Окрашивающие реагенты

Качественный метод обнаружения веществ по хроматограммам с применением окрашивающих реагентов прост по выполнению, но ограничен вследствие сравнительно небольшого ассортимента подходящих проявителей. Возмол<ности метода несколько расширяет [c.222]

Обычно используют два типа окрашивающих реагентов [c.138]

После завершения хроматографич. процесса устанавливают положение зои на хроматограмме разл. способом, напр, опрыскиванием окрашивающими реагентами или облучением УФ светом. Идентификацию компонентов смеси проводят по окраске зон или по величине Rj, к-рая равна отношению пути, пройденного компонентом, к пути, пройденному элюентом. Кол-во компонента в зоне определяют по высоте или объему зоны в колоночной ОХ, по площади пятна или интенсивности его окрашивания - в плоскостной. Для количеств, анализа применяют также разновидность плоскостной ОХ-т. наз. пиковую ОХ, в к-рой хроматографич. зона проявляется на плоскости в форме пика тогда кол-во в-ва в зоне пропорционально высоте или площади этого пика. [c.413]

Большее значение приобрели различные окрашивающие реагенты, применяемые в качестве проявителей при хроматографии на бумаге. [c.61]

Обычный способ обнаружения (выявления) положения бесцветных растворенных веществ на проявленной хроматограмме состоит в опрыскивании пластинок растворами реагентов, которые могут химически взаимодействовать с растворенными веществами. Некоторые реакции протекают на холоду, другие иногда требуют нагревания до такой степени, что происходит обугливание растворенных веществ после их опрыскивания агрессивными реактивами. В этом последнем случае реакции с органическими связующими или материалом подложки могут мешать обнаружению, что исключает возможность использования таких материалов. Наконец, для того, чтобы выявить действие окрашивающего реагента, некоторые пластинки необходимо рассматривать после опрыскивания в ультрафиолетовом свете. [c.157]

Шталь /57/ и Киршнер /58/ приводят соответственно 266 и 204 окрашивающих реагента. Многие из этих реагентов были разработаны для обнаружения природных и биохимических продуктов. [c.160]

Концентрацию комплекса М Ind., определяют фотометрически, а концентрацию [А] вычисляют из константы диссоциации соответствующего реагента. Для расчета концентрации [Ind] также необходимо учитывать константы диссоциации окрашивающего реагента. Живописцев и Калмыкова определили константу нестойкости комплекса скандия с диантипирилметаном по равновесию с КО. Однако при расчетах они принимали, что концентрация свободного КО соответствует разности между общей его концентрацией и той частью, которая связана в комплекс со скандием. Между тем, не принимая во внимание соответствующие константы диссоциации КО и pH раствора, невозможно правильно оценить равновесную концентрацию свободных ионов КО. [c.53]

На высушенной хроматограмме результаты разделения количественно оценивают оптическим детектором. После этого эластичную ленту наматывают на ведущий барабан. Скорость движения ленты выбрана оптимальной по ряду факторов, в том числе времени активации, длительности проявления, высушивания, способа проявления (возможно не только опрыскивание, но и протягивание ленты через кювету с окрашивающим реагентом), количественной оценке (чем больше толщина слоя сорбента, тем длительнее вся процедура). Абсолютные размеры эластичной ленты могут изменяться, одним пз возможных вариантов являются ширина 25 м.ч и толщина 0,1. и.ч. Ленту после регенерации можно использовать снова. [c.173]

НОСТИ цветных реакций. Эти попытки, однако, не имели достаточного основания, поскольку окраска, получаемая с белками, как правило, слабее окраски, получаемой с соответствующими белковыми гидролизатами. Это обусловлено, по всей вероятности, тем, что в белковой молекуле некоторые реактивные группы скрыты внутри глобулы и вследствие этого недоступны действию окрашивающего реагента (см. гл. VII). Поэтому для определения аминокислотного состава белка необходимо подвергнуть его полному гидролизу. Большинство аминокислот можно определить в кислотном гидролизате, однако некоторые аминокислоты обнаруживаются только после гидролиза белка гидроокисью бария (см. выше). Разделение смеси аминокислот представляет собой трудную задачу, так как аминокислоты являются амфолитами, растворимыми в воде и нерастворимыми в таких органических растворах, как спирт. Только иминокислоты пролин и оксипролин раство римы в этиловом спирте. Ввиду того что аминокислоты обладают сходными физико-химическими свойствами, их нельзя разделить фракционированием спиртом или нейтральными солями. Некоторые аминокислоты можно, однако, отделить путем осаждения их при соответствующих условиях. Например, растворимость цистина при нейтральной реакции и тирозина при слегка кислой реакции настолько мала, что при доведении реакции среды до соответствующего значения pH они почти полностью выпадают в осадок. Другие аминокислоты можно осадить специфическими реактивами. Однако ни один из этих методов не является полностью удовлетворительным в количественном отношении, так как все соответствующие осадки до известной степени растворимы. [c.31]

Если пятно пробы обрабатывают окрашивающим реагентом, то следует учитывать некоторые условия окрашенные продукты не должны диффундировать в окружающую среду, а окраска должна быть пропорциональна количеству пробы, должна быть воспроизводимой и устойчивой. Наносить реактив необходимо так, чтобы он распределялся по пластинке равномерно. Уменьшить вероятность появления ошибки, обусловленной неравномерным нанесением реагента, можно, нанося попеременно пятна пробы и стандартные растворы. Грэм и др. [И] показали, что при опрыскивании хромогенным реактивом среднее различие между двумя соседними пятнами составляет 2,5 %, по сравнению с 5,2 % — максимальной ошибкой для всей пластинки. [c.344]

Цвет препаратов лигнина зависит от метода, использованного при их выделении. Протолигнин почти такой же белый, как целлюлоза, что доказывается возможностью отбелки древесины в хороши белый цвет относительно малым количеством перекиси натрия без изменения содержания лигнина и метоксилов или реакционней способности лигнина по отношению к окрашивающим реагентам и бисульфиту. Выделенный нативный еловый лигнин [c.369]

Первые методики хроматографии фенольных соединений были разработаны Каррером и Стронгом [1], которые еще в 1930 г. описали разделение смесей антоцианов на колонках с сульфатом кальция и оксидом алюминия. Однако в данной области исследований хроматографические методы завоевали достаточно прочные позиции лишь после 1948 г., когда Бейт- Смит [2] для разделения этих пигментов использовал распределительную хроматографию на бумаге. Пожалуй, нельзя назвать ни одного другого такого класса природных соединений, за исключением аминокислот и сахаров, которые можно было бы столь же легко разделить и идентифицировать с помощью бумажной хроматографии. Отчасти это обусловлено хорошей растворимостью полифенолов, а отчасти тем, что для обнаружения большинства из них не нужны окрашивающие реагенты. В последние годы в практику исследований введены и другие методы хроматографии, однако по-прежнему, наиболее важным методом разделения этих соединений остается бумажная хроматография. [c.242]

В табл. 12.2 в краткой форме описаны наиболее употребительные методы обнаружения фенольных соединений на бумаге. Обычный просмотр хроматограмм, обработанных или не обработанных парами аммиака, при УФ-освещении является вполне удовлетворительным способом локализации и предварительного обнаружения этих соединений. Перечисленные в таблице реагенты дают довольно устойчивое окрашивание, поэтому хроматограммы, предназначенные для использования в качестве эталонных, можно хранить практически неограниченно долго. Чтобы подтвердить правильность результатов предварительного обнаружения анализируемых соединений, а также установить, присутствуют ли в их молекулах те или иные структурные группы, вторую хроматограмму, идентичную первой, обрабатывают селективными окрашивающими реагентами. Методики приготовления и применения этих реагентов и цветные реакции на отдельные ( нолы подробно описаны в работах [18—24]. [c.245]

Весьма распространенным методом детектирования является опрыскивание пластин окрашивающим реагентом, т. е. использование химических реакций, которые, в принципе, могут проводиться как до, так и после хроматографирования [363, 364, 375]. Некоторые из этих реакций идут на холоду, чаще — требуется нагревание. Обработка хроматограмм химическим реагентом приводит к образованию окрашенных или флуоресцирующих зон, позволяющих обнаружить разделенные компоненты и количественно их оценить. Основное условие при этом, чтобы интенсивность окраски или флуоресценции оставалась стабильной в течение 30 мин. [c.391]

