ДНК-зонды для диагностики

Все параметры, характеризующие падающий электронный пучок (т. е. ток падающего пучка 1. диаметр зонда з и угол схождения а), могут быть определены экспериментально. Если нет необходимости менять эти величины непрерывно, полезно связать выбранные значения , з и с конкретными рабочими условиями, используя это как для установки желаемых рабочих параметров, так и для диагностики прибора в процессе решения задач микроскопии. [c.15]

Одной из наиболее актуальных проблем современной медицины является задача экспрессной диагностики различных заболеваний. В этом аспекте несомненный интерес представляет новый класс препаратов, содержащих катионы, способные выполнять функции зонда — радиоактивных, магнитно-релаксационных и флуоресцентных меток. [c.502]

С помощью современных генетических методов биологи научились превращать бактерии в своеобразные биологические фабрики по производству белковых препаратов (например, рестрицирующих эндонуклеаз), различных химических соединений, аминокислот, антибиотиков и т. д. Клонируя в бактериальных клетках специфические гены, они создают новые пути биосинтеза для получения уникальных метаболитов, применяют клонированные гены болезнетворных микроорганизмов в качестве зондов для диагностики заболеваний человека и домашних животных, используют изолированные гены для получения безопасных и эффективных вакцин. [c.179]

Молекулярная диагностика — это быстро развивающееся направление. Хотя его основные принципы уже сформировались, технические детали отдельных тестов могут различаться. Для получения в достаточном количестве ДНК-мишени сейчас успешно применяют ПЦР. Использование ПЦР и специфических зондов существенно повышает чувствительность тестов и позволяет применять нерадиоактивные хромогенные, хемилюминесцентные и флуоресцентные системы регистрации. Во многих случаях для выявления мутации или экзогенной ДНК инфекционного агента в исследуемом образце достаточно провести ПЦР с последующим электрофоретическим разделением продуктов. Не вызывает сомнения, что с помощью ДНК-диагностики можно будет выявлять большинство, а возможно и все наиболее распространенные ге- [c.201]

Молекулярно-биологическая диагностика — обнаружение в клиническом материале фрагментов нуклеиновых кислот вирусов-возбудителей с помощью зондов (гибридизация НК) или ПЦР. [c.259]

Структурные зонды для идентификации специфических особенностей на поверхности клеток Наборы реактивов ддя диагностики беременности Выявление эстрогенных рецепторов для диагностики некоторых форм рака молочной железы Точное определение количества специфических антигенов Очистка антигенов, например интерферона [c.18]

Человек. Описывается история болезни мужчины 19 лет, госпитализированного с явлениями психоза, развившегося в результате длительной (9 мес.) работы с Б. без противогаза при фумигации фруктов и овощей. Введение в желудок через зонд ацетил-цистеина в дозе 30 мл каждый час в течение 8 ч привело к значительному улучшению. Больной выздоровел, хотя замедленная речь и усиленные рефлексы сохранялись длительное время. Разнообразие симптоматики, характерное для отравления Б., может приводить к ошибкам в диагностике. [c.576]

Физическое описание плазмы требует знания некоторых фундаментальных параметров, таких, как температура плазмы, концентрация электронов, ионов и радикалов и т. д. В большинстве доступных методов диагностики используются зонды из нержавеюшей стали или диоксида кремния, помещаемые в какую-либо точку горящей смеси, в сочетании с обычными системами анализа, такими, как газовая хроматография, инфракрасная спектроскопия и масс-спектрометрия. Внесение зонда в плазму позволяет получить детальное пространственное разрешение ее состояния, поскольку может быть осуществлен отбор пробы небольшого объема без существенных нар) шений в исследуемой системе. Такие исследования обязательны всякий раз, когда существуют сильные неоднородности в составе и температуре, обусловленные самой природой процесса горения. [c.221]

В последние годы разработан новый метод количественной диагностики распределения — метод спинового, или парамагнитного, зонда, основанный на измерении ширины линий ЭПР нитроксильных радикалов, введенных в полимер (см. гл. П). [c.209]

Таким образом, метод спинового зонда является надежным и удобным способом диагностики распределения стабилизаторов в полимерных материалах и его количественной оценки. Выбирая спиновый зонд необходимых размеров и формы, можно моделировать и измерять распределение молекул любых размеров и формы. [c.213]

Искусственные ДНК-зонды позволяют проводить дородовую диагностику наследственных болезней [45] [c.240]

Дородовая диагностика наследственных заболеваний возможна, если известна природа генетического нарушения и имеется соответствующий зонд. Анализу по Саузерну можно подвергнуть ДНК клеток, собранных из 10 мл амниотической жидкости (или полученных с помощью биопсии ворсинок хо- [c.49]

Гетерогенное заболевание В некоторых семьях возможна диагностика с помощью ДНК-зондов [c.156]

Наряду со спектрально-оптическими методами в диагностике низкотемпературной плазмы широкое распространение получили контактные методы. Они основаны на помещении в плазму твердых тел различной конструкции (металлов диэлектриков) и измерении потоков энергии и частиц на них. Такими телами могут быть термопары, нагреваемые проволочки, зонды различных типов, включая пробоотборники. Измеряемые величины — концентрации электронов и тяжелых частиц в основном и возбужденном состоянии и распределения их по энергиям. Условия применения некоторых контактных методов приведены в табл. 6.2. [c.292]

Установка оснащена аппаратурой для спектральных (18—20), зондовых (14) измерений, СВЧ-диагностики (15). Спектры регистрируются не только с оси разряда. Измеряются также радиальные и продольные профили интенсивности. Предусмотрен вариант разрядной трубки, в котором по оси через шлиф, установленный вместо окна 21, вводятся зонд Ленгмюра, термопары или термозонды. [c.58]

ДНК-зонды в диагностике генетических болезней [c.70]

Применеиие, нахождение в природе. Долгоживущие Р. с. (гл. обр. нитроксильные) находят широкое применение в качестве ингибиторов полимеризации и окисления разл. орг. материалов, напр, для стабилизации акрилонитрила, винилацетата, винилиденхлорида, стирола, фурфурола, СК и НК, жиров и масел. Их применяют также в молекулярно-биол. исследованиях в качестве спиновых меток и зондов (см. Липидные зонды, Спинового зонда метод), в судебно-мед. диагностике, аналит. химии, для повышения адгезии полимерных покрытий, при изготовлении фотоматериалов, в приборостроении, в геофизике и дефектоскопии твердых тел, напр, алмазов. Короткоживущие Р. с.-промежут. частицы, во мн. орг. р-циях (радикальное галогенирование и др.). [c.156]

Следует заметить, что иммуноанализ с регистрацией аналитического сигнала амперометрическим методом предложен сравнительно недавно. Наиболее многообещающие результаты достигнуты в тех случаях, когда датчики разрабатывались с учетом специфических требований электрохимического детектирования, а не приспосабливались к существующим методикам. В частности, большие надежды возлагаются на амперометрические зонды для диагностики генетических заболеваний (ДНК-зонды). Разработана конструкция датчика, состоящего из стеклоуглеродного электрода, поверхность которого модифицирована ковалентно пришитой односпиральной ДНК. После ее гибридизации с ДНК-мишенью регистрируют концентрацию дипиридильного комплекса Со(Ш), который взаимодействует с двойной спиралью ДНК. При генетических нарушениях односпиральная ДНК не способна гибридизоваться с ДНК, взятой у больного человека. [c.508]

Экспресс-диагностика. В качестве экспресс-диагностики используются молекулярно-биологические методы выявление в клинических образцах нуклеиновых кислот возбудителя с помощью ПЦР и метод гибридизации на основе ДНК-зондов. Разработана мультиплексная ПЦР, позволяющая одновременно определять в клинических образцах нуклеотидные последовательности М. genitalium, и. urealyti um и М. hominis. Однако в связи с высокой частотой носительства полученные результаты требуют подтверждения методами серодиагностики. [c.252]

Тлеюпщй разряд постоянного тока в UFe. Для получения уран-фторной плазмы низкого давления использовали тлеюгций разряд на постоянном токе. Схема установки показана на рис. 10.4. Разрядная трубка 1 вынолнена из кварца и имеет по всей длине рубашку водяного охлаждения в трубку введены через шлифы остроконечные стальные электроды (анод 2 и катод 3), также снабженные внутренним охлаждением. Расстояние между электродами — 0,1 м внутренний диаметр разрядной трубки — 0,025 м. Давление в трубке измеряли оптическим мановакуумметром 4, в трубку через шлифовой переход вводили при необходимости зонды 5 для диагностики плазмы. Источник электропитания высоковольтный выпрямитель б для регулирования тока в цепи использовано балластное сопротивление [c.499]

Из рис. 25.22 видно, что если оба родителя являются гетерозиготными носителями серпо-виднокпеточной анемии, то вероятность поражения их детей составляет 1/4. Фенотип устанавливают с помощью анализа крови. Если в семье были случаи заболевания, то потенциальным родителям следует посоветовать сделать анализ крови, прежде чем решиться на рождение ребенка. В настоящее время доступна и пренатальная диагностика. Ее проводят либо с помощью гибридизации, используя в качестве зонда ген НЬ8, либо с помощью рестрикционного анализа. Клетки плода получают путем амниоцентеза или биопсии ворсинок хориона (разд. 25.7.9). [c.247]

Каким же образом проводится генетический скрининг Наиболее важными являются четыре метода биопсия ворсинок хориона, амниоцен-тез, диагностика эмбриона перед имплантацией и анализ ДНК с помощью генных зондов. [c.257]

Созданы и применяются в производстве высокочувствительные диагностические препараты на основе метода ИФА (иммуноферментного анализа), ДНК-зондов, внедрения полимеразной цепной реакции (ПЦР).Используются моноклональные антитела, полученные методом гибридомной технологии. Получены генетически трансформированные кролики с геном асРНК, устойчивые к вирусам лейкоза, а также трансгенные кролики с геном альфа-2 интерферона. Разработана рекомбинантная вакцина против лейкоза крупного рогатого скота на основе оспененного вектора. На культуре клеток нарабатывается антиген и производится диагностика лейкоза крупного рогатого скота. Генно-инженерные вакцины против ящура и сибирской язвы производятся в объемах, обеспечивающих потребности в них России, стран СНГ и ряда других государств мира. [c.428]

Полиморфизм длины фрагментов рестрикции. Если имеется подходящий ДНК-зонд, то можно обнаружить прямым методом некоторые генетические болезни, возникающие вследствие мутаций (гемофилия, мыщечная дистрофия и др.). Ответственный за болезнь, но неидентифицированный ген может быть обнаружен, если он находится вблизи последовательности ДНК, поддающейся определению. Во всем человеческом геноме примерно одно из 150 оснований является полиморфным, т. е. варьируется у разных индивидуумов. Каждое щестое из этих случайных изменений или порождает, или разрушает участок рестрикции. В результате этого потенциальные участки рестрикции присутствуют вдоль молекулы ДНК с интервалом примерно в 1000 пар оснований. Их наличие или отсутствие у разных людей приводит к тому, что ДНК в процессе рестрикции разрезается на фрагменты разной длины (полиморфизм длины рестрикционных фрагментов). Если при обследовании членов семьи обнаруживается взаимосвязь между полиморфизмом длины рестрикционных фрагментов и наследственным заболеванием, делается заключение, что данный участок рестрикции расположен вблизи от гена, ответственного за патологию. В таком случае присутствие данного типа полиморфизма можно использовать для предсказания наличия мутантного гена у другого члена семьи или в ткани плода. Однако использование этой техники для пренатальной диагностики требует предварительного обследования семьи. [c.528]

Рестрикционный анализ ДНК позволяет выявить различия в отдельных нуклеотидных парах, появляющиеся в результате мутаций в сайтах, узнаваемых соответствующим ферментом. В случае серповидноклеточной анемии происходит замена АТ на ТА в шестой паре нуклеотидов гена, кодирующего Р-цепь гемоглобина человека замена происходит в сайте (СТКАО), чувствительном к рестриктазе Ойе (рис. 9.19). Фрагменты ДНК, возникающие под действием Ос1е1 у здорового человека и больного серповидноклеточной анемией можно сравнить с помощью метода гибридизации по Саузерну, используя в качестве зонда радиоактивно меченную ДНК гена Р-глобина, как это показано на рис. 9.19. Таким способом можно определять присутствие вредного мутантного гена в геноме эмбриона за несколько месяцев до рождения. Для этого культивируют зародышевые клетки, взятые при амниоцентезе. ДНК этих клеток экстрагируют и подвергают анализу. Такая диагностическая процедура может производиться в тех случаях, когда существует подозрение, что оба родителя-носители вредного рецессивного гена. Следует заметить, что в большинстве случаев вредные мутации происходят вне сайтов, узнаваемых рестриктазами. Однако иногда такие мутации оказываются в хромосомах тесно сцепленными с сайтами рестрикции, что может во многих случаях использоваться в пренатальной диагностике. [c.288]

Существенной областью применения ДНК-олигонуклеотидов является дородовая (пренатальная) лиагностика наследственных заболеваний. Более 500 наследственных болезней человека связаны с нарущением какого-то одного гена. В больщинстве случаев эти мутации рецессивны. Это означает, что болезнь развивается, если человек получает дефектные копии гена сразу от обоих родителей Одна из задач современной медицины состоит в том, чтобы выявлять такие аномальные эмбрионы до рождения, информировать об этом мать и дать ей возможность прекратить беременность. Например, для серповидноклеточной анемии известна точная нуклеотидная замена в мутантном гене (последовательность GAG заменена на GTG в пени ДНК. кодирующей Р-пепь гемоглобина) В данном случае синтезируют два олигонуклеотида Один из них соответствует последовательности нормального гена в участке предполагаемых мутаций, другой несет замену, обусловливающую болезнь. В условиях когда эти последовательности достаточно коротки (примерно 20 нуклеотидов) и при температуре гибридизации, при которой стабильность сохраняют лищь точно совпадающие цепи, можно использовать радиоактивные зонды. Тест состоит в том, что из эмбриональных клеток, содержащихся в амниотической жидкости (ее получают в ходе процедуры, называемой амниоцентезом), выделяют ДНК и используют ее для Саузерн-блоттигна с радиоактивными ДНК-зондами. Дефектный эмбрион легко опознается, поскольку его ДНК будет гибридизоваться только с олигонуклеотидом, комплементарным мутантной последовательности ДНК. К сожалению, для больщинства наследственных болезней дефект на уровне ДНК еще не расшифрован, однако круг заболеваний, для которых применяется дородовая диагностика, постоянно расширяется. Это стало возможно благодаря использованию феномена полиморфизма длины рестрикционных фрагментов. В данном случае с помощью гибридизации выявляют наличие или отсутствие определенных сайтов рестрикции, тесно сцепленных с дефектными генами. [c.241]

Молекулярная цитогенетика. Методы новой генетики важны не только для изучения структуры генов, они оказывают все воз-растаюшее влияние на эффективность цитогенетической диагностики. Например, мелкие хромосомные аберрации, такие, как делеции и транслокации, идентифицируются теперь намного точнее, чем в недавнем прошлом. Мелкие делеции, не выявляемые классическими методами, в настоящее время можно обнаружить, если имеется ДНК-зонд для делетированного участка. Возможна также очень ранняя (8-10 недель беременности) пренатальная диагностика пола эмбриона с использованием -специ-фического ДНК-зонда, биопсии ворсин хориона (разд. 9.1) и методики Саузерна. Получены новые, впечатляющие данные относительно структуры, филогенетических взаимосвязей и эволюции обеих половых (X и V) хромосом (разд. 3.4). Новая технология несомненно должна войти в арсенал средств тех учреждений, которые занимаются генетическим консультированием и пренатальной диагностикой. Современная служба медико-генетической помощи остро нуждается в специальном дорогостоящем оборудовании и хорошо обученном персонале. Готово ли общество к крупномасштабным затратам на такую службу Как поступать слаборазвитым странам, у которых и без того имеется множест- [c.148]

ДНК-маркеры [560 953]. Интенсивные исследования по молекулярной генетике апо-липопротеинов и ферментов, вовлеченных в метаболизм липидов, привели к созданию ДНК-зондов для многих из этих генов. Зонды используются с разными целями. Сцепленный с локусом LDL-рецептора полиморфизм по длине рестрикционных фрагментов [719] оказывается полезным для доклинической диагностики в тех семьях, в которых данные о повышении холестерина остаются не совсем ясными для интерпретации, но имеется по крайней мере один надежно диагностированный больной. Таким способом можно продемонстрировать и изоаллельную изменчивость LDL-рецептора (см. выше). Прямые диагностические зонды для дефектных генов LDL-рецепторов пока еще отсутствуют, и их создание представляет собой проблему (4.6.4). [c.304]

Методы прямого анализа ДНК всегда более предпочтительны, поскольку не связаны с изучением семей. Так, в диагностике талассемии большие надежды возлагают на применение специфических олигонуклео-тидных зондов и разработку методов гибридизации без использования радиоактивной метки. Однако при этом заранее необходимо предполагать, какой именно му- [c.99]

Измерение энтальпии плазмы с помощью калориметрического зонда. Локальное значение энтальпии плазмы можно определить калориметрическим способом. Для этого в плазму вводится калориметрический зонд, через 1Который производят отбор пробы газа из плазмы. Зонд интенсивно принудительно охлаждается. По разности температур охлаждающей зонд жидкости при наличии протока отбираемого газа и в отсутствие такового нетрудно найти энтальпию плазмы в месте отбора пробы, если скорость протока газа при отбора пробы известна [13, 77]. В отношении этого метода следует сделать одно замечание, хотя, по-видимому, стало уже банальностью говорить о том, что идеальные методы диагностики плазмы предполагают минимальное взаимодействие между датчиком и плазмой. Дело в том, что применение зондов, вносящих неизвестные возмущения в плазму с неизвестными и подлежащими определению свойствами, зачастую может только запутать изучаемую проблему. Поэтому следует всегда тщательно оценивать возмущения, которые может внести зонд в исследуемую плазму. [c.27]

Методы обнаружения нуклеотидных замен в геномной ДНК позволили исследователям разобраться в природе многих наследственных болезней человека. Эти методы дают возможность идентифицировать специфические мутации, приводящие к заболеванию [1—6], а также полиморфные участки ДНК, используемые в качестве маркеров в генетическом анализе [7—11]. Благодаря развитию методов выявления нуклеотидных замен стала реальностью пренатальная диагностика многих наследственных болезней человека. Если ген, отвечающий за заболевание, известен, соответствующую мутацию можно обнаружить в геномной ДНК или в РНК при помощи блот-гибридизации с использованием меченых олигонуклеотидов в качестве гибридизационных зондов. В том случае, когда мутировавшая нуклеотидная последовательность неизвестна, замены нуклеотидов можно определить по полиморфизму длины рестрикционных фрагментов <ПДРФ) [7]. ПДРФ обнаруживается по наличию или отсутствию сайта рестрикции во фрагменте геномной ДНК при гибридизации меченого ДНК-зонда с обработанной рестриктазами геномной ДНК, расфракционированной по размеру в агарозном геле и перенесенной на мембранный фильтр. Этот метод оказался очень эффективным для выявления как значимых мутаций, так и нейтрального полиморфизма в геноме человека и других организмов. Однако большую часть мутаций и полиморфных участков генома не удается обнаружить с помощью анализа ПДРФ, поскольку вероятность того, что замена нуклеотида изменит именно сайт рестрикции, низка. Так, например, многие точковые мутации гена р-глобина человека, вызывающие талассемию, не изменяют сайтов рестрикции, а потому не могут быть непосред- [c.123]

Точнейшей из операции по анализу строения генов и способов их регулирования является секвенирование. Секвенирование ююнированных генов зачастую проводят также в тех случаях, когда оптимизируют их экспрессию. Секвенирование геномов помогает не только изучать их структуру, но и понять пути их эволюции. В практическом плане секвенирование важно для приготовления зондов с целью диагностики генетических заболеваний, идентификации микроорганизмов и т. д. [c.269]

Хотя показано, что Р-талассемия обусловлена по меньшей мере тридцатью точечными мутациями, в каждой отдельной популяции найдено лишь небольшое их число. В некоторых популяциях, например среди жителей Сардинии, за подавляюшее большинство случаев р-талассемии ответственна всего одна мутация. В такой популяции использование олигонуклеотидных зондов для пренатальной диагностики р-талассемии особенно удобно. Однако для генетических нарушений с высокой частотой новых мутаций, таких как гемофилия или мышечная дистрофия Дюшене, олигонуклеотидный метод непригоден и приходится прибегать к косвенному методу, в котором используется полиморфизм ДНК. [c.72]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология