этот метод дает хорошие результаты с гетерогенной смесью белков, а также с достаточно чистыми препаратами индивидуального белка, коэффициент поглощения которого может быть точно измерен или вычислен исходя из аминокислотного состава (при условии, что последний известен). [c.56]

Существуют и другие методы определения белка, основанные на измерении 1) коэффициента преломления 2) мутности после осаждения белка трихлоруксусной кислотой и 3) сухого веса (этим методом пользуются для калибровки и проверки других, чаще применяемых методов). [c.56]

Наиболее быстрым методом определения белка сыворотки является рефрактометрический метод. Как известно, луч света, переходя из одной среды в другую, например, из воздуха в сыворотку, меняет свое направление, т. е. преломляется. Степень преломления света оценивают количественно, вычисляя показатель преломления или рефракции. Определяют этот коэффициент с помощью приборов, называемых рефрактометрами. Коэффициент рефракции сыворотки в значительной степени зависит от содержания в ней белка, поэтому, зная рефракцию сыворотки, можно вычислить примерное содержание белка. [c.222]

Ион-селективные электроды применяются для определения белков в биологических средах [562 — 566]. Анализ различных белков представляет собой очень важную научно-техническую проблему ею занимались многие ученые, и в результате был разработан ряд методов определения белков с различной степенью селективности [567 — 573]. [c.193]

Мы рассмотрели только те методы количественного определения белка, которые могут быть особенно полезны для наблюдения за ходом выделения и очистки. Известно немало других, менее универсальных, методов, применяющихся для решения других задач. К ним относится, например, определение концентрации белков в сыворотке крови по удельному весу последней — метод весьма ценный для клинических анализов.. Заслуживает особого упоминания и весьма чувствительный метод определения белка по поглощению ультрафиолетового света с Я = 200 220 ммк (область поглощения пептидными группами белка). Его распространение сдерживается пока крайней дефицитностью соответствующей аппаратуры. [c.34]

Из различных спектрофотометрических методов, которые могут быть использованы для определения количества белка, входящего в состав веществ биологического происхождения, наиболее подходящим является биуретовый метод [25]. Этот метод не очень чувствителен и, как показывает опыт, его применение связано с рядом ограничений. Белок обладает способностью осаждаться совместно с гидратом окиси меди. На этом основан классический метод определения белка [26], согласно которому раствор белка [c.315]

А. Методы определения белков [c.16]

Очевидно, что выбор того или иного метода зависит от той цели, с которой его применяют. Например, в процессе фракционирования или при определении специфической активности еще не полностью очищенного вещества весьма удовлетворительным может быть быстро осуществляемый метод анализа, обладающий умеренной точностью и воспроизводимостью. В то же время при исследовании свойств конечного продукта выделения необходимо применять метод, обладающий максимально возможной точностью определения. Кирк [59] опубликовал критический и хорошо составленный обзор большинства методов определения белка. [c.16]

L5. Спектрофотометрические методы. Спектрофотометрические методы определения белков имеют ряд преимуществ по сравнению с другими методами и могут быть рекомендованы во многих случаях. Они просты, быстры и не вызывают структурных разрушений в исследуемом материале. Один из наиболее ранних прочно утвердившийся метод Варбурга и Христиана [388] основан на определении соотношения величин поглощения при 280 и 260 нм и позволяет определять белок в присутствии нуклеиновых кислот. В нескольких методах, предложенных позднее, для измерений используются другие длины волн. [c.292]

Р-ция антигена с антителом использ. в диагностике мн. заболеваний и как наиб, чувствит. метод определения белков и нек-рых других в-в. [c.218]

Необходимые для постановки этой реакции количества антигена и антисыворотки зависят от чувствительности выбранного метода определения белка. Так, например, при использовании микрометода Кьельдаля в модификации Маркхема вполне достаточно, чтобы иммунная сыворотка содержала 75—125 мкг азота антител. При использовании биуретовой реакции требуется вдвое [c.126]

В основе чувствительного колориметрического метода определения белков в элюатах лежит биуретовая реакция, а также реакция с фенольным реактивом Фолина—Чокальто [77] в модификации Лоури [78]. Таким путем определяют белок в кон- [c.454]

Другим колориметрическим методом определения белков является метод Лоури и др. [49]. Хейвкес и др. [31] применили его [c.249]

В основу метода определения белка по Лоури положена реакция Фолина, открывающая в белке тирозин и триптофан. Окрашенный белковый комплекс получают в два этапа 1) реакция меди с белком в щелочной среде 2) восстановление фос-фомолибденово-фосфовольфрамового реагента белком, обработанным медью. [c.71]

Воробьева М. Т. О сокращении длительности определения муравьиной кислоты. Сб. тр. ЦНИЛХИ (Центр, н.-и. лесохим. ин-т), 1950, вып. 9, с. 188—191. 6889 Воробьева Н. Ф. Метод оценки масличности семян подсолнечника в процессе селекции. Соц. зерн. хоз-во (Саратов), 1941, № 1, с. 171—175. Библ. 4 назв. 6890 Воронин П. Ф. К сравнительной оценке методов определения белков и жиров в пищевых рационах. Гигиена и санитария, [c.265]

Большинство методов определения белка в моче, как качественных, так и количественных, основано на возможности свертывания белков с превращением их в нерастворимую в воде форму. Техника выполнения проб на белок (проба Геллера, проба кипячением с уксусной кислотой, реакция с сульфосалициловой кислотой и др.) подробно описывается в практических руководствах по биологической химии. [c.466]

Более точный (и соответственно более трудоемкий) метод определения белка основан на количественном определении белкового азота. Среднее содержание азота в разных белках составляет приблизительно 16%. Анализ включает перевод белкового азота в аммиак (путем кипячения с 1<онцентри-рованной серной кислотой в присутствии сульфата меди, сульфата ртути или другого катализатора), отгонку с паром образовавшегося аммиака из реакционной смеси и его количественное определение титрованием или колориметрированием при помощи реактива Несслера (щелочной раствор меркурииодида калия). [c.56]

Были предложены многочисленные аналитические методики для определения подобных органических соедине-ний и, в частности, методы определения белков [49, 167], некоторых аминокислот [27, 28, 75] и фактора витамина В [71, 101], а также метод серологической диагностики рака [54]. Более полные и подробные обзоры по каталитическим волнам водорода, а также по каталитическим волнам другого типа и их аналитическому применению даны Колтгофом и Лингайном [75], а также Майранов-ским [103]. [c.76]

Так, 100 лет тому назад агрохимик Буссенго дал такие работы по дыханию и ассимиляции, что к нему ездили учиться методике биологии (Тимирязев) тот же Буссенго впервые провел параллель между обменом азотистых веществ в растительном и животном организмах (аналогия между аспарагином и мочевиной). Не кто иной, как агрохимик Адольф Майер установил наличность большой кривой дыхания , агрохимик Э. Шульце дал методы выделения ряда азотистых веществ и изучил процессы распада этих веществ при прорастании агрохимик Толленс изучил превращения (и дал методы определения) углеводов, Годлевский "и Лясковский изучали превращения жиров при прорастании, да и все ходовые методы определения белков, углеводов и жиров родились в агрохимических лабораториях у нас в последнее время Шмуком и Смирновым даны такие работы по биохимии табака, что их книги становятся справочниками по методам, которыми пользуются представители общей биохимии. [c.390]

Е. В. Дододанова и Н. Н. Иванов, Быстрый метод определения белка по биуретовой реакции, Биохимия, 3, 723 (1938). [c.353]

Сиосвб и сущность метода определения белка в сыворотке крови. [c.295]

Ароматические аминокислоты — тирозин, фенилаланин и триптофан — обусловливают наличие максимумов в электронных спектрах поглощения белков в УФ-области (Я ах 260 - 280 нм), на чем основан спектрофотометрический метод определения белка в растворах и биологических жидкостях. Цистин — диаминодикарбоновая кислота, образующаяся при окислении цистеина [c.48]

Применение одной из количественных модификаций нингидринового метода (см. стр. 144) к общему гидролизату представляет собой чувствительный метод определения белка, более строго обоснованный, чем вышеописанные методики. В применении к гликопротеинам нингидриновый метод нуждается в существенных поправках на аммиак (образующийся при расщеплении амидных групп, сиаловых кислот и гексозаминов) и гексозамины, которые тоже реагируют. Гидролизаты разных белков не дают с нингидрином идентичных интенсивностей окраски на единицу веса белка отчасти за счет различного веса остатков (и образования окраски) различных аминокислот, а также, что более существенно, за счет различного содержания в них имипокислот, практически не дающих окрашивания при длине волны 570 ммк, при которой производятся измерения (см. стр. 149). [c.151]

У человека количество белков, выделяющихся с мочой в течение суток, колеблется от 30 до 750 мг. Величину 213—244 мг л можно считать наиболее достоверной [4]. Эта величина может быть несколько заниженной, так как белки мочи представляют собой соединения с низким мо,пекулярным весом и поэтому способны в значительных количествах проникать через диализа-ционные мембраны (см., например, [5—6]). Средний молекулярный вес 7-глобулинов мочи равен 11 ООО, в то время как молекулярный вес сывороточного у-глобулина составляет 150 ООО. Кроме того, белки мочи отличаются высоким содержанием углеводов — около 40% общего сухого веса белка [7], что является причиной их высокой растворимости в этаноле [5]. ГТХ составляет значительную часть от общего количества белков мочи. Он не обнаруживается с помощью обычных клинических методов определения белков в моче, так как не даст белого плотного осадка при нагревании с сульфосалициловой или уксусной кислотой. [c.151]

Кроме вариабельности в содержании непосредственно белков, что в той или иной степени отражается на содержании аминокислот, имеет большое значение видовая или сортовая вариабельность аминокислот одного и того же продукта. Кроме того, в отличие от метода определения белков метод определения аминокислот дает значительно большой вклад в общую вариабельность аминокислотного состава. Выше бьши подробно рассмотрены причины расхождений в аминокислотном анализе, в том числе проведение одного гидролиза вместо пяти, отсутствие анализа стандартных образцов продукта и внешнего стандарта и т. д. В результате в высокобелковых продуктах (мясо, рыба, птица, зерно и зернобобовые) при определении лизина, лейцина, изолейцина, треонина, валина, аргинина, глицина, пролина, серина, гистидина, аспарагиновой и глутаминовой кислот, фенилаланина, аланина, тирозина, общий коэффициент вариации (относительное среднеквадратичное отклонение) равен 10%, при определении метионина — 15 %, триптофана и цистина — 25% [12]. Для низкобелковых (овощи и фрукты) вариабельность значительно выше — 20, 25 и 30% соответственно [12]. Эти расчеты хорошо совпадают с прямыми экспериментальными данными по межлабораторному испытанию определения состава аминокислот ряда высокобелковых продуктов (казеин, белок яиц, соя, [c.287]

Сравнение поглои ения при 280 и 260 нм. Большинство белков имеет максимум поглощения при 280 им, что обусловле-1Ю содержанием в них остатков триптофана и тирозина. Нуклеиновые кислоты, присутствующие часто в виде примесей к белкам, также сильно поглощают при 280 нм, но максимум поглощения этих соединенир находится при 260 нм. Барбург и Христиан экспериментально определили коэффициенты экстинкции различных белков и нуклеиновых кислот при 280 и 260 нм и нашли отношение этих коэффициентов (фактор F табл. 8.3) предложен дифференциальный метод определения белка в интервале концентраций 50—500 мкг/мл. [c.300]

Этот метод определения белка был предложен Лоури с соавт. в 1951 г. и с тех пор широко используется в лабораторной практике. К преимуществам метода относятся его универсальность и точность, а к недостаткам — отрицательное влияние многих соединений, что может быть преодолено осаждением белка из раствора перед определением, медленное развитие цветной реакции, нестабильность некоторых реактивов, а также необратимая денатурация порции белка, пошедшей на одределение. Чувствительность метода от 5 до 100 мкг белка/мл. [c.141]

С ошибками, которые по опубликованным данным присущи трем обычно используемым методам определения белка биуре-товому методу, методу Лоури и методу Бредфорда. Для этих трех методов ошибки определений устанавливали, сравнивая опубликованные данные (Инструкция по определению белка фирмы Bio-Rad, с. 3—4) с количествами белков, определяемыми гравиметрически. В качестве стандартов для определения по Лоури и Бредфорду использовали бычий -у-глобулин, а для определения биуретовым методом — БСА. Несмотря на некоторые различия в определениях при двух длинах волн, диапазон ошибок (средний уровень отклонений) для определений по площади пиков при 205 нм укладывается в диапазон ошибок для трех стандартных колориметрических определений. Петерсон (Peterson, 1983) в своем обзоре указывает, что измерение по поглощению при 205 нм в два раза чувствительнее, чем модифицированный фенольный метод Фолина при определении белка по Лоури. [c.127]