Тонкослойная хроматография (ТСХ) на покрытых слоем силикагеля пластинах является весьма эффективным методом анализа сложных смесей липидов. Проходящий через носитель элю-ент переносит отдельные липиды с разной скоростью в зависимости от их полярности, в результате чего липидные компоненты оказываются на разных расстояниях от места нанесения. Неполярные нейтральные липиды перемещаются почти с фронтом растворителя, в то время как полярные липиды задерживаются в соответствии с увеличением заряда и степени полярности. Соответствующие липидам фракции можно увидеть после обработки пластины парами йода или опрыскивания специальными окрашивающими реагентами. [c.167]

НИЯ. Так, например, это очень активный дненофнл, который быстро реагирует при комнатной температуре со многими сопряженными диенами с образованием соответствующих аддук-тов Л ильса — Альдера С ароматическими углеводородами он образует иг-комплексы с характерной окраской в интервале от желтой до зеленой он был использован также в качестве окрашивающего реагента при хроматографическом анализе на бумаге ароматических соединений [c.58]

После завершения процесса пластинку высушивают на воздухе и устанавливают положение хроматографич. зон компонентов разл. способами, напр, облучением УФ светом, опрыскиванием окрашивающими реагентами, выдерживанием в парах иода. На получ. картине распределения (хроматограмме) хроматографич. зоны компонентов смеси располагаются в виде пятен в соответствии с их сорбируе-мостью в данной системе (см. рис.). Положение хроматографич. зон на хроматограмме характеризуют величиной Rf, к-рая равна отношению пути U, пройденного i-тым компонентом от точки старта, к пути I, пройденному алюен-том Rf = lili. Величина Rf зависит от коэф-, распределения (адсорбции) Ki и соотношения объемов подвижной (Vn) и неподвижной (Vh) фаз [c.584]

Как указывалось ранее, наряду с методами бумажной и ионообменной хроматографии для определения аминокислот из гидролизатов [65, 89, 118, 154, 162] существует ряд других методов, используемых в меньшей степени или находящихся еще в стадии разработки. Применялась также газовая хроматография для разделения этерифицированных аминокислот [9, 87] или продуктов окисления аминокислот [195]. Хотя этот метод очень чувствителен, применение его ограничено, так как некоторые аминокислоты не образуют достаточно летучие производные. Был сделан ряд усовершенствований для улучшения существующих методов. Колориметрический метод определения гистидина улучшен за счет дегазации раствора перед добавлением окрашивающего реагента — диазосульфаниловой кислоты [159]. Аспарагин и глутамин могут быть определены путем этерификации с последующим восстановлением боргидридом лития. После гидролиза эти амиды идентифицируются в виде соответствую1цих кислот, в то время [c.401]

Отметим еше ряд особенностей анл.гшзатора В 500. Скорость анализа заметно улучшается при миниатюризации системы хроматографического разделения. Система В 500 рассчитана на работу при высоких давлениях с использованием колонок из нержавеющей стали. Давление в системе может достигать 211 кг/см . Используется одноколоночная методика, причем размеры колонки уменьшаются до 43 см х 1,75 мм, в качестве заполнителя применяют шарики катионообменной смолы диаметром 10 2 мкм. Чтобы полностью реализовать возможности системы с управляющей ЭВМ, применяется восемь линий подачи буфера и окрашивающего реагента и четыре насоса с двойными шприцами и гидравлическим приводом, способные к плавной работе при давлении -211 кг/см . Развитие окраски с нингидрином контролируется при 150 °С, что устраняет необходимость во втором фотометрическом канале для детектирования пиков пролина и оксипролина, что существенно при использовании температуры 50 - 70 °С. Фотометрический блок представляет собой двухлучевой фотометр с модуляцией по длине волны. В качестве датчика в фотометре применяется фотодиод с линейной зависимостью сигнала от коэффициента поглощения в пяти диапазонах 0,1, 0,2, 0,5 1,0 и 2,0 единиц коэффициента поглощения. Чтобы свести к минимуму перекрывание пиков, используется кювета с небольшим оптическим путем /0,5 см). Кювета попеременно освещается излучением 590 нм (измерение) и 690 нм (контроль фона). Сигналы фотодиода подаются параллельно на самописец с диаграммной лентой и в ЭВМ, принимающую 600 точек в минуту. Стабильность фотометра такова, что для 1 нмоля аминокислоты отношение сигнала к щуму равно 30 1. Вследствие этого исходные объемы проб могут быть небольшими, порядка 10—20 мкл. [c.301]

Из приведенных данных видно, что состав бесцветных комплексов, определенный по методу сдвига равновесия с использованием металл-индикаторов, существенно зависит от количества прибавляемого окрашивающего реагента. В первом случае (рис. 6, кривая 1), когда индий и КО брали в стехиометрических соотношениях, 1 а = 2, т.е. образуется комплекс 1п(С204) . Если же КО брать в количестве, необходимом для полного связывания индия в окрашенный комплекс, образуется более простой комплекс с соотношением компонентов 1п + СгО — =1 1 (рис. 6, кривая 2). Следовательно, в зависимости от количества окрашивающего компонента образуются щавелевокислые комплексы индия различного состава. [c.31]

Окрашивающий реагент. Применяют 0,025 М раствор симм-дифенилкар-базона в ацетоне. Для уменьшения колебаний величины светопоглощения, происходящих при использовании разных препаратов реагента, добавляют немного уксусной кислоты (1 мл ледяной уксусной кислоты на I л ацетона). [c.189]

Окрашивающий реагент. Суспендируют 0,-5 г перекристаллизованного 5-амино-2-меркаптобензим11дазола (г. пл. 24-5°) в 100 мл воды и затем растворяют, прибавляя при перемешивании по каплям 6 М раствор уксусной кислоты. [c.195]

Окрашивающий реагент. Пригогавливают 0,10%-ный раствор кристаллического фиолетового в 1 М фосфорной кислоте. Этим раствором можно пользоваться в течение недели. [c.202]

Из одной капли раствора методом круговой ТСХ удается определить И анионов (СЮГ, СГ Вг", J , ВгОз, IO3, [Fe( N)e] , [Fe( N)e] , S N , AsO , SO3 ) с точностью + 5% [206]. Метод основан на чувствительных и специфических реакциях с окрашивающими реагентами пятен, получающихся на тонком слое сорбента (AI2O3 или силикагель) при использовании аппаратуры для круговой тех. Для определения проводили сравнение со стандартами. Подвижными фазами служили смеси н-бутанола, воды и пиридина с NH4OH и ацетоном в различных соотношениях. [c.101]

Сьёхольм [157] разделил 28 альгиконов гликозидов наперстянки методом двумерного элюирования на слоях силикагеля, высушенных в течение 30 мин при 110°С. Для первого элюирования он использовал смесь этилацетат—метанол—вода (16 1 1), а для второго — смесь хлороформ—пиридины (6 1). Чтобы удалить растворители, полученные хроматограммы нагревали при 90—100°С до полного исчезновения запаха пиридина. Для разделения гликозидов применяли в качестве растворителя также смесь метилэтилкетон—хлороформ—формамид (5 2 1). После испытания нескольких окрашивающих реагентов лучшим был признан реактив Т-25, в состав которого входят л-анисовый альдегид и хлорная кислота. Под действием этого реактива пятна различных соединений окрашиваются в характерные цвета чувствительность обнаружения составляет 0,1—0,2 мкг в видимом свете и 0,02 мкг при УФ-облуче-нии. Относительные величины Rf этой группы соединений приведены в табл. 26.9. Среди других обнаруживающих реактивов испытаны также реактивы Т-263 и Т-32. [c.220]

После нанесения пятен на бумагу ее нодвепшвают в хроматографическом бачке так, что она на 13 мм погружена в растворитель, служащий подвижной фазой. В один и тот же бачок или в одну порцию подвижного растворителя можно погрузить не одну, а несколько бумаг, но при этом важно, чтобы они не касались друг друга. Стеклянную крышку бачка запечатывают изоляционной лентой, чтобы атмосфера в бачке всегда была насыщена парами подвижного растворителя. Выяшдают пока фронт подвижного растворителя не продвинется вверх по бумаге настолько, что до верха останется 6 сж это занимает примерно 1,5 ч. Затем вынимают бумагу из бачка и дают ей подсохнуть на воздухе в течение не-скольких минут. Еще влажную бумагу погружают в реакционный раствор (8,50 г АдКОд, 700 мл воды, 50 мл 2-феноксиэтанола, 250 мл ацетона, 6 капель перекиси водорода реактив хранят в коричневой склянке). После этого бумагу подвешивают на штатив для просушки избыток окрашивающего реагента стекает на бумажные салфетки. Бумагу сушат на воздухе ее можно поместить также в вытяжной шкаф, где сушка ускоряется благодаря принудительной вентиляции. [c.96]

В табл. 9.1 предс авлен список окрашивающих реагентов, окраски зон анализируемых ионов металлов и определяемых металлов. [c.356]

Используя такие инструментальные методы анализа, как, например, атомноабсорбционную спектрофотометрию, можно количественно определить состав экстрактов. Применяя другой метод ТСХ-анализа, ионы металлов переводят известным способом в производные дитиазонатов и разделяют их па слое силикагеля С элюентом, состоящим из смеси бензола и метиленхлорида (50 10, по объему). Для детектирования не требуется специальных окрашивающих реагентов, поскольку дитиазонаты металлов имеют различную характерную окраску. Зоны можно удалить с подложки, дитиазонаты растворить в соответствующем растворителе и провести количественное определение спектрофотометрией. [c.357]

Методы анализа желчных кислот описаны в обзоре Сьёвалла [278], опубликованном в 1977 г. Тонкослойной хроматографии желчных кислот и спиртов посвящен появившийся в 1976 г. обзор Энерота [279]. Икава и Гото [280] опубликовали методику двумерной тех. Предложены усовершенствованные по своему составу системы растворителей для хроматографии свободных желчных кислот [281], их метиловых эфиров [281, 282] и кетопроизводных [283, 284]. Известны также системы, в которых можно отделить свободные желчные кислоты от их конъюгатов с глицином, а последние — от тауроконъюгатов [285— 287]. Кроме того, методы ТСХ и обращенно-фазовой ТСХ позволяют различить большинство конъюгированных желчных кислот [288—291] и сульфопроизводных солей желчных кислот [292, 293]. Для дополнительного подтверждения вывода об идентичности тех или иных соединений служат специфические окрашивающие реагенты [294, 295]. Количество вещества можно оценить по интенсивности флуоресценции производных, образующихся в результате обработки хроматограмм серной кислотой [296, 297], либо по поглощению этих производных [298]. [c.310]

Для характеристики олеандомицина использована хроматография на бумаге ватман № 1 i[134] и на бумаге тойо № 51 [135] в различных системах растворителей. В случае ТСХ для обнаружения антибиотиков служат биоавтография [136, 137] и окрашивающие реагенты [138, 139]. С помощью ВЭЖХ удалось разделить 10 лейкомицинов, времена удерживания которых расположены в диапазоне от 1,5 до 25,8 мин [140]. [c.149]

Колонка 120X5 мм скорость потока 22 см1мин температура 40 °С давление на входе -в колонку 16—25 атм окрашивающий реагент 0,02%-ный раствор 4-(2-пиридилазо)резор-.цина в 0,7 М (а) и 1,2 М (б) растворе аммиака объем образца 60 мл. Содержание металлов, 10- моль 9,6 СаЧ, 4,8 2пЧ. 4,5 ОаН, 2 РЬЧ-, 4,8 Си +, 7.2 Со=+. 12 МпЧ. 57 / + 12 да+, 9,6 АР+, 1,2-10> СаЧ, 6-10 MgЧ. [c.316]

При использовании гетерогенного метода ELISA на ход анализа влияют лишь немногие компоненты тестируемых образцов сыворотки, спинномозговой жидкости или мочи. Это обусловлено тем, что до стадии окрашивания все эти компоненты удаляются и отмываются с поверхности платы. В то же время применение пероксидазы в системах сопряженных реакций вместе с еще одним ферментом, например глюкозооксидазой (катализирующей образование Н2О2 из глюкозы), связано с необходимостью контакта анализируемого образца и окрашивающих реагентов. В этом случае следует учитывать возможное влияние на ход анализа примесных компонентов образца. [c.408]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология