Методы препарирования

Оптимальной толщиной образцов для анализа методом электронной дифракции является несколько сотен ангстрем. В связи с этим необходимо использовать специальные методы препарирования образцов (разд. 27.3), в том числе отливку тонких пленок из растворов, осаждение мелких частиц из разбавленных растворов, измельчение, дробление блочного полимера, получение реплик с отдельных участков поверхности, межфазную поликонденсацию и пиролиз. Необходимо отметить, что при электронном облучении в полимере образуются свободные радикалы, которые могут приводить к деструкции и/или сшиванию цепей. При повышении напряжения, применяемого для ускорения электронов, радиация становится не столь эффективной. С побочными эффектами электрон- [c.136]

В этой и следующей главах мы рассмотрим практические аспекты препарирования образцов как для растрового электронного микроскопа, так и для рентгеновского микроанализатора Хотя эти приборы очень сходны и во многих случаях могут быть взаимозаменяемыми с точки зрения биолога, полезно рассмотреть методики препарирования раздельно. Растровый электронный микроскоп дает информацию о морфологии объекта, в-то время как рентгеновский микроанализатор дает аналитическую информацию об образце. Для исследователя важно полностью осознать это различие, так как оно существенно для выбора метода препарирования. Способы и методики, которые приводятся в этих двух главах, обеспечат оптимальные условия препарирования объекта для растровой электронной микроскопии или рентгеновского микроанализа. Следует иметь в виду, что любые неоптимальные условия подготовки объекта будут приводить к потере передаваемой с образца информации. Далее также станет очевидным, что зачастую будет необходимо прибегать к некоторому компромиссу между двумя подходами, которые могут привести к потере информации с объекта. [c.216]

Приготовление исследуемых образцов. При абсорбционном анализе, так же как и при других спектральных исследованиях, одним из решающих факторов, от которых зависит точность определений, является метод приготовления исследуемых образцов. Основная сложность ИК спектрального анализа многокомпонентных систем заключается в выборе того или иного метода наиболее полного выделения отдельных компонентов сложного вещества. При этом приходится применять разнообразные аналитические и физико-химиче-ские методы. Современные методы препарирования позволяют приготовить образцы твердых, жидких и газообразных веществ, обеспечивающие получение вполне надежных с высокой степенью воспроизводимых спектров. [c.58]

Выбор метода препарирования определяется величиной зерен и свойствами материала. [c.145]

В гл. 4 и 5 рассматривается процесс детектирования и обработки сигналов вторичных электронов, отраженных электронов, катодолюминесценции и рентгеновского излучения, полученных в РЭМ—РМА. Вслед за этим материалом в гл. 6—8 обсуждаются различные методы количественного и качественного рентгеновского анализа. Методы препарирования таких твердых материалов, как минералы, металлы и керамики, для РЭМ и рентгеновского микроанализа даются в гл. 9. Методы препарирования образцов весьма критичны для большинства биологических объектов и других материалов, содержащих воду. Методики нанесения покрытий для биологических объектов и образцов в материаловедении рассматриваются в гл. 10. Методы препарирования биологических объектов для РЭМ обсуждаются в гл. 11, а для рентгеновского микроанализа — в гл. 12. [c.11]

Особое внимание будет уделено практическим, самостоятельным методам препарирования, и, хотя показано, что понимание некоторых теоретических аспектов может оказаться полезным, они будут сведены к минимуму, а читателям будут указаны ключевые обзорные статьи по данной тематике. Мы не стремимся снабжать биологов набором рецептов. Они уже описаны в литературе, и лишь немногие из них могут привести к оптимальному препарированию объекта, за исключением тех объектов, для которых они разработаны. Обзор современных специальных методик препарирования для широкого класса биологических объектов можно составить по серии общеобразовательных статей в [сб. 8ЕМ/1980]. В главах будет сделана попытка обоснования метода и практического выполнения препарирования образца, но фактически выбор способа будет представлен экспериментатору. Рекомендуется внимательно продумать, какую информацию можно получить с объекта. Например, методики препарирования, призванные обеспечивать защиту ма- [c.216]

Много усилий в развитии методов препарирования биологических объектов для электронной микроскопии было сконцентрировано на разработке способов удаления или иммобилизации воды, где были достигнуты значительные успехи. Следовало бы отметить, что не все проблемы препарирования возникают из-за воды. Была предпринята попытка разделить процедуры препарирования для РЭМ на ряд определенных, но взаимосвязанных операций. Эти операции обсуждаются приблизительно в хронологическом порядке по мере того, как они бы использовались в процессе препарирования объекта. Для конкретной задачи важно четко представлять, что некоторые операции могут быть вовсе не нужными, взаимоисключающими друг друга или могут выходить из этой последовательности. [c.220]

Несмотря на то что довольно тщательно разработано большинство методов препарирования, случаются ошибки, и важно уметь распознать артефакты на конечном изображении. В процессе препарирования илп в процессе наблюдения может произойти повреждение образца, и часто бывает трудно отличить одно повреждение от другого. Именно по этой причине так важны сравнительные исследования, так как каждый из разных методов позволит перекрестно отображать весь процесс препарирования. Ряд наиболее часто встречающихся артефактов, а также предполагаемая причина каждого вида повреждений приведены в табл. 11.1 и 11.2. [c.260]

Существует ряд положений, которые должны выполняться при применении методов препарирования для биологического микроанализа. В работе [403] предложено пять таких положений [c.274]

МЕТОДЫ ПРЕПАРИРОВАНИЯ ПРИ ОБЫЧНОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ [c.275]

Замораживание-замещение является полезным методом препарирования образцов для получения тонких срезов. Несмотря на то что основное усилие исследований было направлено на защиту морфологической целостности образцов, в настоящее время имеется достаточно оснований, чтобы предполагать, что замораживание-замещение может также быть полезным методом препарирования для микроанализа биологических объектов. Мы отправляем читателя к недавно опубликованным обзорам [453, 454], в которых обсуждается целый ряд методов в применении для растительных и животных тканей. [c.302]

Несмотря на эти недостатки, замораживание-замещение является полезным методом препарирования, и, вероятно, его луч-ще всего применять для клеток и тканей с плотной матрицей. Это могло бы ограничить количество растущих кристаллов льда во время замораживания и замещения и свести к минимуму расстояния возможного движения электролитов. [c.305]

В настоящей работе была сделана попытка разработки новых методов препарирования объектов, свободных от указанных выше недостатков и дающих возможность получить представление о реальной структуре высокомолекулярных соединений в растворах. [c.185]

В настоящей работе сделана попытка разработки нового метода препарирования, свободного от указанных недостатков и, следовательно, дающего возможность непосредственно исследовать структуру высокомолекулярных соединений в растворе. [c.315]

Глава II МЕТОДЫ ПРЕПАРИРОВАНИЯ [c.55]

В целом метод ультратонких срезов следует рассматривать как ценное дополнение к арсеналу имеющихся методов препарирования, а при его применении руководствоваться общим правилом при исследовании новых препаратов применять различные методы и па основании общих соображений и опытных данных определять наиболее эффективные из них. [c.121]

Отметим попутно, что наиболее часто цитируемые ЭМ данные о размерах микрофибрилл были получены в 40—50-х годах, когда как сами электронные микроскопы, так и методы препарирования зачастую не отличались большим совершенством. Закономерно поэтому, что абсолютные значения размеров микрофибрилл иногда требуют некоторого уточнения, особенно тогда, когда сопоставляют их с данными рентгенодифракционных методов или пытаются установить связь между конкретными физико-химическими свойствами и структурой полимеров. [c.88]

Раздел Методы анализа содержит наименования методов препарирования, разделения, концентрирования и т. и., методов получения селективных аналитических сигналов, а также краткое описание принципов, положенных в их основу. [c.22]

Методы препарирования. Методы препарирования веществ определяются типом исследуемого образца, а также задачами и целью опыта. Существует много способов препарирования образцов. Для исследования катализаторов можно применять следующие. [c.106]

Достаточно простой метод препарирования ориентированных полимеров, напр, волокон, — измельчение их в нейтральной жидкости, чаще всего в дистиллированной воде, с помощью ультразвуковых колебаний. При таком дроблении разрушение полимера происходит, по-видимому, в первую очередь по границам надмолекулярных образований, на к-рых силы сцепления меньше, чем внутри них. Предполагается поэтому, что при таком диспергировании рельеф поверхности образовавшихся частиц отражает внутреннее строение полимера. [c.475]

В книге дано описание новых приборов для проведения термографического, рентгеновского, спектрального, э лектронно-мик-роскопического и оптического анализов, методов препарирования объектов разного агрегатного состояния и структуры, а также методик определения различных идентификационных характеристик исследуемых веществ. [c.4]

Метод лиофильной сушки заключается в сублимации льда из клеток и тканей в вакууме и, таким образом, является важным способом препарирования для микроанализа биологических объектов. Этот способ отнюдь не является идеальным, и необходимо находить компромиссное решение проблем, связанных с неизбежным образованием и ростом кристаллов льда и с преимуществом, заключающимся в том, что имеется возможность избежать контакта ткани с любыми химикатами во время процесса препарирования. Более того, это не самый лучший способ для всех образцов. Оптимальная сохранность получалась только на образцах, в которых оставалась матрица ткани после завершения процесса сушки. Метод лиофильной сушки в сочетании с микроаналитическими исследованиями, вероятно, лучше всего применим к средам материалов, клеточным монослоям, изолированным клеткам и тонким жидким образцам. Высушенные в замороженном состоянии массивные материалы могут быть заполнены воском или смолой, и заполимеризовавшийся материал может нарезаться. Для анализа массивных объектов, по-видимому, лучше не использовать высушенные в замороженном состоянии объекты из-за возрастания размера области генерации рентгеновского излучения [295]. Метод лиофильной сушки, вероятно, не является наилучшим методом препарирования для анализа in situ межклеточных жидостей — такие исследования более правильно проводить при замораживании из гидратированного состояния. Метод лиофильной сушки биологических образцов для микроскопии и анализа является в общем эмпирическим процессом, и невозможно выработать правила, которые были бы применимы ко всем образцам, — для каждого образца требуется своя собственная процедура. Такие процедуры, вероятно, лучше описать после рассмотрения некоторых физико-химических аспектов замораживания и лиофильной сушки. Поэтому предлагается сначала рассмотреть некоторые теоретические аспекты лиофильной сушки и перейти к обсуждению некоторых практических аспектов, применимых ко всем образцам. Несмотря на то что о методе лиофильной сушки было уже много написано, недавно опубликованные статьи 442—445] содержат строгую теоретическую основу метода. [c.295]

Электронно-микроскопическая картина полиминеральных и поликристаллических вяжущих материалов и изделий из них сложна и весьма трудно расшифровывается. Сложность картины усугубляется большим разнообразием методов препарирования, способов съемки и работой специалистов при разных увеличениях микроскопов. Поэтому метод электронной микроскопии чаще всего используют для изучения конкретных вопросов в проводимом исследовании. Вместе с тем информация по электронно-микроскопическим картинам вяжущих материалов и изделий из них, содержащаяся В работах Ю. С. Малинина, У. Ш. Палиашвили, А. Г. Холодного, Л. П Шпыновой, 3. М. Ларионовой и др., позволяет провести приближенное обобщение описания внешнего вида кристаллов при больших увеличениях (табл. 16), [c.161]

В пособии приведены основные сведения по термографическому, рентгеновскому, спектральному, электронно-микроскопическому, оптическому и некоторым другим методам физикохимического анализа. Рассмотрены современные аппараты для проведения анализов, методы препарирования, методики выполнения анализов, определения конкретных идентификационных характеристик большого числа минералов, входящих в состав природных сырьевых материалов, используемых в производстве вяжущих вен1еств, изложены характеристики минералов, формирующихся при гидратации вяжущих веществ и входящих в состав затвердевших изделий из них. [c.335]

Любой метод препарирования для рентгеновского микроанализа должен приводить к четко распознаваемой структурной неоднородности, в то же время сохраняя in situ элементные составляющие, которые собираются проанализировать. Часто это бывает затруднительным, и для достижения этой цели были разработаны тончайшие методы препарирования. Во многих отношениях принципы методов препарирования для рентгеновского микроанализа не отличаются от методов, используемых в растровой электронной микроскопии. Важное различие состоит в том, что методы препарирования, хотя и призваны сохранять ультраструктуру, не должны достигать этой цели за счет растворимых составляющих клетки. В последующем изложении мы не намереваемся давать бесчисленные рецепты, котроые могли бы быть применены к специфическим биологическим системам, [c.265]

Как указывалось ранее, биолог должен выбрать компромисс между свойствами образца и условиями, в которых должен проводиться анализ. Оказывается, компромисс за счет рабочих характеристик приборов дает малый выигрыш, и это означает, что мы должны внимательно рассматривать способы препарирования биологического материала. Большая часть разработанных процедур основывается на методах, используемых в просве-чиваюш,ей электронной микроскопии. Это неоптимальное наследие, так как просвечивающая электронная микроскопия полагается на адекватную сохранность макромолекул, в то время как в рентгеновском микроанализаторе определяются элементы и он, таким образом, лучше всего подходит для анализа неорганических материалов. Тщательные исследования, проведенные в работе [184], показывают, что на всех этапах стандартных гистологических методов имеют место огромная потеря и перераспределение почти всех элементов. Потеря вещества также далеко неоднородна, например, большое количество калия удаляется, а количество удаляемого фосфора различно и зависит от строения ткани. Концентрации элементов, которые могут быть введены в ткань в процессе препарирования, должны быть одинаковы. Методы препарирования при рассмотрении делятся на две группы (проводимые при обычной температуре и проводимые при низкой температуре) и представлены в поряде проведения процедуры препарирования от лживого объекта до образца, исследуемого внутри рентгеновского микроанализатора. Мы кратко обсудим высокотемпературный метод препарирования — микроозоление . Для достижения необходимого представления о состоянии и перспективе методов препарирования мы в первую очередь рассмотрим виды аналитических исследований в применении к биологическим системам, типы исследуемых образцов, а также стратегию и критерии препарирования. [c.267]

Естественно, что для решения такой задачи наиболее перспективным является высокоразрешающий электронно-микроскопический метод, дающий возможность наблюдать как довольно большие полимерные цепи, так и структуры, образованные из них. К сожалению, прямое наблюдение в электронном микроскопе жидкофазных и летучих объектов пока либо невозможно, либо крайне ограничено. Хорошо известные и широко применяемые методы препарирования объектов для электронно-микроскопических исследований не могут быть использованы для изучения структуры растворов высокомолекулярных соединений. Безусловная необходимость полного удаления растворителя в процессе препарирования вызывает неизбежные осложнения, связанные с постепенным концентрированием раствора, структурирующим действием сил поверхностного натяжения и др. [7]. Эти причиныне позволяют нам быть уверенными в том, что наблюдаемые в электронном микроскопе структуры тождественны действительной структуре полимера в растворе. [c.185]

Естественно, что для непосредственного наблюдения больших полимерных цепей и надмолекулярных структур наиболее перспективным является высокоразрешающий электронно-микросконический метод. Однако из-за специфики электронно-микроскопического исследования известные методы препарирования образцов, к сожалению, не могут быть при-мепепы для изучения структуры растворов высокомолекулярных соединений. Необходимость предварительного полного удаления растворителя и иеизбежно возникающие при этом ослолшения (концентрирование раствора, структурирующее действие сил поверхностного натяжения и др.) не дают нам возможности делать заключения о действительной структуре полимеров раствора. [c.315]

Как и любой другой метод препарирования, метод тонких срезов имеет свои преимущества и недостатки. Достоинством его является возможность непосредственно наблюдать структуру не только поверхностных, но и внутренних слоев препаратов, если последовательно изучать срезы различных по глубине участков. При этом удается различать детали структуры, размеры которых составляют не менее /ю толщины среза. Это давно установленное эмпирическое правило было теоретически объяснено Косслеттом [174], принявшим во внимание потерю энергии электронами, рассеянными в образце, и хроматическую аберрацию объективных линз. Автор указывает, что невысокое разрешение в этом случае объясняется недостаточным контрастом. [c.120]

В заключение рассмотрим работы, авторы которых применили другие методы препарирования и смогли расширить возможности электронно-микроскопического исследования высокодиснерсных минералов. При помощи метода ультратонких срезов было показано, что отдельные частицы глауконита часто образуют дендритообразные агрегаты, входящие в состав плотной сетчатой структуры, в которой встречаются пустоты характерной формы [82, 83]. После фиксирования в полимере осадка суспензии каолинита на срезах можно видеть, как были агрегированы частицы в осадке. Этот прием нозволяет исследовать ориентацию частиц в осадках глинистых и других минералов. [c.226]

В этих экспериментах применяли два образца один из них использовали в серии из 12 опытов, а другой — в серии из 50 опытов. На последней стадии экспериментов в изотермических условиях проводили опыты при низкой и высокой температурах. Последний тип опыта характеризует стабильность образца. В этом случае сначала проводили медленное охлаждение (как описано выше), затем определяли температуру плавления, чтобы убедиться в том, что с образцом не произошло никаких заметных изменений. Были определены температуры плавления пленок полиэтилена, п готовленных из капелек и из исходных гранул полиэтилена. Сравнение с результатами, полученными для капелек в диспергирующей срелте, показало, что в пределах точности эксперимента полученные данные совпадают. Таким образом, применяемые методы препарирования образцов и анализа не изменяют основных свойств полиэтилена. [c.56]

Вследствие сильного поглощения электронов исследуемым веществом просвечивающее Э. и. применимо для объектов, имеюпщх незначительную толщину — для иолимерных материалов всего несколько десятков нм (несколько сот А). Это обстоятельство обусловливает необходимость специального препарирования полимеров. К прямым методам препарирования относят получение тонких пленок, измельчение, в том числе сусиендирование, и ультрамикротомирование. Косвенными наз. методы исследования поверхностей массивных блоков полимеров с помощью реплик. Нередко прямые и косвенные методы препарирования применяют параллельно, что позволяет исключить искажения, вносимые тем или иным методом. [c.475]

Ван<ная особенность полимеров, к-рую необходимо учитывать при интерпретации электронномикроскоиич. снимков, полученных с использованием прямых методов препарирования,— незначительная разница плотностей кристаллич. и аморфных областей. Следствие этого — чрезвычайно малый контраст фотографич. снимков иолимерных образцов, В ряде случаев контраст удается повысить при косом напылении на поверхность препарата слоя тяжелого металла. Более эффективен, особенно для выявления мелких, плотно уложенных структур, метод негативного контрастирования. Па препарат, предварительно помещенный на пленку-подлон ку или дырчатую пленку, наносят р-р какого-либо соединения, содержап его атомы тяжелых металлов (нанр., фосфорновольфрамовой к-ты, уранил-ацетата). Эти соединения не должны взаимодействовать с изучаемым полимером. После удаления растворителя на исследуемом образце остается тонкий слой (в несколько десятков А) осадка, причем концентрация р-ра подбирается такой, чтобы осадок заполнил в основном промежутки между структурными образованиями. После обработки объект будет выглядеть светлым на темном фоне, т. к. рассеивающая способность атомов осадка несравнимо больше, чем у полимера. Основу контраста изображения в этом случае будет составлять [c.475]

Примененный нами метод препарирования позволил цолучить дифференциальные кривые распределения по размерам мицелл присадки ВНИИ НП-370, растворенной в углеводородной среде, и по количеству молекул, образующих мицеллу (рис. 3). Приведенные на рис. 3 значения диаметров вычислены для шаров. Ось абсцисс представлена в виде номограммы. [c.216]

Наиболее прямым методом является метод электронной микроскопии, дающий возможность судить не только о размерах, но и о форме пор. Он применяется для исследования минеральных сорбентов и цолимеров. Однако для полимерных сорбентов еще не достаточно хорошо разработаны методы препарирования объектов. Применяется и рентгенографический метод, дающий возможность определить радиусы тонких пор. Но наиболее распространенными являются классический сорбционный метод, ртутная порометрия и метод плотностей. [c.496]

Возможности применения электронной микроскопии основаны на том, что электронная плотность закристаллизованного полимера достаточно велика для того, чтобы он не был полностью прозрачен для пучка электронов. С помощью электронного микроскопа, позволяющего достичь увеличения от 3-10 до 10 и разрешения от 4 до 20 А, можно наблюдать отдельные кристаллические образования, входящие в состав поликристалла, т. е. ламели различного типа (см. рис. 6) и их взаимное расположение в поликристаллах (см. рис. 17 и 18). Для исследования образца в электронном микроскопе необходимо его специальное препарирование. Методы препарирования подробно описаны в руководствах по электронной микроскопии - Здесь, как и при рассмотрении других методов, мы остановимся только на специфике их применения при исследовании эластомеров. Частично эти вопросы рассмотрены в книге Ляйт-Дюморе применительно прежде всего к задачам исследования ингредиентов резиновых смесей и их распределения. Вопросы электронно-микроскопического препарирования отражены также в работах Печковской - и других . [c.65]

Весьма перспективным является развиваемый Эндрюсом метод препарирования, заключающийся в закреплении кристаллических структур в пленке каучука путем обработки парами четырехокиси осмия -действием паров OSO4 наряду с контрастированием возрастает жесткость аморфной части полимера, что препятствует перестройке поликристаллов даже выше температуры плавления, и вследствие этого внешний вид кристаллических образований сохраняется (см. рис. 18). Обработка OSO4 находит применение и при исследовании аморфных эластомеров. [c.67]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология