Групповые ферментативный

Этот кофермент участвует во множестве ферментативных реа к ций и имеет широкое поле применения в качестве аффинного лиганда с групповой специфичностью. Его закрепляют на матрице через [c.364]

Автолиз или ферментативное переваривание с помощью пепсина является необходимой начальной стадией обработки при выделении групповых веществ крови из тканей или слизистой оболочки [29, 48]. Если для выделения групповых веществ используют жидкость кисты яичника или меконий, то переваривание белков необязательно, однако в некоторых случаях, при плохой растворимости образующегося гелеподобного материала, ферментативное переваривание увеличивает растворимость и тем самым повышает выход групповых веществ. [c.170]

Очищенные групповые вещества, выделенные из жидкости кисты яичника, представляют собой макромолекулы со средним молекулярным весом от 2-10 до 1-10 [80—83]. Даже высокоочищенные препараты обнаруживают некоторую степень полидисперсности. Групповые вещества, не содержащие значительных количеств сиаловой кислоты, при электрофорезе движутся к аноду при pH 8,0 и 4,0, но при pH 4,0 очень незначительно. Подвижность групповых веществ, содержащих 18% сиаловой кислоты, составляет при pH 8,0 —7,6 см в сек 10 при ферментативном удалении сиаловой кислоты для тех же препаратов эта величина уменьшается до —4,2 X X 10- 160]. [c.175]

Существуют три основных направления исследований, с помощью которых можно установить, какие именно группы ответственны за специфичность групповых веществ. Первое включает использование непрямых методов торможения реакции преципитации и гемагглютинации и специфического подавления простыми сахарами и олигосахаридами известной структуры некоторых ферментов, действующих в обычных условиях на групповые вещества. Второй метод, ферментативный, позволяет выяснить химические изменения, происходящие в групповых веществах при нарушении их серологической специфичности под действием определенных ферментов. Третий метод заключается в выделении и идентификации серологически активных фрагментов из продуктов частичного гидролиза макромолекул. Последний метод дает также сведения о строении фрагментов углеводных цепей, не связанных с групповой специфичностью. Более ограниченные сведения относительно строения групповых веществ дают обычные химические методы периодатного окисления [110, 111[ и метилирования [112]. [c.179]

Этот метод, применявшийся вначале эмпирически, дал важные дополнительные данные о сахарах детерминантной группы веществ крови. Он заключается в том, что инактивация групповых веществ путем их ферментативного расщепления специфически тормозится теми простыми сахарами, которые ответственны за серологическую специфичность. [c.187]

Данные, полученные с помощью непрямых методов — торможения серологической и ферментативной активности простыми соединениями известного строения и последовательного ферментативного расщепления,— дают очень ценную информацию о природе детерминантных групп в веществах крови. Однако более однозначные данные можно получить путем выделения и идентификации активных фрагментов непосредственно из групповых веществ. Фрагменты, выделенные из продуктов частичного кислотного гидролиза групповых веществ крови человека. Отщепление от групповых веществ крови фукозы и сиаловой кислоты в условиях кислотного гидролиза, при которых происходит лишь незначительное отщепление других компонентов, указывает на то, что эти сахара являются концевыми или имеют латеральное расположение по отношению к основным углеводным цепям. При гидролизе групповых веществ крови человека 1 н. уксусной кислотой при 100° в течение 16 час независимо от их специфичности освобождается около 95% общей фукозы в виде свободного сахара [53]. Обработка групповых веществ Ье кислотой в очень мягких условиях (0,1 н. серная кислота, 80°, 1 час) приводит к освобождению всей сиаловой кислоты [68]. В продуктах частичного кислотного гидролиза групповых веществ олигосахариды, содержащие фукозу или сиаловую кислоту, не найдены если такие олигосахариды и образуются, то, очевидно, в очень незначительных количествах. [c.198]

На основании данных кислотного гидролиза о наиболее вероятном соединении углеводных остатков друг с другом предполагается, что в групповых веществах А, В, Н и Ье может быть два типа олигосахаридных ценей (табл. 14). При этом не учитываются ответвления, которые дают фукоза или сиаловая кислота. Дополнительная информация, полученная с помощью щелочной и ферментативной деградации, позволила представить строение двух серологически активных цепей в групповом веществе А, полученном от индивидуумов с генами А, Н ж Ье (рис. 7). [c.206]

Хотя теперь уже не вызывает сомнения решающая роль углеводной части в специфичности групповых веществ, однако в опытах по ферментативной деградации было показано значение всей макромолекулярной структуры для серологической активности. Ограниченное, но тем не менее значительное уменьшение активности веществ А, В, Н и Le при их обработке определенными протеолитическими ферментами, которые деполимеризуют их молекулы (но, насколько известно, не изменяют строение углеводной части, ответственной за специфичность), показывает, насколько важна целостность всей макромолекулы групповых веществ для проявления ими максимальной активности. Причина потери активности групповых веществ под влиянием указанных выше факторов выяснится, очевидно, когда будет известно строение их молекул. [c.212]

Весьма широко распространено посттрансляционное присоединение углеводов к белкам. Все известные белки плазмы крови, напрнмер, представляют собой гликопротеины (за исключением альбумина и преальбумина). Гликопроте ины несут разнообразные функции, в частности структурные (коллаген), ферментативные (тромбин) и гормональные (тироглобулин). Содержание углеводов меняется от 0,5 /о в коллагене до примерно 85 % в групповых веществах крови. В гликопротеинах, однако, присутствует лишь относительно небольшое число типов углеводов, включающее О-галактозу, О-маннозу, О-глюкозу, -фукозу, Л -ацетил-/)-глюкозамин, УУ-ацетил-О-галактозамин и сиаловые кислоты. В некоторых растительных гликопротеинах содержится 1-араби-ноза. [c.548]

Детальнее всего исследован вопрос о концевых группировках групповых веществ крови, для которых они являются иммунологическими детерминантами. Эти сведения получены при изучении кислотного и ферментативного гидролиза, а также иммунохимическими методами. При мягком кислотном гидролизе отщепляются фукоза и нейраминовая кисло-тa (если она содержится в биополимере), что доказывает их концевое положение. В несколько более жестких условиях гидролиза а также при гидролизе на сульфополистирольных мoлax отщепляется смесь других MOHO-, ди- и трисахаридов, набор которых оказывается различным для групповых веществ различной специфичности и позволяет сделать заключение о природе иммунологических детерминантов. [c.582]

Особенно важны.ми оказались результаты ферментативного гидролиза. Используя набор гликозидаз различной специфичности, выделенных из Tri homonas foetus, удалось, последовательно отщепляя концевой моносахарид, изменять специфичность группового вещества , как это показано на схеме [c.582]

Следует отметить, однако, что общепринятое понятие абсолютная специфичность в определенной степени условно. Так, глюкозооксвдаза, специфически окисляющая в-глюкозу с образованием глюконовой кислоты, действует еще по крайней мере на 8—10 субстратов, таких, как манноза, мальтоза, лактоза и др. Учитывая тот факт, что скорость окисления этих субстратов ниже по сравнению с глюкозой примерно на два порядка, этими данными зачастую пренебрегают и глюкозооксидазу считают ферментом, проявляющим абсолютную специфичность. Вместе с тем исследования влияния фермента на близкие по строению субстраты оказались чрезвычайно плодотворными в другом отношении. Выяснилось, что на скорость ферментативной реакции влияет не только природа атакуемой связи, но и ее окружение, а также длина углеродной цепи субстрата. Это особенно характерно для ферментов, проявляющих относительную, или групповую, специфичность. Данные ферменты действуют на группу близких по строению субстратов с сопоставимой скоростью, [c.60]

М. Мак-Карти (США) сделал доклад о химической основе серологической специфичности углеводов клеточной оболочки стрептококков группы А. Эти углеводы содержат большое количество рамнозы (35—45%) и гексозамина (22—28%). Первичная групповая специфичность полисахарида зависит от наличия конечных групп N-ацетилглюкозамина. Существует также вторичная специфичность, связанная с рамнсзными остатками, что проявляется после ферментативного отщепления конечных N-ацетилглюкозамин-ных остатков. Мутанты стрептококков группы А синтезируют углеводы клеточной стенки с недостатком терминальных гексозамин-ных остатков, и такие полисахариды обладают рамнозной специфичностью. [c.325]

Иммунитет. В настоящее время экспериментально доказано повышение устойчивости более 80 видов вредных насекомых и клещей ко многим органическим (в основном) и неорганическим инсектицидам или акарицидам (Рукавишников, 1956, 1958). Известно также, что по отношению к органическим веществам устойчивость развивается быстро (через 7—20 поколений), а к неорганическим — значительно медленнее (на протяжении 50— 300 поколений). Приобретенная устойчивость насекомых и клещей иногда проявляется настолько сильно, что ядохимикат, применяемый раньше с успехом, совершенно теряет действие. Вместе с тем наблюдается, что вредитель, проявляющий устойчивость к одному хлорорганическому, инсектициду, может быть устойчивым и к другим хлорорганическим соединениям. Это явление, называемое групповой устойчивостью, объясняют однородным пространственным расположением токсофорных групп. Устойчивость обусловливается комплексом факторов защитными реакциями организма, замедлением обмена веществ, ферментативными процессами детоксикации, накоплением жировых резервов (сезонная устойчивость), степенью проницаемости покровов и т. д. [c.24]

Было показано, что удаление уже одного концевого моно-сахаридного остатка, например N-ацетилгалактозамина, от ве-ш.ества А приводит к потере специфической активности данного группового вещества. Особенный интерес представляют опыты, в которых была показана возможность путем ферментативного отщепления моносахаридных остатков превращать активность, характерную для одного группового вещества, в активность другого группового вещества. Для таких реакций использовались ферментативные препараты из Tri homonas foetus, разделенные на фракции, наиболее активные в отнощении вещества А — А-фермент , в отнощении вещества Н— Н-фермент и другие. Уоткинс осуществила превращения [c.243]

Демонстрация ключевой роли сиаловой кислоты как компонента многих гликонротеинов в их отношении к частице вируса гриппа и к вирусной инфекции (обзор см. [186]) имела большое влияние на современные исследования гликонротеинов. Можно отметить лишь немногие направления в современном развитии исследований. Многие уже известные и очищенные гликонротеины, включая групповые вещества крови и белки сыворотки, были исследованы вновь и вскоре стала очевидной широкая распространенность гликонротеинов, содержащих сиаловые кислоты. Присутствие сиаловой кислоты во многих гликопротеинах, представляющих биологический интерес, делает необходимым развитие мягких методов их выделения и очистки, поскольку кетозидная связь, соединяющая концевой остаток сиаловой кислоты с ее партнером, чувствительна даже к 0,05 п. минеральной кислоте. Ферментативное отщепление сиаловой кислоты от гликонротеинов позволило оценить ее вклад в физические, химические и биологические свойства индивидуальных гликопротеинов. Этот подход был очень плодотворным. Так, оказалось, что сиаловая кислота ответственна за низкую изоэлектрическую точку и высокую электрофоретическую подвин ность сиалогликопротеинов, за электрофоретическую подвижность эритроцитов и раковых клеток, за вязкость гликонротеинов слюны, за биологическую активность гонадотропинов и других гормонов и за правильное функционирование фактора Кэстла. По счастливому стечению обстоятельств этот рост исследований гликонротеинов происходил в то время, когда был доступен арсенал чувствительных, мощных и специфических методов исследования состава и структуры сложных белков и определения их физических свойств и химической реакционной способности. Ниже будут рассмотрены успехи, достигнутые к настоящему времени. [c.23]

Относительная вязкость различных препаратов групповых веществ (0,5% растворы в 0,85%-ном Na l) из кисты яичника изменялась в довольно широких пределах (от 1,14 до 5,24) [38, 54, 57—60]. Готтшалк и Томас [87] обнаружили, что после ферментативного отщепления N-ацетилнейрамино-вой кислоты при pH 6,0 значительно уменьшается вязкость раствора гликопротеина из подчелюстной железы овцы. По мнению этих авторов, после удаления N-ацетилнейраминовой кислоты молекула становится более компактной, что приводит к уменьшению вязкости. По мнению Гиббонса [76], различия гликопротеинов из слизистой шейки матки коров, выделенных в период беременности и течки, обусловлены главным образом различным содержанием в них сиаловых кислот, что в свою очередь приводит к изменению формы и размера их молекулы и, следовательно, вязкости муцина. Ферментативное удаление сиаловой кислоты из групповых веществ крови, содержащих 18% этого сахара, сопровождается уменьшением их относительной вязкости. Такое снижение относительной вязкости можно было ожидать, исходя из предполагаемого уменьшения размера их молекул. Высокоочищенные групповые вещества крови не поглощают в ультрафиолетовой области спектра (от 220 до 310 ммк) [38, 57—59]. [c.176]

Метод, основанный на торможении ферментов, дает информацию о концевых нередуцирующих сахарах углеводных цепей, ответственных за специфичность. Хотя некоторые метилгликозиды, а также ди- или трисахариды тормозят ферментативное разрушение групповых веществ, считают, что торможение происходит в результате отщепления свободных сахаров при гидролизе гликозидных связей. Например, активность Н-фермента из Т. foetus не подавляется метил-а- или метил- 3-фукопиранозидами, а препараты не содержат фермента, способного расщеплять эти гликозиды [147). С другой стороны, активность В-фермента тормозится а- и 3-галактозидами (табл. 10), а неочищенные препараты этого фермента из Т. foetus содержат а- и Р-галактозидазы [148], отщепляющие от этих субстратов галактозу. [c.188]

Расщепление углеводных цепей последовательным действием А- и [или) В-, Н- и Ье -ферментов. Данные, полученные выше, показывают, что. за исключением А-фермента из С1. tertium [16Ц, те ферменты, которые нарушают серологическую специфичность и которые можно охарактеризовать по их химическому действию, представляют собой экзогликозидазы, отщеп-.ияющие от углеводных цепей групповых веществ один невосстанавливающий углеводный остаток. Удаление этого остатка приводит в некоторых случаях к появлению новой специфичности, которая до этого не обнаруживалась в исходном групповом веществе. С помощью последовательного ферментативного расщепления группового вещества можно получить некоторые данные относительно его строения и путей биосинтеза [98, 104]. На рис. 6 показано изменение специфичности вещества В нри последовательном действии на него нескольких ферментов. Оказалось, что в веществе В находятся детерминантные группы Н и Le , а также группы, ответствеппые за специфичность перекрестной реакции с лошадиной антисывороткой к пневмококку типа XIV. Активность этих групп проявляется по мере укорочения углеводных ценей вещества В. Подобное изменение специфичности можно наблюдать при ферментативной деструкции некоторых А-веществ. Таким образом, с помощью частичного расщепления этих веществ выяснено строение участков, ответственных за определенную специфичность, что позволяет в общем пред- [c.195]

Часто при обработке групповых веществ неочищенными ферментными препаратами из микроорганизмов наблюдают интенсивное отщепление восстанавливающих сахаров. Появление в продуктах ферментативного гидролиза дисахаридов было отмечено Бухананом и сотр. [176] и Хоувом и сотр. [160], а небольших количеств олигосахаридов — Исеки и сотр. [179]. Однако в большинстве случаев единственными продуктами гидролиза были моносахариды. Вероятно, неочищенные препараты содержат ряд гликозидаз, которые расщепляют углеводные цепи, помимо тех ферментов, которые ведут К потере серологической специфичности. Наличие такого набора ферментов [c.196]

Ранее [227] считали, что групповые вещества крови являются непосредственно продуктами генов. Однако в последнее время были достигнуты очень крупные успехи в изучении функции генов на биохимическом уровне, в результате чего стало ясно, что эта точка зрения, по всей вероятности, ошибочна [228]. Теперь известно, что в дезоксирибонуклеиновой кислоте (ДНК) заложена информация, определяющая последовательность аминокислот в белках следовательно, функция генов групповых веществ заключается, очевидно, в том, что они определяют образование (через соответствующие промежуточные продукты) каких-то специфических белков, которые либо сами обладают ферментативной активностью, либо контролируют ферменты, участвующие в синтезе углеводов. Исходя из этого предположения, можно считать, что гены А, В, Н и Ье являются трансформирующими и контролируют определенные стадии превращения вещества-предшественника в специфические соединения, появляющиеся в секретах. Ген О (третий аллель Л50-локуса), ген к (аллель гена Н) и ген 1е (аллель гена Ье) не принимают участия в превращении вещества-предшественника. Согласно предложенной схеме, их можно рассматривать как неактивные гены. Вещество-предшественник считают макромолекулнрным гликопротеином с полностью синтезированными пептидными цепями и с углеводными цепями, уже присоединенными к макромолекуле, но еще не окончательно достроенными. Такой гликопротеин, очень сходный по своему составу и свойствам с групповыми веществами крови и отличающийся от них лишь очень низким содержанием фукозы, находят и в секретах тех немногих индивидуумов, у которых отсутствуют вещества А, В, Н, Ье и Ье [5, 21]. Эти соединения, дающие сильно выраженную реакцию преципитации с лошадиной антисывороткой к пневмококку тина XIV, очевидно, можно рассматривать как вещество-предшествен-ник в биосинтезе групповых веществ крови. [c.208]

На осповании того факта, что после ферментативной деструкции веществ А и В появлялась Н-активность, была предложена схема биосинтеза, согласно которой вещество Н рассматривалось как предшественник веществ А и В. Было показано, что в основе веществ А, В или Н не имеется структуры вещества Ье . Более поздние работы, в которых сообщалось, что при ферментативной деструкции вещества Н развивается Ье -активность (см. раздел 5, б, 1) и что при последовательной деградации вещества В появляется вначале Н-, а затем Ье -активность, подтвердили правильность предложенной схемы биосинтеза групповых веществ. Можно добавить, что, так как групповые вещества образуются из одного общего предшественника, очевидно, их аминокислотный состав не должен отличаться друг от друга. Действительно, было найдено [61], что двадцать один препарат групповых веществ с активностью А, В, Н и Ье имеет очень сходный аминокислотный состав. Выделение четырех одинаковых серологически неактивных дисахаридов [134] и трех трисахаридов [193] из продуктов частичного кислотного гидролиза всех четырех типов групповых веществ также свидетельствует о наличии общего предшественника, структура которого является основной при их биосинтезе. Нельзя утверждать, что молекулы предшественника полностью сходны как у разных индивидуумов, так и друг с другом у одного и того же индивидуума, однако степень их различия не зависит от групповой специфичности. На основании предложенной схемы трудно объяснить данные, полученные Алленом и Кабатом [106] эти авторы обнаружили, что после кислотного гидролиза веществ А, В и Н каждое из них приводит к появлению вещества с новой и независимой Р1-специфичностью. Однако, согласно более поздним данным [109], эта новая специфичность не зависит от фрагментов внутри макромолекулы она проявляется после отщепления фукозы от исходного группового вещества. [c.211]