Пролин нингидринная реакция

Идентификация аминокислот и пептидов во фракциях. А. Нингидриновая реакция. Нингидрин реагирует со всеми аминокислотами, имеющими а-МНа-группу, давая фиолетовое окрашивание, за исключением пролина или оксипролина, в реакции с которыми нингидрин дает желтое окрашивание.Некоторые примеси (медь, кадмий и др.) могут влиять на цвет пятен. Для проявления хрома- [c.192]

Аминокислоты открывают цветной реакцией с нингидрином. Две капли 0,1%-ного раствора нингидрина в нитратном буфере наносят на фильтровальную бумагу. Высушивают в шкафу при 100— 105" С. На сухое пятно наносят две капли исследуемого раствора. Бумагу вновь сушат при той же температуре 5—10 мин. В присутствии аминокислот или аминов возникает синее, фиолетовое или красное пятно либо кольцо. Реакцию дают все а-аминокислоты (кроме пролина и оксипролина). [c.126]

Поскольку поглощение при этой длине волны практически линейно зависит от числа исходных аминогрупп, на основе нингидриновой реакции удалось разработать удобный колориметрический метод количественного определения аминов. Если нагревание с нингидрином проводить при pH 1—5, то количество свободной аминокислоты можно определить по объему выделившейся двуокиси углерода (полипептиды и первичные амины также дают лиловое окрашивание с нингидрином, однако в этом случае СО2 не образуется). Таким образом, нингидриновая реакция позволяет определять свободные аминокислоты даже в присутствии полипептидов. В случае имино-кислот (пролина и оксипролина) образуется продукт ярко-желтого цвета с максимумом поглощения около 440 ммк. Это позволяет использовать нин-гидриновую реакцию для определения иминокислот в белковых гидролизатах, содержащих большой избыток аминокислот. [c.48]

Пролин и оксипролин относятся к аминокислотам пиррольного ряда. Они отличаются от всех других аминокислот тем, что ие содержат первичной аминогруппы. С нингидрином они дают не фиолетовое, а желтое окрашивание. Характерной Для них цветной реакцией является реакция с изатином — появление синего окрашивания у пролина и зеленого У оксипролина. Пролин — единственная из аминокислот, входящих в бел- [c.475]

Основные свойства и химия М-моноалкиламинокислот аналогичны их незамещенным предшественникам, за очевидным исключением тех реакций, в которых участвуют оба водорода аминогруппы. Так, пролин и другие Ы-алкил-а-аминокислоты не дают типичного пурпурного окрашивания с нингидрином (пролин дает желтое окрашивание). При действии азотистой кислоты образуются М-нитрозо-М-алкил-а-аминокислоты, которые интересны тем, что из них можно получать сидноны (см. раздел 20.4), и, кроме того, в силу беспокойства [76] об их образовании при хранении пищевых продуктов (нитрозамины канцерогенны). М,М-Диалкил-а- аминокислоты не имеют большого значения, однако их четвертичные производные достаточно важны в биохимии [77]. М,М,М-Три-метилглицин имеет тривиальное название бетаин это название используется также для обозначения всего этого класса соединений. Сам бетаин хорошо растворим в воде, не растворим в эфире, плавится с разложением около 200 °С. Его можно рассматривать как локализованный цвиттерион, лишенный возможности образовать анион, хотя он может протонироваться по карбоксильной группе сильной кислотой с образованием ярко выраженных солей. Бетаины можно получать из соответствующих а-аминокислот с помощью различных методов метилирования, в частности рекомендуется обработка метилиодидом и бикарбонатом натрия в метаноле [78]. [c.246]

Спектрофотометрическое определение (реакция с нингидрином) [119]. Смешивают 1 мл анализируемого раствора, содержащего 0,05—5,6 мкг аминного азота, с 0,5 мл нитратного буферного раствора (pH 5) и 0,2 мл 5%-ного раствора нингидрина в метил-целлозольве. Для приготовления указанного буферного раствора 21,008 г моногидрата лимонной кислоты растворяют в 200 мл воды, прибавляют 200 мл 1 н. раствора едкого натра и разбавляют водой до 500 мл. К 1 мл полученного раствора, содержащего аминокислоту и нингидрин, приливают 5 мл 0,01 М раствора цианида калия и 245 мл метилцеллозольва. Смесь нагревают в течение 15 мин до 100 °С, затем 5 мин охлаждают и разбавляют спиртом до соответствующего объема. Измеряют оптическую плотность при 570 нм (в случае пролина и гидроксипролина при 440 нм). Аналогичный метод описан в работе [120]. [c.174]

В противоположность а-аминокислотам, а-иминокислоты пролин (X, R—Н) и оксипролин (X, R—ОН) при взаимодействии с нингидрином образуют аддукт (XI). При этом освобождается СО2 (IX), но без одновременного выделения NHj. В результате реакции в уксуснокислой среде образуется желтый продукт (XI), который в нейтральной области при нагревании с избытком нингидрина переходит в вещество (XII) пурпурного цвета. [c.138]

Для определения пролина нингидрин малочувствителен, поэтому используют 0,5%-ный раствор изатина в изопропиловом спирте, содержащем 4% уксусной кислоты по объему. После прогревания обработанной этим реактивом хроматограммы в сушильном шкафу пролин проявляется в виде яркого синего пятна. Чувствительность реакции для пролина 0,1 мкг в 1 мкл. Пятна других аминокислот с изатином приобретают слабую розовую окраску. Оксипролин окрашивается в голубой цвет. [c.43]

Наиболее общим методом определения концентрации пептидов является колориметрия продуктов реакции с нингидрином [2]. Это один из наиболее чувствительных колориметрических методов. Для обнаружения аминокислот и пептидов разработаны как обычный, так и полностью автоматизированный варианты, причем нингидриновый реагент не вызывает коррозии и его можно подавать обычным микронасосом. Реакция идет по свободным аминогруппам, но в некоторых случаях хромофор образуется с низким выходом. Данные по окрашиванию дипептидов можно найти в работе [3]. У всех дипептидов, содержащих в качестве Ы-концевой аминокислоты аргинин, треонин, серин, глутаминовую кислоту, глицин, фенилаланин, метионин, лейцин и тирозин, интенсивность окраски составляет 1,6-10 у лейцина эта величина составляет 1,7-10 . У дипептидов с М-концевым лизином и аспарагиновой кислотой интенсивность окраски несколько выше (на 20 и 29% соответственно), а дипептиды с Ы-концевым гистидином и триптофаном проявляются несколько слабее (42 и 67% соответственно от средней интенсивности). Дипептиды с М-концевым пролином, валином и изолейцином окрашиваются очень слабо [2,7 6,4 и 8,5% от средней (1,6- 10 ) интенсивности]. [c.391]

Аминокислоты открывают с помощью соединений, образующих с ними окрашенные или флуоресцирующие продукты. Наиболее широкое распространение для идентификации аминокислот получил нингидрин. Продукт реакции с нингидрином имеет сине-фиолетовую окраску с максимумом поглощения при 570 нм (для пролина 440 нм). [c.129]

Продукты реакции аминокислот с нингидрином экстрагируются органическими растворителями [128]. Это свойство используют для определения пролина в гидролизатах белков. Гидролизуют 1 г исследуемого белка кипячением с 1 мл 4 н. хлористоводородной кислоты в течение 15 ч, после чего раствор выпаривают досуха. Сухой остаток обрабатывают одновременно 4 мл 3%-ного раствора трихлоруксусной кислоты и 1 мл 10%-ного раствора фосфорномолибденовой кислоты (для удаления пептонов) и фильтруют. Отбирают 0,5 мл фильтрата, вводят 0,5 мл 2%-ного водного раствора нингидрина и нагревают 10 мин при 100 °С. После охлаждения добавляют 50 мл воды и экстрагируют продукт реакции 10 мл изобутилового спирта в течение 3 мин. Верхний слой отделяют и измеряют оптическую плотность при 533 нм. [c.169]

Нингидрин специфичен к алифатическим или алициклическим первичным аминогруппам. Вторичные, третичные и четвертичные амины, амиды и аминозамещенные ароматические соединения дают слабую реакцию или не дают вовсе. Исключение-пролин дает желтое пятно (по-видимому, благодаря раскрытию цикла). Аминокетоны первоначально дают желтую окраску, которая переходит в пурпурную. [c.382]

Большинство соединений не поглощает в видимой области спектра. Поэтому анализаторы снабжаются прибором, который вводит в поток элюата постоянное количество реагента, воспроизводимо реагирующего с анализируемым соединением. Продукты реакции обнаруживаются на различных длинах волн. Именно к этому типу детекторов относятся аминокислотные анализаторы, в которых в поток элюата вводят нингидрин. Большинство аминокислот дают с нингидрином окрашенные соединения спектры их поглощения показаны на рис. 8.19. Спектр поглощения продуктов реакции пролина отличается по положению максимума. При проведении количественного анализа боль- [c.68]

Исключение составляют пролин и оксипролин, которые образуют в реакции с нингидрином продукты желтого цвета. Количественное измерение поглощения при 570 нм (для красно-фиолетового продукта )и при 440 нм (для желтого продукта) лежит Б основе широко известной процедуры аминокислотного анализа [43]. [c.524]

Реакцию с нингидрином дают не только а-, но и р- и у-аминокислоты, и т. д. пептиды, белки, амины и аммиак. Пролин дает с нингидрино.м Желтую окраску, которая при продолжительном нагревании переходит в красно-фиолетовую. Реакцию нингидрина с пролином изображают следующей гипотетической схемой [c.468]

Очистку пролина можно осуществить через его медную соль [3,5], которую получают при кипячении водного раствора остатка с избытком карбоната меди в течение 1 часа с последующим фильтрованием полученного раствора, концентрированием его и охлаждением. Выход 4,85 г (67,0%). Разделение пролина на оптические изомеры описано Веллузом [6]. Кларксон [7] описал чувствительную реакцию на бумаге для определения пролина с помощью нингидрина. [c.260]

Дженкинсон и Тинслей [19] идентифицировали с помощью хроматографии на бумаге состав аминокислот, гидролизат которых был получен в ходе изучения аминокислот растительного происхождения, выделенных из компоста. Десять мл гидролизата, содержавшего приблизительно 1 мг связанного азота, запаривали досуха при пониженном давлении, растворяли в 5 мл воды и снова упаривали досуха. Остаток растворяли в 1,5 мл воды и центрифугировали. Осветвленную жидкость в количестве 0,04 мл наносили на бумагу Ватман № 1. Разделение проводили элюентом, предложенным Вольфом [20]. Хроматограмму проявляли, окуная лист в 0,2%-ный раствор нингидрина в ацетоне. Были идентифицированы следующие аминокислоты цистеиновая, аспарагиновая, глутаминовая, лизин, аргинин, глицин, гистидин, серии, аланин, тирозин, пролин, валин, треонин, изолейцин, лейцин и фенилаланин. Метионин не поддавался определению, поскольку его трудно было отделить от глицина в описанных системах растворителей. Метио-нин-5-оксид тоже не отделялся от валина. Хроматограммы опускали в 0,1%-ный раствор изатина в ацетоне для обнаружения про-лина и подтверждения отсутствия оксипролина. Детектирование и определение содержания пептида с остатком лизина в середине цепи проводили с помощью 2,4-динитрофторбензола [21]. Эта реакция протекает, поскольку е-аминогруппа, в отличие от а-амино-группы лизина, свободна и может вступать в реакцию. [c.306]

Этот метод позволяет проводить одновременно анализ 50 фракций. После развития пурпурной окраски фракции разбавляют 5 мл смеси этанол—вода (1 1), охлаждают перед электрическим вентилятором и встряхивают в течение 30 сек для окисления большей части оставшегося гидриндантина. Измеряют величины экстинкции при 570 ммк (и 440 ммк для пролина и оксипролина). В реакции с нингидрином, изображенной на стр. 78, все аминокислоты, за исключением цистеина, дают один и тот же окрашенный продукт — дикетогидриндилиден-дикетогидриндамин [14]. [c.77]

В основе кислого нингидринового метода лежит реакция пролина с нингидрином в сильнокислой среде с образованием соединения 1ч,>аоного цвета, оптическая плотность которого определяется с зеленым фильтром (490-530 нм). [c.277]

При взаимодействии нингидрина с пролином и оксипролином возникает желтоватая окраска Пирролидонкарбоновая кислота и дикето-пиперазин не дают никакой окраски. Реакция с нингидрином удается только, если раствор аминокислоты нейтрален. Положительную реакцию с нингидрином дают все белковые соединения и продукты расщепления белков, амины (вероятно, в соединениях с слабыми кислотами), аминоальдегиды, производные мочевины, аммониевые соединения органических кислот, некоторые неорганические соединения (сероводород, тиосульфат в присутствии ионов аммония), а также альдегиды и сахара, обладающие свойствами восстановителей. Последние образуют весьма характерные красноватые окраски, пригодные для отличия их по этому признаку. Для проведения реакции с окрашенными жидкостями (коричневыми гидролизатами) в качестве экстрагента применяют амиловый спирт. Исследуемый раствор смешивают с раствором нингидрина как указано выше, смесь слабо кипятят 1—2 мин, охлаждают и встряхивают с 2 мл амилового спирта. В присутствии аминокислот слой амилового спирта приобретает сине-фиолетовую окраску. В присутствии альдегидов или соединений с кетостроением амиловый спирт приобретает желтую окраску или остается бесцветным. [c.705]

Аллоксан дает с аминокислотами реакщхю, аналогичную реакции с нингидрином, но окраска получается желтой пролин при этом не проявляется. Розенбек использовал аллоксан в качестве заменителя нингидрина. Согласно Сайферу и Орескесу [2], для некоторых аминокислот аллоксан является более чувствительным реактивом, чем нингидрин. [c.412]

Область применения. а-Аминокислоты дают положительную пробу, обусловленную протеканием следующих двух реакций 1) дегидрирования аминокислоты с образованием альдегида, аммиака и двуокиси углерода и 2) конденсации продукта реакции с нингидрином с образованием окрашенных комплексов, подобных но структуре мурексиду. Все а-аминокис-лоты дают положительную реакцию, за исключением пролина и оксипро-лина. Пролин обычно дает с нингидрином желтое окрашивание. а-Амино-замещенные кислоты и (5- и у-аминокнс,лоты не дают реакции. [c.395]

Пролин можно определить без предварительного хроматографического разделения реакцией его с нингидрином в сильнокислом растворе [ИЗ]. Рен и Виггелл [114] исследовали недавно модификацию этого метода и показали, что единственной аминокислотой, серьезно мешающей определению пролина, является оксипролин. [c.150]

Аминокислоты взаимодействуют с нингидрином (гидратом трикетогидрин-дена) с образованием СОг, аммиака и альдегида, содержащего на один атом углерода меньше, чем соответствующая аминокислота. В результате реакции возникает голубое или фиолетовое окрашивание, что позволяет осуществить колориметрическое количественное определение аминокислот. Однако эта цветная реакция ие является специфической для аминокислот, поскольку окрашенный продукт с нингидрином дает и NH3, и многие другие соединения, содержащие аминогруппу (в том числе пептиды и белки), с тем лишь отличием, что при этом ие выделяется СО2. Поэтому образование СО2 при реакции с нингидрином — характерный признак присутствия свободной карбоксильной группы, расположенной рядом с аминогруппой, т. е. специфично для а-аминокарбоно-вых кислот. Пролин и оксипролии при реакции с нингидрином образуют производное, окрашенное в желтый цвет. [c.118]

Реакция с нингидрином [105]. К 1 мл испытуемой нейтральной жидкости приливают 1—2 капли раствора нТ1нгидрина (100 мг нингидрина в 100 мл воды) и нагревают до кипения. В зависимости от природы кислоты появляется иногда красноватая, пурпурнокрасная, но в большинстве случаев синяя окраска. Эту реакцию дают только те аминокислоты, в которых помимо свободной карбоксильной группы имеется и свободная аминогруппа соответственно с пирролидинкарбоновой кислотой и дикетопиперазином эта реакция не идет. Пролин и гидроксипролин дают л(елтую окраску. Чувствительность реакции очень велика, например для глицина 1 10000, для тирозина 1 5000. [c.168]

Смотреть страницы где упоминается термин Пролин нингидринная реакция: [c.248] [c.188] [c.264] [c.295] [c.520] [c.480] [c.28] [c.404] [c.401] [c.34] [c.59] [c.286] [c.20] [c.282] [c.267] [c.408] [c.415] [c.460] [c.99] [c.335] [c.363] [c.28] [c.91]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология