Методы детектирования при колоночной хроматографии

В то время как в КЖХ хроматографическая система жестко связана с детектором, в ТСХ разделение проводят Б камере независимо от типа детектора. В связи с этим ТСХ является более гибким методом для решения разнообразных задач разделения и для разработки новых методик. Показания фотометрической детектирующей системы в ТСХ обычно не зависят от состава элюента. Жидкостную колоночную хроматографию целесообразно использовать в лаборатории для однотипных анализов, тогда как ТСХ с последующим фотометрическим детектированием — в лабораториях, где имеют дело с самыми различными задачами разделения. Для количественной оценки хроматограмм пригоден только фотометрический метод , поскольку даже опытный оператор при визуальном определении допускает ошибку не менее 10%. Дополнительным приемом при проведении количественного детектирования является удаление пятна вещества вместе с сорбентом с подложки. После этого проводят жидкостное извлечение вещества из сорбента. Количественное определение поглощения или флуоресценции раствора осуществляют с помощью фотометра [1]. Широкому распространению этого метода мешает ряд препятствий. [c.174]

Методами колоночной хроматографии [111] и тонкослойной [133] жидкостной хроматографии экспериментально проверены основные закономерности межфазного распределения макромолекул. Выбор хроматографического метода обусловлен с одной стороны простотой определения равновесного значения Ка (см. раздел 111.4), а с другой—высокой чувствительностью используемых в хроматографии методов детектирования, позволяющих изучать взаимодействия полимер—сорбент в очень разбавленных растворах, т. е. практически изучать рассматриваемое в теории поведение изолированных полимерных цепей. Энергия взаимодействия зависит от типа полимера, состава и температуры элюента. Варьирование этих условий позволило изучить элюционное поведение макромолекул во всем спектре значений и полученные экспериментальные закономерности сравнить с теоретическими. [c.72]

Исследование ряда объектов, в том числе масла печени гигантской акулы, показали идентичность хроматограмм, полученных методом количественной ТСХ с использованием трубчатой подложки, и методом колоночной хроматографии. На обеих хроматограммах зарегистрированы одни и те же основные соединения, причем чувствительность детектирования практически одинакова. [c.61]

Анализ полициклических углеводородов можно проводить с помощью классической ЖХ на оксиде алюминия, силикагеле и сефадексе с последующим детектированием по УФ-поглощению и флуоресценции (см. табл. 12.19 и 12.20). Ранее классическую колоночную хроматографию считали [165] первой стадией в анализе раствора или экстракта сложной смеси на содержание полициклических ароматических углеводородов . Методы определения следов полициклических углеводородов с помощью классической колоночной хроматографии (табл. 12.19 и 12.20) рассмотрены в [c.430]

Предел определения (порог чувствительности) и селективность (специфичность) анализа — различные параметры, хотя они и тесно взаимосвязаны в любом хроматографическом методе. Обе характеристики зависят от чистоты пробы и используемых реактивов, метода разделения и способов измерения или детектирования. Чувствительность можно определить как минимальную концентрацию вещества, детектируемую в присутствии остальных компонентов пробы и применяемых в ходе анализа реагентов. Чувствительность и селективность необходимо оценивать, исходя из конкретной аналитической задачи. В классической колоночной хроматографии чувствительность и селективность зависят от метода анализа элюата. Колонки подчас использовали для предварительного выделения вещества (или груплы веществ) из сложной смеси соединений, которые могут помешать дальнейшему анализу более чувствительными и селективными методами, например методом газовой хроматографии (ГХ). В большинстве конкретных задач, решаемых описываемым методом, максимальное количество вещества, вводимого в колонку, составляет несколько миллиграммов, хотя существующие методы детектирования позволяют оперировать количествами, на несколько порядков меньшими. В ряде других конкретных задач колонки используют для концентрирования. Так, большой объем раствора, содержащего сложную [c.546]

Методы детектирования при колоночной хроматографии [c.36]

Цель работы. Ознакомление с методом лигандообменной хроматографии, с градиентным элюированием в жидкостной хроматографии, с новыми вариантами детектирования разделенных компонентов. Разделение смеси моно-, ди- и триэтаноламинов методом колоночной хроматографии. Установление количественного состава смеси. [c.552]

Характер аналитических задач, решаемых с помощью важнейшего из этих методов — инструментальной или регистрационной колоночной ЖХ,— определяется природой используемых стационарной и подвижной фаз, а также принципом детектирования элюатов. Универсальные детекторы (рефрактометрический, диэлькометрический, транспортные и др. [109, 111, 2541) использовались для количественного анализа самых различных ГАС (аминов [255, 256], порфиринов [257], жирных кислот [258, 259], фенолов [260], сернистых соединений [261 ]) в условиях адсорбционной или координационной хроматографии, а также для определения молекулярно-массового распределения высокомолекулярных веществ [69, 109, 262, 2631 при эксклюзионном фракционировании или разделении на адсорбентах с неполярной поверхностью, например, на графитирован-ных углях. Качественная идентификация элюируемых веществ в этих случаях проводится по заранее установленным параметрам удерживания стандартных соединений и при изучении смесей неизвестного состава часто затруднена из-за отсутствия таких стандартов. Групповая идентификация ГАС отдельных типов существенно облегчается при использовании специфических селективных детекторов спектрофотометрических (УФ или ИК), флю-орометрического [109, 111, 254 и др.], пламенно-эмиссионного [264], полярографического [111], электронозахватного [265] и др. [c.33]

В настоящее время наметились два основных направления в развитии ТСХ. В первом случае (двухэтапный метод) процессы разделения смеси и детектирования обособлены друг от друга и отделены во времени и в пространстве. После разделения смеси содержание каждого из компонентов в хроматографических зонах на пластинке определяют с использованием детекторов различного типа (оптические, ядерно-физические, электрохимические и т. д.). Во втором случае пластинка используется аналогично колонке в колоночной жидкостной хроматографии. Через нее непрерывно проходит поток подвижной фазы, в начале пластинки импульсно дозируется анализируемая смесь и непрерывно с помощью проточного [c.3]

Листовые варианты хроматографии — бумажная и тонкослойная хроматография — обладают общими преимуществами по сравнению с колоночным вариантом хроматографии [41, 55, 381] экспрессностью, простотой осуществления процесса и отсутствием необходимости дорогостоящего оборудования, возможностью разделения и идентификации субмикрограммовых количеств смесей веществ, универсальностью (вследствие возможности варьирования выбора сорбента, особенно в случае тонкослойной хроматографии, тех), простотой детектирования разделенных зон на хроматограмме, возможностью быстрой количественной оценки содержания элементов в зонах различными высокочувствительными методами и др. [c.165]

При выборе хроматографического метода следует учитывать характер данных, которые желают получить. Для качественного анализа можно применять различные методы, для количественных определений предпочтение следует отдавать методикам, включающим стадию детектирования, как, например, в газовой, колоночной жидкостной и ионообменной хроматографии. Для выделения значительных количеств чистых соединений обычно используют препаративную хроматографию, так как бумажная и тонкослойная хроматография не приспособлены для разделения больших объемов проб. [c.44]

Метод гель-фильтрации в топком слое (ТСГФ) имеет ряд преимуществ перед колоночной хроматографией. Во-первых, на стартовую линию пластинки шириной, например, 20 см можно нанести 10—15 препаратов в виде пятен диаметром 3—5 мм, что позволяет сопоставлять результаты фракционирования многих препаратов в одном опыте, в идентичных условиях. Во-вторых, благодаря малой толщине слоя геля (0,4—1 мм) объем препарата может быть уменьшен до 5—20 мкл. Соответственно можно сильно уменьшить и количество фракционируемого материала, тем более что для его детектирования в этом случае можно использовать высокочувствительные методы окраски (см. ниже). Нет проблем и с обеспечением ровного слоя препарата — он мигрирует в виде пятна, как обычно при ТСХ. Наконец, нет необходимости ожидать, пока все компоненты фракционируемой смеси один за другим достигнут конца пластинки. Процесс разделения прекращают, как только наиболее быстрый компонент приблизится к нижнему краю геля. В этот момент регистрируют [c.162]

С этой целью в случае колоночной хроматографии вытекающую из колонки жидкость разделяют на малые фракции и определяют концентрацию содержащегося в них вещества. Детектирование можно осуществлять с помощью цветных реакций, проточных рефрактометров, фотометров, поляриметров и т.д. Для проявления бумажных или тонкослойных хроматограмм бумагу или пластинку опрыскивают какими-либо проявляющими реагентами, образующими с веществами окрашенные соединения. В ряде случаев пятна веществ на хроматограмме можно увидеть в УФ-свете. Хроматографической характеристикой вещества служит величина постоянная для каждого вещества в определенной системе растворителей и представляющая собой отношение длины пробега пятна веи ества на хроматограмме к длине пробега фронта растворителя. Вещество можно выделить из хроматограммы в индивидуальном виде, экстрагируя из пятна. В газовой хроматографии для обнаружения выходящего из колонки вещества применяются иламенно-ионизационные детекторы или детекторы теплопроводности (катаро-метры). Хроматографической характеристикой вещества в этом методе является время задержки его на неподвижной фазе (время удерживания), а также задерживаемый на ней объем, отнесенный к объему подвижной фазы (удерживаемый объем), и иногда — путь, пройденный на неподвижной фазе, также отнесенный к пути, пройденному подвижной фазой (значение / /). Выделение получаемых в процессе газовой хроматографии индивидуальных компонентов возможно вымораживанием их из соответствующих газообразных фракций. [c.30]

Колоночную хроматографию в той или иной форме используют уже более 30 лет, и все это время наблюдался возрастающий интерес к способам радиометрического контроля колоночных элюатов. Однако способам непрерывного контроля при колоночных разделениях уделялось меньше внимания, чем другим методам детектирования. Чаще всего для измерения радиоактивности вели отбор фракций элюата и применяли метод жидкостного сцинтилляционного счета. Ситуация резко меняется с появлением и быстрым развитием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) меченых соединений. [c.158]

При изучении метаболизма пестицидов и лекарственных веществ методы колоночной хроматографии применяются реже, чем другие радиохроматографические методы, в частности ТСРХ. Однако в последние 2—3 года наблюдается повышение интереса к разделению смесей соединений с различными молекулярными весами, а введение ВЭЖХ открывает новые возможности для этого. За исключением ВЭЖРХ, в большинстве лабораторий не применяют систем с проточными кюветами для измерения радиоактивности элюатов. Вероятно, это связано с тем, что остальные методы колоночной радиохроматографии используются нерегулярно и затраты на установку системы непрерывного детектирования не оправдываются. [c.194]

Ван Дийк [17] описал метод и соответствующую конструкцию радиальной ТСХ с движением элюата от периферии к центру, что позволило объединить в единую систему разделение на тонком слое сорбента и детектирование различными устройствами, используемыми в колоночной жидкостной хроматографии. Фик [ 18] предложил способ и устройство для полярографического детектирования в ТСХ. Ряд исследователей, в том числе Сан/ ерс и Снайдер [19], наглядно проиллюстрировали преимущества разделения на тонких стержнях, внешняя поверхность которых покрыта тонким слоем сорбента. Брандт [20] предложил новый принцип функционирования автоматического ТСХ-анализатора, который лег в основу выпускаемого в настоящее время промышленностью прибора для массовых анализов. [c.8]

В книге мы описываем и сравниваем два основных метода ионной хроматографии с кондуктометрическим детектированием. Первый метод, впервые предложенный Смоллом и сотр. [7], представляет собой двухколоночный метод, а другой метод, разработанный Гьерде, Фритцем и Шмуклер [8, 9], является одноколоночным. Тщательный подбор разделяющей колонки и элюента позволяет исключить компенсационную колонку. Некоторые исследователи, сравнивая оба метода, применяют название ионная хроматография с компенсацией в отличие от ионной хроматографии без компенсации или название ионная хроматография с колоночной компенсацией в отличие от ионной хроматографии с электрической компенсацией . Нам кажется, что эти названия вводят в заблуждение и даже ошибочны. В обоих вариантах ионной хроматографии генерируется фоновый сигнал, который необходимо компенсировать электрически. Кроме того, некоторые типы элюентов после прохождения через компенсационную колонку в действительности дают даже более высокую фоновую электропроводность (причины этого явления обсуждаются в гл. 5). Нам кажется, что термины одноколоночная ионная хроматография и двухколоночная ионная хроматография являются более точными. [c.10]