Бумага для хроматографии и электрофореза

Ввиду того, что различия в растворимостях полипептидов очень невелики, для выделения индивидуальных пептидов и.з смесей требуются специальные методы. К ним относятся фракционный диализ, распределительная хроматография (например, на колонке из бумажного порошка или листе бумаги), адсорбционная хроматография, ионнообменная хроматография, электрофорез и противоточное распределение по Крэйгу (т. е. распределение между двумя ограниченно смешивающимися жидкостями). Для характеристики выделенных пептидов и доказательства их однородности применяют противоточное распределение, количественный анализ аминокислотного состава и определение концевых групп полипептидной цепи. [c.383]

Электрофоретические хроматограммы на бумаге получают путем сочетания распределительной хроматографии на бумаге с электрофорезом при проведении их одновременно или раздельно. [c.284]

Получение электрофоретических хроматограмм на бумаге. Хорошие результаты получают, применяя одновременно распределительную хроматографию на бумаге и электрофорез. Разделение веществ обусловливается, с [c.86]

Полученные гидролизаты анализируют различными методами гель-хроматографией, ионообменной хроматографией, электрофорезом и хроматографией на бумаге и в тонком слое, электрофорезом в полиакриламидном геле, методом пептидных карт на бумаге или в тонком слое (в одном направлении пептиды подвергаются электрофорезу, в другом — хроматографии) и др. При этом пептиды, содержащие остат ки аргинина, триптофана и гистидина, могут быть открыты с помощью специфических цветных реакций (с. 129). Выбор метода диктуется величиной (молекулярной массой) и характером пептидов гидролизата. [c.139]

Результаты, сходные с хроматографией на бумаге, при разделении моносахаридов дает метод электрофореза на бумаге . Хотя проведение электрофореза по сравнению с хроматографией требует более сложного -оборудования, разделение веществ с помощью электрофореза происходит быстрее. Известно много случаев успешного применения электрофореза для исследования смесей, которые с трудом поддаются разделению путем хроматографии на бумаге. Поэтому электрофорез является ценным методом анализа моносахаридов, дополняющим метод хроматографии на бумаге . [c.411]

Для разделения пуриновых и пиримидиновых оснований, нуклеозидов и нуклеотидов в лабораторной практике используют все виды хроматографии хроматографию на бумаге (включая электрофорез на бумаге и фингерпринт ), тонкослойную хроматографию [16], все типы колоночной хроматографии (адсорбционную, распределительную, ионообменную и гель-проникающую). Считают, что при разделении методом тонкослойной хроматографии оптимальное количество нуклеотидов составляет 0,2—30 мкг методом хроматографии на бумаге 10—200 мгк методом электрофореза на бумаге 100—500 мкг. На колонке можно делить нуклеотиды в количестве от 50 мкг до нескольких сотен миллиграммов. Конечно, в отдельных случаях аналитического или препаративного разделения эти рамки можно существенно раздвинуть. [c.37]

Хорошие результаты получают при разделении сложной смеси веществ путем сочетания распределительной хроматографии на бумаге с электрофорезом при проведении их одновременно или раздельно. В этом случае, так же как и в двумерной хроматограмме, разделение веществ происходит на бумаге и осуществляется с одной стороны вследствие неодинакового распределения компонентов между двумя несмешивающимися жидкостями, с другой—различного движения компонентов смеси в электрическом поле . [c.119]

Анализ. Для разделения различных П. применяют ионообменную и гелевую хроматографию, электрофорез в жидкой среде или на бумаге, иммуноэлектрофорез в агаровом или полиакриламидном геле, а также фракционное осаждение, экстракцию и противоточное распределение. [c.15]

В книгу внесены следующие крупные изменения 1) сильно расширен отдел определения витаминов, 2) добавлено определение некоторых гормонов, 3) добавлено определение ряда ферментов, 4) совершенно переработана глава об определении белков сыворотки, 5) сильно расширена глава об определении пигментов и желчных кислот, 6) добавлено определение связанных углеводов крови, 7) добавлено описание хроматографии на бумаге и электрофореза на бумаге, 8) дано описание работы с некоторыми приборами (КОЛ-1, ФЭК, СФ-4, ЭФЗ и т. п.). Многие методики заменены другими — менее трудоемкими или более безопасными. Ввиду невозможности увеличения объема книги это сделано за счет более трудоемких методик, постепенно выходящих из употребления. [c.3]

Фнг. 23. Т-образный лист бумаги для электрофореза с последующей хроматографией. [c.52]

Вагман и Вайнштейн [10] опубликовали справочник Хроматография антибиотиков , содержащий данные по разделению методами хроматографии на бумаге, ТСХ, электрофореза, газо- [c.532]

Комбинирование метода распределительной хроматографии на бумаге и электрофореза позволяет разделять щелочные, щелочноземельные металлы и анионы С1 , Вг , J , NS и POt 11262]. [c.77]

Так перегоняют образцы сиропообразного вещества весом 50 мг и менее, что достаточно для получения некоторой информации. После отделения небольших проб для определения элементарного состава и снятия инфракрасного спектра на образце весом 15—20 мг можно определить показатель преломления. Этот же образец повторно используют для изучения вещества методом хроматографии на бумаге и электрофореза. На оставшемся веществе с помощью поляриметра с малой трубкой измеряют оптическое вращение. [c.13]

В индивидуальности осаждаемых фракций убеждаются при помощи хроматографии на бумаге или электрофореза. Многие белки после очистки удается получить в кристаллическом состоянии, если медленно испарять растворитель (наиример, упарить разбавленный водный раствор соли). Этими методами современному исследователю удается получить белки столь же чистые и индивидуальные, как и все другие органические соединения, с которыми имеет дело исследователь. [c.659]

Для разделения смесей нуклеозидов в настоящее время с успехом применяется хроматография на ионообменных смолах на кремневой кислоте газо-жидкостная хроматография электрофорез и противоточное распределение, а идентификация нуклеозидов достигается с помощью хроматографии на бумаге и ультрафиолетовой спектрофото-метрии [c.339]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КЕТОСАХАРОВ МЕТОДАМИ ХРОМАТОГРАФИИ НА БУМАГЕ И ЭЛЕКТРОФОРЕЗА НА БУМАГЕ [c.125]

Процедура состояла в следующем конец бумаги, ближайший к разделяемым пептидам, помещали в смесь органических растворителей и воды, налитую на дно герметично закрывающейся стеклянной банки. При этом растворитель поднимался вверх по бумаге. В такой ситуации каждый пептид мог либо мигрировать с растворителем (неполярная среда), либо оставаться на обводненной целлюлозе бумаги (высокополярная среда). Такой метод разделения называется распределительной хроматографией. Пептид с наиболее выраженными неполярными свойствами будет растворяться в растворителе и, следовательно, подниматься вместе с фронтом растворителя вверх по бумаге в то же время самый полярный из пептидов останется на бумаге внизу. Рассматриваемые методы-хроматография на бумаге и электрофорез-дополняют друг друга, поскольку они разделяют пептиды на основе независимых свойств первый-на основе различий в полярности, второй-на основе различий в общем заряде. Вся последовательность проведения анализа - избирательное расщепление белка на небольшие пептиды с их последующим разделением в двух направлениях-называется методом пептидных карт (отпечатков пальцев). [c.93]

При электрофорезе с последующим хроматографированием на бумагу, пропитанную раствором электролита, наносят каплю анализируемого раствора и проводят электрофорез, подключая концы листа бумаги через электроды к источнику постоянного тока. После окончания электрофореза бумагу вынимают из прибора, сушат и переносят в камеру для хроматографирования по способу восходящей или нисходящей хроматографии. После окончания хроматографирования бумагу проявляют и проводят качественные и количественные определения. Метод раздельного электрофореза и хроматографирования позволяет проводить эти две операции при различных значениях pH, что улучшает возможности разделения. [c.220]

Иногда в литературе этот метод называют электрофорезом или ионофорезом на бумаге (электрофорез — передвижение частиц в электрическом поле). Однако метод имеет сходство не только с электрофорезом, но и с хроматографией на бумаге. Поэтому предложено называть данный метод разделения веществ электрохроматографией на бумаге. [c.348]

Хроматография — колоночная, тонкослойная, бумажная. Электрофорез на бумаге. Г ель-фильтрация [c.230]

Метод электрофореза на носителе во многом подобен методу хроматографии. Камера для электрофореза состоит из трех частей, двух электродных сосудов и расположенной выше подставки для носителя, например бумаги. Камеры должны быть плотно закрыты для предотвращения испарения растворителя. Носитель укладывают горизонтально, уровень растворителей в обеих электродных камерах должен быть одинаковым. Электроды, платиновый или графитовый, встроены в диафрагму. Вещество наносят на носитель в виде точек или полос. Место нанесения пробы зависит от предполагаемого направления движения. При движении разделяемых, веществ к аноду пробу наносят на катодную сторону, и наоборот. Для количественной и качественной оценки процесса разделения (проявление вещества и т. д.) применяют методы, используемые в бумажной хроматографии. [c.387]

При одновременном проведении хроматографии и электрофореза [27, 28] бумажные листы пропитывают электролитом и закрепляют между разноименными электродами. Анализируемую смесь наносят на бумагу, электроды подключают к источнику постоянного тока и одновременно на бумагу подают подвижный растворитель в направлении, перпендикулярном направлению силовых линий электрического поля. Однако технические трудности в выполнении этого метода ограничивают его применение. [c.86]

При растворении Р4О10, в воде наряду с ортофосфорной кислотой образуется смесь различных конденсированных фосфорных кислот. Зти кислоты и их соли, называемые конденсированными фосфатами, можно обнаружить и разделить методами хроматографии на бумаге и электрофореза на бумаге (разд. 38.3.6). [c.549]

Применеиие субстехиометрич. выделения (СВ) позволяет избежать определения массы выделенного соед., проводить определение только по измерению активности и снизить предел обнаружения до 10" -10 %, СВ-прием количеств, выделения части определяемого компонента, меченного радионуклидом, путем переведения (обычно на 50-70%) в др. хим. форму добавлением недостаточных, по сравнению со стехиометрией (т.е. субстехиометрических), кол-в реагента. При практич. осуществлении к стандартному и анализируемому р-рам, в к-рые было введено одииаговое кол-во радионуклида определяемого компонента, добавляют реагент в равных субстехиометрич. кол-вах. Реагент должен полностью расходоваться на образование соед. с определяемым компонентом, а продукт р-ции легго отделяться от исходного в-ва. Состав соед. должен быть постоянным. Чаще всего продукты р-цяи выделяют экстракцией, ионообменной хроматографией, электрофорезом на бумаге и измеряют их активности (стандартный р-р) и А, (анализируемый р-р). Значения т, рассчитывают по ф-ле т, = m AJA - 1). Определяемое соед. и продукт его взаимод, с реагентом могут находиться в разных или в одной и той же фазе. В последнем случас необходимы дополнит, меры для их разделения, [c.195]

Для анализа фракций элюата можно использовать любые достаточно чувствительные аналитические методы, пригодные для серийной работы. В основном с этой целью в настоящее время используют колориметрию в видимой и ультрафиолетовой областях, измерение радиоактивности, хроматографию на бумаге или электрофорез, тонкослойную хроматографию и биологические испытания. Одним из наиболее быстрых способов анализа фракций является отбор аликвотов (5—20 мкл), которые наносят на бумагу и затем обнаруживают соответствующим реактивом (см., например, [85]). [c.563]

Фнг. 62. Идентификация ДНС-амннокислот хроматографией на бумаге. А. Электрофорез при pH 4, 38. Б, В, Г. Электрофорез при pH 1,9. [c.276]

В современном химическом анализе значительное место занимают методы, которые часто очень простым способом решают проблему разделения и определения компонентов в сложных смесях. Из этих методов наибольшее распространение имеют все виды хроматографических методов адсорбционная, распределительная, ионообменная хроматография, хроматография на бумаге и электрофорез на бумаге. Природа сил, которые действуют в отдельных хроматографических разделениях, различна, но общим для них является миграция анализируемых веществ в систему двух и более фаз. При определении некоторых веществ, близких по химическим свойствам, например ряда неорганических катионов, количественное разделение которых одной лишь хроматографической техникой часто затруднительно, выгодно объединить два хроматографических способа или использовать в хроматографии еще некоторые характерные свойства отделяемых веществ. При определении катионов, нанример, выгодно сначала получить их комплексные соединения с различными комплексообразующими реагентами, а эти комплексы потом уже можно хроматографически разделить. [c.245]

Большую помощь в работе по изучению продуктов расщепления белка и их последующих превращений в организме оказывают современные методы физико-химического анализа метод п р о -тивоточного распределения в системе двух нес-мешивающихся растворителей, метод адсорбционной хроматографии, метод распределительной хроматографии на бумаге, метод электрофореза на бумаге и другие. Последние два метода, позволяющие работать с очень малыми количествами исследуемого вещества, получают все более широкое применение в клинических лабораториях. [c.247]

В пробе определяют наличие епрореагировавшей Г-соли. Для этого к 2 г (примерно) реакционной массы прибавляют 10 мл воды, 2—3 мл концентрированной соляной кислоты и 10 мл 0,1 н. раствора л-диазотолуола (приготовление см. стр. 331). Разделяют красители нисходящей хроматографией на бумаге или электрофорезом с 2—3-цроцентным раствором аммиака. На хроматограмме четко видны зоны, соответствующие [c.156]

Парис и Теалет [4] разделили 22 антибиотика на 7 групп, сочетая хроматографию на бумаге с электрофорезом. Шмитт и Матис [5] разделили 42 антибиотика на 4 группы на силикагеле G, элюируя пробы смесями /) хлороформ—метанол—уксусная кислота (45 4 1), 2) хлороформ—метанол—вода (80 20 2,5), 3) бутанол—уксусная кислота—вода (2 1 1) и 4) вода—лимоннокислый натрий—лимонная кислота (100 20 5). Со смесью III разделение проводили на силикагеле G, забуференном до pH 3 фосфатным буфером. Антибиотики близкого химического строения обычно попадают в одну хроматографическую группу. Например, макролиды группы II не перемешаются растворителем /, тетрациклины группы III не перемешаются растворителями 1 к 2, а антибиотики типа стрептомицина не перемещаются растворителями 1, 2 или 3, но легко перемещаются растворителем 4. Группа I антибиотиков перемещается растворителями /, 2 и 3 и в некоторых случаях Вейланд и Вейсс [6] разработали систематическую методику идентификации антибиотиков в чувствительных дисках, которая предусматривает химический и спектрофотометрический анализ, ТСХ и хроматографию на бумаге 28 антибиотиков. [c.532]

Сочетание хроматографии на бумаге с электрофорезом, т. е. с движением молекул вещества в поле постоянного тока, позволяет осуще-ств.1ять разделение даже очень близких веществ гораздо быстрее (за 1—2 ч), чем при помощи одной лишь бумажной хроматографии. [c.293]

Название электрохроматография было предложено для случая разделения, при котором вещества, несущие электрический заряд, переносятся по колонке или листу бумаги не током растворителя, а действием электрического поля. Частицы будут разделяться в соответствии с их адсорбционной способностью и подвижностью в электрическом поле. Метод, в котором в качестве пористого носителя используется буашга, называется электрофорезом (ионофорезом) па бумаге. Метод электрофореза на бумаге уже не относится к обычным методам хроматографии на бумаге. Это объясняется тем, что основным фактором, обусловливающим разделение при электрофорезе на бумаге, является различие в подвижности частиц в электрическом поле. [c.40]

Методы расп епления дисульфидных связей рассматриваются в разд. L5.1 и 2.2. Обп сприняты методы окисления надмуравьиной кислотой [41] и восстановления с последующим алкилированием [48]. Образующиеся полуцистинпептиды выделяют с помощью обычных методов химии белка, включающих гель-фильтрацию, хроматографию, электрофорез на бумаге, высокоэффективную хроматографию и др. [c.174]

Пример 10-H. Определение количества димеров пиримидина в ДНК после облучения ультрафиолетовым светом. При изучении механизмов восстановления облученной ДНК in vivo почти всегда бывает необходимо определять количество димеров пиримидина, являющихся основным продуктом ультрафиолетового облучения ДНК. Это можно осуществить с помощью хроматографии на бумаге или электрофореза в том случае, когда внутриклеточная ДНК может быть помечена Н до высокой удельной активности. Однако при работе с клетками животных или растений это не всегда возможно. Более того, определение очень малого числа димеров обычными методами, например 1 на 10 пар оснований, затруднено, однако радиоиммунологический анализ дает возможность определять такие количества (рис. 10-15). [c.271]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология