Обнаружение пероксидазы

Работа 103. Обнаружение пероксидазы [c.124]

Работа 48. ОБНАРУЖЕНИЕ ПЕРОКСИДАЗЫ [c.124]

Применение. В гистохимии и гематологии для выявления гемоглобина [1] и в сочетании е пероксидом водорода для выявления пероксидазы [2—4]. В микроскопии для выявления пектина [5], обнаружения белка [Пирс, 86] и в качестве реактива на Си +. [c.56]

Кровь может попасть в желудочный сок в результате кровотечения. Это бывает при язве желудка, а также при кровотечениях из верхних дыхательных путей, носоглотки и пищевода. При сильном кровотечении желудочный сок окрашен в красный цвет. Под действием соляной кислоты желудочного сока гемоглобин крови постепенно превращается в солянокислый гемин коричневого цвета. Для обнаружения в желудочном соке малых количеств крови применяют известные нам гваяковую и бензидиновую реакции, основанные на пероксидазном действии гемоглобина (см. стр. 74). Для того чтобы исключить ошибки, связанные с попаданием в желудочный сок пероксидазы, сок перед реакцией на кровь кипятят. При этом пероксидаза разрушается, а гем сохраняет свои пероксидазные свойства. [c.266]

Обнаружение фермента пероксидазы [c.71]

Чанс нашел, что константы диссоциации мало зависят от pH в интервале от 3,6 до 8,8 это наводит на мысль о том, что ни одна из двух связанных с гемом групп, обнаруженных Теореллом и Паулем 15], не влияет на способность пероксидазы к образованию характерных для нее комплексов энзим-субстрат. На основании этого наблюдения он предположил, что первичное сочетание происходит [c.209]

Данный подход в принципе позволяет проводить количественное определение как антигенов, так и антител. Длительность анализа невелика так, время определения алкалоида теофиллина с использованием липосом с пероксидазой составило 15 мин при пределе обнаружения 4-10 М. Метод приведен в данном разделе, так как антиген связан с липосомой, которую формально можно рассматривать как неферментную метку. [c.122]

Концентрацию антител против пероксидазы подбирают так, чтобы интенсивность окраски полоски сравнения соответствовала интенсивности окраски индикаторной полоски при концентрации определяемого вещества на уровне предела обнаружения. Результаты анализа определяют по отношению интенсивности окраски индикатора (I) к интенсивности окраски полоски сравнения (Н). Если индикаторная полоска окрашена интенсивнее, чем полоска сравнения (1/К>1,0), пробу считают отрицательной, в противном случае (1/Н 1,0) ее считают положи-, тельной. [c.137]

На рис. 10-5 показана зависимость интенсивности окраски индикаторной полоски, содержащей антитела против морфия, и полоски сравнения, содержащей антитела против пероксидазы, от концентрации морфия в образце. Интенсивность окраски индикаторной полоски обратно пропорциональна концентрации определяемого вещества в интервале от 5 до 1000 нг/мл. Предел обнаружения равен 5 —10 нг/мл, а при концентрации —70 нг/мл модуляция иммуноспецифического сигнала составляет 50% от максимальной. Как и ожидалось, интенсивность окраски полоски сравнения в исследованном интервале не зависит от концентрации морфия. Откладывая на графике отношение интенсивностей окраски индикатора и полоски сравнения, можно построить совершенно равноценную калибровочную кривую. Легко также заметить, что предел обнаружения, определяемый как концентрация вещества, при которой интенсивности окраски индикатора и полоски сравнения одинаковы, можно регулировать, увеличивая или уменьшая интенсивность окраски полоски сравнения. Таким образом можно изготовить индикаторные полоски [c.139]

Порядок работы. Обнаружение пероксидазы в соке клубня картофеля. Основано на изменении окраски при окислении полифенолов в хиноны. Натирают на терке очищенный клубень картофеля. Из мезги отжимают сок через марлю и собирают в колбочку. В четыре пробирки вносят по 5 мл 1 %-го раствора гидрохинона. В первую добавляют, кроме того, 1 мл 3 %-го раствора перекиси водорода и 1 мл картофельного сока, во вторую — 1 мл 3 %-го раствора перекиси водорода, в третью — 1 мл картофельного сока, в четвертую 1 мл предварриельно прокипяченного в течение [c.124]

Гем обнаружен у всех организмов, за исключением анаэробных клостридий и молочнокислых бактерий. Молочнокислые бактерии примечательны тем что, по-видимому, вообще не содержат железа, тогда как клостридии богаты соединениями, содержащими негемовое железо. Гемопротеиды в крови обратимо связывают кислород, в то время как в концевых оксидазных системах, а также в гидроксилазах и оксиге-назах гемопротеиды активируют кислород, делая его способным взаимодействовать с углеродными соединениями или с водородом. Другие гемовые соединения катализируют реакции не с Ог, а с Н2О2. К ним относятся пероксидазы и каталазы. Еще одну группу составляют гемовые ферменты, функцией которых является только перенос электронов. [c.366]

Пероксидаза хрена в действительности не является простым ферментом. По-видимому, у многих, если не у всех, высших растений имеется множество форм пероксидазы (иногда их называют изоферментами) которые удается разделить методами электрофореза и (или) хроматографии. Множественность форм пероксидазы можно сопоставить с неоднородностью, обнаруженной у гемоглобинов (разд. 7.1 и 7.2). В корнеплоде репы найдено, например, семь изоферментов [151 ], а в хрене — около десяти изоферментов [131 ]. Относительная концентрация изоферментов может варьировать в зависимости от времени года [151 или от одной части растения к другой [147]. Подобные колебания в относительной концентрации изоферментов, возможно, связаны с различными и изменяющимися функциями пероксидаз в метаболизме растений. Четыре изофермента пероксидазы хрена, которые удалось выделить в очищенном состоянии, как оказалось, все содержат углеводный фрагмент и имеют примерно одинаковый аминокислотный состав [131]. Природа неоднородности остается неясной. Спектры различных изоферментов пероксидазы хрена почти идентичны, и практически совпадает их ферментативная активность, что облегчает сопоставле- [c.197]

Обнаружено, что ферменты, состоящие из нескольких субъединиц, значительно менее устойчивы в водно-органических смесях по сравнению с ферментами типа каталазы и пероксидазы, состоящими из одной полипептидной цепи. Необратимая инактивация ферментов, состоящих из нескольких субъединиц, вероятно, обусловлена неполной реассоциацией предварительно диссоциировавших субъединиц при возвращении системы к нормальным условиям. Процессы диссоциации и реассоциации субъединиц, происходящие под. влиянием органического растворителя. и гари замораживании, могут приводить к образованию полимерных форм, не обладающих ферментативной активностью. Так, замораживание растворов двух злектрофоретически индивидуальных форм лактат-дегидрогеназы, а затем их последующее плавление в присутствии хлорида натрия приводит к образованию пяти различных форм. Органические растворители, такие как этиленгликоль, пропилен-гликоль, глицерин или диметилсульфоксид, при их добавлении в растворы полностью ингибируют образование этих форм и, за исключением пропиленгликоля, способствуют сохранению ферментативной активности [626, 627]. Как правило, растворимость веществ, включая ферменты и субстраты, уменьшается при понижении температуры и при введении органических растворителей. Несмотря на это, для обнаружения промежуточных соединений при низких температурах часто бывает достаточно не очень больших концентраций субстратов, поскольку при понижении температуры увеличиваются стационарные концентрации [615, 628]. Необходимо, однако, проверять, являются ли обнаруженные при низких температурах промежуточные соединения теми же самыми, что и при нормальных условиях, так как направление процесса может измениться. Активность ферментов, которые находятся в биомем- ранах и связаны е липидами, падает при переводе их в водные буферные растворы. Например, известно, что цитохром Р-450 ин-активируется при экстракции в водные растворы (при этом наблю- [c.237]

При сравнительных опытах с оксигеназами и пероксидазами различного происхождения был обнаружен замечательный факт, что оксигеназы из грибов (Russula и La tarius) значительно энергичнее активируются пероксидазами, выделенными из тех же грибов, чем пероксидазами из хрена или тыквы. С другой стороны, перекись водорода значительно ела- [c.354]

Акцепторами водорода, передаваемого восстановленной дегидрогеназой, могут служить разнообразные соединения. Установлено, однако, что анаэробные дегидрогеназы не способны передавать полученный ими водород субстрата непосредственно кислороду. Данный заключительный этап дыхания катализируется специальной группой ферментов, активирующих кислород (оксидазы, пероксидазы). Наряду с этим больщую роль выполняют также катализаторы промежуточного типа, осуществляющие передачу водорода, мобилизуемого анаэробными дегидрогеназами, активированному оксидазами кислороду, либо некоторым другим системам, расположенным между анаэробными дегидрогеназами и кислородом. Первыми звеньями цепи промежуточных переносчиков мобилизуемого анаэробными дегидрогеназами электрона по направлению к кислороду являются аэробные дегидрогеназы, называемые еще флавиновыми оксидазами. Пиридиновые дегидрогеназы весьма широко распространены как в животных, так и в растительных клетках и являются в буквальном смысле универсальными окислительными системами. Несмотря на структурную близость обоих коферментов, они, как правило, друг друга не замещают. В соответствии с этим действие ряда дегидрогеназ в живой клетке сопряжено с НАД. тогда как другие дегидрогеназы связаны с НАДФ. Из ферментов, обнаруженных в тканях растений, к первой груп- [c.223]

Хромопротеиды, содержащие железопорфирин (гем), представлены в природе не только гемоглобинами и миоглобинами. Широко встречается в тканях животных и некоторых бактерий фермент каталаза, имеющий в составе своей молекулы четыре гема. Из некоторых тканей организма животных выделены кристаллические препараты каталазы, молекулярный вес их достигает 225 ООО они содержат в каждой молекуле четыр молекулы гема. В растительных организмах широко распространен другой гемсодержащий фермент — пероксидаза. Встречается этот фермент также и в тканях животных. Из радужной оболочки глаза лошади пероксидаза получена в кристаллическом виде. Молекулярный вес ее равен 44 ООО, и она содержит одну молекулу гема. Из молока выделена в кристаллическом виде лактпероксидаза с молекулярным весом в 92 ООО, также с одним гемом в молекуле. Пероксидаза, обнаруженная в лейкоцитах, получила [c.45]

Однако с утверждением указанных авторов нельзя согласиться, поскольку в инфицированных растениях отмечено как появление новых изоэнзимов пероксидазы, так и исчезновение зон, обнаруженных ранее в здоровых органах исследуемых растений. Ели бы появление новых пероксидаз было связано только со старением, то при анализе разных органов одного и того же растения обнаруживались бы какие-то закономерные явления, но они не наблюдались. Наши данные свидетельствуют о том, что к концу вегетации (21-й и 40-й дни) белки с Rm, равными 0,60—0,61 и 0,67—0,68 соответственно, присутствуют только в спектре здоровых листьев, тогда как в зараженных органах эти зоны отсутствуют. Число изопероксидаз в листьях здоровых и вирозных растений (40-й день) было одинаково, а подвижность некоторых из них различна. [c.63]

Электрофорез на ацетате целлюлозы служит простым и вместе с тем чувствительным способом обнаружения аномальных видов гемоглобина. Наиболее подходящей буферной системой является смесь трис-борная кислота-ЭДТА (pH 8,4) [816, 1141, 1224]. Для качественных анализов можно использовать микрометоды. Электрофореграммы анализируют либо без применения красителей, либо после их окрашивания общими белковыми красителями или с помощью пероксидазы. Последний метод, очевидно, более специфичен, так как выявляет только те белки, которые содержат гем. Шнейдер [1141] рекомендует двукратное окрашивание сначала пунцовым S, а затем раствором бензидина, содержащим нитропруссид натрия (дает синюю окраску). Если при электрофорезе необходимо определить содержание минорного (т. е. имеющегося в незначительном количестве) компонента, например гемоглобина Аг, то наиболее надежный метод состоит в том, что на пленку наносят относительно большое (точно определенное) количество образца, элюируют соответствующие зоны электрофореграммы без ее предварительного окрашивания и проводят фотометрическое измерение [1141]. При денситометрическом сканировании окра- [c.321]

Рис. 2.9. Применение ELISA для тестирования специфичности антисыворотки к IgG человека. В лунках панели адсорбирован антиген (2,5 мкг/мл) ряды А и В —IgG человека, С и D —IgM человека, Е и F —IgA человека (все антигены получены из нормальной сыворотки) G и Н —легкие цепи х. Исследуемая сыворотка добавлена в двукратных последовательных разведениях (начиная с 1 100) от вертикального ряда 2 до ряда 12 (ряды А и В) или до вертикального ряда 9 (другие горизонтальные ряды). Лунки вертикальных рядов 10—12 (ряды С—Н) содержат разведения антисывороток, специфичных к адсорбированным на дне этих лунок антигенам. В реакции использовали конъюгат пероксидазы хрена с кроличьей антисывороткой к IgG овцы. Вертикальный ряд 1—контроль (только конъюгат). Исследуемая антисыворотка взаимодействует только с IgG человека. Реакция в лунках рядов G и Н идет вследствие примеси IgG, обнаруженной в препаратах >с-цеси, т. е. метод позволил определить и чистоту антигена

Применение неионизирующего излучения (ультрафиолетовое), ионизирующего (рентгеновское, гамма-излучение) и электрических полей высокого напряжения дало возможность изменять биоэлектрические свойства пыльцы и активно вмешиваться в процесс оплодотворения (И. С. Горшков). Исследованиями особенностей обмена веществ у электризованных растений сахарной свеклы при пропускании тока через почву был обнаружен ряд существенных физиологических и биохимических изменений повышалась интенсивность дыхаиия и фотосинтеза в листьях, возрастала активность ферментов (полифенолоксидазы, пероксидазы, каталазы, инвертазы) электризованные растения больше поглощали и накапливали азота,, фосфора и калия (И. Н. Луткова). [c.433]

Недавно было показано, что с пероксидазой в роли индикаторного фермента может весьма успешно конкурировать глюкозооксидаза. Важнейшим преимуществом этого фермента является более низкий уровень фона, чем при использовании пероксидазы (Porter, Porter, 1984). Следует добавить также, что для весьма широкого круга ферментов продемонстрирована возможность непосредственного обнаружения (окрашивания соответствующих зон) после переноса на ДЭАЭ-бумагу (M Lel-lan, 1981). [c.362]

Метод Нго — Ленхоффа — это новый чувствительный метод обнаружения активности пероксидазы хрена (ПХ), а также других ферментов в сопряженных системах (Ngo, Lenhoff, 1980). Метод характеризуется чрезвычайно высокой чувствительностью и позволяет обнаруживать ПХ при концентрации в растворе до [c.400]

Любые вещества, меченные биотином, включая и иммуно-тлобулины, могут быть обнаружены с помощью авидина, кова--лентно или нековалентно связанного с тем или иным индикатором, В зависимости от системы обнаружения индикаторным компонентом могут служить красители — сульфородамин, флуоресцеин, родамин, а также ферритин, коллоидное золото фер- менты — пероксидаза, щелочная фосфатаза и др. Таким образом, авидин-биотиновая система может быть использована в самых разнообразных методах анализа, включая иммуногистохимиче- Ские и электронно-микроскопические, методы обнаружения ан- [c.414]

Вещества, меченные биотином, могут быть обнаружены с помощью любого из используемых конъюгатов или комплексов авидина с тем или иным индикаторным реагентом типа авидин — флуоресцеин, авидин — ферритин или АБК- Таким образом, после того как вещество помечено биотином, для его обнаружения можно приспособить любую систему анализа. В то же время при использовании антител, меченных флуоресцеином или пероксидазой, круг их применения ограничен, т. е. авидин-биотиновая система характеризуется гораздо большей гибкостью, чем дру- [c.419]

ТОЧНОГО роста начинается лигнификация, последнюю стадию которой катализирует пероксидаза. Причем в лигнификации и образовании диферуловой кислоты принимают участие разные изоформы пероксидазы, обнаруженные в листовой пластинке овсяницы, однако в зоне элонгации преобладали два катионных изофермента [Ma Adam, 1993]. [c.46]

Смотреть страницы где упоминается термин Обнаружение пероксидазы: [c.18] [c.135] [c.302] [c.33] [c.212] [c.390] [c.197] [c.14] [c.253] [c.235] [c.27] [c.72] [c.193] [c.290] [c.135] [c.61] [c.94] [c.119] [c.315] [c.403] [c.413] [c.294] [c.536] [c.226]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология