Очистка и радиоактивное мечение РСВ

Метод ХТС оправдал себя также при анализе и очистке радиоактивно меченных липидов. Некоторые типичные примеры применения метода рассмотрены на стр. 72. [c.182]

В этом методе не требуется высокой химической и радиохимической чистоты меченых кислот, поскольку вместе с радиоактивной кислотой в раствор пробы намеренно добавляли значительные количества нерадиоактивных примесей. При очистке радиоактивные примеси удалялись вместе со своими нерадиоактивными аналогами. [c.162]

Применение радиоактивных меченых атомов в аналитической химии имеет два основных преимущества огромная чувствительность, позволяющая измерять количества веществ меньше микрограммов и качественно определять еще на несколько порядков меньшие количества, а также возможность анализа без тщательной очистки, часто без отделения определяемого вещества и даже без разрушения пробы. [c.295]

Выделение полимера и отделение его от реакционной смеси являются серьезной проблемой. Во многих экспериментах потеря незначительных количеств полимера или окклюдирование следов других компонентов вносит лишь небольшие поправки. Однако при определении концевых групп с помощью меченых атомов небольшие количества радиоактивного инициатора, передатчика цепи или аналогичного низкомолекулярного компонента могут существенно изменить интерпретацию результатов. Та же экспериментальная трудность, конечно, существовала во всех работах, связанных с определением концевых групп, но в случае применения радиоактивных меченых атомов эта трудность значительно возрастает вследствие большей чувствительности данного метода. Простой метод очистки может быть пригоден для одних систем и неприменим для других. С другой стороны, очистка в слишком жестких условиях может привести либо к потере низкомолекулярного полимера, либо к удалению химически связанных концевых] групп, например, путем гидролиза. [c.341]

Очистка радиоактивных органических со единений. Незагрязняющаяся система газо жидкостной хроматографии. (Очистка 0,001— 0,025 мл в-в, меченных Т.) [c.167]

Для оценки эффективности аффинной хроматографии су щественное значение имеет выход исследуемого белка на каждой стадии элюирования. В связи с этим все полученные фракции сохраняют до окончания эксперимента. Выход исследуемого белка может варьировать в широком диапазоне. Добавление белка-носителя приводит к увеличению выхода биологически активного материала, но может также повлиять на степень очистки, При вымывании лиганда с сорбента наблюдается уменьшение выхода сорбированного белка или кажущегося выхода выделяемого биологически активного материала. Степень отщепления лиганда оценивают по содержанию лиганда во фракциях, полученных при промывке сорбента до нанесения образца [8], или по отщеплению радиоактивной метки при использовании радиоактивно меченных лигандов. [c.186]

После того как зараженная клеточная культура подвергается дифференциальному центрифугированию или какой-либо другой процедуре фракционирования, необходимо идентифицировать фракции, содержащие нужный материал. При необходимости можно использовать методы, описанные в разд. 4.1 и 4.2, но они требуют довольно много времени альтернативные подходы состоят в том, что во фракциях градиента по поглощению в ультрафиолете идентифицируют пики РНК или белка. или же в материал, подвергаемый очистке, включают в качестве маркера радиоактивно меченный вирус. Затем в аликвотах из каждой фракции любым стандартным методом (например, с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика) можно определить радиоактивность. Если есть возможность получить радиоактивно меченный материал, данный метод очень удобен, поскольку он занимает мало времени, точен и прост в исполнении. [c.57]

Культивирование тогавирусов уже детально рассмотрено в одном из предыдущих разделов настоящей главы. Оптимальную систему для культивирования следует подбирать специально в каждом случае. В целом лучшей можно считать ту систему, в( которой вирус дает максимальный титр, хотя нужна иметь в виду, что очистка вируса из тканей зараженных животных, например экстрактов мозга, затруднена в связи с большим содержанием в препаратах клеточных компонентов кроме того, радиоактивное мечение вируса в организме животных, как правило, невозможно. В тех случаях, когда вирус хорошо размножается в культуре ткани, имеет смысл потратить некоторое время, чтобы оптимизировать его выход. Выбор же таких параметров, как чувствительная линия клеток, культуральная среда, множественность инфекции, температура инкубации и время сбора вируса, существенно влияет на выход. При опти- [c.95]

Очистка и радиоактивное мечение РСВ [c.150]

Иногда УА препарата выражают не в кюри или распадах- в минуту, а числом импульсов в минуту (имп./мин), которые регистрирует прибор. Нередко это число относят не к одному миллимолю, а к миллиграмму или микрограмму вещества (например, имп./мин/мг). Строго говоря, такое выражение для УА некорректно. Как будет видно из дальнейшего, число импульсов в минуту, регистрируемое счетчиком радиоактивности, может быть значительно меньше, чем число распадов в минуту. При этом соотношение между ними зависит от способа приготовления образца для счета, настройки прибора и ряда других факторов, не имеющих прямого отношения к собственно радиоактивности препарата. Тем не менее, такое выражение может оказаться удобным для сравнительных измерений, например для наблюдения за ходом очистки индивидуального, радиоактивно меченного белка, когда измеряемую радиоактивность (в имп./мин) относят к суммарному количеству белка, содержащегося в препарате на разных этапах его очистки. [c.165]

Прежде чем начать приготовление меченого соединения, необходимо выбрать радиоизотоп и способ синтеза меченого соединения. Принимают во внимание также требования к виду и местоположению атома-метки, период полураспада и вид излучения этого радиоизотопа, удельную активность исходного радиоактивного материала, ее предполагаемое уменьшение в ходе приготовления и применения меченого соединения, устойчивость меченого соединения, влияние радиационных эффектов, легкость очистки продуктов, степень трудности синтеза, сложность аппаратуры, безопасность выбранного метода и, не в последнюю очередь, экономичность метода. [c.660]

ЛОМ изучены значительно меньше, чем основные метаболические пути у животных не проводилось, в частности, выделения и очистки фермен тов биосинтеза. Показано, однако, что скармливание растениям меченного радиоактивностью ацетата приводит к специфическому распределению метки в терпенах. Это относится к большинству упоминаемых терпенов распределение метки в них соответствовало теоретически ожидаемому. В любом растении содержится обычно большое количество различных терпенов, которые концентрируются в специальных масляных железах или пропитанных смолой проводящих тканях. Внутри клеток терпены присутствуют в меньшем количестве, причем обычно в виде гликозидов терпеновых спиртов. Содержание некоторых терпенов поистине огромно. Так, в скипидаре концентрация а-пинена достигает 64%, можжевеловое масло на 65% состоит из а-терпинеола [80]. [c.568]

Необходимость в количественной обработке раствора пробы можно исключить, если для определения меченого производного применять метод обратного изотопного разбавления. Для этого после превращения анализируемого амина в замещенный сульфамид в раствор добавляют известное количество нерадиоактивного производного, много большее количества меченого производного, присутствующего в растворе. Для этого берут минимальное количество нерадиоактивного производного, достаточное для последующего проведения операций очистки. Затем, применяя ионообменные смолы [79] или экстракцию [81], из раствора удаляют избыток реагента, не обращая внимания на небольшие потери анализируемого соединения. После этого образовавшееся производное очищают путем перекристаллизации до получения постоянного значения удельной радиоактивности [81]. Однако более строгим критерием чистоты соединения в данном растворителе является совпадение значений удельной радиоактивности фильтрата и полученного продукта [83]. Хроматографического разделения в таком анализе не требуется, и удельные радиоактивности образовавшегося производного и радиореагента измеряют, используя стандартный метод. Содержание амииа в пробе в этом случае вычисляют по формуле [c.309]

В работе [43] изучены основы ректификационной очистки хлороформа и четыреххлористого углерода. В связи с трудностями аналитического определения малых концентраций примесных веш еств, контроль за компонентом, содержащимся в малой концентрации, осуществляли методом меченых атомов. В связи с этим были разработаны методы получения целого ряда хлорпроизводных углеводородов, меченых радиоактивным хлором. Введение радиоактивного хлора в молекулу для большинства веществ осуществлялось путем изотопного обмена органического с неорганическим хлоридом. [c.166]

При изучении биогенеза изофлавонов Гризбахом (16, 17] были успешно использованы слои силикагеля Г для очистки радиоактивно меченных флавоноидов. Растворителем служила смесь бензол — этанол (92 + 8). При аналогичных исследованиях Биллека [5] был использован метод хроматографического анализа (растворитель — бензол) кумарина, выделенного из пахучей смолки. [c.376]

Определение молекулярных масс при помощи меченых атомов было проведено в работе [65]. При использовании Д1еченых атомов необходимо учитывать ошибки в определении связанные с недостаточной очисткой радиоактивных соединений, различием [c.118]

Использование радиоизотопов в бумажной хроматографии позволило во многих отношениях расширить возможности этого метода. Особенно при количественных определениях радиометрические методы имеют ряд преимуществ благодаря их высокой чувствительности. Особая сложность в бумажной хроматографии заключается в том, чтобы сделать видимыми на бумаге пятна вещества. В большинстве случаев это осуществляется при помощи цветных реакций. Разделение и количественное определение многих веществ неосуществимо из-за отсутствия соответствующих цветных реакций. При радиометрических определениях цветные реакции не нужны. В тех случаях, когда неактивные вещества могут быть переведены в меченые соединения при помощи радиоактивных индикаторов, они определяются и идентифицируются по излучению. В тех случаях, когда неактивные вещества (элементы), разделенные методом бумажной хроматографии, имеют большое эффективное сечение захвата нейтронов, хроматограммы можно облучать нейтронами в реакторе и измерять радиометрически. За последние годы удалось методом бумажной хроматографии разделить ряд радиоизотопов без носителя. Таким образом, бумажная хроматография стала одним из основных методов получения и разделения радиоактивных изотопов без носителя [8, 9]. Для бумажнохроматографического разделения в среднем используют 60—80 у вещества. Без носителя 1 милликюри Н23 Ю4 соответствует 6,8-мг, 1 милликюри Нз Р Ю4 — 1 жг, т. е. общий вес веществ, соответствующих активности 1 мкюри серной кислоты и 1 мкюри фосфорной кислоты, составляет 78у, и они могут быть разделены методом бумажной хроматографии. Даже при менее благоприятных условиях можно производить разделение или очистку радиоактивных веществ. [c.265]

Спрашивается какое вещество фаг впрыскивает внутрь клетки Этот вопрос был поставлен и решен еще в 1952 г. Херши и Чейз с помощью радиоактивной метки. Бактериофаг Tg выращивался меченным по нуклеиновой кислоте (40% веса) и по белку (60% веса) путем заражения бактерий Е. oli, выращенных на радиоактивной среде. После очистки радиоактивный фаг использовался для заражения нерадиоактивных клеток Е. соИ. После отделения клеток от фага измерялось по радиоактивности количество перешедшей ДНК и белка. Основной факт, найденный в этой работе, — переход ДНК из фага в клетку практически без белка (0,5% примеси белка к ДНК может являться ошибкой опыта). В дальнейшем меченый белок, если и проникает в клетку, то во всяком случае не участвует в построении новых фаговых частиц. В опытах Херши и Чейз удалось констатировать инъекцию 70% меченой ДНК всех использованных фагов.Потери (30%) в подобных экспериментах вполне естественны нужно учитывать, что среди частиц фага имеется некоторое количество нежизнеспособных и, кроме того, фаги могут прикрепляться не к клеткам, а к обрывкам клеток, погибших в результате лизиса, после чего они впрыскивают свою ДНК просто в среду, и она теряется. [c.364]

Первый вопрос решался с помощью радиоактивно меченных аминокислот. Существенно то, что нам известно концевое звено цепи гемоглобина, содержащее КН2-группу, — это валин. Опыт ставился следующим образом препарат отмытых рибосом (большая часть, свьппе 80%, имеет константу седиментации 70 э) подвергался инкубации на среде с набором аминокислот и меченным С валином. Синтез шел сравнительно короткое время, что доказывает кинетический характер эксперимента. После извлечения синтезированного рибосомами белка у последнего определялась общая радиоактивность и активность N-кoнцeвoй аминокислоты путем реакции концевой аминогруппы с динитро-фторбензолом или фенилизотиоцианатом, отщепления меченой концевой группы и ее хроматографической очистки. Молекула гемоглобина (кролика) состоит из 670 аминокислотных звеньев, из которых 46 являются валинами, в том числе 4 валина — КНа-концевой группы (в молекуле гемоглобина содержится [c.453]

Данная методика позволяет получить частично очищенные препараты радиоактивно меченного РСВ. Для последующей очистки предложены более сложные методы (см. [10]) инфекционность, которая в обычных условиях очень чувствительна к центрифугированию, можно стабилизировать добавлением MgS04 до концентрации 1 М (см. разд. 2.5.4). [c.151]

Поскольку обычно работа ведется с большими объемами жидкости (более 1 л), для ультрацентрифугирования необходимо иметь роторы большой емкости. Существуют роторы емкостью 1—2 л, в которых можно осадить вирус гриппа при 50 ООО g в течение 90 мин при работе с небольшими объемами радиоактивно меченного вируса время центрифугирования можно сократить до 30 мин и проводить осаждение в роторе меньшей емкости при 200 000 g. Супернатант по возможности полностью удаляют и ресуспендируют осадок вируса в малом объеме буфера NTE с помощью шприца и иглы с широким просветом (тип 19G). Для разрушения вирусных агрегатов полученную супензию пропускают несколько раз через тонкую иглу (25G) или обрабатывают ультразвуком 1 мин. Объем NTE, в котором ресуспендируют осадок вируса, зависит от величины осадка и от того, какой объем можно использовать на последующих стадиях очистки. Обычно осадок из 1—2 л содержащей вирус жидкости ресуспендируют в 2—5 мл NTE. [c.183]

Этот быстрый одностадийный метод используют при работе с малыми объемами содержащей вирус жидкости, например в случае радиоактивно меченного вируса. Его можно использовать и для предварительной очистки вируса, сконцентриро-ваванного из большого объема жидкости. Содержащую вирус жидкость, например культуральную среду, наносят на ступенчатый градиент, состоящий из 5 мл 15%-ного раствора сахарозы в NTE (верхний слой) и 5 мл 60%-ного раствора сахарозы (нижний слой, или подушка). Градиент центрифугируют 30 мин [c.184]

Закрепление антигенов на твердой фазе носителя упоминалось выше при рассмотрении иммуносорбентов, используемых для очистки антител. Такие сорбенты можно использовать и для количественных оценок, например, для определения концентрации специфических антител в растворе, где их содержание еще слишком мало, чтобы его можно было выявить обычными прие-м ми титрования, описанными в части II. Такая задача возникает, например, в ходе отбора ( сканирования ) гибридбм, синтезирующих нужные антитела. Находящиеся в недостатке антитела из раствора полностью переходят на иммуносорбент, где их легко обнаружить с помощью радиоактивно меченного белка А. Если последний взять в избытке и дать ему надежно прореагиро- [c.287]

Ж. Радиоактивно меченные фрагменты ДНК можно использовать пр выявлении сайт-специфических ДНК-связывающих белков мето дом торможения в геле, при очистке белков методом аффиннс хроматографии ДНК и при отборе бактерий, экспрессирующв определенный белок. [c.128]

В связи с тем, что в радиохимических лабораториях проводятся исследования с большим числом различных радиоактивных изотопов (меченых атомов), жидкие отходы могут содержать самые. разнообразные радиоактивные загрязнения. В качестве добавок к жидким отходам, вызывающих выпадение осадков, используют и другие реагенты тринатрийфосфат, сульфиды, двуокись марганца [33], ферроцианид калия [122], ферроцианид никеля пли кобальта [123]. Имеются сообщения о применении в качестве добавки двуокиси титана [124]. Этим методом при определенных значеггия.х pH могут быть из-илечены 8г (99,9%), РЗЭ (99,9%), 2г, ЫЬ (99,8%), но для Сз и Ки коэффициенты очистки низкие (28% ). Выбор необходимой добавки (обычно количества этих ве- [c.78]

Пиридин и меченую СН СООН удаляют путем экстракции эфирного раствора продуктов реакции сначала разбавленной соляной кислотой, а затем разбавленным NaOH. Если требуется определить полное содержание гидроксильных групп в пробе, то этот способ экстракции можно применять для очистки продукта ацетилирования с целью получить постоянное значение удельной радиоактивности при этом не должно быть потерь меченых и немеченых компонентов первоначальной смеси. Механические потерн допустимы, если они не изменяют относительного состава продукта ацетилирования. Необходимость выделения части полного продукта ацетилирования отличает данный метод определения полного содержания гидроксильных групп от метода определения числа ацетильных групп, в котором требуется очистка лишь одного производного. Содержание (Е) ацетильной группы в полном продукте количественного ацетилирования пробы дается формулой [c.76]

Влияние содержания дивинилбензола в катионите. Было проведено сравнение наших данных по получению чистого иодида натрия на двух образцах катионита КУ-2 КУ-2 X Ю и КУ-2 X 20. Все опыты проводили с 2%-ным раствором иодида натрия, меченного радиоактивным рубидием (НЬ ), на натриевой форме катионита. Результаты опытов, контролируемых по выходу радиоактивного рубидия, приведены на рис. 2. Из этих опытов вытекает, что на катионите КУ-2 X 10 можно получить-6 г иодида атрия, примесь рубидия в котором понижена на два порядка. При пропускании исходного раствора иодида через колонку с катионитом КУ-2Х20 достигнута очистка по рубидию в 500 раз и получено 6 г чистого иодида натрия. [c.121]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология