Фермент каталитическая константа

В таблице 7 приведена рН-зависимость каталитической константы скорости гидролиза беизилового эфира N-бензилокси-карбонил-Ь-лизина, катализируемого папаином [6]. Определить рК ионогенной группы фермент-субстратного комплекса, контролирующей скорость реакции. [c.229]

Полагая, по своей обычной методике, что гидролитический коэффициент ко для расщепления субстрата, связанного с ферментом продуктивно (т. е. с участием каталитического центра), не зависит от степени полимеризации субстрата и степени заполнения сайтов активного центра, Хироми принял, что величина соответствует плато, достигаемому каталитическими константами скоростей гидролиза при последовательном возрастании степени полимеризации субстрата (/го=Ь10 мин ) [8]. Далее, используя выражения (13) и (19) и численное значение константы скорости второго порядка гидролиза мальтозы, продуктивное связывание которой должно происходить с участием сайтов 6 и 7, прилегающих с двух сторон к каталитическому участку, Хироми рассчитал суммарное сродство этих сайтов, равное —3,1 ккал/моль. [c.52]

Для установления роли данных ионогенных групп лизоцима в катализе и (или) в поддержании каталитически активной конформации активного центра в работе [64] была изучена рН-зави-симость инактивации лизоцима нод действием ультразвука. Как видно из рис. 22, группа с рК 5,0, контролирующая каталитическую активност лизоцима, не проявляется в рН-зависимости константы скорости инактивации фермента под действием ультразвука. Следовательно, протонирование этой группы не приводит к какому-либо существенному конформационному изменению в активном центре лизоцима, хотя и делает фермент каталитически неактивным. С другой стороны, ионогенные группы фермента с рК<2 и рК в области 9—11 контролируют конформационную [c.199]

Так, если для А1а-51-фермента константа связывания (А, ) с АТР уменьшилась примерно в два раза без значительного изменения каталитической константы ( ( а(), то для Pro-51-фермента - более чем в 100 раз. При этом каталити- [c.172]

Каталитическая константа. Выражается числом молей продукта, образовавшегося за 1 мин, на 1 моль очищенного фермента. Хотя возможиость определения каталитической константы непосредственно следует из уравнения (VI.16), однако очевидно, что для определения этой величины необходимо, во-первых, иметь чистый фермент и, во-вторых, знать его молекулярный вес. Если молекулярный вес фермента неизвестен, то каталитическую константу часто рассчитывают на 100 ООО г фермента. [c.169]

Е, Е,, Е — исходный фермент и его промежуточные соединения 1 и 2, соответственно, АН — аскорбиновая кислота, Е, — АН , Е — АН-, АН- — Е — АН , Е — (п + 2)АН2 — комплексы одной, двух и (п + 2) молекул аскорбиновой кислоты с промежуточными соединениями Е, и Е , к,, Ц, кз и к — каталитические константы. [c.57]

Е, Е , Е — нативная и окисленные формы фермента 8, — ферроцианид 8 — аскорбиновая кислота Е, — 8,, Е, — 8 , Е — 8,, Е, — 28 — комплексы окисленных форм пероксидазы с субстратами, Е, - 8 - 8,, Е, - 8, - 28 — комплексы окисленных форм фермента с ферроцианидом и одной или двумя молекулами аскорбиновой кислоты К,, К , К,, — константы диссоциации соответствующих комплексов окисленных форм ферментов с субстратами (ферроцианидом и аскорбиновой кислотой) к,, каталитические константы. [c.61]

Молярная активность (или число оборотов, или каталитическая константа) равна числу единиц активности фермента, деленному на количество фермента, выраженное в микромолях (мкмоль/мин/мкмоль). Молярная активность указывает, сколько молекул [c.42]

Проанализируем численные значения каталитических констант скоростей и констант Михаэлиса различных ферментов, с тем чтобы представить средние скорости реакций в биохимических системах. Был проведен статистический анализ констант и ферментных систем, для которых измерены к настоящему времени значения к и найдены плотности распределения ферментов по значениям каталитических констант. С этой целью ферменты были разбиты на группы приблизительно с одинаковыми (в пределах одного порядка) константами процесса, определялось число ферментов в фуппе и полученные значения нормировались к общему числу ферментов в выборке. [c.99]

Зависимость скоростей реакций, катализируемых химотрипсином, от pH обнаруживает оптимум при pH 8. [42]. Механизм зависимости химотрипсино-. вого катализа от pH заключается в следующем [6—9, 13, 43, 44]. Эффективные константы скоростей химических стадий ферментативной реакции 2 и сохраняют постоянное значение при щелочных и нейтральных значениях pH, но при дальнейшем понижении pH они уменьшаются. Сигмоидальный характер этих зависимостей указывает на участие в катализе ионогенной группы фермента с рЛГа7. Многие годы полагали, что этой группой является имидазольный фрагмент His-57, однако позднее она была идентифицирована как карбоксил Asp-102 [45]. Ее протонизация разрушает водородные связи в составном нуклеофиле (рис. 32), что приводит к потере ферментом каталитической способности. [c.132]

Гидролиз метилового эфира N-aцeтил-L-фeнилaлaнинa, катализируемый а-химотрипсином, изучали методом остановленной струи, используя методику вытеснения профлавина из комплекса его с ферментом [6]. Было найдено, что уменьшение оптической плотности раствора при длине волны 465 нм (соответствующей максимуму поглощения комплекса фермент-профлавин) описывается кинетикой первого порядка (табл. 12). Из независимых экспериментов нашли, что константа диссоциации комплекса фермент-профлавин при условиях опыта равна 1 - Ю- М. Значение каталитической константы, найденное в стационарном режиме проведения реакции ферментативного гидролиза, равно 0,03 сек-. Найти значения индивидуальных констант 2, кз и /Сз (схема 9.7) при условии к2 >кз для изучаемой реакции. [c.197]

Известно, что кинетику ферментативных реакций можно изучать с помощью регистрации либо начальных участков кинетической кривой, либо достаточно протяженных ее участков (практически до полного завершения реакции) [21]. В первом случае изучение преврапгений полимеров не отличается принципиально от изучения реакций любых других (простых) субстратов, поскольку в начальный период реакции ферментативной атаке могут подвергаться различные по реакционной способности участки полимера в зависимости от их относительного содержания и относительного сродства фермента к ним. Поэтому соответствующие эффективные кинетические параметры ферментативной реакции (константы Михаэлиса, каталитические константы) являются некоторыми средними величинами и не могут быть использованы для описания и теоретического предсказания временного хода ферментативного процесса на достаточно больших глубинах превращения полимеррюго субстрата. [c.29]

Поскольку при изучепи-и кинетики ферментативного гидролиза экспериментально определяемыми величинами обычно являются константа Михаэлиса Кт, каталитическая константа кат и валовая константа скорости второго порядка йкат Кт, следует выяснить, как эти величины связаны с микроскопическивди —константами ассоциации фермента и субстрата. Ясно, что константа Михаэлиса (точнее, ее обратная величина, поскольку константа Михаэлиса традиционно записывается как константа диссоциации) в простом случае (и в предположении аддитивности) представляет собой просто сумму констант ассоциации я-мера с активным центром и его отдельными участками (сайтами) в / позициях [c.41]

Сопоставляя па данном этапе рассмотрения концепции Хироми и Тома, мы видим, что отнесение константы Михаэлиса к соответствующим микроскопическим параметрам в рамках обеих концепций идентично (сравните выражения 14 и 15, с одной стороны, и 43 — с другой). Однако смысл каталитической константы в обеих концепциях различается (см. выражения 17 и 44). Если по гипотезе Хироми каталитическая копстапта пропорциональна гидролитическому коэффициенту ко, который является строго характеристическим для данного фермента, и определяется исключительно соотношением констант ассоциации субстрата в продуктивном и непродуктивном фермент-субстратном комплексах (17), то по гипотезе Тома величина гидролитического коэффициента зависит от способа связывания фермента с субстратом и от степени полимеризации последнего. На наш взгляд, это придает настолько больн1ую гибкость расчетам на основании концепции Тома, в особенности с помощью машинного анализа, что может в отдельных случаях делать бессмысленными определения показателей сродства индивидуальных сайтов активного центра. фермента, поскольку все наблюдаемые кинетические эффекты могут быть объяснены в рамках вариации гидролитического коэффициента при изменении структуры олигомерного субстрата и способов его связывания с ферментом. То же можно отнести и к определению константы скорости второго порядка ферментативного расщепления субстрата (см. выражения 18 и 45). [c.65]

Первая концепция внутренне противоречива. Дело в том, что непродуктивное связывание приводит к параллельному уменьшению констан1Ы Михаэлиса (увеличению константы ассоциации субстрата с ферментом) и каталитической константы ферментативной реакции, но их отношение должно остаться постоянным. Однако из табл. 38 видно, что отношение Акат/ т(каш) при переходе от длинных к коротким олигосахаридам не постоянно, а резко уменьшается (в несколько десятков тысяч раз при переходе от гексамера к тримеру) и не может быть объяснено возрастанием непродуктивного связывания. [c.196]

Число ах-стивных центров Число оборотов равно каталитической константе, если молекула фермента состоит только из одной полипептидной цепи и если каждая ферментная молекула реагирует в данный момент времени только с одной молекулой субстрата. В действительности, однако, молекулы многих ферментов состоят из нескольких субъединиц и содержат более одного каталитически независимого активного центра. Числа оборотов различных ферментов могут варьировать в пределах от 10 до 10 . [c.169]

Интересно проанализировать численные значения каталитических констант скоростей и констант Михаэлиса различных ферментов с тем, чтобы представить средние скорости реакций в биохиминеских системах. [c.34]

Был проведен статистический анализ констант и Кт ферментных систем, для которых измерены к настоящему времени значения й ат (Varfolomeev, Savin, Berezin, 1979) и найдены плотности распределения ферментов по значениям каталитических констант. С этой целью ферменты были разбиты на группы приблизительно с одинаковыми (в пределах одного порядка) кон- [c.34]

Сокращения КПА — карбоксипептидаза А, КПВ — карбоксипептидаза В, про-КПА — прокарбоксипептидаза А, ЛАП — лейцинаминопептидаза, КБЗ — карбобензокси, Е — фермент, S — субстрат, I — ингибитор, йкат — каталитическая константа, Кш — константа Михаэлиса. [c.504]

Сравнивая каталитическое действие фермента на разные субстраты (специ--фичность) или сопоставляя его с модельной неферментативной реакцией (эффективность), оперируют каталитическими константами первого или второго порядка и константой скорости неферментативной реакции, которая может иметь псевдопервый или второй порядок. При сравнении с модельной сис темой обычно считают, что рассматриваемая модельная реакция протекает через те же промежуточные продукты, что и ферментативный процесс, т.е. является конгруэнтной. [c.349]

Условно все ферменты можно разбить на три основные группы 1) малоактивные, имеющие отношение каталитической константы к константе Михаэлиса йкат//См<Ю л/моль-с 2) — активные с /гкат/Км в интервале 10 —10 и 3) —высоко-ЭКТИВНЫС с /Зкат /Кы выше 10 л/(моль-с). Если условно принять проницаемость диффузионного слоя Р = 0/6 = Ю " см/с, для ферментов третьей группы при монослойном заполнении поверхности электрода и при использовании концентраций субстрата, соизмеримых с К , скорость ферментативной реакции существенно превысит скорость диффузии и фермент будет работать в строго диффузионном режиме. Уменьшение поверхностной концентрации фермента вплоть до 1% заполнения поверхности не должно заметно изменить регистрируемую скорость процесса. Ферменты первой группы в силу низких значений ккит/Км при любой концентрации субстрата будут работать в кинетическом режиме. При этом скорости реакции и, соответственно, [c.71]

Наличие высокой активности пероксидазы в семенах и проростках пщеницы позволяет предположить участие фермента в метаболических процессах, происходящих во время покоя зерновок и в период их активного прорастания. Пероксидаза входит в состав антиоксидантной системы, активность которой определяет их уровень устойчивости к различным воздействующим факторам в процессе онтогенеза растений. Фермент способен катализировать окисление различных неорганических и органических соединений. Обладая щирокой субстратной специфичностью фермент может проявлять свойства оксидазы. Поэтому активность пероксидазы возрастает с увеличением дыхания семян при выходе их из состояния вынужденного покоя. Сродство пероксидазы к различным соединениям, являющимися субстратами фермента, может характеризоваться величинами констант Михаэлиса-Ментен (К ) и каталитической константой (к ). В случае использования неочищенного фермента, когда неизвестна его концентрация характеристической величиной может быть V , рассчитанная на грамм сухой массы. Субстраты пероксидазы можно условно разделить, как это было описано выше, на две группы быстро окисляемые и медленно окисляемые. При совместном присутствии субстраты могут окисляться последовательно, при этом быстро окисляемый субстрат активирует окисление медленно окисляемого субстрата [Лебедева, Угарова, 1996 Рогожин, Верхотуров, 1998а], причем в условиях in vivo преимущественно протекает совместное окисление субстратов в присутствии пероксидазы. [c.185]

Установив, что концентрация субстрата должна быть по возможности не менее чем в 10 раз больше Км, необходимо указать на зависимость /См от других факторов, таких, как pH, ионная сила и температура. Эти параметры влияют также и на каталитическую константу скорости кат V max — АкатХобщаЯ концентрация фермента). Хотя оптимум pH определяют как значение pH (или интервал значений pH), при котором достигается максимальная активность (максимальная величина Vmax), снижение активности при изменении pH может быть обусловлено резким возрастанием величины Л ы (и, следовательно, снижением степени насыщения фермента субстратом), а не уменьшением l max. Некоторые ферменты при измерении их активности в присутствии высоких концентраций субстрата имеют оптимум pH, сильно отличающийся от физиологического. Например, щелочные фосфатазы, как показывает их название, проявляют максимальную активность в щелочной области pH (10— М), хотя в условиях in vivo они функционируют при pH около 7. Причина заключается в том, что в физиологическом отношении величина Км гораздо важнее, чем величина Ута в клетке субстраты присутствуют всегда в очень низких концентрациях. Поэтому в данном случае значение Км при pH 7 намного меньше, чем при pH 10. [c.284]

Смотреть страницы где упоминается термин Фермент каталитическая константа: [c.59] [c.243] [c.257] [c.257] [c.144] [c.49] [c.56] [c.194] [c.197] [c.33] [c.85] [c.291] [c.254] [c.164] [c.135] [c.28] [c.139] [c.209] [c.204] [c.217] [c.232] [c.98] [c.37] [c.77] [c.86] [c.70] [c.76] [c.111]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология